[資格考試]weisheng

1、. 微生物學實驗設計方案 組成員：田曉瑞、秦艷艷、鄧小鳳、馬小莉、孫翠、王凱 實驗名稱：乳酸菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察前言：乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。凡是能從葡萄糖或乳糖的發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸菌的細菌統(tǒng)稱為乳酸菌。日常生活中利用乳酸發(fā)酵腌制泡菜，制造酸奶都是應用乳酸發(fā)酵的實例。分離乳酸菌常用的培養(yǎng)基有乳清瓊脂、乳清白堊瓊脂和BCP等多種實驗目的：1.掌握乳酸菌的分離及性質觀察2. 掌握培養(yǎng)基的制作方法及配制原則3. 運用正確的方法對菌體進行菌落形態(tài)觀察實驗原理：革蘭氏染色是用于細菌鑒別的一種重要染色方法，它是根據(jù)革蘭式陽性細菌、陰性細菌細胞壁結構、組成的不

2、同而使用一系列的染色處理使之差別顯色。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性菌，被染成紫色的是革蘭式陽性細菌。實驗材料： 1，器材： 玻璃棒，量筒，線繩，膠塞，試管，三角瓶（3個），天平，接種環(huán)，酒精燈，火柴，培養(yǎng)皿（12個），鑷子，載玻片，廢液瓶，洗瓶，顯微鏡，撥針，蓋玻片，擦鏡紙，吸水紙，試管（6個） 2，試劑 ： 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 瓊脂 水 H2O2 酸奶 二甲苯 香柏油 蕃紅或石炭酸復紅 碘液 95%乙醇 NaOH實驗方法及步驟 1.培養(yǎng)基制備：（共200ml）1） 稱量：稱取牛肉膏0.6g 蛋白胨 2g NaCl 1g 瓊脂 3.6-4g 水 200ml 2） 溶化:將已經(jīng)稱好的藥品依

3、次放入融化容器內在電爐上加熱促溶，待其他藥品已溶，可將瓊脂放入融化，并不時攪拌，待藥品已融化完全，補充融化過程中蒸發(fā)的水分至所需培養(yǎng)基的總體積，攪拌均勻。3） 調節(jié)PH：用玻璃棒沾取少許培養(yǎng)基，以PH試紙檢測培養(yǎng)基的PH,并用0.1NnaOH溶液調整。4） 分裝：趁熱將培養(yǎng)基分裝至三角瓶內，分裝時，應避免管口或瓶口粘附上培養(yǎng)基，如果粘附，須擦盡。5） 包扎：三角瓶口加棉花塞，用防水紙和線繩將瓶口加塞處包扎好，并注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。6） 滅菌：將分裝包扎好的培養(yǎng)基置于高壓滅菌器中121滅菌20-30min 2.乳酸菌的分離及純培養(yǎng)：1） 將稀釋2倍、4倍和無稀釋的酸奶分別涂在已制好的平板

4、培養(yǎng)基上，每一倍數(shù)各兩個，放于溫床上培養(yǎng)。2） 乳酸菌的純培養(yǎng)（1） 選取3種不同的菌落分別接種在不同的平板培養(yǎng)基上（各兩個），分別表上序號，以備過氧化氫酶實驗應用；（2） 在選取生長良好的菌落接種在斜面培養(yǎng)基上（三個）備用。 3.過氧化氫酶試驗：分別挑取不同的菌落將3%H2O2注于乳酸菌菌落上，觀察有無氣泡產(chǎn)生。 4.乳酸菌革蘭氏染色（以枯草桿菌染色作為對照）1） 涂片：在潔凈的載玻片上滴加少許蒸餾水，用接種環(huán)以無菌操作方式從菌落上挑取少量菌體，與水混勻，并涂成薄層，然后干燥、固定2） 初染：滴加結晶紫染液覆蓋圖片，染色1分鐘，然后用水沖洗3） 媒染：滴加碘液覆蓋涂片，染色1-2分鐘后用水沖洗，甩盡殘余水4） 脫色：用95%乙醇沖洗30秒（須嚴格控制時間），然后立即用水沖洗5） 復染：用蕃紅或石碳酸覆蓋涂片進行復染，蕃紅染2-3分鐘，若為石碳酸染1分鐘，水洗，晾干5. 乳酸菌菌落形態(tài)