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文檔簡介

1、堿性磷酸酶的分離提取勻漿液上清液沉淀粗酶液管 號(hào)01234567 pNP含量 (mol)00.050.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.5mol/mL pNP (mL)00.10.20.30.40.50.60.7 H2O (mL)0.80.70.60.50.40.30.20.1 Na2CO3-NaHCO3 (mL)各管加入1.0 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL)各管加入0.2 mL 0.1 mol/L NaOH (mL)各管加入2.0 mL OD 405 nm以對(duì)硝基苯酚的絕對(duì)量(mol數(shù))為橫坐標(biāo)，OD405nm值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求出pNP的克

2、分子消光系數(shù)()值。103( mol/L)-1cm-1管 號(hào)空白1235 mM pNPP(mL)各0.2mL Na2CO3-NaHCO3 (mL)各管加入1.0 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL)各管加入0.2 mL H2O (mL)各0.50mL 酶液（mL）/各0.1mL 0.1 mol/L NaOH (mL)各管加入2.0 mL 酶液（mL）0.1mL OD 405 nm2.2.2 酶活力的測(cè)定酶活力的測(cè)定以0號(hào)管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)定各管的OD405nm值，從對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出產(chǎn)物的mol數(shù)，算出酶活力。步驟總體積 mL蛋白mg/mL總蛋白mg酶活力U/mL總活力U比活力U/mg純化倍數(shù)得率%勻漿過濾液4007.24 20.3 正丁醇處理上清液470 33.8 0.35飽和(NH4)2SO4上清液440 35.3 0.7飽和(NH4)2SO4沉淀溶解透析上清液40.3 314.7 DEAE-32酶液9.63.82 1002.2 Sephadex G75酶液13.20

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