腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測

1、LOGO腸道傳染病常見腸道傳染病常見 致病菌實驗室檢測致病菌實驗室檢測LOGO腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測腸道傳染病常見致病菌實驗室檢測v一、一、腸道傳染病概述腸道傳染病概述v二、二、幾種常見致病菌的實驗室檢測幾種常見致病菌的實驗室檢測 LOGO一、概述一、概述v腸道傳染病是由各種病原體經(jīng)口侵入腸道，腸道傳染病是由各種病原體經(jīng)口侵入腸道，在腸道內(nèi)繁殖并產(chǎn)生毒素，破壞腸粘膜組織，在腸道內(nèi)繁殖并產(chǎn)生毒素，破壞腸粘膜組織，引起腸道功能紊亂和損害，病原體再從患者引起腸道功能紊亂和損害，病原體再從患者由糞便中排出感染他人的一類疾病。往引起由糞便中排出感染他人的一類疾病。往引起腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發(fā)

2、熱等癥狀，嚴(yán)腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐及發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚重者可引起身體重度脫水、昏迷和休克，甚至有生命危險。至有生命危險。LOGO一、概述一、概述v 特點：特點：發(fā)病急、傳播快、傳染性強、危害性發(fā)病急、傳播快、傳染性強、危害性大、極易引起暴發(fā)或流行大、極易引起暴發(fā)或流行v流行特征流行特征 1、傳播途徑：糞、傳播途徑：糞-口（食物、水、日常生活接觸、昆蟲媒介）口（食物、水、日常生活接觸、昆蟲媒介） 2、病原體：外界抵抗力和存活力強、病原體：外界抵抗力和存活力強 3、傳染源：病人、帶菌者目前認(rèn)為是唯一的傳染源、傳染源：病人、帶菌者目前認(rèn)為是唯一的傳染源 4、明顯季節(jié)

3、性：主要出現(xiàn)在夏秋季、明顯季節(jié)性：主要出現(xiàn)在夏秋季LOGO傳播途徑傳播途徑 v 1、經(jīng)水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物、經(jīng)水傳播：生活飲用水源被腸道傳染病人和病原攜帶者排出的糞便、嘔吐物污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、污染或在水中洗滌病人的衣褲、器具、手等都容易造成水源污染，可引起霍亂、傷寒、細(xì)菌性痢疾等疾病的暴發(fā)流行。傷寒、細(xì)菌性痢疾等疾病的暴發(fā)流行。v 2、經(jīng)食物傳播：食品在加工、儲存、制作、運輸?shù)匿N售等過程中被腸道傳染病、經(jīng)食物傳播：食品在加工、儲存、制作、運輸?shù)匿N售等過程中被腸道傳染病的病原體污染，可造成局部的流行和

4、暴發(fā)流行。的病原體污染，可造成局部的流行和暴發(fā)流行。v 3、接觸傳播：通過握手、使用或接觸過病人的衣物、文具、門具、門把手、人、接觸傳播：通過握手、使用或接觸過病人的衣物、文具、門具、門把手、人民幣等造成病原體傳播。民幣等造成病原體傳播。v 4、昆蟲傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲體內(nèi)存活一、昆蟲傳播：有些腸道傳染病的病原體可在蒼蠅、蟑螂等媒介昆蟲體內(nèi)存活一段時間，并隨著昆蟲的活動進(jìn)行傳播。段時間，并隨著昆蟲的活動進(jìn)行傳播。LOGO病原體病原體v甲類傳染?。夯魜y；甲類傳染?。夯魜y；v乙類傳染?。簜透眰⒓?xì)菌性和阿米乙類傳染?。簜透眰?、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、脊髓灰

5、質(zhì)炎、甲、戊型病毒性肝巴性痢疾、脊髓灰質(zhì)炎、甲、戊型病毒性肝炎；炎；v丙類傳染?。撼魜y、傷寒副傷寒、細(xì)菌性丙類傳染?。撼魜y、傷寒副傷寒、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾以外的細(xì)菌、病毒、原蟲等和阿米巴性痢疾以外的細(xì)菌、病毒、原蟲等病原體引起的腸道感染。病原體引起的腸道感染。LOGO二、幾種常見致病菌的實驗室檢測二、幾種常見致病菌的實驗室檢測 v（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v由傷寒沙

6、門菌和甲、乙、由傷寒沙門菌和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌引起的丙型副傷寒沙門菌引起的急性腸道傳染病。急性腸道傳染病。v參照傷寒和副傷寒診斷標(biāo)參照傷寒和副傷寒診斷標(biāo)準(zhǔn)（準(zhǔn)（ws280-2008 ）LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v1 診斷依據(jù)診斷依據(jù) 1.1 流行病學(xué)史流行病學(xué)史 1.1.1 病前病前 30d 內(nèi)曾到過或生活在傷寒、內(nèi)曾到過或生活在傷寒、副傷寒流行區(qū)。副傷寒流行區(qū)。 1.1.2 有傷寒、副傷寒患者、帶菌者密切接有傷寒、副傷寒患者、帶菌者密切接觸史。觸史。 1.1.3 有喝生水等不良衛(wèi)生習(xí)慣者。有喝生水等不良衛(wèi)生習(xí)慣者。v1.2 臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 1

7、.2.1 不明原因持續(xù)發(fā)熱。不明原因持續(xù)發(fā)熱。 1.2.2 特殊中毒面容（表情淡漠，呆滯），特殊中毒面容（表情淡漠，呆滯），相對緩脈，皮膚玫瑰疹，肝脾腫大。相對緩脈，皮膚玫瑰疹，肝脾腫大。v1.3 實驗室檢測實驗室檢測 1.3.1 嗜酸性粒細(xì)胞減少或消失、白細(xì)胞總嗜酸性粒細(xì)胞減少或消失、白細(xì)胞總數(shù)正常或低下；數(shù)正?；虻拖?； 1.3.2 肥達(dá)反應(yīng)肥達(dá)反應(yīng)“O”抗體凝集效價抗體凝集效價1：80， “H”抗體凝集效價抗體凝集效價1：160者；但者；但在高發(fā)地區(qū)，許多正常人因既往感染亦可有在高發(fā)地區(qū)，許多正常人因既往感染亦可有較高滴度，此時最好首先檢查當(dāng)?shù)厝巳好庖咻^高滴度，此時最好首先檢查當(dāng)?shù)厝巳好庖?/p>

8、水平，確定正常值；水平，確定正常值； 1.3.3 恢復(fù)期血清中特異性抗體效價較急性恢復(fù)期血清中特異性抗體效價較急性期血清特異性抗體效價增高期血清特異性抗體效價增高 4 倍以上；倍以上； 1.3.4 從血、骨髓、糞便、膽汁中任一種標(biāo)從血、骨髓、糞便、膽汁中任一種標(biāo)本分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙門菌。本分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙門菌。v 2 診斷診斷v 帶菌者帶菌者 ：無任何臨床表：無任何臨床表現(xiàn)、從糞便中分離到傷寒現(xiàn)、從糞便中分離到傷寒沙門菌或副傷寒沙門菌。沙門菌或副傷寒沙門菌。v 疑似病例：疑似病例：1.1任何一項任何一項+1.2.1或或1.2.1+1.2.2 任何一項任何一項體征或體征或1.2

9、.1+1.3.1v 臨床診斷病例：臨床診斷病例：1.2.1+1.2.2 中任何一中任何一項體征項體征+（1.3.1或或1.3.2）v 確診病例：確診病例：1.2.1+1.3.3或或1.2.1+1.3.4LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v3 實驗室病原學(xué)檢查實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)標(biāo)本本采采集集及及送送檢檢分分離離培培養(yǎng)養(yǎng)形形態(tài)態(tài)與與染染色色 生生化化反反應(yīng)應(yīng) 血血清清學(xué)學(xué)及及確確定定鑒鑒定定 LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v標(biāo)本采集及送檢：標(biāo)本采集及送檢：發(fā)病1-2周取血，3-4周取糞便(新鮮糞便冷藏8h內(nèi)送檢，轉(zhuǎn)移至卡里-布

10、萊爾Cary-Blair運送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)，全程可取骨髓（已用抗生素，其他標(biāo)本陰性）作細(xì)菌培養(yǎng)。整個病程中應(yīng)分期采集2-3份標(biāo)本作血清抗體檢測。*轉(zhuǎn)移至Cary-Blair運送培養(yǎng)基的糞便試子分離培養(yǎng)時應(yīng)輕攪混合標(biāo)本LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 血液：血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基或葡萄糖膽鹽肉湯，361孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營養(yǎng)瓊脂平板，361培養(yǎng)24-48h 骨髓：骨髓：直接或增菌分離 糞便：糞便：直接接種或于亞硒酸鹽增菌培養(yǎng)基亞硒酸鹽增菌培養(yǎng)基361增菌18-24h后接種于SS、MAC或沙

11、門顯色沙門顯色等培養(yǎng)基361培養(yǎng)18-24hLOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v形態(tài)與染色：形態(tài)與染色：在SS和MAC培養(yǎng)基上形成中等大小、無色透明、表面光滑、邊緣整齊的菌落部分產(chǎn)H2S菌株形成中心黑褐色的菌落革蘭陰性桿菌周身鞭毛，無莢膜、芽胞 SS agarE.coliLOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v生化反應(yīng)：生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等361培養(yǎng)18-24h觀察生化反應(yīng)進(jìn)行初篩。發(fā)酵葡萄糖、不發(fā)酵乳糖 ，除傷寒沙門菌不產(chǎn)氣外，其余菌產(chǎn)生氣體，動力陽性、吲哚陰性、不水解尿素，其KIA生化反應(yīng)模

12、式為：K/A G H2S(+)；MIU生化模式為： LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）LOGO（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v 血清學(xué)鑒定：血清學(xué)鑒定：凡生化反應(yīng)附合沙門菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗確定凡生化反應(yīng)附合沙門菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗確定相應(yīng)群和生物型，基本原則：相應(yīng)群和生物型，基本原則：O:Vi:H1:H2 A-F群多價O血清 多價凝集后再用每個O血清群的單價因子血清定群后用H因子檢查第1相和第2相H抗原單價O因子血清不凝集，應(yīng)排除Vi抗原(制成菌懸液100 水浴30min破壞Vi抗原后再進(jìn)行血清凝集)LOGO（一）傷

13、寒和副傷寒（沙門氏菌）（一）傷寒和副傷寒（沙門氏菌）v 確定鑒定：確定鑒定：腸桿菌科細(xì)菌各屬之間，生化有類似，抗原有交叉反應(yīng)和不典型菌株的出現(xiàn)，需進(jìn)一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定，可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)鑒定。LOGO（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌） v簡稱菌痢，是由志賀菌屬細(xì)菌引起簡稱菌痢，是由志賀菌屬細(xì)菌引起的腸道傳染病。的腸道傳染病。v細(xì)菌性和阿米巴性痢疾診斷標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌性和阿米巴性痢疾診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS287-2008）分類：分類： A群：痢疾志賀菌群：痢疾志賀菌(S.dysenteriae) B群：福氏志賀菌群：福氏志賀菌(S.flexneri) C群：

14、鮑氏志賀菌群：鮑氏志賀菌(S.boydii) D群：宋內(nèi)志賀菌群：宋內(nèi)志賀菌(S.sonnei)LOGO（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v 1 診斷依據(jù)診斷依據(jù)1.1 流行病學(xué)史流行病學(xué)史：患者有不潔飲食和（或）與：患者有不潔飲食和（或）與菌痢患者接觸史。菌痢患者接觸史。1.2臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 1.2.1 潛伏期：數(shù)小時至潛伏期：數(shù)小時至 7d，一般，一般 1d3d。 1.2.2 臨床癥狀和體征：起病急驟，畏寒、寒臨床癥狀和體征：起病急驟，畏寒、寒戰(zhàn)伴高熱，繼以腹痛、腹瀉和里急后重，每戰(zhàn)伴高熱，繼以腹痛、腹瀉和里急后重，每天排便天排便 10 次次20 次，但量不多，呈膿

15、血次，但量不多，呈膿血便，并有中度全身中毒癥狀。重癥患者伴有便，并有中度全身中毒癥狀。重癥患者伴有驚厥、頭痛、全身肌肉酸痛，也可引起脫水驚厥、頭痛、全身肌肉酸痛，也可引起脫水和電解質(zhì)紊亂，可有左下腹壓痛伴腸鳴音亢和電解質(zhì)紊亂，可有左下腹壓痛伴腸鳴音亢進(jìn)。進(jìn)。 1.2.3 臨床分型臨床分型1.3 實驗室檢測實驗室檢測 1.3.1 糞便常規(guī)檢查，白細(xì)胞或膿細(xì)胞糞便常規(guī)檢查，白細(xì)胞或膿細(xì)胞15/HPF（400 倍）倍） ，可見紅細(xì)胞、吞，可見紅細(xì)胞、吞噬細(xì)胞。噬細(xì)胞。 1.3.2 病原學(xué)檢查，糞便培養(yǎng)志賀菌陽性病原學(xué)檢查，糞便培養(yǎng)志賀菌陽性。v 2 診斷診斷 2.1 疑似病例：腹瀉，疑似病例：腹瀉，

16、有膿血便或黏液便或有膿血便或黏液便或水樣便或稀便，伴有水樣便或稀便，伴有里急后重癥狀，尚未里急后重癥狀，尚未確定其他原因引起的確定其他原因引起的腹瀉者。腹瀉者。 2.2 臨床診斷病例：臨床診斷病例：1.1+1.2+1.3.1+排除其他原因引起之排除其他原因引起之腹瀉。腹瀉。 2.3確診病例：臨床診確診病例：臨床診斷病例斷病例+1.3.2LOGO（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v3 實驗室病原學(xué)檢查實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)標(biāo)本本采采集集及及送送檢檢分分離離培培養(yǎng)養(yǎng)形形態(tài)態(tài)與與染染色色 生生化化反反應(yīng)應(yīng) 血血清清學(xué)學(xué)及及確確定定鑒鑒定定 LOGO（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）

17、細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v標(biāo)本采集及分離：標(biāo)本采集及分離：盡量在抗生素使用前，采集血液（懷疑菌血癥）或新鮮糞便膿血、粘液部分(新鮮糞便置于清潔、干燥、無肥皂或消毒液殘留的容器中冷藏條件下8h內(nèi)送檢或轉(zhuǎn)移至卡里-布萊爾Cary-Blair運送培養(yǎng)基的糞便試子冷藏24h內(nèi)送檢)。v分離培養(yǎng)：分離培養(yǎng)： 血液：血液：按1：10加入血液增菌培養(yǎng)基，361孵育，分別于1d、2d、7d轉(zhuǎn)種血平板或營養(yǎng)瓊脂平板，361培養(yǎng)24-48h，觀察結(jié)果。 糞便：糞便：直接劃線接種于MAC或XLD（木糖賴氨酸去氧膽酸鈉）培養(yǎng)基361培養(yǎng)18-24h。 不建議使用SS，因其可抑制痢疾志賀氏菌A1型生長，漏檢LOGO（二）

18、細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v形態(tài)與染色：形態(tài)與染色：革蘭陰性短小桿菌，無鞭毛、芽胞，有菌毛。在MAC上呈不發(fā)酵乳糖的無色、透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊的小菌落；在XLD上呈粉紅色至無色，半透明、光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊或不齊的小菌落S.flexneri on MAC agarS.boydii on MAC agarS.sonnei and E.coli XLDLOGO（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v生化反應(yīng)：生化反應(yīng)：純化后挑取可疑菌落接種KIA/TSI、MIU等361培養(yǎng)16-20h觀察生化反應(yīng)。 KIA生化反應(yīng)模式為：K/A H2S(

19、-) ；MIU： +/ LOGO（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）（二）細(xì)菌性痢疾（志賀氏菌）v血清學(xué)凝集：血清學(xué)凝集：凡生化反應(yīng)附合志賀菌者，均應(yīng)用凡生化反應(yīng)附合志賀菌者，均應(yīng)用血清學(xué)凝集試驗進(jìn)行鑒定分型血清學(xué)凝集試驗進(jìn)行鑒定分型 無菌挑取KIA表面菌落，用志賀氏菌四種多價抗血清凝集； 凝集者，再取痢疾志賀氏I、痢疾志賀氏II、宋內(nèi)志賀氏、福氏志賀氏抗血清凝集； 不凝者排除k抗原(制成菌懸液100 水浴30min后再進(jìn)行血清凝集)后，取鮑氏志賀氏菌抗血清凝集； 若與某型血清發(fā)生凝集，應(yīng)進(jìn)一步作分型鑒定。v確定鑒定：確定鑒定：選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)一步做系統(tǒng)生化反應(yīng)鑒定。LO

20、GO（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）v感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)（感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)（ws271-2007）v感染性腹瀉：感染性腹瀉：除霍亂、傷寒副傷寒、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾以外的細(xì)菌、病毒、原蟲等病原體引起的、以腹瀉為主要臨床特征的一組腸道傳染病。主要常見的傷寒、副傷寒以外的沙門氏菌、致瀉性大腸埃希菌（腸毒素型大腸埃希菌ETEC、腸致病型大腸埃希菌EPEC、腸侵襲型大腸埃希菌EIEC、腸出血型大腸埃希菌EHEC、腸凝聚型大腸埃希菌EaggEC）、副溶血性弧菌、彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、輪狀病毒、隱孢子蟲等LOGO（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血

21、性弧菌）v 副溶血性弧菌（副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus,VP）是一種革蘭氏陰性，無芽胞，是一種革蘭氏陰性，無芽胞，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀的形狀的嗜鹽性細(xì)菌嗜鹽性細(xì)菌。進(jìn)食含。進(jìn)食含有該菌的食物可致食物中毒，有該菌的食物可致食物中毒，臨床上以急性起病、腹痛、臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。傳染源主要為帶菌的癥狀。傳染源主要為帶菌的海產(chǎn)品，近海淡水魚帶菌較海產(chǎn)品，近海淡水魚帶菌較高。高。LOGO（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）v實驗室病原學(xué)檢查實驗室病原學(xué)檢查標(biāo)標(biāo)本本采采集集及及送送檢檢分分離離培培養(yǎng)養(yǎng)形形態(tài)態(tài)與與染染色色 生生化化反反應(yīng)應(yīng) 確確定定鑒鑒定定 LOGO（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）（三）感染性腹瀉（副溶血性弧菌）v標(biāo)本采集及送檢：標(biāo)本采集及送檢：急性期、用藥前采