專題五DNA的粗提取與鑒定

1、 從核從核DNA數(shù)目來(lái)看，豬數(shù)目來(lái)看，豬38條，雞條，雞78條，哺條，哺乳動(dòng)物血乳動(dòng)物血0條，獼猴桃條，獼猴桃58條，洋蔥條，洋蔥16條，豌條，豌豆豆14條，菠菜條，菠菜12條，大腸桿菌條，大腸桿菌1條。請(qǐng)選擇條。請(qǐng)選擇動(dòng)植物材料各一種。動(dòng)植物材料各一種。哺乳動(dòng)物的血細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核及細(xì)胞器。哺乳動(dòng)物的血細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核及細(xì)胞器。液體培養(yǎng)基中的大腸桿菌的液體培養(yǎng)基中的大腸桿菌的DNA量減少。量減少。魚卵是減數(shù)分裂的產(chǎn)物。魚卵是減數(shù)分裂的產(chǎn)物。方法步驟方法步驟 加入物質(zhì)加入物質(zhì) 目的目的 1 1.制備雞血細(xì)胞液制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液檸檬酸鈉溶液 2 2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)

2、 20 m120 m1蒸餾水蒸餾水 幻燈片 18 3 3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNADNA 2 m12 m1L L 的的NaCINaCI溶液溶液4040mLmL 幻燈片 18 4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏稠物 蒸餾水蒸餾水 5 5.濾取含濾取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.將將DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.過(guò)濾含過(guò)濾含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的 DNADNA 冷卻的冷卻的9595的酒精的酒精50 mL5

3、0 mL 幻燈片 18 A A:(1)1)向試管中加入向試管中加入0 0.015 mol015 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)2)加入加入DNADNA (3)43)4 mLmL二苯胺試劑二苯胺試劑 9 9.DNADNA的鑒定的鑒定 B B:(1)(1)向試管中加入向試管中加入0 0.015mol015molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m2)4 mL 二苯胺試劑二苯胺試劑 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固加速血細(xì)胞破裂加速血細(xì)胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀釋至溶液稀

4、釋至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地釋出最大限度地釋出 使含使含DNA的黏稠物被留在紗布上的黏稠物被留在紗布上使含使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)的濾液中的雜質(zhì)提取提取DNA A出現(xiàn)藍(lán)色出現(xiàn)藍(lán)色 B無(wú)變化無(wú)變化練習(xí)練習(xí)1、請(qǐng)解釋提取、請(qǐng)解釋提取DNA的實(shí)驗(yàn)操作中主要的步驟的目的。的實(shí)驗(yàn)操作中主要的步驟的目的。答：提取答：提取DNA的的第一步是材料的選取第一步是材料的選取，其目的，其目的是一定要選取是一定要選取DNA含量較高的生物材料，否則會(huì)含量較高的生物材料，否則會(huì)由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中或多或少的損失而造成檢測(cè)的困難；由于

5、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中或多或少的損失而造成檢測(cè)的困難；第二步是第二步是DNA的釋放和溶解的釋放和溶解，這一步是實(shí)驗(yàn)成功，這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的與否的關(guān)鍵，要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解；全部溶解；第三步是第三步是DNA的純化的純化，即根據(jù)，即根據(jù)DNA的溶解特性、的溶解特性、對(duì)酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將對(duì)酶及高溫的耐受性的不同等特性，最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開；與雜質(zhì)分開；最后一步是對(duì)最后一步是對(duì)DNA進(jìn)行鑒定進(jìn)行鑒定，這是對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測(cè)。這是對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測(cè)。2、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)、你認(rèn)為從細(xì)胞中提取某種特定的蛋白質(zhì)與提取與提取D

6、NA一樣容易嗎？一樣容易嗎？答：答：提取蛋白質(zhì)比提取提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大的難度大。這是因?yàn)?，。這是因?yàn)椋c與DNA相比，相比，蛋白質(zhì)對(duì)溫度、鹽濃度、蛋白質(zhì)對(duì)溫度、鹽濃度、pH等條件等條件要敏感得多，很容易失活要敏感得多，很容易失活；并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)；并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的構(gòu)多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取提取沒有一種統(tǒng)一的方法沒有一種統(tǒng)一的方法，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)，只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設(shè)計(jì)特定的方法。的特性摸索提取的條件，設(shè)計(jì)特定的方法。2.實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和0.

7、14 molL對(duì)對(duì)DNA有何影響有何影響?1.在在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出C.使血細(xì)胞破裂、增大使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：答：B答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會(huì)染成會(huì)染成( ) ( ) A. A.磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫色紫色 D.D.藍(lán)色藍(lán)色4.提取雞血中的提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液時(shí)，為什么要除去血液中的上清液