藥物配體與生物大分子受體相互作用核磁共振的研究進展

1、評述與進展藥物配體與生物大分子受體相互作用核磁共振的研究進展紀竹生 1,2 劉買利 2 胡繼明 311(武漢大學(xué)分析測試中心 , 武漢 2(摘 要 , 。 如何 , 是制藥工業(yè)普遍關(guān)注的問題 。 核磁 。檢測小分子配體信號在作用 , 是核磁共振進行藥物篩選的主要方法之一 。 本文介紹了近年來這方面的研究 進展 。關(guān)鍵詞 核磁共振 , 藥物篩選 , 評述 2002212222收稿 ;2003205226接受本文系中國科學(xué)院武漢物理與數(shù)學(xué)研究所波譜與原子分子物理國家重點實驗室資助課題 (No. 9915081 引 言大多數(shù)藥物分子均通過與生物體內(nèi)的大分子 (如蛋白質(zhì) 結(jié)合起作用 。因而要得到一個具

2、有良好 生物利用度 (bio 2availability 、 代謝穩(wěn)定性和低毒性的藥物 , 首先必須尋找到和生物靶分子高度親和性 和選擇性結(jié)合的分子 (通常稱為先導(dǎo)化合物 ,lead compound 。 為了能快速地尋找到這種分子 , 近 20年 來人們研究了許多方法 。 這些方法主要涉及兩個過程 :即尋找先導(dǎo)化合物 , 然后對其進行優(yōu)化 1。前 一過程涉及到與靶分子相互作用且能抑制其體外活性的藥物分子的識別 , 后一過程則是根據(jù)體外活性 、 生物利用度 、 藥理和毒理性質(zhì)對潛在藥物進行優(yōu)化 。在以結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的藥物設(shè)計過程中 , 核磁共振 (NMR 方法被典型地用于先導(dǎo)化合物的優(yōu)化 , 該研

3、究包括蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì) 2配體絡(luò)合物的溶液結(jié)構(gòu)測 定和用同位素編輯 /濾波或核 Overhauser 效應(yīng) (nuclear Overhauser effect , NOE 技術(shù)迅速測定在蛋白 2配體絡(luò)合物中配體的結(jié)構(gòu) 2。最近 , 人們發(fā)現(xiàn) NMR 也可以用于藥物發(fā)現(xiàn)過程中尋找先導(dǎo)化合物 3。 在該應(yīng)用中 , 核磁共振被用于快速 、 高效地測定分子間的相互作用 , 在原子水平上獲得信息 , 指導(dǎo)以結(jié)構(gòu) 為基礎(chǔ)的藥物設(shè)計 。在配體與受體發(fā)生作用時 , 許多 NMR 參數(shù)將發(fā)生變化 , 這就是 NMR 能用于藥物篩選的主要原 因 。 NMR 可用多種方法測定藥物和蛋白的相互作用 , 如化學(xué)位移變化

4、 、 線寬變化 、 轉(zhuǎn)移 NOE 及脈沖梯 度場實驗 (pulsed 2field gradient , PF G 等 411。這些方法可以分為檢測蛋白信號和檢測配體信號 。前一類型的主要代表為 SAR by NMR (structure activity relationship by NMR 12, 該方法需要知道靶蛋白確切的三維結(jié)構(gòu) , 同時還必須有足夠量的 15N 標記的靶蛋白 , 因此具有一定的局限性 。后一類型則采用脈 沖梯度擴散測量 、 轉(zhuǎn)移 NOE 或 NMR 線加寬來檢測小分子配體信號 。與觀測蛋白信號相比 , 觀測配體 信號有很多優(yōu)點 , 同時觀測混合物中所有小分子信號有助

5、于識別與靶蛋白結(jié)合的特定成分而無須去卷 積 。 更重要的是 , 直接觀測配體 , 排除了對蛋白進行同位素標記的需要 , 因而允許目標蛋白有較大的分 子量 。 正是這兩點限制了 SAR by NMR 的應(yīng)用 。 本文將介紹這些技術(shù)的近期發(fā)展 。2 親和磁共振 (aff inity NMR親和磁共振是近年來出現(xiàn)的一種研究受體 2配體相互作用的方法 13, 它將與特殊受體有結(jié)合作用 第 32卷2004年 11月 分析化學(xué) (FENXI HUAXU E 研究報告 Chinese Journal of Analytical Chemistry 第 11期 14211425的活性配體從與非活性化合物組成的

6、混合物中識別出來 。 由于親和磁共振不需要對混合物進行物理分 離 , 也不需要去卷積步驟 , 因此它能提高藥物篩選的效率和準確性 。親和磁共振方法的基本前提是 :當(dāng) 配體與受體結(jié)合時 , 該低分子量配體的擴散速率發(fā)生明顯的變化 , 其結(jié)果是結(jié)合和非結(jié)合配體的擴散系 數(shù)明顯不同 , 從而允許采用 PF G 實驗 14,15從該配體和眾多與靶蛋白無結(jié)合作用的分子的混合物中對 該配體進行識別 。PF G 實驗常用于測定分子的擴散系數(shù) , 該實驗常用的兩個脈沖序列為縱向渦流延遲 (longitudinal eddy 2current delay , L ED 16和雙極性脈沖縱向渦流延遲 (bipol

7、ar pulse longitudinal eddy 2delay , BPP 2L ED 17。 通過增加梯度強度或持續(xù)時間 ,L ED 和 BPP 2L ED 序列可以擴展為多維形式 , 其中一個軸表 示的是擴散系數(shù) 。 這兩個序列也可以和傳統(tǒng)的多維 NMR 實驗相結(jié)合 , 。 簡而言之 , 結(jié)合 PF G 2spectroscopy , DOSY 18。 由于 DOSY NMR 信號 , 且非常方便和無破壞性 , 20及測定絡(luò)合常 數(shù) 21的常用工具 , 22, 23。 然而 , 如果兩個不同化合 , 則處理擴散系數(shù)的拉普拉斯變換將不能分辨來自 24。 由于用于高速篩選或來自組合化學(xué)合成

8、 的混合物常常由結(jié)構(gòu)相似的分子組成 , 所以上述問題是 DOSY 方法的一個很大缺陷 , 近年來 , 人們開發(fā) 出了許多減少化學(xué)位移重疊的 DOSY 實驗方法 。Wu 等 24提出了一系列結(jié)合 L ED 序列和極化轉(zhuǎn)移增強不靈敏核 (insensitive nuclei enhanced by polarization transfer , IN EPT 或無畸變的極化轉(zhuǎn)移增強 (distortionless enhancement by polarization trans 2fer , DEPT 的 DOSY 實驗 , 利用 13C 核比 1H 核寬得多的化學(xué)位移范圍 , 并對 CH 、

9、CH 2、 CH 3基團進行譜 編輯 , 獲得了更多的結(jié)構(gòu)信息 , 減少了峰重疊的可能性 。NOE 相關(guān)譜 (NOE spectroscopy , NOESY 和全相關(guān)譜 (total correlation spectroscopy , TOCSY 是解 析分子結(jié)構(gòu)的常用二維 NMR 譜 , 克服譜重疊的另一種方法就是將 L ED 或 BPP 2L ED 序列和這些傳統(tǒng) 的二維實驗相結(jié)合 , 如 G ozansky 等提出的 DOSY 2NOESY 25或 Lin 提出的 DOSY 2TOCSY 26, 這里 DOSY 2TOCSY 又稱為擴散編碼譜 (diffusion 2encoded

10、spectroscopy , DECODES 。除增加了梯度脈沖以 外 , 這些譜的脈沖序列與對應(yīng)的二維相關(guān)譜很相似 。 然而 , 由于脈沖梯度場的應(yīng)用 , 譜中每一個交叉峰 的強度依賴于產(chǎn)生該交叉峰的化合物的擴散速率 , 通過增加梯度脈沖強度而得到的一系列二維譜可估 計某一化合物的擴散系數(shù) , 若不考慮實驗誤差 , 從某一化合物產(chǎn)生的信號應(yīng)該獲得相同的擴散系數(shù) 。 DECODES 實驗的優(yōu)勢是把一個 J 2耦合體系的所有 1H 共振都關(guān)聯(lián)起來 , 從而允許探討重疊共振和完全 分辨共振的相關(guān)情況 , 這不僅僅簡化了分子識別 , 也為估計分子擴散系數(shù)提供了更多的機會 , 只要某化 合物能夠產(chǎn)生一

11、個可分辨的交叉峰 , 就有可能分析其分子結(jié)構(gòu)并估計擴散系數(shù) 。將擴散 NMR 用于藥物篩選即為 “ 親和磁共振” 27。 親和磁共振實驗條件 (即 :梯度強度 、 持續(xù)時間和延遲 的設(shè)定非常重要 , 所設(shè)條件在無受體存在時混合物各成分無信號出現(xiàn) , 該條件下加入受體 , 無結(jié) 合作用的化合物在親和磁共振實驗中將不出峰 。 由于與受體結(jié)合的配體擴散速率明顯降低 , 因而它們 的信號將出現(xiàn)在親和磁共振譜圖上 。 第一個親和磁共振的研究實例是關(guān)于氫化奎寧 292菲基醚 (hydroquinine 292phenanthryl ether 受體與 8個可能配體混合物的相互作用 28。 在正常氫譜中 ,

12、9種化合物的信號都存在 , 當(dāng)配體與受體結(jié)合時 , 其運動明顯變慢 。 在親和磁共振實驗中采用擴散濾波的方法濾除快擴散成分 , 只有兩種慢運動的與受 體結(jié)合的配體和受體本身出現(xiàn)在譜圖上 , 其它所有配體的信號均消失 。在和親和磁共振相同的條件下 進行 DECODES 實驗 , 辨別出這兩種化合物是 DL 2異檸檬酸內(nèi)酯 (DL 2isocitric lactone 和 (S 2(+ 2O 2乙 酰基苯乙醇酸 (S 2(+ 2O 2acetylimandelic acid 。當(dāng)混合物中有多個配體能與受體結(jié)合時 , 通過 DECODES 實驗或調(diào)節(jié)受體 2配體相對濃度以匹配不 同配體結(jié)合能力的方法

13、 , 這些配體也可以一一得到識別 。 Lin 等 27報道了一個調(diào)節(jié)親和磁共振實驗條 件以匹配配體結(jié)合能力的實例 , 將氫化奎寧 292菲基醚加入 4種有機酸的混合物 , 根據(jù)其親和能力 , 每一 3351第 11期 紀竹生等 :藥物配體與生物大分子受體相互作用核磁共振的研究進展 種有機酸依次出現(xiàn)在親和磁共振譜圖上 。為了將親和磁共振應(yīng)用到更具有生理意義的體系中 ,Lin 等 29嘗試了對 DNA 2藥物相互作用的研究 。采用 DECODES 方法 , 在無結(jié)合作用的化合物腺嘌呤 (adenine 、 腺苷 (adenosine 和維生素 B1(thiamine 存在的情況下 , 他們識別出化

14、合物 Hoechst 33342與 Drew 2Dickerson dodecamer d (CGCG AA TTCGCG 2的相互作用 。 DECODES 方法研究 DNA 片斷的優(yōu)點 是 DNA 譜在芳香區(qū)域沒有交叉峰 , 這就大大方便了有芳環(huán)的配體信號的識別和解析 。他們還研究了 糖肽萬古霉素 (glycopeptide vancomycin 與 10種低聚肽混合物的相互作用 30。親和磁共振研究表明 , 兩種含 D 2殘基的低聚肽 DDFA 和 DDFS 與萬古霉素有明顯的結(jié)合作用 。擴散編輯譜中始終存在受體信號 , 這可能是親和磁共振的一個問題 。配體信號可能與受體信號重 疊 , 特

15、別是當(dāng)受體為一分子量很大的蛋白質(zhì)的時候 。對于小分子受體 DECODES具 , 但該方法很難適用于蛋白受體 。 , 同位素濾波 親和磁共振得到了發(fā)展 31。 該實驗以 13C , 序列外還使用 13C 濾波步 驟 。Hajduk 等 32, 該方法依賴于在低梯度和高梯度強度 , 差譜中僅僅顯示結(jié)合配體信號 。 同位素濾波 PF G 實 20kDa 的基質(zhì)酶催化域 (stromelysin catalytic domain 的研究 。 從以上的討論中可知 , 根據(jù)擴散系數(shù)的相對大小 , 可以對分子進行譜編輯 , 使結(jié)合配體從它與非結(jié) 合分子的混合物中識別出來 。 但是 , 研究表明 , 化學(xué)交換

16、對擴散 NMR 實驗中觀察到的信號強度有非常 大的影響 , 弱結(jié)合配體” 結(jié)合態(tài)” 和” 游離態(tài)” 的化學(xué)交換能夠引起嚴重的信號扭曲 , 從而造成靈敏度損失 和解析錯誤 。 由于能夠識別弱結(jié)合配體是親和磁共振的一大優(yōu)勢 , 因此這一影響無疑極大地限制了親 和磁共振的應(yīng)用 。 例如 , 使用 L ED 脈沖序列 , 在含有萬古霉素和 DDFA 的樣品中可觀察到 DDFA 信號 的強度調(diào)制 33。 而使用 BPP 2L ED 脈沖序列 , 得到的則是沒有這種余弦調(diào)制的信號 , 從而解決了這種由 于交換而產(chǎn)生的問題 。 因此 , 在擴散實驗中 , 雙極性 L ED 脈沖序列是一種更好的選擇 , 由此

17、序列產(chǎn)生的 譜圖沒有化學(xué)交換調(diào)制或其他不良影響 。3 NOE 抽運 (NOE pumping除了交換調(diào)制外 , 親和磁共振實驗還存在其它問題 。 由于結(jié)合配體通常在游離態(tài)和結(jié)合態(tài)之間進 行交換 , 擴散系數(shù)的觀測值 (D obs 是游離態(tài) (D free 和結(jié)合態(tài) (D bound 擴散系數(shù)的權(quán)重平均值 :D obs =x free D free +x bound D bound式中 x free 和 x bound 分別是游離態(tài)和結(jié)合態(tài)配體的摩爾分數(shù) , x free +x bound =1。當(dāng)小配體與大分子結(jié)合 時 , D free 可能比 D bound 大 1到 2個數(shù)量級 。 顯然

18、, 游離配體對于權(quán)重平均的貢獻將比結(jié)合配體要大得多 , 擴散系數(shù)的觀測值將更接近于 D free , 也就是說化學(xué)交換模糊了結(jié)合配體和非結(jié)合配體之間的界限 , 其 結(jié)果是 , 結(jié)合配體和非結(jié)合配體擴散系數(shù)差別太小 , 以至難以區(qū)別 。親和磁共振的另一個問題來自譜線的加寬 , 通過改變配體和受體的相對濃度 (即 :x free 和 x bound 使 結(jié)合配體擴散系數(shù)的觀測值接近 D bound 是完全可能的 。在此情況下 , 結(jié)合配體和非結(jié)合配體在擴散速 率上的差別也足夠大 , 但此時親和磁共振譜上出現(xiàn)的主要是結(jié)合態(tài)的配體信號 。當(dāng)小分子與大分子結(jié) 合時 , 結(jié)合態(tài)小分子的譜線常常太寬而無法直

19、接觀測到 。 Shapiro 等 34研究了人血清白蛋白 (human serum albumin , HSA 、 水楊酸 (salicylic acid 、 葡萄糖 (glucose 及維生素 C (ascorbic acid 混合物的親和 磁共振譜 , 其中 HSA 是受體 , 水楊酸是結(jié)合配體 , 葡萄糖和維生素 C 為非結(jié)合配體 。 3種配體的表觀擴 散系數(shù)差別不大 , 雖然水楊酸與 HSA 結(jié)合后其擴散系數(shù)變小 , 但由于化學(xué)交換的平均作用變化并不明 顯 , 在親和磁共振實驗中應(yīng)用強梯度場壓制非結(jié)合配體信號的同時 , 結(jié)合配體的信號也完全消失 。 結(jié)合 和非結(jié)合化合物的主要差別是結(jié)合

20、配體與受體緊密接觸 , 這種空間距離上的接近無疑可以為分離提供 條件 ,NOE 能夠提供自旋核跨空間相互作用的信息 , 這是其它技術(shù)很難做到的 。因此 ,NOE 是一種非 常重要的 NMR 方法 , 已成為研究分子結(jié)構(gòu)的一種不可或缺的工具 。為了區(qū)別結(jié)合配體和非結(jié)合配體 ,Shapiro 等 34提出了 NOE 抽運方法 。首先使用擴散濾波以得到4351 分 析 化 學(xué) 第 32卷一種僅僅蛋白信號能夠被檢測到的狀態(tài) , 然后 , 應(yīng)用 NOE 實驗使信號從蛋白重新分配到結(jié)合配體 。抽運機理可以直觀地用以下過程進行描述 :當(dāng) NOE 實驗開始時 , 所有的配體信號都被破壞了 , 而 蛋白信號得以

21、保留 。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與配體發(fā)生相互作用時 , 如果他們作用的時間足夠長且空間距離足夠近 , 則在混合期 t m 發(fā)生磁化轉(zhuǎn)移 。 這一分子間 NOE 的后果是 , 觀測磁化由蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移給了結(jié)合配體 , 且 蛋白信號極大地被衰減了 , 因此 , 只有能夠與蛋白結(jié)合的配體能夠被檢測到 。 當(dāng)配體從蛋白中離解出來 時 , 轉(zhuǎn)移過來的磁化由于游離態(tài)配體的弛豫時間較長而得以保持 。 即使結(jié)合配體由于譜線太寬而無法 直接觀測 , 結(jié)合配體信號 (游離態(tài)和結(jié)合態(tài)的平均 仍然能夠被檢測到 。HSA 、 水楊酸、 葡萄糖和維生素 C 混合物的擴散濾波 NOE 抽運實驗表明 , 當(dāng)混合時間 t m 很小時 , 一維

22、 NMR 譜中僅含蛋白信號。 但隨著 t m 的增加 , , 同時伴隨蛋 白信號的減小 , 顯然 ,HSA 然而 素 C 的信號始終沒有出現(xiàn)。 因此 , 使用 NOE 抽運實驗 , NOE NMR 篩選方法相比 , 該 方法具有以下優(yōu)勢 :, 而用于傳統(tǒng) NMR , 將參數(shù)變 , 如溫度或 pH 等做圖 , 結(jié)果常常不同。 由于檢測的是配體信號 , 因此該 方法適用于化學(xué)位移難以分辨且未進行同位素標記的大蛋白質(zhì)。 事實上 , 大蛋白質(zhì)受體對該方法的使用 有利 , 因為在慢運動限制以內(nèi)極化轉(zhuǎn)移速率直接正比于相關(guān)時間 (或分子大小 , 所以受體的分子量越大 , 該技術(shù)的靈敏度越高。 另外 , 寬的

23、大分子信號屏蔽結(jié)合配體信號的可能性也較小。 該方法還適用于研究 弱的結(jié)合配體如溶劑 , 而且 , 把這一 NOE 實驗向多維譜延伸可得到更詳細的結(jié)合中心信息。NOE 抽運實驗的缺陷在于 :為了檢測從受體抽運到結(jié)合配體的信號 , 首先必須得到一種所有配體 信號均被壓制僅僅能夠檢測到蛋白信號的狀態(tài) , 由于大分子通常具有很快的弛豫速率 (特別是 T 2弛 豫 , 因此在預(yù)備這種狀態(tài)的同時 , 大分子信號將受到很大程度的損失 , 從而影響實驗的靈敏度 。 為了提 高實驗靈敏度和減少實驗時間 ,Shapiro 等 35又提出了反向 NOE 抽運 (reverse NOE pumping ,RNP 方

24、法 。 與前述 NOE 抽運實驗不同 ,RNP 技術(shù)用于檢測從結(jié)合配體轉(zhuǎn)移給受體的信號 。在 RNP 實驗中 , 首先采用弛豫濾波 (或同位素濾波 壓制受體信號 , 同時保持配體信號 , 然后通過 NOE 實驗 (混合時間 t m 使信號從配體轉(zhuǎn)移給受體 。 配體信號強度減小主要通過兩種途徑 , 其一為弛豫 (非結(jié)合配體 , 其二 為 NOE 抽運和弛豫 (結(jié)合配體 。 為了檢測由于 NOE 抽運而造成的信號損失 , 需要記錄一個由于弛豫 而造成信號損失的參考譜 , 該譜可以通過將相同的弛豫濾波放在 NOE 實驗之后而獲得 , 此參考譜只記 錄弛豫造成的信號衰減而檢測不到 NOE 抽運 。比較

25、上述兩個實驗所獲得的圖譜 , 就可以得到與受體 有結(jié)合作用的配體信息 。由于壓制受體信號同時保留小分子配體信號相對來說比較容易 , 因此 ,RNP 譜具有較高的靈敏度 和較短的實驗時間 。 同時 , 對蛋白和配體的濃度需求也大大降低 , 這就使研究體系更接近于生物環(huán)境 , 也使對溶解度較小的化合物的研究成為可能 。4 轉(zhuǎn)移 NOE(transferred NOE另一種基于分子內(nèi)轉(zhuǎn)移 NOE 的 NMR 篩選方法是轉(zhuǎn)移 NOE 36。 雖然 NOE 抽運和轉(zhuǎn)移 NOE 篩選技 術(shù)都與 NOE 有關(guān) , 但轉(zhuǎn)移 NOE 的分離基礎(chǔ)是轉(zhuǎn)動速率 , 而不是分子間的空間距離。 轉(zhuǎn)動速率很快的小分 子游離

26、配體通常顯示正的分子內(nèi) NOE , 然而 , 如果配體與大分子量的受體相結(jié)合 , 它與具有很慢速率的受 體一起轉(zhuǎn)動 , 從而顯示很強的負 NOE 。 當(dāng)游離態(tài)和結(jié)合態(tài)配體間存在化學(xué)交換 , 強的負 NOE 就會 “ 轉(zhuǎn)移” 給游離配體 , 從而很容易被檢測到。 因此 , 結(jié)合配體的分子內(nèi) NOE 信號將與小分子非結(jié)合配體的信號符 號相反。 二維轉(zhuǎn)移 NOE 能夠揭示受體加入后化合物分子內(nèi) NOE 信號的任何改變 , 因而提供了識別結(jié)合 配體和非結(jié)合配體的另一種方法 37。 與 NOE 抽運不同 , 轉(zhuǎn)移 NOE 篩選技術(shù)不需要配體和受體間的分子 間 NOE 信息 , 該技術(shù)對受體的需求量很小。

27、 然而 , 由于 NOE 抽運是一種一維實驗 , 所以它所花的時間較 少 , 同時 ,NOE 抽運能應(yīng)用于大的配體 , 而大配體即使在游離態(tài)也可能給出負的分子內(nèi) NOE 。 5351第 11期 紀竹生等 :藥物配體與生物大分子受體相互作用核磁共振的研究進展 5 藥物 2蛋白質(zhì)相互作用的動力學(xué)研究通過檢測小分子配體在不同蛋白濃度時 NMR 弛豫速率或擴散系數(shù)的變化 , 可以進行藥物 2蛋白相 互作用的動力學(xué)研究 。 Liu 等 3842以 HSA 作為模型蛋白 , 在這方面做出了大量有益的嘗試并取得了 明顯的進展 。作者應(yīng)用 Langmuir 吸附等溫方程結(jié)合 NMR 弛豫測量成功地推導(dǎo)出了藥物

28、 /HSA 絡(luò)合物的動力學(xué) 參數(shù) (結(jié)合點的數(shù)目 , 絡(luò)合常數(shù)等 43, 表明 Langmuir 吸附等溫方程能夠很好地解釋蛋白與配體間的相 互作用 ; 利用藥物分子與 HSA 結(jié)合前后 13C 2NMR 化學(xué)位移和線寬變化 , 從分子水平上研究了藥物的結(jié) 合部位 ; 采用 NMR 化學(xué)位移 、 HSA 分子間相互作 用的影響 44, 結(jié)果表明 , 有機溶劑能夠降低藥物對 HSA , 作用 。 這些都為研究藥物 2, 指導(dǎo)藥物設(shè)計 提供了強有力的手段 。6 結(jié) 論, 親和磁共振方法 、 NOE 抽運技術(shù) 、 轉(zhuǎn)移 NOE 及有關(guān)藥物 2蛋白 相互作用的動力學(xué)研究將極大地簡化藥物篩選過程 。 這

29、些技術(shù)的另一個優(yōu)勢是能夠檢測在高速篩選中 常常遺漏的低親和力配體 , 并將其作為高親和力配體的合成前體 。 NMR 方法的最大挑戰(zhàn)是它的靈敏 度 。 與其他技術(shù)相比 ,NMR 方法在篩選混合物中的應(yīng)用受到其相對不靈敏的限制 ?？紤]到溶解性 、 穩(wěn) 定性和樣品用量等因素 , 簡單地增加混合物濃度通常是不明智的 。為使 NMR 方法能應(yīng)用到更大和更 復(fù)雜混合物的篩選 , 有必要對 NMR 方法的硬件和軟件系統(tǒng)做更大的改善 , 微量線圈和流動探頭技術(shù)的 發(fā)展 , 將極大地提高 NMR 方法的靈敏度和篩選能力 。 混合物分析能力的提高還可以通過與其他技術(shù) , 如 HPLC 、 MS 等聯(lián)用而獲得 。

30、作為一種多用途非破壞性的分析工具 ,NMR 將不斷地得到完善 , 并為新 藥物的發(fā)現(xiàn)做出更大的貢獻 。R eferences1 Moore J M. Biopolymers , 1999, 51:2212432 Roberts G C K. Curr. Opin. Biotechnol , 1999, 10:42473 Moore J M. Curr. Opin. Biotechnol , 1999, 10:54584 Campbell I D , Dwek R A. Biological S pect roscopy , Menlo Park :Benjamin/Cummings , 198

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37、M , Shapiro M J . J . Com b. Chem . , 1999 , 1 : 6972 30 Bleicher K , Lin M , Shapiro M J , Wareing J R. J . O rg. Chem . , 1998 , 63 : 84868490 31 Gonnella N , Lin M , Shapiro M J , Wareing J R , Zhang X. J . M agn. Reson. , 1998 , 131 : 336338 32 Hajduk P J , Olejniczak E T , Fesik S W. J . A m .

38、Chem . S oc . , 1997 , 119 : 1225712261 33 Chen A , Johnson J r C S , Lin M , Shapiro M J . J . A m . Chem . S oc. , 1998 , 120 : 90949095 34 Chen A , Shapiro M J . J . A m . Chem . S oc. , 1998 , 120 : 1025810259 35 Chen A , Shapiro M J . J . A m . Chem . S oc. , 2000 , 122 : 414415 36 Meyer B , We

39、imar T , Peters T. Eu r. J . B iochem . , 1997 , 246 : 705709 37 Fejzo J , Lepre C A , Peng J W , Bemis G W , Ajay , Murcko M A , Moore J M. Chem . B iol . , 1999 , 6 : 755769 38 Conggang ( 李從剛 , Liu Maili ( 劉買利 . N at u ral Science Progress ( 自然科學(xué)進展 , 2001 , 11 ( 1 : 17 Li 39 Luo R S , Liu M L , Ma

40、o X2A. A ppl . S pect rosc. , 1999 , 53 : 776779 1 2 portant approach to st udy t he interaction between small ligand and biomolecule. Bot h ligand and receptor nals f rom ligand. The recent development s in t his field are reviewed. Keywords Nuclear magnetic resonance , drug screening , review ciently discover drug t hat can interact wit h target molecular and inhibit it s in vit ro activity has become an is2