碩士論文--二靈軟膠囊的藥學部分研究_圖文

1、成都中醫(yī)藥大學 碩士學位論文二靈軟膠囊的藥學部分研究 姓名:鄭翠英申請學位級別:碩士 專業(yè):藥劑學指導教師:徐超群 2009-04中文摘要二靈軟膠囊處方來源于二靈散,由當歸、白芷兩味藥物組成,主要用于治療 風搏于肺,傳于大腸,導致津液干枯,大腸失于潤澤,排便不暢所致的 “ 風秘 ” 。 “ 風秘 ” 屬于 “ 燥 ” 性便秘,而便秘是臨床常見癥狀,發(fā)病率極高,治療藥物需求量 大,市場前景廣闊。本課題以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為指導,根據(jù)現(xiàn)代臨床用藥特點,對二靈散重新進 行提取與制劑方面的研究,開發(fā)成為能夠改善胃腸道功能、具有潤腸通便作用的 二靈軟膠囊,可以增加臨床用藥的選擇性,具有較好的發(fā)展前景。在提取

2、工藝中,當歸主要提取其揮發(fā)油部分,并以揮發(fā)油的收率為指標考察 了不同的提取方法,結果選擇以超臨界流體萃取法進行提取。超臨界流體萃取法 的萃取條件為:萃取釜壓力 20MPa ,萃取溫度為 36 ,分離器壓力為 6.5 MPa, 分離器溫度為 70 , CO 2流速為 25L/h,蒸發(fā)器溫度為 0.5 。白芷主要以歐前 胡素的得率為指標來選擇其提取方法。在研究過程中,綜合對滲漉法與回流法進 行了比較, 通過考察其對制劑成型的影響, 最終選擇以回流法進行提取。提取條 件為:12倍量 80%乙醇加熱回流提取 3次,每次 2h 。在制備工藝研究過程中,分別對軟膠囊內容物的成型工藝、軟膠囊囊皮處方 進行了

3、研究。成型工藝研究中,根據(jù)藥物的用藥特點,選擇了以麻油作為內容物 基質;并以成品的外觀性狀、流動性、沉降比為指標,對助懸劑的種類、用量進 行了考察,最終選擇以蜂蠟為助懸劑,用量為麻油用量的 6%。在軟膠囊囊皮處 方的研究過程中,以檸檬黃的溶出速率為指標來間接考察不同明膠甘油比例、不 同大分子物質的加入對于膠囊皮崩解的影響,并最終篩選軟膠囊的處方為:明膠 -甘油-PEG400-檸檬黃 (1:0.5:0.1:0.015。最后進行了中試放大研究,驗證了 制備工藝工業(yè)化的可行性。在二靈軟膠囊的質量標準研究中,進行了性狀、鑒別、常規(guī)檢查等研究,以 高效液相色譜法測定歐前胡素的含量來對產品進行含量控制。

4、對當歸、白芷兩味 藥物進行了薄層色譜鑒別,并 確定了相應的條件。在質量標準可控的基礎上對該 制劑進行了穩(wěn)定性研究。以上結果表明:制備工藝合理可行、質量標準可控、成 品質量基本穩(wěn)定。關鍵詞 :二靈軟膠囊 制備工藝 質量標準 穩(wěn)定性研究AbstractThe formation of Erling soft capsule comes from Erlingsan,which includes danggui and baizhi.It is mainly used to deal with the defication problem,which has the “ dry” nature 。

5、If the wind effects the lung and the large instine,at last,it will result in the loss of the body fluid and make the stool difficult to be expelled out,then the the “ wind defication” appear.Defication is very fluent in clinic,lots kinds of drugs are needed,therefore,it can has a good market.Accordi

6、ng to the traditional chinese medicine theory and the feature of drug using in modern clinic,we did the new research to Erlingsan on its extracting part and pharmaceutics.We can enlarge the choice of medcine in clinic and make a good future if we can change Erling san into Erling soft capsule ,which

7、 is helpful in improving the function of the digestive system moisterning the intestine and freeing the stool.In its extraction research,we mainly meaned to extract the oil from danggui and at last we chose the Supercritical Extraction Technology,depending on the productivity.The condition of the Su

8、percritical Extraction Technology is that the pressure of 20MPa,the temperature of 36, the separating pressure of 6.5 MPa ,the separating temperature of 70 ,the CO2 fluent rate of 25L/h and the Evaporator temperature of 0.5 .When it means baizhi,we chose its extraction method depending on the produc

9、tivity of Coumarins.During the research progress,we compared the percolation method and refluent extraction method in many ways,but at last,considering its effect on the pharmaceutics,we choose the refluent extraction method with 12 times amount of 80% alcohol for three times,2 hours one time as the

10、 extract method of baizhi.In the manufacturing progress,we did some research on its formation of the content and the soft gelatin.In the first part, semame oil was chosen as the dispersed medium according to its using purpose.With the guideline of the external appearance fluent character the sedimen

11、tation ratio,the kind and the dosage of the suspending agent were researched and chosen as beeswax with the proportion of 6% corresponding to the amount of the oil.In the second part,by the rate of the dissolutionof the lemonwood,we reviewed the different rate of gelatin and glycerine different macr

12、omolecular s effect on the gelatin and we chose the formation as gelati n-glycerin e-PEG400-lemonwood(1:0.5:0.1:0.015.In the end, We enlarged the experiment according to the confined process and proved its feasibility in industrial production.During the quality standard research of Erling soft capsu

13、le,external appearance and characters,discriminate,the normal regulation check etc. were studied.we used the HPLC method to control the amount of coumarins in the drug.we used the thin layer chromatography method to identify baizhi and danggui,and built the proper method.The research indicated that

14、the technique of preoaration was reasonable and practical,the standards was controlled and the quality of the sample was steady and well.Key words:Erling soft capsule technique of preparation, quality standard, preliminary stability聲明本 人 承 諾 :碩 士 學 位 論 文 二 靈 軟 膠 囊 的 藥 學 部 分 研 究 是本人在成都中醫(yī)藥大學攻讀碩士學位期間在導

15、師指導下獨立進行 研究工作所取得的成果,無抄襲及編造行為。 該論文著作權歸成都中 醫(yī)藥大學所有。由于本人的導師(或主要具體指導者系外校兼職導 師,并提供了該學位論文研究、撰寫的主要經費,故該論文涉及的有 關知識產權等,按事先已有的約定執(zhí)行。若無約定,則同樣需征得導 師和成都中醫(yī)藥大學同意。本人同意:成都中醫(yī)藥大學有權通過影印、 復印等手段匯編學位 論文予以保存,并提供查閱和借閱;有權按照規(guī)定向國家有關部門、 機構送交論文及電子版,公布(或刊登論文內容。(注:論文涉及保密部分請事先做好處理 碩士生簽名:導 師 簽 名:年 月 日1前言1.1立題的依據(jù)和背景1.1.1便秘的發(fā)病及治療原則便秘是指排

16、便頻率減少, 7天內排便次數(shù)少于 23次,糞便量少且干硬, 并常有排便困難。便秘可以單獨出現(xiàn),也可以伴隨多種疾病同時出現(xiàn),其發(fā)病率 在世界范圍內都比較高,在美國,便秘的發(fā)生率約為 2%,英國為 10%、日本為 4%,我國天津為 4.4%1。發(fā)病率女性高于男性、北方高于南方。我國大部分流 行病學資料認為,隨著年齡的增長,便秘的發(fā)病率明顯增加,老年人患病率大約 為 15%30%。長期臥床的老年人患病更高達 80%2。引起便秘的原因很多,如飲食過于精細、長期濫用瀉藥、疾病原因、生活規(guī) 律等?，F(xiàn)代醫(yī)學認為便秘可繼發(fā)于直接影響腸平滑肌功能的各種因素,也可因結 腸及肛門功能異常所致。西醫(yī)的治療手段主要是容

17、積性通便、滲透性通便、刺激 性通便、潤滑性通便等 3。中醫(yī)則從整體觀念出發(fā),認為外因、內因和不內外因 均可導致便秘,便秘的發(fā)生與性別、年齡、地域氣候、文化程度、精神心理狀況 等因素均有關。凡可致 “ 津液虧耗,陰血不足,大腸枯澀 ” 的各種原因均可導致便 秘的發(fā)生。中醫(yī)的治療則根據(jù)不同的病機而采取不同的手段及方法。1.1.2中醫(yī)對便秘的辨證論治從中醫(yī)的角度來看,便秘的病機常涉及 “ 燥 ” 4。人體的排便,靠五臟六腑的 正常生理功能及相互之間的協(xié)調合作來完成, 對于便秘的治療需要從臟腑功能的 失調方面來考慮。便秘的原因有多個方面,有因臟腑本身功能虛弱,脾胃功能受 損所致,胃氣虛弱,大腸傳導無力

18、,失于通降,肝腎陰匱乏,大腸失于濡潤,腎 陽不足,氣化失司所致;也有因臟腑功能不協(xié)調或功能失常導致,如肝郁脾虛, 氣機不利,三焦氣機壅滯,聚津為痰,津不下行所致;也有因臟腑受邪,久而不 去所致,如肺有痰飲或燥邪,使肺失其清肅功能,或因病理性產物如痰濕、 瘀血 阻滯大腸,氣機受阻所致 5。中醫(yī)針對不同的病機對便秘有不同的辯證,并針對各種辯證的特點,采用不同的論治原則。熱結便秘者,宜瀉熱通便;氣滯者宜行氣導滯;氣虛者宜益氣潤 腸;血虛者宜養(yǎng)血潤燥;陽虛則用溫腸通便之法。老年臟腑功能減弱,腸道傳送 無力,故成便秘,主以虛秘、冷秘、氣秘為主,治療則應以潤腸通便為主加以理 氣健脾之品 6。中醫(yī)在治療便秘

19、方面尤其獨特的特點和優(yōu)勢, 因此對于開發(fā)可以用于治療或 者改善便秘癥狀的中藥產品則具有很大的市場空間。并可以采用更健康、自然的 方式來引出新一代治療或改善便秘癥狀的原則和方法, 也可以進一步開發(fā)中藥的 市場價值,充分發(fā)揮其獨特的功能。1.2二靈軟膠囊的處方分析及藥物研究1.2.1二靈軟膠囊的處方分析二靈軟膠囊來自原方二靈散。古用于治療風秘,其使用原記載于仙拈集 卷二,有潤腸通便的作用。主要用于治療大便秘結之風秘者,風秘的病因即風搏 于肺,傳于大腸,導致津液干枯,大腸失于潤澤,排便不暢,屬于 “ 燥 ” 性便秘。 故針對此種便秘,治則宜疏風和血潤腸。本方由兩味藥物當歸與白芷組成。當歸,甘,辛,溫

20、,歸肝、心、脾經,具 有補血、活血,調經、止痛、潤腸的功效。白芷,辛,溫,歸肺、胃經;具有解 表散風、通竅、止痛、燥濕止帶、消腫排膿的功效,白芷用于治療風秘在本草 綱目中就有所記載。 本方使用主要利用白芷疏風于外、當歸和血潤腸于內的功 效, 兩味藥物合理配伍,開發(fā)為可以改善胃腸道功能、具有潤腸通便作用的藥品 具有較好的發(fā)展前景。1.2.2當歸、白芷的物質基礎研究當歸的化學成份主要分為揮發(fā)油和水溶性成份兩大部分。當歸揮發(fā)油中,成 分相對含量最高的是藁本內酯,占總量的 57.81%,除此之外,還有正丁烯基苯 酞內酯 7.94%、反式 -羅勒烯 4.09%、 a-蒎烯 3.38%7。當歸的水溶性成份

21、研究較為深入的主要為有機酸類,如阿魏酸、當歸多糖類成份。當歸揮發(fā)油是其對血管平滑肌解痙作用的主要活性成分, 其中以藁本內酯的 活性最強。揮發(fā)油中高沸點部分含有興奮子宮和抑制子宮的兩種成分。正丁烯基 苯酞和藁本內酯在體外有松弛氣管平滑肌的作用, 同時還有抑制血小板聚集的作 用。當歸中性油能增強巨噬細胞的吞噬功能和促進淋巴細胞的轉化。 有 機酸類成 分中的阿魏酸有很強的抗氧化活性。 當歸多糖具有補血及調節(jié)免疫和物質代謝的 功能 8。白芷主要有效成分為香豆素類,含量為 0.211%1.221%9,其中主要有氧 化前胡素 0.06%0.43%,歐前胡素 0.1%0.83%,異歐前胡素 0.05%0.1

22、5%。 有研究測定不同生長期白芷中香豆精類含量,結果顯示 3年以上、斷面直徑在 1cm 以上的白芷香豆精類含量顯著提高。另外也有報道顯示,白芷含揮發(fā)油 0.24%,已鑒定 29種成分, 其中主要有甲基環(huán)癸烷 12.4%, 1-十四碳烯 10.9%等; 也有報道含揮發(fā)油類成分 0.5%,并鑒定出 59種成分,主要有有機酸類、碳烯類 及醇類化合物等。白芷的化學成分復雜,經現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其在多方面都具有較顯著的藥理 作用。白芷具有較顯著的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用,能對抗多種病原微生物,并對 皮膚、心血管、平滑肌、脂肪代謝及中樞神經等多方面都有一定的藥理作用 10。2. 制備工藝研究2.1試驗材料2.1

23、.1試驗用藥材來源及鑒定當歸為傘形科 (Umbelliferae植物當歸 Angelica sinensis (Oliv. Diels的干燥 根。本試驗所用當歸購自成都市中藥材市場,并按照中國藥典 2005年版一 部當歸項下有關要求檢驗,結果符合規(guī)定。白 芷 為 傘 形 科 (Umbelliferae植 物 白 芷 Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm.Benth. et. Hook.f.或杭白芷 Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm.Benth. et. Hook.f. var.formosana (Boiss. Shan et

24、 Yuan的干燥根。本試驗所用白芷購于四川 遂寧白芷 GAP 生產基地 (四川銀發(fā)資源開發(fā)股份有限公司 , 并按照 中國藥典 2005年版一部白芷項下有關要求檢驗,結果符合規(guī)定。2.1.2主要試驗儀器與試藥5+1升超臨界萃取裝置(四川德陽四創(chuàng)公司Agilent 1200高效液相色譜儀包括四元泵、脫氣機、 VWD 紫外檢測器和化學工 作站 (美國安捷倫公司 UV-2401PC 紫外分光光度計(日本島津ZRS-8C 溶出度測定儀(天津大學無線電廠Thermo SNL216V/VC45 真空冷凍干燥儀(美國賽默飛世爾科技有限公司 101型電熱鼓風干燥箱(北京市永光明醫(yī)療儀器廠DZF-6021型真空干

25、燥箱(上海精密實驗設備有限公司分析天平 (Sartorius 十萬分之一 歐前胡素對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號為:110826-200511 乙腈為色譜純;水為純凈水;其他試劑均為分析純;輔料均為藥用規(guī)格2.2提取與干燥工藝研究2.2.1當歸提取工藝研究當歸藥材中揮發(fā)油成分多達數(shù)十種,其中以藁本內酯為主,另外還含有少量 香荊芥酚、苯酚、對苯甲酚、別羅勒烯、正丁烯基輔內酯等。由于當歸揮發(fā)油中 藁本內酯成分不穩(wěn)定, 故本試驗對當歸揮發(fā)油提取工藝的考察主要以當歸揮發(fā)油 的收率為指標。2.2.1.1有機溶劑提取法稱取當歸粉 300g ,放置于 2000ml 圓底燒瓶中,加乙醚 1200ml

26、,加熱回流 提取 5h ,收集乙醚液體,減壓回收乙醚至燒瓶中少量乙醚剩余,轉移到已稱重 的蒸發(fā)皿中,低溫水浴揮干剩余乙醚,稱重,計算揮發(fā)油得率約為 0.10%。 由試驗結果可以看出, 揮發(fā)油得率低,且揮發(fā)油黏著在蒸發(fā)皿的內壁上,收 集困難,在揮去乙醚的過程中,由于揮發(fā)油溶解在乙醚中,因此難以判斷乙醚是 否揮發(fā)完全,所得揮發(fā)油仍有少量乙醚殘留。故本方法不適于揮發(fā)油的提取。2.2.1.2水蒸氣蒸餾法當歸揮發(fā)油屬于輕油,因此采用中國藥典 2005年版一部附錄 XD 揮發(fā) 油測定法甲法進行揮發(fā)油的提取。根據(jù)文獻資料可知,浸泡時間、加水量、蒸餾 時間為影響揮發(fā)油收率的主要因素,對每個因素各設計 3個水平

27、,見表 2-1。設 計正交試驗表,進行試驗。每組試驗各取當歸粗粉 500g ,按照試驗條件進行揮 發(fā)油提取,對提取結果進行統(tǒng)計分析。正交試驗設計及結果見表 2-2、方差分析 結果見表 2-3。表 2-1 正交試驗因素水平表因素水平A 浸泡時間 (h B 加水量 (倍 C 蒸餾時間 (h1 6 6 62 12 8 83 24 10 10表 2-2 正交試驗設計及結果A B C D試驗號1 2 3 4收率 (%1 1 1 1 1 0.182 1 2 2 2 0.203 1 3 3 3 0.224 2 1 2 3 0.195 2 2 3 1 0.226 2 3 1 2 0.197 3 1 3 2 0

28、.208 3 2 1 3 0.179 3 3 2 1 0.21 0.6 0.57 0.54 0.61 0.6 0.59 0.6 0.59 0.58 0.62 0.64 0.58( 2+ 2+ 23×K0.3521 0.3525 0.3537 0.3522l 0.0001 0.0005 0.0017 0.0001表 2-3 方差分析來源 l v MS FA 0.0001 2 0.00005 0.5000B 0.0005 2 0.00025 2.5000C 0.0017 2 0.00085 8.5000D(誤差 0.0002 2 0.0001查方差分析表,得 F 0.01(2,2=99.

29、00, F 0.05(2,2=19.00。由試驗結果和方差分 析可知,三個因素對當歸揮發(fā)油的提取效率均無顯著影響。由揮發(fā)油的提取效率可知,水蒸氣蒸餾法所得當歸揮發(fā)油提取效率不超過 0.25%,提取效率低,難以滿足生產需要。從揮發(fā)油的提取情況來看,水蒸氣蒸 餾法所得揮發(fā)油較透明,有濃郁的當歸香味,但是水蒸氣蒸餾法提取當歸揮發(fā)油收集不完全, 一是長時間的提取可以導致當歸揮發(fā)油黏著在揮發(fā)油提取器的側壁 上,難以收集;二是當歸揮發(fā)油部分與水形成芳香水溶液,造成了一定的浪費; 所得當歸油中含有少量水分,在揮發(fā)油脫水的過程中也會造成一定的損失。2.2.1.3超臨界流體萃取法(1試驗方法與結果 將當歸藥材粉

30、碎成 20目左右的顆粒,取當歸 2.22kg 置 5+1升超臨界萃取裝 置的 5升提取釜中,采用超臨界流體萃取方式,參考文獻報道 11,12及操作人員的 長期操作經驗, 擬定提取揮發(fā)油萃取條件。 萃取釜壓力 20MPa , 萃取溫度為 36 , 分離器壓力為 6.5 MPa,分離器溫度為 70 , CO 2流速為 25L/h,蒸發(fā)器溫度設定 為 0.5 。超臨界流體萃取得揮發(fā)油 24.8g ,計算收得率約為 1.12%。所得當歸揮發(fā)油 具有濃郁的當歸香氣,較水蒸氣蒸餾法所得揮發(fā)油顏色較深,超臨界流體萃取法 揮發(fā)油收得率明顯高于水蒸氣蒸餾法,且提取時間短,提取效率高,所得揮發(fā)油 不含水分,無需脫

31、水,可以直接使用。提取后所得藥材干燥。鑒于超臨界流體萃 取法的種種優(yōu)點,所以決定采用超臨界流體萃取法進行提取。由于當歸本身含油 量并不高,超臨界流體法萃取得率已經得到加大提高,提取條件也較為成熟,故 以上述條件為提取條件,不另外進行摸索。(2驗證試驗取 20目左右的當歸藥材 3份,每份約 2.30kg ,在上述萃取條件下進行萃取, 結果見表 2-4表 2-4當歸揮發(fā)油萃取試驗驗證結果編號 藥材重量 (kg 揮發(fā)油質量 (g 揮發(fā)油收率 (%1 2.25 25.22 1.122 2.27 25.88 1.143 2.22 24.64 1.11結果表明:驗證試驗結果與以上試驗結果一致,表明當歸揮發(fā)

32、油萃取工藝穩(wěn) 定。2.2.2白芷提取工藝研究2.2.2.1歐前胡素測定方法的初步選擇為保證中藥用藥安全、合理,有效地控制中藥及其制劑的質量,通常要建立 科學、可靠的定量分析方法。本試驗以白芷中歐前胡素的含量作為指標成分,在 其相關質量研究文獻報道的基礎上進行摸索, 初步建立了歐前胡素的高效液相測 定方法,從而為二靈軟膠囊的處方設計、工藝優(yōu)化、成品質量及穩(wěn)定性等工作提 供了可參考的分析手段和評價方法。本試驗采用藥典色譜條件進行測定,以 Agilent XDB-C18、 150mm×4.6mm、 5µm 色譜柱進行測定,主峰出峰時間在 20min 左右,出峰時間過長,所以改變

33、流動相,縮短出峰時間。(1溶液的制備對照品溶液的制備 取歐前胡素對照品于五氧化二磷干燥器中減壓干燥 24小時,精密稱取歐前胡素 8.49mg ,置于 25ml 容量瓶中,加甲醇定容至刻度,超 聲使溶解,即得濃度為 0.3408mg/ml的歐前胡素對照品貯備液。精密量取歐前胡 素對照品貯備液 2ml ,置 10ml 容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得濃度 為 0.06816mg/ml的對照品溶液。樣品供試品溶液 取白芷藥材細粉 2g ,加入當歸揮發(fā)油少許 (揮發(fā)油為水蒸 氣蒸餾法所得 ,置于三角瓶中,加甲醇 50ml ,超聲處理 30min ,過濾,取續(xù)濾 液,續(xù)濾液用微孔濾膜過濾,得樣品溶

34、液。(2色譜條件的選擇歐前胡素測定波長的選擇取歐前胡素對照品溶液,在 200400nm 波長范圍內,進行紫外掃描。掃描 結果見圖 2-1。由掃描圖可以看出 300nm 、 248nm 、 218nm 、 204nm 處分別呈現(xiàn) 吸收峰,但其中以 300nm 處吸收峰峰形規(guī)則,干擾小,因此選擇 300nm 作為歐 前胡素的測定波長,見圖 2-1。流動相的選擇色譜柱:Agilent XDB-C18, 150mm×4.6mm、 5µm、檢測波長:300nm 、柱溫:25 、流速:1ml/min等基本色譜條件不變,進行流動相的選擇。參考相關文獻, 對不同流動相進行選擇,結果以乙腈-

35、水(57:43為流動相分離效果最好,見 圖 2-2。2.2.2.2白芷的提取白芷的化學成分主要分為兩大類,即香豆素類以及揮發(fā)油類。香豆素類成分 的含量約為 0.211%1.221%,其中主要有氧化前胡素 0.06%0.43%,歐前胡素 0.1%0.83%,異歐前胡素 0.050.15%,其他香豆素類成分如比克白芷素、比克 白芷醚,脫水比克白芷素、新比克白芷醚、水合氧化前胡素、珊瑚菜素、花椒毒 素等。本試驗以香豆素類有效成分中歐前胡素的含量為檢測指標,對白芷進行提 取條件的摸索。文獻報道中,多以乙醇回流法、乙醇滲漉法對其進行提取研究,也有部分文 獻報道采用超臨界流體萃取法進行提取。 本試驗主要考

36、察了滲漉法與回流法在白 芷提取過程中的不同, 并在進行當歸超臨界萃取的同時對白芷的超臨界萃取進行 了一次摸索性試驗。(1超臨界流體萃取法方法 將白芷粉碎成 20目左右的粗粉,取白芷 2.04kg 置 5+1升超臨界萃 取裝置的 5升提取釜中,采用超臨界流體萃取方式,參考文獻及操作人員的長期 操作經驗,擬定萃取釜壓力 25MPa ,萃取溫度為 30 , CO 2的流速為 20L/h進 行提取。收集白芷萃取物 11.30g ,收率約為 0.55%,萃取物呈淡黃色油狀液體, 有濃郁的白芷香味。方法 將白芷粉碎成 20目左右的粗粉,取白芷 2.01kg 置 5+1升超臨界萃 取裝置的 5升提取釜中,采

37、用超臨界流體萃取方式,參考文獻及操作人員的長期 操作經驗,擬定萃取釜壓力 22MPa ,萃取溫度為 40 , CO 2的流速為 22L/h進 行提取。收集白芷萃取物 12.51g ,收率約為 0.62%,萃取物呈淡黃色油狀液體, 有濃郁的白芷香味。精密稱取兩種萃取條件下所得白芷萃取產物 0.1071g 、 0.1068g , 分別置 10ml 容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,再分別精密吸取甲醇溶液 2ml ,至 25ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,高效液相色譜法測定其歐 前胡素的含量,計算兩種萃取條件下歐前胡素的轉移率分別為 為 25.12%、 30.18%。根據(jù)上述試驗

38、結果可知, 兩種條件下所得白芷萃取產物的萃取效率和轉移率 均無法滿足試驗要求,故不選擇超臨界流體萃取方式進行白芷的提取。(2滲漉提取法與回流提取法的比較研究滲漉法與回流法是白芷提取常用的方法,文獻的報道也比較多,兩種方法各 有優(yōu)缺點,本研究即針對本項目要求對兩種提取方法進行比較,從而選擇適宜本 試驗要求的白芷提取方法。滲漉提取法乙醇濃度的選擇 文獻報道中 13,14,對于白芷提取所用的乙醇濃度差異較 大。 本試驗采用超聲的方法考察不同濃度乙醇對白芷提取的效果,以歐前胡素的 得率為指標進行評價。分別稱取白芷粉末 2g, 精密稱定,置 25ml 容量瓶中,分別加入適量濃度為 20%、 40%、 6

39、0%、 80%、 95%的乙醇,超聲處理 30min ,放冷至室溫,分別加相 應濃度的乙醇溶液至刻度,搖勻,過濾,分別精密量取 5ml 濾液于 10ml 容量瓶 中,加相應濃度的乙醇溶液稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,高效液相色譜法 測定其歐前胡素的含量,結果見表 2-5。表 2-5 不同濃度乙醇提取結果乙醇濃度 (% 20 40 60 80 95提取結果 (mg/g 0.5863 1.5809 1.8009 1.8387 1.8074 由表上結果可以看出,白芷的提取效率隨乙醇濃度的增加而增加。但當乙醇 濃度大于 60%以后,白芷的提取效率隨乙醇濃度變化增加不顯著。因此在設計滲 漉法提取正交試

40、驗時,則選擇用 50%、 60%、 70%濃度的乙醇來進行考察。乙醇用量的考察 采用滲漉法對白芷提取過程中乙醇的用量進行考察, 取白 芷粗粉 50g ,加 60%乙醇浸泡 24h 后,以 3ml·min -1的速度進行滲漉,分別在滲 漉量為 2倍、 4倍、 6倍、 8倍、 10倍、 12倍乙醇量的情況下,精密量取滲漉液2ml ,置 10ml 容量瓶中,加 60%乙醇稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,高效 液相色譜法測定其歐前胡素的含量。 以歐前胡素的提取結果為指標,來考察不同 溶劑的提取效果,結果見表 2-6。表 2-6 不同滲漉量提取結果溶劑量 (倍 2 4 6 8 10 12 提取

41、結果 (mg/g 1.2826 1.7990 1.9366 1.9534 1.9983 2.0043 由表上結果可以看出,白芷的提取效率隨乙醇用量的增加而提高,但當滲漉 量達 6倍量時,提取效率隨乙醇用量增加提高不明顯。因此在滲漉法提取白芷的 正交試驗設計中,則選擇以 4倍、 6倍、 8倍滲漉量進行考察。滲漉法提取正交試驗研究 根據(jù)白芷的理化性質和前面所作的單因素試驗 結果,并參考文獻內容 13,14,設定影響白芷提取效果的主要因素為:乙醇濃度、 浸泡時間、提取溶劑量,每個因素設計三個水平,見表 2-7。以歐前胡素的提取 結果為指標,選擇 L 9(34 正交表進行正交試驗。每次用同一時間粉粹的

42、白芷粗粉 50g ,按照正交表設計開始試驗,滲漉速度為 3ml·min -1。對提取結果進行統(tǒng)計分 析。正交試驗設計表及結果見表 2-8,方差分析見表 2-9。供試品溶液的制備:精密量取滲漉液 2ml 至 10ml 容量瓶中,加相應濃度的 乙醇溶液稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,濾液即白芷供試品溶液。表 2-7 正交試驗因素水平因素水平A 乙醇濃度 (% B 浸泡時間 (h C 溶劑用量 (倍數(shù) 1 50 12 42 60 24 63 70 48 82-8正交試驗設計及試驗結果A B C D試驗號1 2 3 4試驗結果 (mg/g1 1 1 1 1 1.54 1.532 1 2 2

43、2 1.91 1.893 1 3 3 3 2.01 2.014 2 1 2 3 1.89 1.895 2 2 3 1 1.96 1.956 2 3 1 2 1.43 1.437 3 1 3 2 1.89 1.888 3 2 1 3 1.69 1.689 3 3 2 1 1.94 1.94 10.89 10.62 9.30 10.86 10.55 11.08 11.46 10.43 11.02 10.76 11.70 11.17( 2+ 2+ 23×K58.5558 58.5547 59.1186 58.5822l 0.0196 0.0185 0.5824 0.0460表 2-9正交試

44、驗結果分析來源 l v MS FA 0.0196 2 0.0098 2.3333B 0.0185 2 0.0093 2.2024C 0.5824 2 0.2910 69.2857D(誤差 0.0460 11 0.0042查方差分析表,得 F 0.01(2,11=7.21, F 0.05(2,11=3.98因素 A 與因素 B 的 3個 水平間沒有顯著性差異,因素 C 有顯著性差異,其影響因素大小為 C > A >B, 由直觀分析可以看出最佳提取工藝為 A 3B 2C 3,即采用 70%乙醇浸泡 24h ,滲漉 8倍量。驗證試驗 稱取白芷粗粉 3份,各 50g ,分別采用 70%乙醇

45、浸泡 24h ,滲漉8倍量,滲漉速度為 3ml·min -1的方法進行提取,測定歐前胡素的含量 , 結果見 表 2-10。表 2-10驗證試驗結果試驗編號 1 2 3提取結果 (mg/g 2.12 2.06 2.11結果表明,驗證試驗結果與正交試驗結果一致,表明白芷滲漉法提取工藝穩(wěn) 定。干浸膏收率考察 精密量取白芷滲漉液兩份,各 50ml ,分別至干燥至恒重 的蒸發(fā)皿中,水浴加熱,揮去乙醇溶劑,在 105 條件下,干燥至恒重,計算該 提取工藝條件下白芷的干浸膏平均收率為 22.92%。回流提取法藥材粒度的選擇 分別稱取不同粒度的白芷粉末各 50g ,精密稱定,用 12倍量 80%乙醇

46、加熱回流提取 3次,每次 2小時,合并提取液。精密量取提取液 2ml 至 10ml 容量瓶中,加相應濃度的提取溶劑稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過 濾, 高效液相色譜法測定歐前胡素的含量,考察不同藥材粒度的提取效果, 結果 見表 2-11。表 2-11 藥材粒度考察結果粉碎度 粗粉 中粉 細粉提取結果 (mg/g 1.80 1.95 1.99由考察結果可知,粗粉的提取效率稍低,中粉與細粉提取效率較高,且差別 不大,因此選擇中粉即可?；亓鞣ㄌ崛≌辉囼炑芯?參考以上試驗結果及所查閱文獻 15,選擇影響 白芷提取效果的主要因素有:乙醇濃度、提取溶劑量、回流時間、提取次數(shù),每 個因素設計 3個水平,見表

47、 2-12。以歐前胡素的提取效率為指標,選擇 L 9(34 正交表進行正交試驗。每次用同一時間粉粹的白芷粉末 50g ,按照正交表設計開 始試驗。 對提取結果進行統(tǒng)計分析, 正交試驗表設計及結果見表 2-13,方差分析 見表 2-14。樣品供試品溶液的制備:精密量取合并的提取液 2ml 至 10ml 容量瓶中,加 相應濃度的提取溶劑稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜過濾,濾液即白芷的供試品溶 液。表 2-12 正交試驗因素水平因素水平A 乙醇濃度 (% B 溶劑量 (倍 C 回流時間 (h D 提取次數(shù)1 70 8 1 12 80 10 2 23 90 12 3 3表 2-13正交試驗設計及試驗結果A

48、 B C D試驗號1 2 3 4試驗結果 (mg/g1 1 1 1 1 1.81 1.802 1 2 2 2 1.99 2.043 1 3 3 3 2.07 2.014 2 1 2 3 2.18 2.225 2 2 3 1 1.90 1.906 2 3 1 2 2.10 2.107 3 1 3 2 1.83 1.958 3 2 1 3 1.97 1.969 3 3 2 1 1.77 1.76 11.73 11.79 11.74 10.94 12.39 11.76 11.95 12.00 11.24 11.80 11.67 12.41( 2+ 2+ 23×K69.5551 69.445

49、3 69.4524 69.6374l 0.1099 0.0002 0.0073 0.1922表 2-14正交試驗結果分析來源 l v MS FA 0.1099 2 0.0550 50.0000B 0.0002 2 0.0001 0.0909C 0.0073 2 0.0036 3.2727D 0.1922 2 0.0961 87.3636 誤差 0.0100 9 0.0011查方差分析表,得 F 0.01(2,9=8.02, F 0.05(2,9=4.26因素 B 與因素 C 沒有顯著 性差異,因素 A 與因素 D 有顯著性差異,其影響因素大小為 D > A >C>B,由直觀

50、分析可以看出最佳提取工藝為 A 2B 3C 2D 3, 即采用 12倍量 80%乙醇加熱回流提取 3次 , 每次 2h 。驗證試驗 稱取白芷中粉 3份,各 50g ,分別采用 12倍量 80%乙醇加熱回 流提取 3次 , 每次 2h ,進行提取,測定歐前胡素的含量 , 結果見表 2-15。表 2-15 驗證試驗結果試驗編號 1 2 3提取結果 (mg/g 2.18 2.15 2.16結果表明,驗證試驗結果與正交試驗結果一致,表明白芷回流法提取工藝穩(wěn) 定。浸膏收率考察 精密量取白芷提取液兩份,各 50ml ,分別至干燥至恒重的 蒸發(fā)皿中,水浴加熱,揮去乙醇溶劑,在 105 條件下,干燥至恒重,計

51、算該提 取工藝條件下白芷的干浸膏平均收率為 14.07%。2.2.3干燥工藝研究本試驗當歸主要提取其揮發(fā)油部位,超臨界流體萃取所得揮發(fā)油收率高,不 含水分,所以可以直接應用。干燥工藝主要針對白芷提取溶液進行研究。 分別量取 70%乙醇浸泡 24h ,滲漉 8倍量條件下所得的白芷滲漉液 3份,各 400ml ; 12倍量 80%乙醇加熱回流 3次,每次 2h 條件下所得白芷提取液 3份, 各 600ml ,減壓回收乙醇至小體積,轉移至蒸發(fā)皿中,水浴加熱至稠膏狀態(tài),分 別采用烘干法、減壓干燥法、冷凍干燥法進行干燥,比較三種干燥方法所得干浸膏的狀態(tài),并考察歐前胡素的轉移率,綜合比較進行判斷,結果見表

52、 2-16。 供試品溶液制備方法:三種干燥方法所得干浸膏,分別取少量,精密稱定, 至容量瓶中,加甲醇適量超聲溶解,放冷至室溫,加甲醇定容至刻度,搖勻,微 孔濾膜過濾,高效液相色譜法測定其歐前胡素的含量,計算轉移率。表 2-16三種干燥方法結果比較干燥方法 提取方法 歐前胡素轉移率 (% 干浸膏狀態(tài)滲漉法 65.26 烘干法回流法 66.31 干浸膏黏附在蒸發(fā)皿內壁,干浸膏堅硬, 難以取出,粉碎過程干浸膏變軟。滲漉法 92.18 減壓干燥法回流法 92.96 干浸膏成蓬松狀態(tài),易于取出,粉碎過程 順利。滲漉法 99.85 冷凍干燥法回流法 99.96 干浸膏成蓬松狀態(tài),從冷凍干燥機取出, 表面出

53、現(xiàn)吸濕現(xiàn)象,且干浸膏內混有有油 狀物質。粉碎過程中干浸膏吸濕軟化。由表可知烘干法歐前胡素轉移率低,所得浸膏堅硬,粉碎過程易軟化;冷凍 干燥法轉移率高,但所得干浸膏極易吸濕,且難以粉碎,所以烘干法與冷凍干燥 法不適于白芷提取液的干燥處理。減壓干燥法轉移率較高,干浸膏易于粉碎,適 于白芷提取液的干燥處理。2.3制劑成型工藝研究2.3.1劑型的選擇2.3.1.1提取物的特性與要求二靈軟膠囊由當歸、白芷兩味藥物組成。在制劑的提取工藝中,當歸主要提取其揮發(fā)油部分,所提取產物為脂溶性油 狀物質;白芷主要提取其脂溶性部分,主要成分為小分子香豆素類化合物。該制 劑所選用的劑型應適用于脂溶性物質,能夠有效保留脂

54、溶性成分,并宜于成型。 如制成液體制劑,如口服液、注射液等,由于制劑本身含有揮發(fā)油類成分,易造 成有效成分的揮發(fā),難以避免揮發(fā)油等部分成分的氧化、聚合等反應,造成制劑 性質不穩(wěn)定,影響藥物的質量;白芷中有效成分的加入也會增加制劑的難度,影響制劑的美觀,故不適宜制成液體制劑。如制成固體制劑,如片劑、顆粒劑等, 制劑難度降低,但由于揮發(fā)性成分較多,仍然存在制劑不穩(wěn)定的因素,影響產品 質量。 如制成半固體制劑, 如軟膠囊, 則可以有效得兼容兩種脂溶性物質的混合, 并可以有效防止當歸揮發(fā)油的揮發(fā),便于制劑的成型。2.3.1.2軟膠囊劑的特點軟膠囊劑可以將油狀藥物、藥物溶液、藥物混懸液、糊狀物甚至藥物粉

55、末定 量壓注并包封于膠囊內。軟膠囊可以根據(jù)不同種類藥物的需求、患者需要及臨床 需要制成各種形狀的密封膠囊,并可以通過軟膠囊囊皮顏色的改變, 使軟膠囊制 劑更加美觀。另外,軟膠囊制劑還具有生物利用度高、含量準確、均勻性好等優(yōu) 點。對于油狀藥物,軟膠囊制劑可以省去吸收固化等處理步驟,并有效避免油類 從輔料中滲出,其密閉性還有助于油類藥物的穩(wěn)定保存。故初步確定本制劑的劑 型為軟膠囊劑。2.3.2軟膠囊內容物制備工藝研究2.3.2.1藥料的準備本品藥料為白芷干浸膏粉與當歸揮發(fā)油。當歸揮發(fā)油為油狀液體,與植物油 混溶, 可直接應用; 白芷浸膏粉為油不溶性物質, 需要與基質混合制備成混懸液。 混懸液的穩(wěn)定

56、性與固形物粒度的大小有很大的關系,固形物的粒度越小,混懸液 的穩(wěn)定性越好。以混懸液為內容物的軟膠囊,為保證內容物的穩(wěn)定性,一般固形 物的粒度不小于 100目,參考文獻 16,本試驗選擇 120目白芷細粉。當歸揮發(fā)油的準備:取當歸,粉碎過 20目,在萃取釜壓力 20MPa ,萃取溫 度為 36 ,分離器壓力為 6.5 MPa,分離器溫度為 70 , CO 2流速為 25L/h,蒸發(fā) 器溫度 0.5 的條件下進行萃取,收集所得揮發(fā)油,備用。白芷干浸膏粉的制備:取白芷,粉碎成中粉,用 12倍量 80%乙醇加熱回流 提取 3次 , 每次 2h ,合并提取液,回收乙醇,減壓干燥,所得干浸膏粉碎過 120

57、目篩,備用。2.3.2.2分散基質的選擇軟膠囊除少數(shù)液體藥物外,大部分藥物需要用適宜的液體基質溶解或混合。 常用的基質有植物油、芳香烴酯類、有機酸、甘油以及表面活性劑等。大多數(shù)軟 膠囊選用油類物質或油與油的混合物作為基質, 水溶性強的藥物,較多的可以應 用 PEG400作為分散介質。本試驗所提取的當歸揮發(fā)油、白芷醇提物均為脂溶性物質,所以選擇的分散 介質應該為油脂性物質。軟膠囊的油脂性基質主要為植物油類物質, 其原料天然 廣泛,對身體無毒副作用,是較理想的分散基質。本試驗所研制的二靈軟膠囊主 要用于治療風秘,而麻油是應用較為廣泛的一類植物油,對身體無毒副作用,并 且本身具有一定的潤腸通便作用,因此決定采用麻油作為分散基質。2.3.2.3助懸劑的選擇(1助懸劑種類的選擇中藥軟膠囊的制備,單純依靠粉末與油進行混懸。常不能起到良好的混懸效 果,會出現(xiàn)內容物性狀不均勻、易分層等缺點,造成后續(xù)工藝壓丸困難,裝量不 準確,制劑性質不穩(wěn)定等。因此需要選擇適宜的助懸劑降低粒子的沉降速度,使 內容物長時間保持穩(wěn)定。助懸劑的種類很多,有低分子化合物、高分子化合物、還有部分表面活性劑 也可以作為助懸劑。本試驗選擇以麻油作為分散基質,助懸劑可以選用能夠增加 分散基質粘度的固體類物質, 本試驗分別以蜂蠟、 大豆磷脂、 單硬脂酸甘油酯為 助