丙戊酸鈉對大鼠損傷背根節(jié)神經(jīng)元異位自發(fā)放電的抑制作用

1、丙戊酸鈉對大鼠損傷背根節(jié)神經(jīng)元異位自發(fā)放電的抑制作用     【關(guān)鍵詞】  神經(jīng)病理性痛    Effect of sodium valproate on ectopic spontaneous discharge of injured dorsal root ganglion neurons in rats【Abstract】  AIM: To investigate the effect of sodium valproate on ectopic spontaneous discharge (ESD

2、) in injured  dorsal root ganglion (DRG) neurons. METHODS:  Single dorsal root fiber was separated, the ESD conducted from injured DRG neurons was recorded and the effects of different concentrations of sodium valproate were observed. RESULTS:  Different concentrations of sodium valpr

3、oates decreased the number of ESD in a dosedependent manner. CONCLUSION:  The administration of sodium valproate inhibits the number of ESD from injured DRG neurons. This may lay a foundation for using sodium valproate peripherally as analgetic.【Keywords】  ganglia, spinal;   ecto

4、pic spontaneous discharge; valproic acid;   neuropathic pain【摘要】  目的： 探討丙戊酸鈉(sodium valproate, VPA)對損傷背根節(jié)神經(jīng)元異位自發(fā)放電的影響及其時間和劑量關(guān)系. 方法： 分離背根單纖維，引導來自損傷背根節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)神經(jīng)元的異位自發(fā)放電，觀察不同濃度VPA對放電頻率和放電模式的影響. 結(jié)果： VPA可抑制異位自發(fā)放電，降低其放電數(shù)，并具有劑量依賴關(guān)系. 結(jié)論： 局部應(yīng)用VPA可抑制DRG神經(jīng)元自發(fā)放電，這可為外周應(yīng)用VPA進行鎮(zhèn)痛

5、治療提供依據(jù). 【關(guān)鍵詞】 神經(jīng)節(jié)，脊；異位自發(fā)放電；丙戊酸；神經(jīng)病理性痛0引言    丙戊酸鈉(sodium valproate, VPA)是目前臨床上應(yīng)用較廣的抗癲癇藥物，1988年Sorensen1報道了臨床采用VPA和丙戊酸鎂預防治療偏頭痛，特別是嚴重偏頭痛，獲得了較滿意的效果. 其后的研究發(fā)現(xiàn)VPA在治療三叉神經(jīng)痛2、糖尿病性神經(jīng)病變3以及皰疹性疼痛4等也具有滿意的療效. 但是，關(guān)于VPA的作用機制卻不甚清楚. 我們在背根節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)慢性壓迫模型上，用分離背根單纖維的技術(shù)觀察VPA對受損DRG神經(jīng)元異

6、位自發(fā)放電的影響，對VPA的作用機制進行初步探討，為局部應(yīng)用VPA進行鎮(zhèn)痛治療提供依據(jù).1材料和方法1.1材料模型制備：  正常SpraqueDawley大鼠16只(體質(zhì)量為150180 g)，雌雄不拘，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供. 戊巴比妥鈉(40 mg/kg, ip)麻醉后，在腰椎水平切開背部皮膚、分離肌肉，暴露左側(cè)L5椎間孔插入適當直徑小鋼柱，制備DRG慢性壓迫損傷模型5. 1.2方法1.2.1 溶液配制人工腦脊液(artificial cerebrospinal fluid, ACSF)成分(mmol/L)： NaCl 130, KCl 3.5, NaH2PO4

7、 1.25, NaHCO3 24, Glucose 10, MgCl2 1.2, CaCl2 1.2；以上藥品溶于蒸餾水后，以1 mol/L HCl調(diào)pH至7.4，置4冰箱中備用. 實驗所用藥品以上述ACSF配制.1.2.2離體DRG標本的制備及背根纖維放電的引導選擇術(shù)后28 d的大鼠，戊巴比妥鈉(40 mg/kg, ip)麻醉，在背部L1L6處行椎板切除術(shù)，充分暴露兩側(cè)L5 DRG，小心游離L5 DRG及其相連的脊神經(jīng)和背根約2 cm，置950 mL/L O250 mL/L CO2飽和的人工腦脊液中平衡30 min. 將DRG標本放入特制的灌流槽內(nèi)，以ACSF對DRG進行灌流，流速12 mL

8、/min，溫度控制在(33±1)，連接DRG的背根經(jīng)槽間縫隙放入盛有石蠟油的小槽內(nèi)，在體視顯微鏡下從背根分出約20 m直徑的神經(jīng)細束，將中樞端懸掛在白金絲引導電極上記錄DRG單纖維放電，槽間縫隙用凡士林隔開. 如記錄到多個單位的自發(fā)放電，則繼續(xù)細分，直到所觀察的細束中只有一個自發(fā)放電單位時開始實驗記錄. 放電經(jīng)記憶示波器（VC11型）顯示后通過A/D板采集放電信號，采計算機記錄原始放電圖和放電密度. 記錄到自發(fā)放電后穩(wěn)定5 min后，分別以含1，5，10和20 mmol/L VPA的ACSF進行灌流，觀察放電頻率的變化. 通過刺激坐骨神經(jīng)，測量刺激電極與引導電極之間的距離及外周刺激引

9、發(fā)動作電位的潛伏期，計算神經(jīng)傳導速度以對神經(jīng)纖維進行分類. 速度大于2 m/s為A類神經(jīng)元，小于2 m/s為C類神經(jīng)元6. 統(tǒng)計學處理： 實驗數(shù)據(jù)以x±s表示. 將用藥前在ACSF浸浴條件下3 min基礎(chǔ)放電頻率的平均數(shù)作為對照值，用藥后每分鐘的平均放電數(shù)作為測定值，采用SPSS軟件對藥物作用后放電數(shù)降到最低時3 min的放電頻率平均值與加藥前對照值的比較進行配對t檢驗.2結(jié)果2.1損傷DRG神經(jīng)元自發(fā)放電的一般特點在16例慢性壓迫損傷的DRG，離體記錄了95條單纖維的自發(fā)放電活動，其中92條的傳導速度在5.043.0 m/s范圍內(nèi)，屬于A類有髓纖維，其余3條為C類纖維，傳導速度為1.051.72 m/s. 依據(jù)放電峰峰間期(ISI)序列的非線性動力學特征7，損傷DRG神經(jīng)元自發(fā)放電的節(jié)律形式可分為以下3類： 周期節(jié)律(regular firing)，占10.5% (10/95)； 非周期節(jié)律(irregular firing)，占32.6%(31/95)； 陣發(fā)節(jié)律(bursting firing)，占56.8% (54/95) (Fig 1).2.2丙戊酸鈉抑制損傷DRG神經(jīng)元自發(fā)放電分別以1，5，10和20 mmol/L的VPA溶液浸浴損傷DRG，除1 mmol/L作用后神經(jīng)元自發(fā)放電無明顯改變外，5，10和20 mmol/L