凱普21種基因型HPV分型與其它比較

1、凱普HPV分型產(chǎn)品與市場其它HPV檢測產(chǎn)品的比較 凱普HPV21種基因型分型檢測試劑盒介紹 與美國雜交捕獲試驗（HC-2）的比較 與深圳亞能HPV分型檢測試劑盒的比較人乳頭狀瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測試劑盒人乳頭狀瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測試劑盒 簡稱：簡稱：HPVHPV基因分型檢測試劑盒基因分型檢測試劑盒 應(yīng)用：婦女子宮頸癌的早期篩查應(yīng)用：婦女子宮頸癌的早期篩查 尖銳濕疣輔助診斷尖銳濕疣輔助診斷HYBRIMAXHYBRIMAX醫(yī)用核酸分子快速雜交儀醫(yī)用核酸分子快速雜交儀 凱普核酸分子快速雜交儀擁有二項美國專利凱普核酸分子快速雜交儀擁有二項美國專利(美國專利號美國專利號 5 741 647，6 020

2、 187 )和一項中國和一項中國專利專利(中國專利號中國專利號 02102795.1) ?；浭乘幈O(jiān)械粵食藥監(jiān)械(準(zhǔn)準(zhǔn))字字2007第第2400216號號 。 以全新的導(dǎo)流雜交理念將傳統(tǒng)以全新的導(dǎo)流雜交理念將傳統(tǒng)DNADNA、RNARNA和蛋白和蛋白 雜交需幾小時到數(shù)天的雜交時間縮短為幾分鐘到雜交需幾小時到數(shù)天的雜交時間縮短為幾分鐘到十幾分鐘內(nèi)完成，為低密度基因芯片的最佳工作十幾分鐘內(nèi)完成，為低密度基因芯片的最佳工作平臺。平臺。金屬反應(yīng)室金屬反應(yīng)室金屬多孔板金屬多孔板塑料薄膜塑料薄膜雜交膜雜交膜硅膠圈硅膠圈反應(yīng)分隔室反應(yīng)分隔室壓扣蓋壓扣蓋機(jī)器外殼機(jī)器外殼反應(yīng)室反應(yīng)室HYBRIMAXHYBRIMA

3、X醫(yī)用核酸分子快速雜交儀醫(yī)用核酸分子快速雜交儀導(dǎo)流雜交原理導(dǎo)流雜交法與傳統(tǒng)雜交法比較動力學(xué)比較動力學(xué)比較傳統(tǒng)雜交法傳統(tǒng)雜交法導(dǎo)流雜交法導(dǎo)流雜交法雜交時間1小時10分鐘在雜交膜上的反應(yīng)方式目的DNA只能與雜交膜表面探針進(jìn)行雜交反應(yīng)目的DNA可與雜交膜表面及孔徑中的探針進(jìn)行雜交反應(yīng)，立體式雜交雜交背景(膜片背景顏色）高（深）低(淺)交叉污染多次開關(guān)管蓋,完全手工操作，需要向外傾倒液體，易污染；有同一容器內(nèi)洗滌過程，容易交叉污染實(shí)驗全過程在隔離的反應(yīng)室內(nèi)完成，通過外部負(fù)壓吸引，分子不易向外擴(kuò)散，不易交叉污染。無效復(fù)性高低雜交效率低高 凱普HPV21種基因型分型檢測試劑盒介紹 與美國雜交捕獲試驗（HC

4、-2）的比較 與深圳亞能HPV分型檢測試劑盒的比較試驗原理試驗原理凱普凱普HPV分型分型 HC-2*分型分型分型分型不分型不分型檢測基因型檢測基因型21種基因型種基因型 13高危型高危型檢測成本檢測成本成本低成本低試劑成本試劑成本儀器成本儀器成本內(nèi)對照內(nèi)對照成本高成本高試劑成本試劑成本儀器成本儀器成本6個對照個對照儀器平臺儀器平臺可擴(kuò)展性強(qiáng)可擴(kuò)展性強(qiáng)可擴(kuò)展性差可擴(kuò)展性差HPV檢測方法比較檢測方法比較凱普凱普HPV基因分基因分型檢測試劑盒型檢測試劑盒HC-II96.61%98.48%95.74%87.61%來源:臨床考核報告來源：內(nèi)部研究資料來源：內(nèi)部研究資料&. limitations

5、 of the procedure DIGENE high-risk HPV DNA Test hybrid capture-II,P24 來源：來源：limitations of the procedure DIGENE high-risk HPV DNA Test hybrid capture- II,P24 &. Mario Poljak, Irena J. Marin, Katja Seme, Hybrid Capture II HPV Test detects at least 15 human papillomavirus genotypes not included in

6、 its current high-risk probe cocktail. Adriana Vince Journal of Clinical Virology 25 (2002) 89-97 1. PCR法檢測HPV不準(zhǔn)確，容易出現(xiàn)污染。 多家醫(yī)院的臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗室已經(jīng)得到國家臨檢中心和省臨檢中心認(rèn)證，有相應(yīng)的硬件配置和管理軟件規(guī)范。 多種PCR檢測試劑已經(jīng)得到國家藥監(jiān)局認(rèn)證，PCR方法已得到臨床醫(yī)生的廣泛認(rèn)可。 HC-方法是采用分子雜交+化學(xué)發(fā)光使信號放大的原理，無需基因擴(kuò)增。但HC-檢測系統(tǒng)采用專利的全長8000bp的RNA探針及專利的抗DNA-RNA抗體。容易造成交叉反應(yīng)和假陽性。

7、2. PCR方法的交叉污染和假陽性。 樣本間的交叉污染在任何一項檢測中都需要避免。不是PCR方法所特有。 通過PCR保證了檢測的靈敏度，引物和探針的堿基特異配對，充分保證了檢測的特異性。 3. 分型的意義。 隨著研究的進(jìn)展，對不同高危型HPV的致癌風(fēng)險的研究不斷深入；新的高危型HPV不斷增加。4. HC-2是定量或半定量的試劑嗎？HC-2 的說明書已明確表述其檢測為定性檢測，定量或半定量的概念是經(jīng)銷公司在市場推廣過程中的概念。如其為定量或半定量，那么它的結(jié)果可以給出HPV的載量或載量范圍嗎？HC-2的結(jié)果判讀類似于抗體夾心法ELISA，其OD值的比值與樣本分子的量沒有很好的線性關(guān)系，所以不能給

8、出定量的值。同樣，凱普HPV分型試驗的膜雜交點(diǎn)的灰度也不能很好的反映病毒的載量，所以不能用灰度的深淺推斷HPV的載量。目前對病毒載量的測定通常使用熒光定量PCR的方法。對宮頸脫落細(xì)胞樣本中HPV定量要做到對細(xì)胞和病毒同時定量才有意義。 凱普HPV21種基因型分型檢測試劑盒介紹 與美國雜交捕獲試驗（HC-2）的比較 與深圳亞能HPV分型檢測試劑盒的比較實(shí)驗原理步驟：步驟： 雜交進(jìn)行時雜交進(jìn)行時樣本的單鏈樣本的單鏈DNA與薄膜上的探針結(jié)合與薄膜上的探針結(jié)合 樣本樣本DNA帶有生物素的標(biāo)記帶有生物素的標(biāo)記 然后然后把酶加到結(jié)合物上，酶會與生物素結(jié)合把酶加到結(jié)合物上，酶會與生物素結(jié)合 再加入底物溶液，

9、酶便能催化顏色物的形成，從而顯示雜交的產(chǎn)生再加入底物溶液，酶便能催化顏色物的形成，從而顯示雜交的產(chǎn)生探針單鏈DNA（生物素標(biāo)記）酶底物薄膜實(shí)驗步驟實(shí)驗步驟DNA提?。▌P普提?。▌P普&亞能）亞能）臨床樣本臨床樣本宮頸脫落細(xì)胞宮頸脫落細(xì)胞離心，獲得細(xì)胞離心，獲得細(xì)胞裂解細(xì)胞，裂解細(xì)胞，釋放釋放DNA樣本樣本DNA實(shí)驗步驟實(shí)驗步驟PCR過程（凱普過程（凱普&亞能）亞能）樣樣本本DNA加樣加樣PCR MIX凱普凱普(40循環(huán)）循環(huán)） 亞能亞能(40循環(huán)）循環(huán)） 95 9min 95 10min 95 20s 94 30s55 30s 42 90s 72 30s 72 30s72 5mi

10、n 72 5min凱普凱普 亞能亞能實(shí)驗步驟實(shí)驗步驟雜交過程（凱普雜交過程（凱普&亞能）亞能）PCR產(chǎn)物產(chǎn)物熱變性熱變性沸水中加熱沸水中加熱10 min 95 5min 冰上冰上2min雜交雜交45 10min51 1 h過夜過夜 實(shí)驗步驟實(shí)驗步驟雜交過程（凱普雜交過程（凱普&亞能）亞能）凱普凱普 亞能亞能洗膜，去除洗膜，去除未雜交的未雜交的PCR產(chǎn)物產(chǎn)物在同一管在同一管子內(nèi)子內(nèi):洗多洗多張膜張膜-交叉交叉污染；洗污染；洗1張膜張膜-耗費(fèi)耗費(fèi)試劑。試劑。45 800ul 3次次51 40ml 15 min 1次 酶標(biāo)酶標(biāo)酶與膜上目酶與膜上目標(biāo)分子結(jié)合標(biāo)分子結(jié)合室溫輕搖浸泡室溫輕

11、搖浸泡30 min 封阻封阻5min；酶標(biāo)；酶標(biāo)25 3.5min 實(shí)驗步驟實(shí)驗步驟雜交過程（凱普雜交過程（凱普&亞能）亞能）凱普凱普 亞能亞能洗膜，去除洗膜，去除未結(jié)合的酶標(biāo)液未結(jié)合的酶標(biāo)液 800ul 4次次顯色顯色膜上的酶與膜上的酶與底物反應(yīng)底物反應(yīng)36 3-5min A液室溫輕搖洗液室溫輕搖洗2次，每次次，每次5 min。用用C液室溫洗膜液室溫洗膜12 min 現(xiàn)配顯色液，避光顯色現(xiàn)配顯色液，避光顯色10 min 實(shí)驗結(jié)果（凱普實(shí)驗結(jié)果（凱普&亞能）亞能）凱普凱普 亞能亞能陰性結(jié)果陰性結(jié)果陽性結(jié)果陽性結(jié)果無效結(jié)果無效結(jié)果陰性對照陰性對照陽性對照陽性對照陽性結(jié)果陽性結(jié)果H

12、PV分型試劑（凱普亞能）凱普（導(dǎo)流雜交法）凱普（導(dǎo)流雜交法）亞能（常規(guī)膜雜交法）亞能（常規(guī)膜雜交法）專利情況專利情況2 2項美國項美國/1/1項中國專利項中國專利無無操作原理操作原理導(dǎo)流雜交法導(dǎo)流雜交法傳統(tǒng)雜交法傳統(tǒng)雜交法操作時間操作時間4 4小時左右小時左右 1 1天左右天左右操作特點(diǎn)操作特點(diǎn)1.雜交試劑直接可以使用雜交試劑直接可以使用2.雜交操作僅開蓋一次，每個樣雜交操作僅開蓋一次，每個樣本放在不同的分隔室中，將產(chǎn)本放在不同的分隔室中，將產(chǎn)物間的交叉污染降到最低；物間的交叉污染降到最低；1.雜交試劑需在雜交時配置雜交試劑需在雜交時配置2.操作過程中需進(jìn)行多次開操作過程中需進(jìn)行多次開蓋蓋,

13、,洗膜等操作在同一管洗膜等操作在同一管子里進(jìn)行，子里進(jìn)行，容易發(fā)生產(chǎn)物容易發(fā)生產(chǎn)物間交叉污染；間交叉污染；實(shí)驗質(zhì)控實(shí)驗質(zhì)控完善的內(nèi)對照：設(shè)有完善的內(nèi)對照：設(shè)有PCRPCR及雜交對及雜交對照，以確保對照，以確保對PCRPCR及雜交過程及雜交過程全面控制；避免因系統(tǒng)誤差導(dǎo)全面控制；避免因系統(tǒng)誤差導(dǎo)致的漏檢。致的漏檢。無無PCRPCR內(nèi)對照點(diǎn)內(nèi)對照點(diǎn), ,容易漏診出容易漏診出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象；需要陽性現(xiàn)假陰性現(xiàn)象；需要陽性陰性外對照質(zhì)控。陰性外對照質(zhì)控。HPVHPV基因型基因型2121種種（20種種+CP8304）；其中；其中CP8304為中國人群感染比較為中國人群感染比較常見的基因型，約占總常見的基因

14、型，約占總HPV感染的感染的5%左右左右2323種種（20種種+73，83，MM4）；其中；其中73，83，MM4在中國人群中感染在中國人群中感染很少見很少見靈敏度較低的靈敏度較低的基因型基因型HPV35HPV35，4343的靈敏度稍差，但中國的靈敏度稍差，但中國人群感染率較低。人群感染率較低。HPV52,53HPV52,53(1，2)的檢測靈敏度的檢測靈敏度較差。較差。HPV52HPV52是中國人常是中國人常見感染的高危基因型見感染的高?；蛐?1,3,4)。其他方面的比較（凱普其他方面的比較（凱普 & 亞能）亞能）凱普凱普亞能亞能學(xué)術(shù)支持學(xué)術(shù)支持全國范圍的專家團(tuán)隊，多家全國范圍的專家團(tuán)隊，多家有影響力的醫(yī)院。有影響