阿司匹林聯(lián)合腦缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注后炎性反應(yīng)的影響

1、阿司匹林聯(lián)合腦缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注后炎性反應(yīng)的影響         10-09-04 16:39:00     編輯：studa20                    作者：廖仁昊 陳立英 梁容仙 王敬【摘要】  目的 探討阿司匹林（ASA)聯(lián)合腦缺血預(yù)處理治療對(duì)大鼠

2、腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法 SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注組、腦缺血預(yù)處理組和ASA治療組。各組采用ZeaLonga等的大腦中動(dòng)脈線栓法并加以改進(jìn)，制備缺血預(yù)處理及缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較各組神經(jīng)功能缺失評(píng)分、腦梗死體積、血清神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)含量及腦組織白細(xì)胞介素(IL)1和腫瘤壞死因子(TNF)含量。結(jié)果 ASA聯(lián)合腦缺血預(yù)處理可使神經(jīng)功能缺損減輕、腦梗死體積縮小、血清NSE含量降低，均較缺血預(yù)處理組更為明顯。腦組織IL1和TNF含量降低亦更為明顯。結(jié)論 ASA可增強(qiáng)缺血預(yù)處理誘導(dǎo)的腦缺血耐受作用，下調(diào)腦組織再灌注損傷時(shí)IL1和TNF的表達(dá)，

3、二者具有疊加作用。 【關(guān)鍵詞】  阿司匹林； 腦缺血預(yù)處理； 白細(xì)胞介素1； 腫瘤壞死因子近年來發(fā)現(xiàn)預(yù)先給予短暫的腦缺血預(yù)處理(BIP)可誘導(dǎo)缺血耐受(IT)1，從而減輕缺血再灌注所致的腦損傷。腦缺血再灌注后的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)是神經(jīng)元損傷的重要因素，抗感染治療可減輕缺血再灌注所致的神經(jīng)損傷2。阿司匹林（ASA）具有抗炎、抗血小板聚集等作用，是防治缺血性腦血管疾病的重要藥物之一。 近年來研究發(fā)現(xiàn)，ASA除有抗血栓形成作用外，還有直接的腦保護(hù)作用3，但對(duì)IT影響的報(bào)道尚少見。本實(shí)驗(yàn)利用局灶缺血預(yù)處理模型，觀察ASA對(duì)大鼠BIP后缺血再灌注損傷保護(hù)作用的影響。1  材料與方法1.1&

4、#160; 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用健康雄性SD大鼠120只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重250320 g，隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組(n=40)；腦缺血再灌注組，假手術(shù)3 d后給予2 h大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)，按再灌注時(shí)間分4個(gè)亞組（B1B4），即缺血2 h后分別再灌注6、12、24、48 h，每個(gè)亞組動(dòng)物均為10只；BIP組，缺血預(yù)處理10 min，再灌注3 d后給予2 h MCAO；ASA治療組，于缺血預(yù)處理10 min即開始給藥，ASA 60 mg·kg-1·d-1溶于2 ml生理鹽水中，灌胃，3 d后再次造成2 h MCAO。BIP組和ASA治療組均按缺血

5、2 h后分別再灌注6、24 h分為2個(gè)亞組，每個(gè)亞組動(dòng)物均為10只。腦缺血再灌注組和BIP組予等量生理鹽水灌胃。1.2  缺血預(yù)處理及缺血再灌注模型制作 采用文獻(xiàn)4法并加以改進(jìn)。再灌注3 d后用相同方法再次造成MCAO 2 h，于各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，心臟取血，后斷頭處死。以動(dòng)物清醒后爬行時(shí)向右轉(zhuǎn)圈(追尾現(xiàn)象)，嚴(yán)重時(shí)向右跌倒，提尾時(shí)右前肢內(nèi)收屈曲，且一直存活到規(guī)定時(shí)間點(diǎn)為造模成功標(biāo)志。假手術(shù)僅暴露頸總動(dòng)脈及分叉處，不插線阻斷大腦中動(dòng)脈。各組動(dòng)物術(shù)中均用白熾燈使其肛溫維持在37左右。1.3  指標(biāo)檢測(cè)及方法1.3.1  神經(jīng)功能缺失評(píng)分

6、60;按Longa等4的5級(jí)評(píng)分法評(píng)分：0級(jí)，無功能障礙；1級(jí),不能伸展右側(cè)前肢；2級(jí)，向右側(cè)旋轉(zhuǎn)；3級(jí)，向右側(cè)傾倒；4級(jí)，無自主活動(dòng)伴意識(shí)喪失。1.3.2  血清神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)的測(cè)定 神經(jīng)功能缺失評(píng)分完畢后，取心臟血2 ml，離心后取血清，置-20冰箱內(nèi)保存，整批待測(cè)。1.3.3  腦梗死體積測(cè)定  取血完畢后，每組各隨機(jī)選取5只動(dòng)物，以10%的水合氯醛深麻醉后處死，取左側(cè)大腦半球，冠狀面均勻切成2 mm厚腦片，迅速放入2%的2,3,5三苯基氯化四氮唑溶液(37)中染色30 min，然后用10%的甲醛緩沖液固定。24 h后照相測(cè)每個(gè)層面梗死灶

7、面積，將各腦片梗死面積之和乘以厚度(2 mm)為總的梗死體積。1.3.4  腦組織白細(xì)胞介素1(IL1)、腫瘤壞死因子(TNF)含量測(cè)定 每組另外5只動(dòng)物用10%的水合氯醛深麻醉后處死，迅速取出鼠腦，剝離左側(cè)皮質(zhì)，稱重后按400 mg1 ml加生理鹽水制腦組織勻漿，勻漿液3 000 r/min低溫離心15 min，取上清液置-20冰箱內(nèi)待測(cè)。后采用FTDF晶體閃爍計(jì)數(shù)儀(北京核儀器廠生產(chǎn))，測(cè)定腦組織IL1和TNF的含量。試劑盒均由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用x±s表示，用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，多組比較進(jìn)行方差分析及兩兩比較q檢驗(yàn)，兩組間比較采用t或t檢驗(yàn)。2  結(jié)果2.1  神經(jīng)功能缺失評(píng)分 假手術(shù)組無神經(jīng)功能缺失表現(xiàn)。BIP組、ASA治療組神經(jīng)功能缺失評(píng)分與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的缺血再灌注組比較有顯著性差異(P<0.01)。ASA治療組神經(jīng)功能缺失評(píng)分明顯降低，與BIP組比較差異顯著(P<0.01)，見表1。表1  各組腦缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺失評(píng)分的比較(略)2.2  血清NSE含量 腦缺血再灌注組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)