異氟醚減少離體鼠肝缺氧－復(fù)氧損傷與枯否細(xì)胞有關(guān)

1、異氟醚減少離體鼠肝缺氧復(fù)氧損傷與枯否細(xì)胞有關(guān)(1)作者；李 泉，俞衛(wèi)鋒，曹云飛，楊立群，呂 欣，周脈濤 【摘要】 目的 明確異氟醚減少離體鼠肝缺氧復(fù)氧損傷的作用主要發(fā)生在哪一階段，以及與枯否細(xì)胞的關(guān)系。方法 將大鼠肝臟取下，置于離體鼠肝灌流儀中，以經(jīng)95% O2/5 CO2飽和的改良克林氏碳酸氫鹽緩沖液恒壓灌流（有氧狀態(tài)用1.2kPa，缺氧狀態(tài)用0.2kPa），維持生理pH值和溫度，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)灌流液中LDH變化。2MAC異氟醚分別用于缺氧期、復(fù)氧期和缺氧復(fù)氧期。用GdCl3選擇性抑制枯否細(xì)胞活性。結(jié)果 (1)2MAC異氟醚用于缺氧復(fù)氧期和單純用于復(fù)氧期均可抑制LDH升高，而單純用于缺氧期則無(wú)明顯

2、作用。(2)2MAC異氟醚和(或)GdCl3組均可抑制肝臟缺氧復(fù)氧后LDH升高。結(jié)論 異氟醚保護(hù)缺氧復(fù)氧肝臟免受損傷的作用主要發(fā)揮在復(fù)氧期，異氟醚在復(fù)氧期發(fā)揮保護(hù)作用可能與抑制復(fù)氧引起的氧自由基爆發(fā)有關(guān)，其作用與枯否細(xì)胞活性密切相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】 異氟醚；離體鼠肝；缺氧復(fù)氧損傷；枯否細(xì)胞【Abstract】 Objective To investigate which stage is the most important and the relationship with kupffer cell，during isoflurane decrease anoxia-reoxygenation

3、injury in isolated rat liver.Methods We established the model of isolated rat liver.It included artificial lung，pump，pressure meter，flow meter，thermostat，humidifier and monitors.Rat livers were harvested and placed in the model.They were flushed with modified Krebsbuffer，which were saturated with 95

4、% O2 / 5% CO2 and were added with 10 mM glucose and 1% albumin.The perfusion pressures were controlled constantly at 1.2 kPa(oxygenation)or0.2 kPa(anoxia).PH and temperature were maintained properly，and oxygen pressureorliver flow were measured.2MAC isoflurane were used in the periods of anoxia，reox

5、ygenationoranoxia-reoxygenation separately.GdCl3 was used to inhibit the activation of kupffer cell.Results (1)2MAC isoflurane inhibited LDH release in the periods of both anoxia-reoxygenation and reoxygenation in isolated rat liver，while it was not effective in the period of anoxia.(2)Both 2MAC iso

6、flurane and GdCl3 decreased LDH release obviously after anoxia and reoxygenation in isolated rat liver.Conclusion Reoxygenation stage is the most important during isoflurane decrease anoxia-reoxygenation injury in isolated rat liver.Isoflurane may protect hepatic function by inhibiting oxygen stress

7、 outside cells，which is related to kupffer cell.【Key words】 isoflurane；isolated rat liver；anoxia-reoxygenation injury；kupffer cell研究表明肝臟缺血再灌注損傷分為兩相1：第一相（再灌注后6h內(nèi)）是以枯否細(xì)胞介導(dǎo)為主的早期再灌注損害。第二相（再灌注后6h后）是以中性粒細(xì)胞介導(dǎo)為主的后期再灌注損傷。本研究以離體無(wú)血灌流鼠肝為模型，研究異氟醚如何保護(hù)肝臟缺氧復(fù)氧損傷，以及與枯否細(xì)胞的關(guān)系，排除中性粒細(xì)胞可能帶來(lái)的影響。1 材料和方法1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用雄性健康Wist

8、er大白鼠，重約200250g（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院），所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前禁食24h。三氯化锝（GdCl3）處理組在實(shí)驗(yàn)前24h經(jīng)尾靜脈注射GdCl3 7.5mg/kg，對(duì)照組注射等量的生理鹽水。1.2 建立離體鼠肝灌流模型 用戊巴比妥鈉腹腔麻醉后開(kāi)腹，小心分離肝周韌帶和血管，經(jīng)下腔靜脈注入肝素50u，然后迅速完成肝下下腔靜脈插管，門靜脈插管，并結(jié)扎肝上下腔靜脈，開(kāi)始非循環(huán)灌流，可見(jiàn)肝臟即刻呈均勻土黃色，取下鼠肝置于離體鼠肝灌流儀中，開(kāi)始循環(huán)灌流。離體鼠肝灌流儀經(jīng)米氏灌流儀包括人工肺、動(dòng)力泵、測(cè)壓表、流量計(jì)、恒溫保濕系統(tǒng)和監(jiān)測(cè)系統(tǒng)組成。灌流液選用改良的克林氏緩沖液，包括：NaCl 117mM，KCl 4

9、.7mM，CaCl2 1.5mM，KH2PO4 1.19mM，MgSO4 1.14mM，NaHCO3 24.8mM，另外加入葡萄糖10mM維持營(yíng)養(yǎng)，加入1牛血清白蛋白維持膠體滲透壓，有氧灌流用1.2kPa，缺氧灌流用0.2kPa，根據(jù)pH監(jiān)測(cè)調(diào)節(jié)pH在7.350.05范圍內(nèi)。實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)灌流液中LDH水平。1.3 實(shí)驗(yàn)處理步驟 待循環(huán)灌流20min模型穩(wěn)定后開(kāi)始從零計(jì)時(shí)，2MAC異氟醚分期給藥如下：缺氧期：缺氧前20min至再灌注前10 min（即-20min50min）；復(fù)氧期：再灌注前10min至實(shí)驗(yàn)結(jié)束（即50120min）；缺氧復(fù)氧期：缺氧前20min至實(shí)驗(yàn)結(jié)束（即-20120min）。1

10、.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(xs)表示，應(yīng)用t檢驗(yàn)或方差分析，以P0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。2 結(jié)果2.1 比較2MAC異氟醚用于缺氧復(fù)氧各期對(duì)肝損傷的不同影響 異氟醚用于缺氧復(fù)氧期和單獨(dú)用于復(fù)氧期均可明顯抑制LDH水平（P0.01），同樣發(fā)揮保護(hù)肝細(xì)胞的作用，說(shuō)明異氟醚保護(hù)肝臟免受缺氧復(fù)氧損傷的關(guān)鍵是作用在復(fù)氧期(見(jiàn)圖1)。2.2 比較2MAC異氟醚與GdCl3對(duì)肝臟缺氧復(fù)氧損傷的影響 異氟醚組、GdCl3組及異氟醚GdCl3組均明顯抑制LDH水平（P0.01），說(shuō)明GdCl3可通過(guò)抑制KC活性保護(hù)肝臟缺氧復(fù)氧損傷，而2MAC異氟醚可能也有類似作用(見(jiàn)圖2)。復(fù)氧045min

11、內(nèi)LDH的釋放量(IU/min)處理組與缺氧復(fù)氧對(duì)照組相比，*P0.05，n=7圖1 2MAC異氟醚用于肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧各期對(duì)肝損傷的不同影響復(fù)氧015min內(nèi)LDH的釋放量(IU/min)處理組與缺氧復(fù)氧對(duì)照組相比，*P0.05，n=7 圖2 2MAC異氟醚和GdCl3對(duì)肝細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響3 討論根據(jù)研究結(jié)果，我們認(rèn)為：異氟醚保護(hù)肝臟免受缺氧復(fù)氧損傷的關(guān)鍵是對(duì)復(fù)氧期發(fā)揮了作用，這種作用可能與抑制KC活性有關(guān)。 本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不要用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，

12、請(qǐng)聯(lián)系我們。如圖1所示：2MAC異氟醚單獨(dú)用于復(fù)氧期所產(chǎn)生的效果和用于缺氧復(fù)氧全期所產(chǎn)生的效果一樣明顯，而異氟醚單獨(dú)用于缺氧期則無(wú)明顯效果，這充分說(shuō)明了異氟醚的保護(hù)作用是發(fā)揮在復(fù)氧期，而與缺氧期關(guān)系不大。有人認(rèn)為異氟醚降低肝細(xì)胞氧耗的原因是抑制了某些耗能反應(yīng)，從而異氟醚可能通過(guò)此機(jī)制來(lái)增強(qiáng)肝細(xì)胞乏氧耐受力。如果此觀點(diǎn)成立，那么異氟醚就應(yīng)該在缺氧期保護(hù)了肝細(xì)胞活性，降低了LDH水平，顯然這一點(diǎn)與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致。因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)使用了禁食24h的大鼠肝臟，所以無(wú)法觀察異氟醚對(duì)缺氧期糖酵解的影響。異氟醚在復(fù)氧期發(fā)揮保護(hù)作用可能與抑制復(fù)氧引起的氧自由基爆發(fā)有關(guān)，有人發(fā)現(xiàn)可抑制中性粒細(xì)胞中產(chǎn)生氧自由基及其損

13、傷2，3，又有人證明氟烷可抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生H2O24，所以我們推測(cè)異氟醚有降低復(fù)氧期氧應(yīng)激的作用。如圖2所示，GdCl3抑制了KC細(xì)胞活性后，肝臟缺氧復(fù)氧損傷程度明顯下降，可見(jiàn)肝臟缺氧復(fù)氧早期損傷中KC的重要作用。而2MAC異氟醚發(fā)揮了類似作用，所以我們認(rèn)為異氟醚的保護(hù)作用可能與抑制KC活性有關(guān)。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)：蛋白激酶C（PKC）的活性能被吸入抑制5，而PKCNADPH氧化酶途徑是KC產(chǎn)生細(xì)胞外O2-的關(guān)鍵途徑6，7，所以異氟醚可能通過(guò)抑制KC中PKC介導(dǎo)的信號(hào)途徑來(lái)減少O2-產(chǎn)生，抑制肝臟復(fù)氧損傷，更直接的證據(jù)有待在進(jìn)一步研究中得到?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 Jaeschke H，Anwar F.N

14、eutrophil and kupffer cell-induced oxidant stress and ischemia-reperfusion injury in rat liver.Am J Phsiol，1991，260：G355-362.2 曹云飛，俞衛(wèi)鋒.異丙酚對(duì)中性粒細(xì)胞活性氧生成及細(xì)胞內(nèi)游離Ca2 濃度的影響.臨床麻醉學(xué)雜志，2000，16(2)：96-98.3 曹云飛，薛惠斌，俞衛(wèi)鋒.異丙酚對(duì)紅細(xì)胞自由基損傷的保護(hù)作用.臨床麻醉學(xué)雜志，2000，16(2)：90-92.4 Stevensin GW，Hall S，Rudnick ST，et al.Halothane anes

15、thesia decreases human monocyte hydrogen peroxide generation： protection of monocytes by activation with gamma interferon.Immunopharmacol Immunotoxicol，1987，9：489-510.5 Slater ST，Cox KJA，Lombardi JV，et al.Inhibition of protein kinase C by alcohols and anaesthetics.Nature，1993，364：82-84.6 Poole AW，Pula G，Hers I，et al.PKC-interacting proteins： from function to