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1、n結(jié)果分析:陽(yáng)性-凝集或溶血 陰性-無(wú)凝集無(wú)溶血先觀察有無(wú)溶血、再觀察有無(wú)凝集n注意事項(xiàng):細(xì)胞濃度25%(嚴(yán)格按說(shuō) 明書(shū)操作)、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫度、弱凝集分析n優(yōu)點(diǎn):免疫球蛋白分5類: IgM IgG IgA IgD IgEIgG(單體)IgM(五聚體) IgG IgM結(jié)構(gòu) 單體 五聚體半衰期 2023天 10天是否能通過(guò)胎盤(pán) 是 否是否可激活補(bǔ)體 是 是抗原結(jié)合部位 2個(gè) 10個(gè)最大作用距離 14nm 30nm注:紅細(xì)胞在生理鹽水介質(zhì)中的間距約為25nm。IgM 與 IgG介質(zhì)為0.9NaClIgGIgG介質(zhì)為0.9NaClIgG介質(zhì)為0.9NaClIgG介質(zhì)為0.9NaClIgGIg
2、GIgG3加入抗人球蛋白加入抗人球蛋白1紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時(shí)和兩抗人球蛋白可以同時(shí)和兩個(gè)不完全抗體的個(gè)不完全抗體的FC段結(jié)合,段結(jié)合,從而把紅細(xì)胞連接在一起。從而把紅細(xì)胞連接在一起。 微柱凝膠試驗(yàn)原理:n微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱,柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室??乖贵w反應(yīng)后離心,凝膠柱起過(guò)篩作用,紅細(xì)胞凝集塊不能通過(guò)凝膠的間隙而留在凝膠的上部,未凝集的紅細(xì)胞通過(guò)凝膠的間隙,沉積到底部。微柱凝膠試驗(yàn)注意事項(xiàng)n嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作。n獻(xiàn)血者DAT陽(yáng)性,干擾結(jié)果判讀。n患者自身抗體干擾。n注意加樣順序。n配制細(xì)胞濃度準(zhǔn)確。2 加入
3、聚凝胺后,可以縮短紅細(xì)胞之間的距離,使其非特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉,可以中和聚凝胺4 紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺枸櫞酸鈉2 加入聚凝胺后,縮短紅細(xì)胞之間的距離,讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4 由于不完全抗體的結(jié)合,紅細(xì)胞的特異性凝集不消失聚凝胺枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉不完全抗體不完全抗體1試驗(yàn)技術(shù)原因:采樣不規(guī)范、試劑質(zhì)量問(wèn)題(細(xì)菌污染)、離心速度和時(shí)間、抗原抗體比例不適當(dāng)?shù)取?受檢紅細(xì)胞問(wèn)題(抗原減弱或未知抗原):ABO亞型、白血病、直抗陽(yáng)性、獲得性異常、移植術(shù)后等。3受檢血清問(wèn)題(抗體減弱或未知抗體):年齡、白血病、不規(guī)則抗體、異常球蛋白濃度、
4、冷凝聚、靜脈輸用大分子藥物等。血型鑒定正反不一致的原因獲得性異常1獲得性B:細(xì)菌酶作用,只見(jiàn)于A型,腸道疾病,酸化血清可消除,疾病緩解會(huì)消除。2獲得性多凝聚:感染會(huì)暴露T/Tn等隱蔽抗原,而抗-T等天然存在,感染減輕凝聚會(huì)消失。3急性白血?。河绕銩抗原減弱,可呈混合凝聚。4老年人:尤其A抗原減弱常見(jiàn)。1 增強(qiáng)技術(shù):4孵育對(duì)IgM抗體增強(qiáng);反定型加大血清量可提高弱抗體檢出率;增強(qiáng)劑:凝聚胺、蛋白水解酶等。2 針對(duì)冷凝集素:在37 可解除凝聚。3 直抗陽(yáng)性紅細(xì)胞處理:放散技術(shù),56 熱放散、乙醚放散、2-Me。4 亞型檢測(cè):抗原強(qiáng)度,家系調(diào)查。5 混合視野: 非O型輸入O型紅細(xì)胞:會(huì)消失 ABO不
5、相容的骨髓移植:會(huì)消失 嵌合體細(xì)胞:A+O,B+O第一步:排除人為因素或操作失誤第二步:調(diào)查臨床資料第三步:根據(jù)第二步設(shè)計(jì)針對(duì)性試驗(yàn)驗(yàn)證 患者年齡小于1歲或大于60歲嗎?患者是孕婦嗎?患者是否是骨髓瘤、白血病、腸道阻塞、胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、移植術(shù)后?患者近期有無(wú)輸血、有無(wú)靜脈輸用大分子藥物?凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)的細(xì)節(jié)凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)的細(xì)節(jié)標(biāo)本要求:標(biāo)本要求:紫頭管(紫頭管(EDTA抗凝)抗凝)不受纖維蛋白析不受纖維蛋白析出的干擾。采待檢者靜脈血出的干擾。采待檢者靜脈血4ml(最小量不低于(最小量不低于2ml),),3400rpm離心離心5min。配制配制5%紅細(xì)胞懸液:紅細(xì)胞懸液:取壓積紅細(xì)胞取壓積紅細(xì)胞1滴,加入生滴,加入生理鹽水理鹽水16滴(滴(0.8ml)主側(cè)管主側(cè)管 /次側(cè)管次側(cè)管 :血漿血漿2滴,滴,5%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液1滴;每滴;每管各加管各加LIM溶液溶液
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