活性氧ROS介導(dǎo)的乙醛氧化損心肌致細胞凋亡的初步研究

1、活性氧（活性氧（rosros）介導(dǎo)的乙醛氧化損）介導(dǎo)的乙醛氧化損傷心肌致細胞凋亡的初步研究傷心肌致細胞凋亡的初步研究上海中山醫(yī)院上海中山醫(yī)院心血管病研究所心血管病研究所 研究背景研究背景 酒精性心肌病迅速蔓延酒精性心肌病迅速蔓延在西方世界，酒精是繼發(fā)性非缺血性擴張型心肌病主要原因在西方世界，酒精是繼發(fā)性非缺血性擴張型心肌病主要原因1) 據(jù)統(tǒng)計，成年人2/3不同程度飲酒2) 酒精性心肌病,1/3以上與酒精有關(guān)在中國，隨著生活水平不斷提高，酒精性代謝相關(guān)疾病增多在中國，隨著生活水平不斷提高，酒精性代謝相關(guān)疾病增多乙醇？乙醛？損傷心肌乙醇？乙醛？損傷心肌 乙醇，乙醛誘導(dǎo)心肌細胞比較實驗1）養(yǎng)化應(yīng)激水

2、平2）細胞凋亡水平 轉(zhuǎn)基因過表達adh或aldh比較實驗1）過表達adh加劇心肌收縮功能障礙2）過表達aldh減少心肌細胞凋亡乙醇 乙醛 乙酸adhaldh乙醛通過何種途徑損傷心??？乙醛通過何種途徑損傷心??？心肌肥大、凋亡致功能改變心肌肥大、凋亡致功能改變遺傳因素病毒感染dna突變免疫改變t細胞殺傷心肌炎ros途經(jīng)導(dǎo)致靜脈內(nèi)皮細胞凋亡途經(jīng)導(dǎo)致靜脈內(nèi)皮細胞凋亡j. biol. chem. 279:11244. 心肌細胞胞漿特異表達 -mhc, 200 體外心肌細胞培養(yǎng)體外心肌細胞培養(yǎng)rosros隨乙醛誘導(dǎo)濃度增加的變化隨乙醛誘導(dǎo)濃度增加的變化umol/lrosros隨乙醛誘導(dǎo)時間增加的變化隨乙醛

3、誘導(dǎo)時間增加的變化h乙醛誘導(dǎo)心肌細胞乙醛誘導(dǎo)心肌細胞bcl-2bcl-2蛋白表達蛋白表達0 2 6 12 18 24 48 h不同條件誘導(dǎo)下不同條件誘導(dǎo)下rosros的變化的變化00.20.40.60.81對照組缺氧組過氧化氫組乙醛1 0 0umol/l組m1%/gated per100cells乙醛誘導(dǎo)細胞培液上清乙醛誘導(dǎo)細胞培液上清sodsod活性活性h乙醛誘導(dǎo)心肌細胞實驗結(jié)論乙醛誘導(dǎo)心肌細胞實驗結(jié)論 ros介導(dǎo)的氧化損傷是乙醛誘導(dǎo)心肌細胞凋亡的主要原因 乙醛較h2o2誘導(dǎo)產(chǎn)生的ros增量水平低，提示乙醛對心肌作用為慢性氧化損傷 乙醛介導(dǎo)的氧化損傷可能經(jīng)線粒體途徑發(fā)揮作用 降低細胞內(nèi)氧化應(yīng)

4、激水平可有效改善心肌缺氧缺血狀態(tài)， 減少心肌細胞凋亡 心肌凋亡心肌凋亡ros心力衰竭心力衰竭功能障礙功能障礙擴張型心肌病擴張型心肌病？蛋白質(zhì)組學(xué)研究意義蛋白質(zhì)組學(xué)研究意義 篩選出差異蛋白 研究與疾病的相關(guān)性sdsd鼠心力衰竭模型中鼠心力衰竭模型中aldh2aldh2明顯下調(diào)明顯下調(diào) 染色體定位：12q24.2 蛋白定位：線粒體內(nèi)膜線粒體內(nèi)膜醛脫氫酶醛脫氫酶 2 2 aldehyde dehydrogenase(aldh2)aldehyde dehydrogenase(aldh2)線粒體功能線粒體功能 ros產(chǎn)生主要場所 引起氧化損傷 atp能量來源 抗氧化酶系 凋亡和抗凋亡蛋白 bcl家族線粒

5、體功能線粒體功能aldh2的mrna 轉(zhuǎn)錄水平表達 normal transplantgapdhaldh2心肌組織心肌組織aldh2aldh2活性測定結(jié)果活性測定結(jié)果rt-pcrwestern blot在在sd鼠心衰模型中鼠心衰模型中ddddreal time-pcr54kd36kdaldh2/pad-hm4aldh2/pad-hm4質(zhì)粒構(gòu)建質(zhì)粒構(gòu)建cag poly akpniapaixhoi (2)sali (2)bamhi(2)xbai (2)sali (2)psti (2)?sphihindiii (3)total 35.3kb1720bp730bp30.3kbamprxbai（ 2)aldh21954bpecorpstbglbglhind0.8kb2.5kbadeno virus genomee3(-)(28133-30818)adeno virus genomee1(-)(342-3523)itritrpacipaci技術(shù)路線技術(shù)路線細胞培液上清細胞培液上清dcm組組轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)aldh2*1形形 dna ladder態(tài)態(tài) tunel基基 aldh2因因 adh-1蛋蛋 bcl-2家族家族白白 caspase移植心臟組織移植心臟組織 sd鼠心肌細胞鼠心肌細胞 活活 aldh2性性 ros對照組對照組對照組對照組乙醛干預(yù)乙醛干預(yù)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)aldh2