凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗操作規(guī)程

1、凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗操作規(guī)程(SOP文件)1目的作為介質(zhì)輔助用于完全抗體及不完全抗體的臨床篩選檢 測及輔助用于臨床交叉配血實驗。2檢驗原理紅細胞表面帶有大量的負電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚 集，當(dāng)紅細胞懸浮在電解質(zhì)時，陽離子會被紅細胞的負電荷 所吸引，此時紅細胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，而形成 Zeta電位，Zeta電位決定紅細胞之間的排斥作用。凝聚胺技術(shù)首先利用低離子溶液(LIM),降低介質(zhì)的離子 強度，減少紅細胞周圍的陽離子云， 以促進紅細胞和血清(血 漿)中的抗體結(jié)合。其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一種高價陽離 子多聚物、肝素中和劑，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中 和

2、紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞Zeta電位降低，縮短紅細胞之間的距離， 使紅細胞產(chǎn)生非特異性的凝聚。最后,加入懸浮液(Resuspending),Resuspending 具有中和凝聚胺(Polybrene)陽離子的作用，使正常的紅細胞非特異性凝聚 散開，試驗結(jié)果為陰性；但如果紅細胞被相應(yīng)的抗體致敏， 則會被凝聚胺凝結(jié)，凝集就不會散開，試驗結(jié)果為陽性。3儲存條件及有效期未開封試劑應(yīng)貯存于 2c25C、相對濕度不大于 80%無 腐蝕性氣體的室內(nèi)；已開封試劑應(yīng)貯存于相對濕度不大于80%無腐蝕性氣體和通風(fēng)良好的室溫環(huán)境，試劑用后應(yīng)及 時擰緊瓶蓋保存；未開封試劑的有效期為二年，在有效期內(nèi) 的已開封試

3、劑應(yīng)在開封后的 6個月內(nèi)使用完。4樣本要求4.1 新鮮血清，含EDTM凝血漿、3%5%J紅細胞懸液。4.2 不能使用溶血標(biāo)本及含枸檬酸鈉、肝素抗凝血漿標(biāo)本。5檢驗方法輔助交叉配血試驗5.1 取試管二支，標(biāo)主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清（血漿）2滴，加供血者3%5%E細胞懸液（洗滌或不洗滌均可） 1滴， 次側(cè)管反之。5.2 各加LIM0.65ml,混合均勻后，再各加 Polybrene 溶液2 滴，并混合均勻。5.3 用離心機3400轉(zhuǎn)/min（相當(dāng)于1000g離心力）離心10秒， 然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。5.4 輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝集，如無凝集，則必 須要重

4、做。5.5 最后加入Resuspending 2滴，輕輕搖動試管混合并同時 觀察結(jié)果。如果在 60秒內(nèi)凝集散開，代表是由 Polybrene 引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑，可進一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。6注意事項6.1 可以用含EDTA之血漿代替血清使用。6.2 若病人血清（血漿）含肝素，如洗腎患者，須多加 46 滴Polybrene溶液以中和肝素。6.3 本試劑盒的操作方法也適用于抗體鑒定。6.4 若試劑使用前為低溫貯存，請回復(fù)室溫再行操作。6.5 加做輔助性抗人球蛋白試驗，目的是增加檢測抗-K的敏感性。6.

5、6 在冬天室溫極低的情況下，操作交叉配血試驗， 莫些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果由 現(xiàn)。若有此懷疑，建議在最后滴入Resuspending時，將試管立即置入37c水溶中，輕輕搖動試管混合，并在60秒內(nèi)觀察結(jié)果。6.7 紅細胞抗原檢測步驟同抗體篩檢試驗，具檢測標(biāo)準血清用已知標(biāo)準血清。6.8 用戶可使用IgG抗D抗體（效價A 64）與RhD陽性紅細 胞反應(yīng)做陽性對照實驗，測試本試劑的有效性。ABO 血型定型操作規(guī)程（SOPC件）1目的用于鑒定人ABO血型2檢驗原理本品系用產(chǎn)生抗 A或抗B血型抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)上清 液（或在上清液中加入少量同型腹水）配制而成，采用凝集 試驗

6、原理，專供鑒定人 ABO血型用。3樣本要求本試劑適用于全血或10%、5 %紅細胞懸液。4檢驗方法平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或 10%紅細胞生理 氯化鈉懸液按1:1攪勻，不必再稀釋，按照有無凝集判定結(jié) 果5結(jié)果判斷血型抗A試劑抗B試劑A+B+OAB+注：“+”有凝集反應(yīng)，“-”無凝集反應(yīng)6檢驗結(jié)果的解釋將已知的抗 A、抗B血型定型試劑與受檢者的紅細胞混合時，與抗A血型定型試劑發(fā)生凝集者即為 A型血型，與抗 B 血型定型試劑發(fā)生凝集者即為 B型血型，與抗 A、抗B血型 定型試劑均發(fā)生凝集者即為 AB型血型，與抗A、抗B血型定 型試劑均不發(fā)生凝集者即為 O型血型。7注意事項7.1 對含有較多

7、自身冷凝集的受檢者，在鑒定血型時往往被誤認為AB血型，遇到此種情況，需用 37生理氯化鈉溶 液洗滌受檢者細胞 2-3次，以去除吸附在紅細胞上的凝集素， 然后再鑒定血型。7.2 在做配型試驗時，如發(fā)現(xiàn)有不配合現(xiàn)象，則取受檢者 血清，用已知 A血型或B血型細胞進行反定型試驗，以核實 原鑒定的血型是否正確。7.3 用立即試管法不能測由亞型（如 Ax）,需延長作用時 問。7.4 本品如由現(xiàn)渾濁或變色則不能使用，若開瓶使用時間 較長后，最好用已知 ABO血型紅細胞檢查結(jié)果是否與已知血 型相符，以防制品污染，變質(zhì)失效，而造成鑒定錯誤。7.5 在有效期內(nèi)使用。ABO血型反定型操作規(guī)程（SOP文件）1目的用于

8、ABO血型的反定型檢測，該產(chǎn)品不用于血源篩查。2檢驗原理本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和O型合格人紅細胞經(jīng)洗滌后懸浮于紅細胞保存液中配制而成。采用凝集試驗原理，用已知的 A1, B, O型紅細胞測定被檢者血清/血漿 中有無相應(yīng)的抗 A或抗B抗體（反定型試驗），結(jié)合正定型 結(jié)果判定ABO血型。3檢驗方法試管法3.1 取被檢者血清/血漿各50ul分別加入3支標(biāo)記好的試管 中；3.2 分別各加50ulA1、B、O試劑紅細胞；3.3 搖動試管，混勻。于 900g離心15s,或室溫靜止1h;3.4 首先檢查是否溶血，（溶血可能是陽性結(jié)果，或是細菌污染。）輕輕搖動懸浮紅細胞。3.5 觀察凝集情況，

9、并立即記錄結(jié)果。必要時可借助顯微鏡 觀測。4檢驗結(jié)果的解釋ABO血型正反定型反應(yīng)格局表正定型反定型血型抗A試劑抗B試劑A1細胞B細胞O細胞+A+B+O+AB注：“+”有凝集反應(yīng)，“-”無凝集反應(yīng)5注意事項5.1 如果在反定型試驗中， 受檢者的血清/血漿與O血型紅細 胞試劑產(chǎn)生陽性反應(yīng)，則需要添加自身對照試驗。如果自身 對照為陽性，表明是冷凝集素導(dǎo)致。如果自身對照為陰性， 則表明被檢者血清或血漿中可能存在ABO 系統(tǒng)以外的其他血型系統(tǒng)的抗體干擾定型。請按照相關(guān)的試驗方法解決上述定 型問題。5.2 本品如由現(xiàn)紅細胞顏色變成暗紫色或紅細胞自發(fā)凝集， 由現(xiàn)菌落或溶血，則不能使用。若開瓶使用時間較長后，

10、最 好用注冊上市的抗 A、抗B血型定型試劑檢查結(jié)果是否與已 知血型相符，以防制品污染、變質(zhì)失效、而造成檢定錯誤。5.3 為了便于鑒別，A1血型紅細胞試劑標(biāo)簽為藍色，B血型紅細胞試劑標(biāo)簽為黃色，O血型紅細胞試劑標(biāo)簽為紅色。乙型肝炎病毒表面抗原操作規(guī)程（SOa件）1 .目的用于血液的篩查和臨床乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。2 .檢驗原理本品系用乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）包被的微孔板和酶標(biāo)記抗-HBs及其他試劑制成，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原 理檢測人血清和血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）3 .適用儀器微量移液器；37 c恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶； 計時器；酶標(biāo)儀，檢測波長 45

11、0nm,參考波長630nmo 4.樣本要求1.1 樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置 37c處理2小時，再將血樣本充分 離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含 有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分 離心后，最好再放置室溫 2小時以上。1.2 樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結(jié)果，高度溶血的樣 本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引 起錯誤的結(jié)果。1.3 新鮮的樣本在28c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本 可長期貯存在-20 C或以下，避免反復(fù)凍融。5 .檢驗方法5.1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取由試劑盒，在室溫下平衡3

12、0分鐘，同時將洗滌液進行 1:40倍稀釋。5.2 設(shè)陽性對照2孔，陰性對照3孔，空白對照1孔。5.3 力口樣：在陽性對照、陰性對照孔內(nèi)分別加入陽性對照、 陰性對照50ul ,其余每孔加待測血清或血漿50ul o蓋上封孔膠片，置37 c水浴孵育60分鐘。5.4 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。5.5 加酶結(jié)合物：空白孔除外，每孔各加酶結(jié)合物50ul。蓋上封孔膠片，置 37 c水浴孵育30分鐘。5.6 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。5.7 加底物液：每孔先加底物液 A50ul,再加底物液B50ul, 混勻，蓋上封孔膠片，置 37

13、 c條件下避光顯色 30分鐘后， 加終止液50ul ,混勻，終止反應(yīng)。6 .參考值（參考范圍）終止后盡快測定，波長450nm,先用空白孔校零，測OD®。 如果選用雙波長測定，不必設(shè)置空白對照空。按下列公式計 算：COV=陰性對照平均OD直X 2.1倍陰性對照平均 OD值低于或等于0.05 ,按0.05計算；高 于0.05時，按照實際OD直計算。7 .檢驗結(jié)果的解釋樣品OD值S/CO® 1時，待測樣本 HBsAg為陽性；樣品OD值S/COVc 1時，待測樣本HBsAg為陰性。8 .注意事項8.1 本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清或血漿；檢 測結(jié)果作為診斷指標(biāo)之一。8.2

14、使用時，從冷藏環(huán)境取由試劑盒， 置室溫平衡30分鐘 后，方可進行測試。剩余試劑應(yīng)及時封存于冰箱內(nèi)保存，備用。8.3 結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后 10分鐘內(nèi)完成。8.4 封孔膠片不得重復(fù)使用。8.5 在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試 驗結(jié)果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。8.6 陽性對照應(yīng)呈陽性，否則全部試驗無效。8.7 確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導(dǎo)致錯誤的試驗結(jié)果。8.8 使用微量移液器加樣時，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。8.9 在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。8.10 準確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。8.11 洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應(yīng)注意

15、控 制，既避免洗液過量而溢生，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、 后沖洗干凈, 防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。8.12 本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關(guān)實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。9 .參考文獻中國藥典2010年版三部；體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)械20071 240 號）梅毒螺旋抗體操作規(guī)程（SOPC件）1 .目的本試劑盒定性檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。適用于血液的篩查及臨床梅毒螺旋體感染的輔助診斷。2 .檢驗原理本試劑盒采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理。在微孔條上預(yù)包被梅毒螺旋抗體

16、的基因重組抗原，配以酶標(biāo)記抗 原及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的梅毒螺 旋體抗體。3 .適用儀器加樣器、溫箱、洗板機、含波長450nm的酶標(biāo)儀。4 .樣本要求4.1 本試劑使用樣品為人血清或血漿，含有 EDTA檸檬酸 鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本實驗。4.2 不能檢測含懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品。4.3 樣品中應(yīng)無微生物，可在 28c儲存1周，長期儲存應(yīng) 低溫凍存，避免反復(fù)凍融。4.4 使用前請將樣品室溫平衡 30分鐘以上，冷凍樣品實驗 前需混勻。5 .檢驗方法5.1 配液：將濃縮洗滌液用蒸儲水或去離子水20倍稀釋。5.2 編號：將樣品對應(yīng)微孔板按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性

17、對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔。（用雙波長檢測，可不 設(shè)空白對照孔）。5.3 力口樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品或陰性、陽性對照100ul。5.4 溫育：用封板膜封板后，置 37±1C溫育60±2分鐘。5.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。5.6 加酶：酶孔加入酶標(biāo)試劑 100ul ,空白孔除外。5.7 溫育：用封板膜封板后，置 37±1C溫育30±1分鐘。5.8 洗板：操作同步驟 5.55.9 顯色：沒孔加入顯色劑 A.B液各50ul ,輕輕震蕩混勻， 37±1C避光顯色30±1分鐘。6 .參考值臨

18、界值（CUTOFF計算臨界值=陰性對照孔A均值NC+0.18.7 .檢驗結(jié)果的解釋7.1 陰性對照孔 A值W 0.10,陽性對照孔 A值A(chǔ) 0.80.否則 實驗無效。7.2 若有1孔陰性對照A值大于0.1應(yīng)舍棄，若兩孔或兩孔 以上陰性對照A值大于0.1 ,應(yīng)重復(fù)實驗。7.3 陰性判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者為TP陰性。7.4 陽性判定：樣品A值A(chǔ)臨界值（CUTOFF看為TP陽性（注 意：初試陽性應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試）。8 .注意事項8.1 本品僅用于體外診斷， 操作應(yīng)按說明書嚴格進行。 封板 膜不能重復(fù)使用，不同批號酶標(biāo)板。酶標(biāo)試劑和陰性、陽性 對照不可混用，不能與其他廠家試劑混用。8

19、.2 避免在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒劑（如84消毒劑）的環(huán)境下操作。8.3 使用前請將試劑平衡至室溫（平衡30分鐘以上），實驗前將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即放回28CO未用完的微孔板條與干燥劑儀器用自封袋密封28 C保存。過期試劑請勿使用。8.4 加液時必須用加樣器，并經(jīng)常校對加樣器的準確性。加 入不同樣品或不同試劑組分時，應(yīng)更換加樣器吸頭和加樣 槽，以防由現(xiàn)交叉污染。8.5 洗滌時各孔均需加滿洗液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗 凈。使用洗板機應(yīng)設(shè)定 3060秒侵泡時間。在洗板結(jié)束后， 必須立即進行下一步，不可使酶標(biāo)板干燥。避免長時間的中 斷實驗步驟，以確保每孔實驗條件的均一。8.6 結(jié)果判定必

20、須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準。讀取結(jié)果時，應(yīng)擦干酶標(biāo)板底部，且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁， 指印或劃痕都可能影響板孔的讀值。8.7 所用樣品、廢液和廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為硫酸，使用時必須注意安全。8.8 顯色時必須加顯色劑 A液后再加顯色劑 B液，以免顯色 過低。8.9 由于ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑檢測陰性并不排除 TP感染的可能。檢測的陽性結(jié)果必須結(jié)合臨床信息進行分 析。甲型肝炎病毒IgM抗體操作規(guī)程（SO我件）1 .目的用本試劑盒檢測人血清或血漿中的抗-HAV IgM,用于甲型肝炎的早期診斷。2 .檢驗原理本品系用抗人IgM（u鏈）包被的微孔板、甲型肝炎病毒（HAV） 抗

21、原和酶標(biāo)記抗甲型肝炎病毒（抗-HAV）及其他試劑制成，應(yīng)用捕獲法原理檢測人血清或血漿中的抗-HAV IgM,用于甲型肝炎的早期診斷。3 .適用儀器微量移液器；37 c恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶；計時器；酶標(biāo)儀，檢測波長 450nm,參考波長630nmo4 .樣本要求4.1 樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置 37c處理2小時，再將血樣本充分 離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含 有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分 離心后，最好再放置室溫 2小時以上。4.2 樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒完全收

22、縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引 起錯誤的結(jié)果。4.3 新鮮的樣本在28c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本 可長期貯存在-20 C或以下，避免反復(fù)凍融。5 .檢驗方法二步法5.1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取由試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將洗滌液進行 1:40倍稀釋。5.2 設(shè)陽性對照2孔，陰性對照3孔，空白對照1孔。5.3 力口樣：在陽性對照、陰性對照孔內(nèi)分別加入陽性對照、陰性對照50ul ,其余每孔加待測血清或血漿 50ul （或?qū)⒋?測血清或血漿用生理鹽水 1:1000稀釋后，加入到反應(yīng)孔內(nèi)）， 蓋上封孔膠片，置 37 c水浴孵育30分鐘。5.4 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗

23、滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。5.5 加酶結(jié)合物：取由酶結(jié)合物，充分混勻，每孔加 50ul （空白孔除外），蓋上封孔膠片，置 37c水浴孵育30分鐘。5.6 洗板：同5.45.7 加底物液：每孔先加底物液 A50ul,再加底物液B50ul, 混勻，蓋上封孔膠片，置 37 c條件下避光顯色15分鐘后， 加終止液50ul ,混勻，終止反應(yīng)。6 .參考值（參考范圍）終止后盡快測定，波長 450nm,空白孔調(diào)零，測 OD值。如 果選用雙波長測定，不必設(shè)置空白對照空。 按下列公式計算：COV=陰性對照平均OD直X 2.1倍樣品OD值S/COV> 1時為陽性樣品OD值S/COV< 1時為陰

24、性注：陰性對照平均 OD直低于或等于0.05 ,按0.05計算； 高于0.05時，按照實際OD直計算。7 .檢驗結(jié)果的解釋7.1 陰性結(jié)果表明樣本中不含有抗 -HAV IgM或抗-HAV IgM 含量低于試劑盒的檢測范圍。7.2 陽性結(jié)果表明樣本中含有抗 -HAV IgM或產(chǎn)生非特異反 應(yīng)。7.3 樣本的檢驗結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符或存在疑問時應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM行確認。7.4 對于待檢血清或血漿直接進行 50ul加樣，結(jié)果判為陽 性的標(biāo)本，應(yīng)對其用生理鹽水 1:1000稀釋后重復(fù)實驗并判 定結(jié)果。8 .注意事項8.1 本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清或血漿；檢測結(jié)果作為診斷指標(biāo)之一。8.2 使用

25、時，從冷藏環(huán)境取由試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方可進行測試。剩余試劑應(yīng)及時封存于冰箱內(nèi)保存，備 用。8.3 結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。8.4 封孔膠片不得重復(fù)使用。8.5 在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試 驗結(jié)果。8.6 試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。8.7 確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導(dǎo)致錯誤的試驗結(jié)果。8.8 使用微量移液器加樣時，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本；如果采用滴瓶滴加時，請將滴瓶中液體搖勻，并棄去 2滴后 垂直均速滴加，要避免組分中的液體觸到或濺到微孔邊緣上，特別是酶結(jié)合物。8.9 在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。8.10

26、準確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。8.11 洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應(yīng)注意控 制，既避免洗液過量而溢生，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢 查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、 后沖洗干凈， 防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。8.12 本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關(guān)實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。9 .參考文獻中國生物制品規(guī)程 2000年版丙型肝炎病毒抗體操作規(guī)程（SOPC件）1 .目的用于血液的篩查和臨床丙型肝炎病毒感染的輔助診斷2 .檢驗原理本品系用丙型肝炎病毒（HCV抗原包被的微孔板和酶標(biāo)記 抗人IgG及其他試劑制成，應(yīng)用簡接酶聯(lián)免疫法

27、原理檢測人 血清或血漿樣品中的 HCV抗體。3 .適用儀器微量移液器；37 c恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶； 計時器；酶標(biāo)儀，檢測波長 450nm,參考波長630nmo 4.樣本要求1.1 樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術(shù)收集 血液，全血樣本最好先放置 37 c處理2小時，再將血樣本充 分離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不 含有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充 分離心后，最好再放置室溫 2小時以上。1.2 樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結(jié)果，高度溶血的樣 本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引 起錯誤的結(jié)果。1.3 新鮮的樣本在28

28、c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本 可長期貯存在-20 C或以下，避免反復(fù)凍融。5 .檢驗方法5.1 實驗準備：從冷藏環(huán)境中取由試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將洗滌液進行 1:40倍稀釋。5.2 設(shè)陽性對照2孔，陰性對照3孔，不加樣品稀釋液， 直接加入陽性對照。陰性對照100 ul ,另設(shè)空白對照1孔（只 加底物液及終止液）。5.3 加樣：在其余每孔加先加樣品稀釋液100ul ,再加待檢血清或血漿10ul （空白孔除外），充分混勻，蓋上封孔膠 片，置37 c水浴孵育60分鐘。5.4 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。5.5 加酶結(jié)合物：空白孔除外，每孔各加酶結(jié)

29、合物100ul。蓋上封孔膠片，置 37 c水浴孵育30分鐘。5.6 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。5.7 加底物液：每孔先加底物液 A50ul,再加底物液B50ul, 混勻，蓋上封孔膠片，置 37 c條件下避光顯色 30分鐘后， 加終止液50ul ,混勻，終止反應(yīng)。6 .參考值終止后盡快測定，波長 450nm,空白孔調(diào)零，測 OD值。如 果選用雙波長測定，不必設(shè)置空白對照空。 按下列公式計算：COV=陰性對照平均OD直X 2.1倍陰性對照平均 OD值低于或等于0.1 ,按0.1計算；高于0.1 , 按照實際OD直計算。7結(jié)果判斷樣品OD值S/CO®

30、 1時，待測樣本為陽性；樣品OD值S/COVc 1時，待測樣本為陰性。8 .注意事項8.1 本品僅用于體外診斷， 僅限檢測人體血清或血漿；檢測結(jié)果作為診斷指標(biāo)之一。8.2 使用時，從冷藏環(huán)境取由試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方可進行測試。剩余試劑應(yīng)及時封存于冰箱內(nèi)保存，備用。8.3 結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后 10分鐘內(nèi)完成。8.4 封孔膠片不得重復(fù)使用。8.5 在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試 驗結(jié)果。8.6 試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。8.7 確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導(dǎo)致錯誤的試驗結(jié)果。8.8 使用微量移液器加樣時，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。8.9 在

31、操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。8.10 準確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。8.11 洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應(yīng)注意控 制，既避免洗液過量而溢生，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。8.12 本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關(guān)實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。9 .參考文獻中國藥典2010年版三部體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)械【20071240 號）HIV抗體初篩實驗室操作規(guī)程(SORt件)1 .檢驗?zāi)康臋z驗人體血清中是否感染HIV病毒2 .檢驗原理

32、本產(chǎn)品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒“1”型和“2”(HIV-1和HIV-2)抗原包被的微孔板和酶聯(lián)記的HIV-1和HIV-2抗原及其它試劑組成試劑盒，應(yīng)用雙原夾心法原理檢 測人血清或血漿中的人類免疫缺陷病毒抗體，用于獻血員及 高危人群中人類免疫缺陷病毒的篩查。3 .檢驗條件3.1 操作人員對本實驗應(yīng)心中有數(shù)，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程。3.2 洗板機，酶標(biāo)儀，加樣器必須定期校正。試劑按規(guī) 定保存。4 .標(biāo)本采集4.1 門診病人由檢驗科人員無菌抽取靜脈血2ml分離血清備用。4.2 住院病人由護士采血送檢驗科。4.3 要避免溶血。5 .設(shè)備和試劑5.1 設(shè)備全自動ZDM戲酶標(biāo)洗板機，MR-96A酶標(biāo)儀。

33、5.2 試劑 珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的抗HIV診 斷試劑盒6 .操作方法6.1 實驗準備從冷環(huán)境中取由試劑盒，室溫平衡半小時，同時將濃縮洗液用蒸儲水作1:20稀釋備用。6.2 編號 每板應(yīng)設(shè)空白對照1孔，陽性對照2孔，陰 性對照2孔，質(zhì)控1孔。6.3 加樣 每孔加入50ul樣品稀釋液，并分別在相應(yīng)孔 中加入待測樣品或陰、陽對照、質(zhì)控品 50ul o空白孔內(nèi)只加 稀釋液。6.4 溫育 用封板膜封板后置 37 c溫育60分鐘。6.5 加酶 除空白對照孔外，每孔加 50ul酶標(biāo)記物，輕 輕震動混勻，用封板膜將板孔封好，置 37c溫育30分鐘。6.6 洗板 小心將封板膜揭掉，選擇 6次的程序洗板， 最后排干。6.7 顯