HPLC法測定撲感片中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度

1、HPLC法測定撲感片中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度                        【摘要】  目的 建立用HPLC法測定撲感片中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度的方法。方法 采用DIKMA Diamonsil C18柱，以乙腈水三乙胺（體積比15085015）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8±0.1）為流動(dòng)相，檢測波長為265

2、 nm。結(jié)果 馬來酸氯苯那敏在2.814.0 g·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9999，n8），平均加樣回收率為100.39，RSD1.45。結(jié)論 本法簡便、準(zhǔn)確，為撲感片的質(zhì)量控制提高了標(biāo)準(zhǔn)。 【關(guān)鍵詞】  撲感片；馬來酸氯苯那敏；含量均勻度撲感片是由地膽草、蒼耳草、山葡萄、紫蘇油、對乙酰氨基酚及馬來酸氯苯那敏制成的抗感冒復(fù)方制劑。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)収載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第20冊，該標(biāo)準(zhǔn)采用滴定法測定對乙酰氨基酚含量及薄層掃描法測定馬來酸氯苯那敏含量，兩種方法的供試品溶液的前處理繁瑣且易產(chǎn)生誤差。為了更好地保證藥品質(zhì)量且控制片劑間的含量變異程度，本文采用HPL

3、C法對該制劑中的馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度進(jìn)行測定。結(jié)果表明本文方法簡便、準(zhǔn)確。1  儀器與試藥     安捷倫1100全自動(dòng)高效液相色譜儀；UV2201島津可見紫外分光光度計(jì)；超聲波清洗器（KUDOS）。馬來酸氯苯那敏對照品（中國藥品生物制品檢定所，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.3%，批號(hào)：100047-200305）；對乙酰氨基酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號(hào)：100018-200408）；撲感片及缺馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚的陰性對照樣品（廣東萬年青制藥有限公司）；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。2  色譜條件與系

4、統(tǒng)適用性試驗(yàn)     色譜柱：DIKMA  Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5 m）；流動(dòng)相：乙腈水三乙胺（體積比15085015），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8±0.1；檢測波長：265 nm；柱溫：35  ；流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：20 L。理論塔板數(shù)按馬來酸氯苯那敏峰計(jì)算為11 640，分離度為28.04，見圖1。A.對照品  B供試樣品  .陰性樣品1.對乙酰氨基酚  2.馬來酸氯苯那敏圖1  高效液相色譜（略）Fig.1

5、  HPLC chromatogram3  方法與結(jié)果3.1  對照品溶液的制備     精密稱取105 干燥3 h的馬來酸氯苯那敏對照品約17.5 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（1）；精密稱取對乙酰氨基酚對照品400 mg，置100 mL量瓶中，精密加入上述對照品溶液（1）20 mL，加流動(dòng)相適量使溶解，并用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液10.0 mL置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。3.2  供試品溶液的制備

6、0;    取本品10片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取適量(約相當(dāng)于本品1片)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相約80 mL，超聲處理（功率300 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，0.45 m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。3.3  陰性對照溶液的制備     按處方比例及制備方法，制備缺馬來酸氯苯那敏和對乙酰氨基酚的陰性樣品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行檢測。結(jié)果在對照品出峰位置未見其它雜質(zhì)干擾峰（見圖1），說明處方中其它成分對對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的測定無干擾。3.4&

7、#160; 線性范圍的考察      精密吸取上述對照品貯備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0 mL，分別置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，依次進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積。對照品濃度作為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程：Y=-2.124 821.712 9X，r=0.9999。表明馬來酸氯苯那敏在2.814.0 g· mL-1范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。           &

8、#160;                 3.5  精密度試驗(yàn)     取同一份供試品溶液（批號(hào)為050801），重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值，得RSD%為0.53%，表明精密度良好。3.6  穩(wěn)定性試驗(yàn)     取同一份供試品溶液（批號(hào)為050801），分別于配制后0，1，2，3，4，6，8，12，16，24 h進(jìn)樣，測定峰面

9、積，得RSD%為0.34%（n=10），表明供試品溶液在24  h內(nèi)穩(wěn)定。3.7  重復(fù)性試驗(yàn)     取同一批號(hào)供試品（批號(hào)為050801），分別平行稱取6份，照樣品含量測定項(xiàng)下測定，測得馬來酸氯苯那敏標(biāo)示量為115.50，RSD為1.15，表明重復(fù)性良好。3.8  回收率試驗(yàn)     采用加樣回收法，精密稱取同一批已知含量的樣品（批號(hào)為050801）15份，每份約相當(dāng)于0.13 g，每5份1組，分別于各組分中精密加入馬來酸氯苯那敏對照品貯備液4.0，5.0，6.0 mL，即80%，

10、100%，120%的馬來酸氯苯那敏對照品溶液（0.0695 mg·mL-1），按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.39%，RSD為1.45%?？梢姳痉ň哂辛己玫幕厥章剩姳?。表1  馬來酸氯苯那敏加樣回收率試驗(yàn)（略）Tab.1  Recovery test of chlophenamine maleate3.9  樣品測定     按上述測定方法對5批樣品進(jìn)行測定，計(jì)算含量，5批樣品測定結(jié)果見表2。3.10  樣品含量均勻度測定     取本品

11、1片，除去糖衣，研細(xì)，置100 mL量瓶中，其余步驟同供試品溶液制備項(xiàng)，以上述色譜條件按中國藥典2005年版二部附錄X E含量均勻度檢查法測定，結(jié)果見表3。  表2  樣品中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度測定結(jié)果（略）  Tab.2  Content and uniformity of samples4  討論4.1  檢測波長的選擇     經(jīng)過對馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚對照品溶液的紫外吸收光譜測定及參考有關(guān)文獻(xiàn)1，考慮到撲感片處方中對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏（0.7 mg ·

12、片1）的含量相差懸殊，為提高馬來酸氯苯那敏定量的準(zhǔn)確性，故把檢測波長定為265 nm。在此波長下，馬來酸氯苯那敏有較大的響應(yīng)值，重現(xiàn)性好。4.2  流動(dòng)相pH值的選擇     pH值對馬來酸氯苯那敏的出峰時(shí)間及峰形影響較大。當(dāng)pH值為3.03.5時(shí)，撲感片中的馬來酸氯苯那敏和對乙酰氨基酚兩個(gè)主成分色譜峰與陰性樣品峰不能很好分離，且馬來酸氯苯那敏的峰變寬，保留時(shí)間變長。當(dāng)pH值為2.8±0.1，色譜峰得到較好的分離，峰形比較理想，馬來酸氯苯那敏與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.52附錄VD。流動(dòng)相中使用三乙胺可有效改善前沿峰現(xiàn)象，經(jīng)反復(fù)摸

13、索，最終以乙腈水三乙胺（體積比15085015）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.8±0.1）為本法的流動(dòng)相。4.3  實(shí)驗(yàn)中分別對提取溶劑、提取時(shí)間進(jìn)行考察：以無水乙醇、甲醇、流動(dòng)相、水為提取溶劑，均超聲30 min，經(jīng)比較，以流動(dòng)相作為提取溶劑為佳；再以流動(dòng)相為提取溶劑，對同一批號(hào)樣品的超聲時(shí)間進(jìn)行考察，選擇超聲15、30、45、60 min后處理的樣品溶液分別進(jìn)行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時(shí)間30 min處理樣品。4.4  實(shí)驗(yàn)考察了5批撲感片中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度，結(jié)果1批樣品的A+1.80S大于15.0，A+S亦大于15.0。根據(jù)中國藥典含量均勻度檢查法規(guī)定2附錄XE，可直接判該批樣品不符合規(guī)定。分析其原因可能是撲感片為中西藥復(fù)方制劑，其中藥浸膏與化學(xué)藥的質(zhì)量比約為51，而化學(xué)藥馬來酸氯苯那敏（0.7 mg ·片1）和對乙酰氨基酚的質(zhì)量比約為157倍，再加上中藥浸膏粘度較大，使馬來酸氯苯那敏不易混勻。因此，建議廠家在生產(chǎn)此類中