病理科切片及染色方法與問(wèn)題(1)

1、病理科切片及染色方法和職業(yè)暴露的預(yù)防病理科：黃山石蠟切片的步驟 將已固定和修好的石蠟塊裝在切片機(jī)的夾物臺(tái)上。 將切片刀固定在刀夾上，刀口向上。 搖動(dòng)推動(dòng)螺旋，使石蠟塊與刀口貼近，但不可超過(guò)刀口。 調(diào)整石蠟塊與刀口之間的角度與位置，刀片與石蠟切片約成15度左右。 調(diào)整厚度調(diào)節(jié)器到所需的切片厚度，一般為4-10微米。 一切調(diào)整好后主可以開(kāi)始切片。此時(shí)右手搖動(dòng)轉(zhuǎn)輪，讓蠟塊切成蠟帶，左手持毛筆將蠟帶提起，搖轉(zhuǎn)速度不可太急，通常以40-50r/min。 切成的蠟帶到20-30cm長(zhǎng)時(shí)，右手用另一支毛筆輕輕將蠟帶挑起，以免卷曲，并牽引成帶，平放在蠟帶盒上，靠刀面的一面較光滑，朝下，較皺的一面朝上。 用單面

2、刀片切取蠟片一小段，放在載玻上加水一滴，置于放大鏡或顯微鏡下觀察切片是否良好。 切片工作結(jié)束后，應(yīng)將切片刀取下用氯仿擦去刀上沾著的石蠟，把切片機(jī)擦拭干凈妥為保存。切片結(jié)束后的撈片 展片、貼片 打開(kāi)水浴鍋，使水溫維持在40-45，另準(zhǔn)備30%乙醇溶液。 切片時(shí)，將一碗30%乙醇溶液放于切片機(jī)旁的桌面上。 用小鑷子夾取預(yù)先用刀片割開(kāi)的蠟帶，放在乙醇溶液的水面上，使切片展開(kāi)。 小鑷子輕輕地將連在一起的切片分開(kāi)，用一個(gè)載玻片將切片完整，已展開(kāi)的切片撈至溫水中，使之充分展開(kāi)。 另取潔凈的載玻片，撈起展開(kāi)的切片，使其位于切片1/3處，另一端（磨邊，粗糙的一端）磨面上標(biāo)記或貼上標(biāo)簽，放于切片架上。 10.

3、脫蠟復(fù)水 將水浴鍋溫度調(diào)至60，待水溫控制在60時(shí)，將切片連同切片架放入一干燥的染色缸內(nèi)，放入水浴鍋中，蓋上蓋子（可密封），30min至蠟熔化。 萊卡rm2235切片機(jī)萊卡切片機(jī)石蠟切片的關(guān)鍵點(diǎn) 1、時(shí)刻注意保護(hù)好自己，切片刀非常鋒利，小心被割傷。 預(yù)防方法？ 2、如何才能切出滿(mǎn)意的病理切片？ a，愛(ài)護(hù)機(jī)器。b、取材脫水合適。c、切片厚度也很重要。d、切片方法（非常重要）。 e、多做練習(xí)，多多觀察，發(fā)現(xiàn)不同組織不同的切片方法。一些組織的切片方法 1、脂肪多的組織。（乳腺、淋巴結(jié)、脂肪瘤） 2、過(guò)脆的組織（肝臟、脾臟） 3、過(guò)硬的組織（骨組織，鈣化組織） 4、小組織。 5、某些皮膚組織。水浴鍋撈

4、片的關(guān)鍵點(diǎn) 1、水溫。（47-50） 2、如何選擇最合適的切片。 3、出現(xiàn)皺褶如何解決。 4、如何才能杜絕撈片中發(fā)生的污染。切片結(jié)束后HE染色的步驟1、二甲苯脫蠟 兩道，每道10分鐘 2、無(wú)水乙醇 5min 5min 3、95%乙醇 5min 5mn 4、水洗 5、蘇木素液 3-5min（冬天可適當(dāng)延長(zhǎng)） 6、水洗 7、0.5%鹽酸酒精分色 310seconds，鏡下觀察 8、水洗藍(lán)化 35min（注意換水） 9、95%乙醇 1min 10、伊紅液染色 330seconds 11、梯度酒精，70%一直到無(wú)水酒精。 12、二甲苯 兩步 透明 13、中性樹(shù)膠封片。 HE染色后切片會(huì)遇到的一些問(wèn)題 1、蘇木素染色不滿(mǎn)意，核不藍(lán)或者過(guò)染。 2、伊紅染色不滿(mǎn)意，過(guò)紅或者過(guò)淡。 3、切片白色不透明，非常的臟。 4、鏡下觀察組織上有氣泡。 5、鏡下發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核上有黑點(diǎn)，類(lèi)似芝麻點(diǎn)。 6、組織朦朦朧朧，結(jié)構(gòu)不清。如何解決這些問(wèn)題？ 1、蘇木素和伊紅染不上色或者過(guò)染是什么原因造成的，如何解決？ 2、什么原因造成的切片白色，非常的臟。如何解決？ 3、如何減少切片上的氣泡。 4、如何減少細(xì)胞核上的芝麻點(diǎn)。 5、染色試劑如何