α干擾素中和抗體對慢性病毒性肝炎療效的影響

1、    干擾素中和抗體對慢性病毒性肝炎療效的影響        【摘要】目的探討慢性病毒性肝炎患者中-干擾素(IFN)中和抗體(NA)的產(chǎn)生及其對干擾素療效的影響。方法采用抗病毒中和生物測定法檢測了30名健康人及116例經(jīng)三種亞型IFN治療的慢性病毒性肝炎患者血清中的NA。結(jié)果健康人及IFN治療前的患者中未檢出NA，治療后共20例(17.2%)NA陽性。NA在IFN治療后2個月即可出現(xiàn)，6個月達(dá)高峰(20例全部陽性)，至9個月后則有所下降。其中IFN 2a、IFN 2b和IF

2、N 1b治療組的NA陽性率分別為34.6%、13.2%和11.5%。NA陽性組、高滴度組的病毒陰轉(zhuǎn)率明顯低于NA陰性和低滴度組(P<0.01; P<0.05)。而NA陽性組病毒復(fù)發(fā)率則顯著高于NA陰性組(P<0.05)。結(jié)論IFN治療后可產(chǎn)生NA，且具有一定的時間規(guī)律性。不同亞型的IFN其NA的產(chǎn)生率不同。NA可中和IFN的活性而影響干擾素的抗病毒療效?！局黝}詞】干擾素-抗體，病毒中和試驗肝炎病毒抗病毒中和生物測定法 The influence of interferon alpha neutralizing antibodies on the therapeutic eff

3、ectiveness in patients with chronic viral hepatitisTONG Fuyi*, TANG Yonghuang, BAI Jingyu.  * Institute of Hepatology, Changzhou Third Peoples Hospital, Changzhou 213001【Abstract】ObjectiveTo study the influence of interferon alpha (IFN-) neutralizing antibody (NA) on the therapeutic effectivene

4、ss of IFN-.Methods30 healthy persons and 116 patients with chronic viral hepatitis treated with IFN- were studied, and the NA in their sera were tested by using the antiviral neutralizing bioassay (ANB). ResultsNone was positive for NA in sera of the healthy persons and patients before IFN- treatmen

5、t, 20 of 116 patients devoloped NA after IFN- therapy, the positivity was 17.2%(20/116). NA appeared after 2 months of IFN treatment, all 20 patients were positive after 6 months. The NA positivity in treated groups of IFN- 2a、IFN- 2b and IFN- 1b were 34.6%、13.2% and 11.5% respectively. The clearanc

6、e rates of virus in NA-positive group and NA high-titered group were significantly lower than those in NA-negative group and NA low-titered group (P<0.01 and P<0.05, respectively) In contrast, the relapse rates of virus in NA-positive group was markedly higher than that in NA-negative group (P

7、<0.05).ConclusionNA may develop with its regularity in the chronic viral hepatitis patients treated with IFN. The frequencies of NA development are related with the subtypes of IFN used. NA can inhibit IFN activity, thereby affecting the therapeutic effectiveness of IFN.【Key words】Interferon alph

8、aAntibodies,viralNeutializativeHepatitis virusAntiviral neutralizing bioassay目前-干擾素(IFN-)已成為病毒性肝炎抗病毒治療的主要藥物。實踐表明，IFN不僅能有效地防止肝炎進(jìn)一步慢性化，改善臨床癥狀，而且還能明顯抑制慢性肝炎患者肝組織病變的活動，緩解病情。然而，仍有部分患者對IFN治療無反應(yīng)或僅有短暫反應(yīng)后再次復(fù)發(fā)。原因之一與機體產(chǎn)生了抗干擾素的抗體，特別是能夠中和IFN生物學(xué)活性的中和抗體(NA)有關(guān)1，2。國內(nèi)有關(guān)生物學(xué)方法測定IFN-中和抗體的報告不多3。我們曾探討過NA產(chǎn)生的時間規(guī)律性4。繼后，又采用抗病毒

9、中和生物測定法檢測慢性病毒性肝炎患者血清IFN-中和抗體，旨在探討NA的產(chǎn)生對干優(yōu)素療效的影響。1材料和方法1.1研究對象116例慢性病毒性肝炎患者，來源于19951996年的住院病例。所有病例均符合1995年北京第五次全國傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修訂的病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)5。其中；男78例，女38例；年齡1949歲。慢性乙型肝炎88例，慢性丙型肝炎28例。排除合并其他類型病毒感染及藥物性、自身免疫性肝病。IFN治療包括使用IFN 2a 26例，IFN 2b 38例，IFN 1b 52例。治療劑量均為3 mU/次，每周3次，肌肉注射。療程6個月，隨訪6個月。基礎(chǔ)用藥為維生素B、C及肌苷等，不用免疫

10、抑制劑。治療前及治療開始后每月末定期采血，直到隨訪結(jié)束。并以30名健康人(男18例，女12例，年齡1848歲；均未用過IFN及免疫抑制劑)血清作對照。1.2材料方法測定細(xì)胞采用人羊膜Wish細(xì)胞株，攻擊病毒選用水泡性口炎病毒(VSV)，均由湖南醫(yī)科大學(xué)提供。IFN 2a(Referon):瑞士Roch公司生產(chǎn)；IFN 2b(Intron A):美國Scheing-Plough公司生產(chǎn)；IFN 1b(Sinogen):深圳Kexing公司生產(chǎn)。測定干擾素中和抗體采用抗病毒中和生物測定法，參照文獻(xiàn)3，4進(jìn)行。即以VSV攻擊Wish細(xì)胞，觀察干擾素對細(xì)胞的保護(hù)作用。細(xì)胞病變程度分為04級，以細(xì)胞出現(xiàn)

11、3級或3級以上病變?yōu)殛栃詷?biāo)準(zhǔn)，血清最高稀釋倍數(shù)作為其效價。并設(shè)置有關(guān)對照。對治療血清予以相應(yīng)亞型的IFN進(jìn)行中和試驗，以測定NA，對照組則以上述3種亞型的IFN進(jìn)行中和試驗以測定NA。對結(jié)果采用四格表的2檢驗及確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。2結(jié)果2.1干擾素中和抗體的產(chǎn)生率對照組32名健康人中，NA全部陰性。治療組116例患者中，IFN治療前未測得NA。治療及隨訪過程中共有20例NA陽性，總檢出率為17.2%(20/116)。各IFN治療組NA的產(chǎn)生率見表1。表1IFN治療組的中和抗體檢出率Tab.1Neutralizing antibody detection ratesin -IFN trea

12、ted groups組別Group治療用藥IFN used例數(shù)Case no.陽性例數(shù)Positive no.檢出率(%)Detection rate(%)IFN2a26934.6IFN2b38513.2IFN1b52611.5合計1162017.2     注：與或與比較：P<0.05；與比較：P>0.05.Notes:When comparcd with or , P<0.05. when compared with ,P>0.052.2中和抗體產(chǎn)生的時間規(guī)律20例NA陽性患者中，IFN治療第1個月均未檢測到NA；第2個月有4

13、例NA陽性；第3個月有16例陽性；第45個月有18例陽性；第68個月20例均為陽性；第910個月有1例NA消失，即19例陽性；第1112個月有18例陽性。2.3中和抗體對干擾素療效的影響20例NA陽性患者中，IFN治療結(jié)束時，有5例(HBV DNA 4例，HCV RNA 1例)血清病毒陰轉(zhuǎn)，隨訪中有3例復(fù)發(fā)；而96例NA陰性患者中，有59例(61.5%，HBV DNA 39例，HCV RNA 20例)病毒陰轉(zhuǎn)，隨訪中有8例(13.6%，HBV DNA 6例，HCV RNA 2例)復(fù)發(fā)。病毒總陰轉(zhuǎn)率為55.2%(64/116)，總復(fù)發(fā)率為17.2%(11/64)。2.4中和抗體滴度對干擾素療效的

14、影響在20例NA陽性患者中，測得NA滴度在1200至16 400之間。其中滴度11 600者有15例，其病毒陰轉(zhuǎn)只有1例；而NA滴度<11 600者有5例，其病毒陰轉(zhuǎn)有4例。3討論干擾素抗體有中和抗體(NA)和非中和抗體(結(jié)合抗體)之分。中和抗體可以中和干擾素的生物學(xué)活性，其檢測意義較大。測定干擾素抗體目前至少有4種方法，抗病毒中和生物測定法檢測的是針對于IFN生物活性有關(guān)的抗原決定簇的抗體。Vallbracht等6首次報道在IFN治療患者血清中，應(yīng)用生物學(xué)方法檢出了能夠中和IFN活性的IgG抗體。本組32名健康人及IFN治療前的患者血清中，均未檢測到NA?？赡芘c機體免疫系統(tǒng)未接觸到外來

15、IFN抗原有關(guān)。而116例治療后患者檢測到20例陽性，表明IFN治療后可產(chǎn)生NA，但總的陽性率較低(17.2%)。不同亞型的IFN，其NA的產(chǎn)生率有所不同(表1)，這可能與IFN本身抗原性的差異有關(guān)，如IFN 2a在氨基酸排列第23位點上，以賴氨酸分子取代原天然排列的甘氨酸，而IFN 2b則以精氨酸取代甘氨酸。NA的產(chǎn)生具有一定的時間規(guī)律性。IFN治療2個月即可出現(xiàn)NA，3個月NA大幅度上升，6個月達(dá)高峰，直至9個月后則有所下降。因此臨床延長IFN療程并不影響NA的產(chǎn)生。NA與IFN療效的關(guān)系尚存在爭論，如Graxi等7認(rèn)為，NA不影響IFN的抗病毒療效。而多數(shù)報告認(rèn)為中和抗體能降低血清IFN

16、水平，中和IFN的抗病毒作用。Lok等8研究證實，HBV DNA已轉(zhuǎn)陰的乙肝患者若出現(xiàn)NA，其HBV DNA可再度陽轉(zhuǎn)。Roffi等9研究慢性丙肝容易復(fù)發(fā)的原因之一，即由于NA的出現(xiàn)使臨床治療反應(yīng)消失。劉國珍等3研究結(jié)果也提示，NA的產(chǎn)生是影響IFN近期和遠(yuǎn)期療效的重要因素之一。我們的研究顯示，IFN治療結(jié)束后，NA陽性患者血清病毒陰轉(zhuǎn)率(5/20)明顯低于NA陰性者(61.5%)，P<0.01，而前者復(fù)發(fā)率(3/5)大于后者(13.6%)，P<0.05。故我們的研究亦表明，NA與IFN療效密切相關(guān)，NA可中和所使用的IFN，從而降低IFN的療效。另外，NA滴度的高低也與IFN療效

17、密切相關(guān)。高滴度的NA(滴度11 600)者，病毒陰轉(zhuǎn)率(1/15)明顯低于低滴度的NA(滴度<11 600)(4/5)，P<0.05。Lok等8研究也證實，高滴度NA的治療反應(yīng)明顯低于低滴度NA。這均表明NA滴度愈高對IFN療效影響愈大。此進(jìn)一步證實NA抑制了IFN的抗病毒活性。由于各亞型IFN治療NA的產(chǎn)生率有差異，且有些IFN產(chǎn)生的NA間無明顯交叉反應(yīng)10，因此臨床上當(dāng)某亞型IFN治療因NA產(chǎn)生而致效果下降時，可試換用其他亞型的IFN，有可能提高其療效。我們認(rèn)為，中和抗體可作為干擾素療效考核指標(biāo)之一，并可用于指導(dǎo)臨床選擇病例，判斷預(yù)后。檢測干擾素中和抗體具有較大的臨床意義。作

18、者單位：童福易、白敬羽  213001江蘇省常州市第三人民醫(yī)院肝病研究室 唐永煌  暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院參考文獻(xiàn)1Steis RG, Smith JW, Urba WJ, et al. Resistance to recombinant interferon alpha-2a in hairy cell leukemia associated with neutralizing anti-interferon antibodies. New Eng1 J Med, 1988, 318:1409-1413.2Von Wussow P, Hartmann F, Freun

19、d M, et al. Leukocyte-derived interferon-alpha in patients with antibodies to recombinant IFN-alpha 2b. Lancet, 1988, 1:882-883.3劉國珍，胡國齡，譚德明，等.干擾素中和抗體對干擾素療效的影響.中華傳染病雜志，1997，15：197-199.4童福易，唐永煌，白敬羽，等.病毒性肝炎患者-干擾素中和抗體發(fā)生率及其時間規(guī)律的研究.臨床肝膽病雜志，1999，15：38-40.5中華醫(yī)學(xué)會傳染病寄生蟲病學(xué)會.病毒性肝炎防治方案(試行).中華傳染病雜志，1995，13：241-2

20、47.6Vallbracht A, Treuner T, Flehmig B, et al. Interferon neutralizing antibodies in a patients treated with human fibroblast interferon. Nature, 1981,287:496-498.7Craxi A, Dimarco V, Volpes R, et al. Anti-alpah interferon antibodies after alpha interferon treatment in patients with chronic viral hepatitis. Hepato-gastroenterol, 1988,35:304-305.8