中性粒細胞趨化因子基因表達增強在內(nèi)毒素大鼠急性肺損傷發(fā)病中的作用

1、    中性粒細胞趨化因子基因表達增強在內(nèi)毒素大鼠 急性肺損傷發(fā)病中的作用        觀察內(nèi)毒素致大鼠急性肺損傷發(fā)生過程中肺組織細胞因子誘生的中性粒細胞趨化因子（CINC）基因表達水平變化，并分析其在急性肺損傷發(fā)生中的作用。材料與方法模型復制及動物分組：健康雄性SD大鼠28只，體重200300 g。將其中16只大鼠隨機分為以下兩組：（1）正常對照組（8只）；（2） 內(nèi)毒素損傷2 h組（8只）。每組動物觀察2 h。另取12只大鼠隨機分為3組，每組3只，分別為內(nèi)毒素

2、損傷后4、6和8 h組，以動態(tài)觀察內(nèi)毒素的致傷作用。采用腹腔注射LPS（2 mg/kg體重）復制大鼠急性肺損傷模型。到時間后摘眼球放血，處死大鼠。收集血清行外周血白細胞計數(shù)。采用放免法檢測腫瘤壞死因子(TNF-)。開胸取2小塊肺組織，分別送光鏡和電鏡檢測，其余肺組織待檢CINC基因表達。肺組織CINC基因檢測采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應（RT-PCR）法。PCR反應條件：94 ，15 s ；58 ，30 s；72 ，18 s。執(zhí)行35個循環(huán)。最后延伸，72 ，10 min。電泳結(jié)束時對電泳帶進行掃描，用LEICA計算機像分析系統(tǒng)測擴增產(chǎn)物的灰度值，以-actin為內(nèi)參照，計算CINC mRNA的相對

3、含量。結(jié)果病理觀察：正常對照組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰。LPS注射后2 h，肺泡壁充血、增厚，肺間質(zhì)和肺泡腔內(nèi)均可見大量炎性細胞浸潤。電鏡觀察示肺泡型上皮細胞微絨毛減少甚至消失、線粒體空泡形成，并可見板層小體排空增多（13）。LPS損傷后大鼠外周血白細胞計數(shù)、血清TNF-和肺組織CINC mRNA等指標的變化，見表1。內(nèi)毒素損傷2 h組大鼠外周血白細胞計數(shù)明顯低于其它組(P<0.05)；4 h組外周血白細胞計數(shù)明顯低于對照組和8 h組(P<0.05)；內(nèi)毒素損傷2 h組、4 h組外周血PMN計數(shù)明顯低于對照組(P<0.05)，與6 h、8 h組比較(P<0.01)；內(nèi)毒素損傷2

4、 h組血清TNF-明顯高于其它各組(P<0.001)；內(nèi)毒素損傷2 h組肺組織CINC mRNA表達水平明顯高于其它各組(P<0.001)；4 h組肺組織CINC mRNA表達水平明顯高于對照組(P<0.05)。討論CINC在急性肺損傷發(fā)生過程中所起作用已引起有關(guān)學者的重視。Blackwell等1通過Northern斑點分析發(fā)現(xiàn)，在內(nèi)毒素大鼠急性肺損傷發(fā)生過程中，肺組織CINC基因表達增強。我們采用RT-PCR法檢測肺組織CINC mRNA表達也發(fā)現(xiàn)，內(nèi)毒素損傷后2 h大鼠肺組織CINC mRNA表達顯著強于對照組。CINC是大鼠中性粒細胞特異性趨化因子，體內(nèi)研究顯示2，給大

5、鼠皮下注射10-1010-7M的CINC可引起注射局部中性粒細胞浸潤，且呈劑量依賴性。本組研究還表明，腹腔注射內(nèi)毒素引起肺組織CNIC基因表達增強，伴隨外周血以PMN為主的白細胞計數(shù)下降和肺組織中以中性粒細胞為主的炎癥細胞浸潤增多。證實內(nèi)毒素可致肺組織CINC表達增強，后者通過趨化中性粒細胞而參與急性肺損傷發(fā)病過程。表1各組各項指標的變化（±s）時間只數(shù)外周血白細胞計數(shù)(×109/L）外周血PMN計數(shù)（×109/L）血清TNF-(ng/ml)肺組織CINC mRNA表達水平對照組85.5±1.93.1±1.20.13±0.040.03

6、±0.06內(nèi)毒素損傷組82.6±0.91.0±0.32.85±1.160.51±0.162 h組4 h組42.9±1.21.5±1.01.21±0.350.26±0.056 h組44.9±1.43.4±1.30.84±0.340.15±0.068 h組45.6±1.23.7±1.40.14±0.050.07±0.051正常大鼠肺組織結(jié)構(gòu)HE×202內(nèi)毒素損傷組肺泡壁和肺泡腔可見大量炎性 細胞浸潤HE×403

7、內(nèi)毒素損傷組型上皮細胞板層小體排空 增多醋酸鈾檸檬酸銅雙重染色×800作者單位：張齊武(116021 大連，解放軍第二一醫(yī)院)張進川(解放軍總醫(yī)院)參考文獻1.Blackwell TS,Holden EP,Blackwell TR,et al. Cytokine-induced neutrophil chemoattractant mediates neutrophilic alveolitis in rats :association with nuclear factor B activation .Am J Respir Cell Mol Biol，1994，11:464-4722.Watanabe K, Koizumi F, Kurashige Y,et al. Rat CINC, a member of the inter