分子遺傳學(xué)復(fù)習(xí)總結(jié)

1、學(xué)習(xí)必備歡迎下載第二章基因的結(jié)構(gòu)和功能一基因一酶學(xué)說：該學(xué)說具體體現(xiàn)了基因和酶之間的關(guān)系，表明每個(gè)基因控制單個(gè)酶的合成或激活其活性。轉(zhuǎn)化：通過裸露的外源 DNA 傳遞遺傳信息。轉(zhuǎn)染：是轉(zhuǎn)化的一種特殊形式。用于原核細(xì)胞時(shí)，其外源 DNA 特指離體的 phage DNA 來(lái)感染感受態(tài)的細(xì)菌，并在其中表達(dá)；用于真核細(xì)胞時(shí)對(duì)任何裸露DNA 的吸收都成為轉(zhuǎn)染。接合：通過細(xì)胞與細(xì)胞之間的直接接觸。遺傳信息單向傳遞到受體的過程。轉(zhuǎn)導(dǎo)：一個(gè)細(xì)胞的DNA 或 RNA 通過病毒載體的感染轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞中。自主發(fā)育：不受周圍細(xì)胞的影響，按照自身基因型發(fā)育的現(xiàn)象。非自主發(fā)育：受周圍細(xì)胞的影響，不按自身基因型發(fā)育的現(xiàn)

2、象。1902 英 Garrod.A 首先研究了四種遺傳病:黑酸尿病白化病胱氨酸尿病戊糖尿??； 1952 年發(fā)現(xiàn)糖原貯積癥（ Von Gierke 氏?。┎∪巳狈ζ咸烟?6-磷酸酶芽盤移植實(shí)驗(yàn)第二節(jié)人類酶缺陷的遺傳基礎(chǔ)一、半乳糖血癥二、白化病三、苯丙酮尿癥四 . 萊 -尼二氏癥第三節(jié)遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷一、遺傳咨詢（Genetic counseling ）：詢問先征者的完整病史，家族史；查閱McKusick,V.A: MendlianInheritance in Man 是否為遺傳病，遺傳類型，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)？通過產(chǎn)前診斷，決定是否終止妊娠。二、產(chǎn)前診斷（ prenatal diagnosis）：指征是

3、：（ 1）親體為攜帶者； （ 2）母親曾生育過先天性異常的嬰兒；（ 4）35-40 歲以上的高齡孕婦； （ 5）曾有多次流產(chǎn)，早產(chǎn)和死胎的孕婦； （6）親體曾多次接觸過放射線或在妊娠早期服過一些胎兒致畸藥物。采集標(biāo)本的方法：羊膜穿刺抽取羊水，收集胎兒脫落細(xì)胞 ;從宮頸粘液中獲取絨毛膜細(xì)胞;直接從子宮控中吸取絨毛膜細(xì)胞;超聲波可用于產(chǎn)前診斷神經(jīng)管缺陷，如無(wú)腦兒，脊椎裂和水腦兒。胎兒鏡（fetoscope）又稱羊膜鏡或?qū)m腔鏡。產(chǎn)前診斷的方法：細(xì)胞學(xué)，生物化學(xué)，分子生物學(xué)三、攜帶者的檢出：方法：(1) 染色體核型分析(2) 酶活性的檢測(cè)(3)分子生物的方法。實(shí)例：神經(jīng)節(jié)苷酯貯積病 GM2-I 型 T

4、ay-Sachs 癥，家族性黑蒙性癡呆，氨基已糖苷酶A ）缺乏癥四、分子?。?molecular diease）：分子病是指由于基因的突變引起了蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的改變而導(dǎo)致的疾病，如鐮形細(xì)胞貧血（sickle cell anenia ）。第四節(jié)基因的精細(xì)結(jié)構(gòu)和順反測(cè)驗(yàn)(應(yīng)為百度文庫(kù)的原因，此處刪除了)當(dāng)順式有功能，而反式?jīng)]有功能時(shí)，突變位點(diǎn)在同一順反子內(nèi)；當(dāng)順式有功能，而反式也有功能時(shí)，突變位點(diǎn)在不同順反子內(nèi)。第三章遺傳物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)第一節(jié)核酸是遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)必須具備哪些特點(diǎn)？：在體細(xì)胞中含量穩(wěn)定；在生殖細(xì)胞中含量減半；能攜帶遺傳信息；能精確地自我復(fù)制；能發(fā)生變異；（ DNA RNA 是

5、遺傳物質(zhì)的證明） 一、遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)： 1928 年 Frederick Griffith 轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)； 1944 年， Avery 在離體條件下完成轉(zhuǎn)化。1952 年，Hershey 和 Chase 噬菌體感染實(shí)驗(yàn)二、RNA 也是遺傳物質(zhì)： 1956 年 A.Gierer 和 G.Schraman發(fā)現(xiàn)煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus,TMV ），其遺傳物質(zhì)是RNA 。 1957 年美國(guó)的 HeinzFraenkel-Conrat 和 B.Singre 用重建實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這一結(jié)論。第二節(jié)DNA 和 RNA 的化學(xué)組成及雙螺旋模型一、 DNA 和 RNA 的化學(xué)組成二、 DNA

6、 雙螺旋模型的誕生： Watson & Crick建立雙螺旋模型主要是受到4 個(gè)方面的影響：（ 1）1938年 W.T.Astbury & Bell用 x 衍射技術(shù)研究 DNA。1947 年拍攝了第一張DNA 的衍射照片， 并推斷 DNA學(xué)習(xí)必備歡迎下載分子的結(jié)構(gòu)是： 柱狀； 多核苷酸是一疊扁平的核苷酸； 核酸殘基取向和分子長(zhǎng)軸垂直 ,間距為 3.4。（ 2）1951 年 Pauling 和 Corey 運(yùn)用化學(xué)的定律來(lái)推理，而不做具體的實(shí)驗(yàn)， 建立了蛋白質(zhì)的 -螺旋模型；（ 3）晶體學(xué)者 美 J. Donoh & Chargaff的指點(diǎn)。（4） R.Franklin

7、& Wilkins在 1952年底拍得了DNA 結(jié)晶 X 衍射照片。三 、雙螺旋模型(double helix model)雙螺旋模型有以下特點(diǎn)： (1) DNA分子由兩條反向平行的多核苷酸鏈組成，形成右手雙螺旋。(2) 雙螺旋的直徑為 2nm；螺距為 3.4nm，上下相鄰堿基的垂直距離為0.34nm，交角為 36°。 (3)兩條鏈反向平行，即兩條鏈的方向相反；(4) 糖一磷酸鍵是在雙螺旋的外側(cè)，堿基對(duì)與軸線垂直。(5) 糖與附著在糖上的堿基近于垂直。(6)堿基配對(duì)時(shí)，必須一個(gè)是嘌呤，另一個(gè)是嘧啶。(7) DNA 雙螺旋有大溝（ major or wide groove）和小

8、溝（ minor or narrow groove ）的存在。第三節(jié)DNA 的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)一、 DNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定因素 (1)堿基對(duì)之間的氫鍵。 (2) 堿基的堆集力。它包括： 疏水作用；范德華力； 磷酸基的負(fù)電荷斥力模型中的堿基配對(duì)有何重要性？ A-T,G-C 配對(duì)可形成很好的線性氫鍵； A-T 對(duì)和 G-C 對(duì)的幾何形狀一樣，使雙鏈距離相近，使雙螺旋保持均一；堿基對(duì)處在同一平面內(nèi)。不論核苷酸的順序如何，都不影響雙螺旋的結(jié)構(gòu)；為 DNA 半保留復(fù)制奠定了基礎(chǔ)。二、 雙螺旋結(jié)構(gòu)的構(gòu)象變異DNA 的構(gòu)象現(xiàn)已知有A ，B ， C， D， E，T ， Z 7 種。生理?xiàng)l件下：B 三種主要構(gòu)象：B引

9、起 DNA 雙鏈構(gòu)象改變有以下因素：（ 1）核苷酸順序；（ 2）堿基組成；（ 3）鹽的種類；（ 4）相對(duì)濕度。立體異構(gòu)：分子中原子互相連接的方式和次序相同（構(gòu)造相同）,但在空間的排列方式不同而出現(xiàn)的異構(gòu)現(xiàn)象。平面偏振光和旋光性光是一種電磁波，它的電場(chǎng)或磁場(chǎng)振動(dòng)的方向與光前進(jìn)的方向垂直。在普通光線里，光波可以在垂直于前進(jìn)方向平面上的任何方向振動(dòng)。(一 )左旋 DNAZ-DNA 的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) （ 1）糖磷骨架呈 “之 ”字形（ Zigzag）走向。（2）左旋。(3) G 的糖苷鍵呈順式(Syn) ，使 G 殘基位于分子表面。 （ 4）分子外形呈波形。 (5) 大溝消失，小溝窄而深。(6) 每個(gè)螺旋有

10、 12bp。Z DNA 存在的條件 (1) 高鹽： NaCl>2Mol/L, MgCl2>0.7 Mol/L(2) Pu,Py相間排列：（ 3）在活細(xì)胞中如果 m5C,則無(wú)需嘌呤 -嘧啶相間排列， 在生理鹽水的濃度下可產(chǎn)生Z 型。(4) 在體內(nèi)多胺化合物，如精胺和亞胺及亞精胺和陽(yáng)離子一樣，可和磷酸基因結(jié)合，使B-DNA轉(zhuǎn)變成 Z-DNA 。(5) 某些蛋白質(zhì)如 Z-DNA 結(jié)合蛋白帶有正電荷， 可使 DNA 周圍形成局部的高鹽濃度和微環(huán)境。(6) 負(fù)超螺旋的存在生物學(xué)意義： (1) 可能提供某些調(diào)節(jié)蛋白的識(shí)別。嚙齒類動(dòng)物病毒的復(fù)制起始部位有d（ GC）有交替順序的存在； (2) 在

11、 SV40 的增強(qiáng)子中有三段8bp 的 Z-DNA 存在。 (3)原生動(dòng)物纖毛蟲，它有大、小兩個(gè)核，大核有轉(zhuǎn)錄活性，小核和繁殖有關(guān)。Z-DNA抗體以螢光標(biāo)記后，顯示僅和大核DNA 結(jié)合，而不和小核的 DNA 結(jié)合，說明大核 DNA 有 Z-DNA 的存在，可能和轉(zhuǎn)錄有關(guān)。(二 )右旋 DNA ：目前已知 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)可分為 A 、B 、C、 D 及 Z 型等數(shù)種，除Z 型為左手雙螺旋外，其余均為右手雙螺旋。三、 DNA 的三級(jí)結(jié)構(gòu)所謂 DNA 的三級(jí)結(jié)構(gòu)， 是指在一二結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上的多聚核苷酸鏈上的卷曲。在一定意義上， 是指雙螺旋基礎(chǔ)上的卷曲三級(jí)結(jié)構(gòu)包括鏈的 扭結(jié)和 超螺旋或者是單鏈形成 的

12、環(huán)或是環(huán)狀DNA中的連環(huán)體超螺旋：（ Supercoied） 松馳型 DNA （ relax form ）。超螺旋（ Supercoied） DNA ，負(fù)超螺旋正超螺旋檢測(cè) DNA 三級(jí)結(jié)構(gòu)的方法：密度梯度離心凝膠電泳電鏡觀察學(xué)習(xí)必備歡迎下載原核生物 DNA 的三級(jí)結(jié)構(gòu)：絕大多數(shù)原核生物的DNA 都是共價(jià)封閉的環(huán)狀雙螺旋。如果再進(jìn)一步盤繞則形成麻花狀的超螺旋三級(jí)結(jié)構(gòu)。超螺旋的定量描敘： White 方程： L=T+WL（ Linking nnmber ）：鏈環(huán)數(shù)或稱拓?fù)洵h(huán)繞數(shù)，指cccDNA中一條鏈繞另一條鏈的總次數(shù)。其特點(diǎn)是(1) L 是整數(shù)； (2) 在 cccDNA 中任何拓?fù)鋵W(xué)狀態(tài)中其

13、值保持不變；(3)右手螺旋對(duì) L 取正值。W （ Writhing number）：扭曲數(shù)，即超數(shù)旋數(shù)。其特點(diǎn)是：(1)可以是非整數(shù)； (2)是變量； (3)右手螺旋時(shí)， W 取負(fù)值。T（ Twisting number ）：纏繞數(shù)，即雙螺旋的圈數(shù)。其特點(diǎn)是：(1)可以是非整數(shù)； (2) 是變量； (3)右手螺旋時(shí) T 為正值。超螺旋的量度可以用超螺旋密度 來(lái)表示： =（ L-T ） /T 在天然 DNA 中， 約為 -0.05第四節(jié)DNA 的變性與復(fù)性變性或解鏈：對(duì)雙鏈進(jìn)行緩慢地加溫，使氫鍵斷裂，雙鏈解開，產(chǎn)生單鏈的分子的過程成核作用： 復(fù)性過程中互補(bǔ)的兩條鏈?zhǔn)紫仁侵行牟糠只パa(bǔ)堿基對(duì)之間形成

14、氫鍵，接著像拉拉鏈一樣，其余部分隨之形成雙鏈。又稱為拉拉鏈作用。復(fù)性或退火：核酸分子在變性后分開的互補(bǔ)鏈緩慢冷卻，重新形成互補(bǔ)雙鏈的過程。DNA 的復(fù)性對(duì)片段有兩個(gè)要求： (1) 互補(bǔ)順序的碰撞和排列； (2) 堿基的正確配對(duì)和氫鍵的形成。一、 DNA 變性物理性質(zhì)發(fā)生變化： （ 1）流體力學(xué)的性質(zhì)發(fā)生改變：粘度下降，而沉降速度增加；（ 2）提高了對(duì)紫外線的吸收能力， 此稱為增色效應(yīng) （ hyperchromic effect ）。雙鏈 DNA 的 A260=1.00（濃度為 50g/ml 時(shí)，對(duì)波長(zhǎng) 260nm 紫外線的吸收能力） ；單鏈 DNA 的 A260=1.37 ；游離堿基或核苷酸的

15、 A260=1.60 。解鏈溫度（ melting temperature, Tm ）或熔點(diǎn)， Tm 是 A260 的升高達(dá)到極大值一半時(shí)的溫度。即是變性溫度范圍的中點(diǎn)。影響變性的因素：高溫、酸、堿、尿素、甲酰胺影響值的因素：外部條件 :如溫度和正離子的濃度:濃度低于0.4mol/L ，單價(jià)陽(yáng)離子增高10 倍 ,Tm增加16.6°內(nèi)部條件：GC 含量及分子類型當(dāng)GC 的含量上升1%，則Tm 上升0.4馬默多蒂（ Marmur-Doty ）關(guān)系式： Tm = 69.3+0.41(G +C)% ，或 GC%= （Tm-69.3 ）× 2.44二、 DNA 復(fù)性復(fù)性動(dòng)力學(xué)公式根據(jù)

16、復(fù)性動(dòng)力學(xué)公式我們可以知到些什么？(1) 單鏈濃度隨著時(shí)間的增大而減??；(2）反應(yīng)速率取決于初始的單鏈濃度 Co；(3) 以反應(yīng)濃度和COt1/2 為座標(biāo)可繪復(fù)性曲線； (4)通過 C0t1/2 值可測(cè)原核生物基因組的大??；已知大腸桿菌的基因組為4.2x106bp, COt1/2 = 9M.Sec COt1/2（大腸桿菌基因組 DNA ）/9M.sec = 任何基因組大小 /4.2X106bp(5) 原核生物基因組大小不同，復(fù)性曲線不同；(6) 可用以區(qū)分真核生物和原核生物基因組。單一順序和重復(fù)順序復(fù)性動(dòng)力學(xué)曲線的區(qū)別真核生物 DNA有重復(fù)順序， 原核物多為單一順序。 (1) 單一順序的復(fù)性曲

17、線常只有一個(gè)拐點(diǎn)，而重復(fù)順序常有多個(gè)拐點(diǎn)。 (2) COt 比值變化范圍不同： 原核生物的 COt 比值小于 100,真核生物的 COt 比值大于 100。影響復(fù)性反應(yīng)的因素 (1) DNA 片段的大?。?(2) DNA 的濃度； (3) DNA 復(fù)雜性 ;(4) 溫度。最佳復(fù)性溫度一般比 Tm 低 25 C。 (5) 鹽的濃度：復(fù)性時(shí)要求鹽的濃度達(dá)到足夠高，為什么？復(fù)性反應(yīng)中如何知道單鏈已結(jié)合成雙鏈？可以通過哪些法來(lái)檢測(cè)？(1) 減色效應(yīng)：測(cè)定光密度，即 OD 值， DNA 從單鏈變成雙鏈， OD260 減少 30%(2) 羥基磷灰石柱層析羥基磷灰石對(duì)雙鏈 DNA 吸附較牢，不易吸附單鏈。

18、（）羥基磷灰石柱層析第五節(jié)核酸分子雜交技術(shù)分子雜交：具有互補(bǔ)序列的兩條核酸單鏈在一定條件下，按堿基配對(duì)原則形成雙鏈的過程。雜交的共同特點(diǎn) (1) 都是應(yīng)用復(fù)性動(dòng)力學(xué)原理； (2) 都必須有探針（ probe）的存在。探針就是用同位素學(xué)習(xí)必備歡迎下載或非同位素如熒光染料，生物素等標(biāo)記的短片段特異DNA 或 RNA 順序。一、核酸分子雜交的基本原理DNA 變性 方法 熱變性： 90-100 酸堿變性：常采用堿變性化學(xué)試劑變性：尿素、甲酰胺、甲醛等 特點(diǎn)：粘度增加、密度增加、增色效應(yīng)、溶解溫度(melting temperature,Tm)DNA 復(fù)性或雜交 (hybridization)DNA/D

19、NA,DNA/RNA,RNA/RNA等影響雜交的因素：核酸分子的濃度和長(zhǎng)度濃度大，復(fù)性快；分子量大，復(fù)性慢溫度 離子強(qiáng)度雜交液中的甲酰胺核酸分子的復(fù)雜性非特異性雜交反應(yīng)預(yù)雜交：鮭魚精子DNA 封閉非特異性雜交位點(diǎn)分子雜交的基本方法： Southern印跡法Northern 印跡法 斑點(diǎn)印跡雜交 原位雜交 Western 印跡法液相雜交Southern 雜交： DNA/DNA 雜交，即將 DNA 電泳、轉(zhuǎn)印到固相支持物上，用探針進(jìn)行檢測(cè)的方法。Southern 雜交的主要步驟：待測(cè)DNA樣品的制備、酶切待測(cè) DNA 樣品的電泳分離：瓊脂糖凝膠電泳凝膠中 DNA 的變性： 堿變性Southern

20、轉(zhuǎn)膜： 硝酸纖維素 (NC) 膜、尼龍膜毛細(xì)管虹吸印跡法、電轉(zhuǎn)印法、真空轉(zhuǎn)移法探針的制備Southern 雜交雜交結(jié)果的檢測(cè)：基因組DNA 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切后 DNA 片段瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)Northern印跡雜交：檢測(cè)RNA （主要是mRNA ）的方法與 Southern 雜交的不同：靶核酸：RNA。RNA 電泳。轉(zhuǎn)膜：不需變性斑點(diǎn)印跡雜交：將 RNA 或 DNA 變性后直接點(diǎn)樣于 NC 膜或尼龍膜上。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品原位雜交：將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交，稱為原位雜交。在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究。不需從組織或細(xì)胞中提取核酸，對(duì)含量極低的靶

21、序列靈敏度高。準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。核酸原位雜交的基本步驟：玻片原位雜交：細(xì)胞或組織的固定載玻片；組織細(xì)胞雜交前的預(yù)處理；去垢劑或蛋白酶除去核酸表面蛋白；膜上分子雜交；探針的選擇和標(biāo)記；雜交結(jié)果檢測(cè)。探針的標(biāo)記 探針的種類： cDNA探針、基因組 DNA 探針、寡核苷酸探針、RNA 探針。標(biāo)記物：核素標(biāo)記物（同位素標(biāo)記） ：32P、35S、3H 等；非核素標(biāo)記物（非同位素標(biāo)記）：生物素、地高辛、熒光素等Western 雜交印跡法 (Western bloting) 檢測(cè)蛋白質(zhì)，即將電泳分離的非標(biāo)記蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體上，用特異的抗血清對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定及定量的方法。主要步驟：蛋白

22、質(zhì)樣品的制備；SDS-聚丙烯酰胺凝膠 (PAGE) 電泳；蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移：NC 膜；靶蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)：靶蛋白于第一抗體（一抗）反應(yīng)；與標(biāo)記的第二抗體（酶標(biāo)二抗）反應(yīng)；顯色反應(yīng)：酶促反應(yīng)第四章基因組和染色體基因組：是指一個(gè)單倍體的染色體數(shù)目（遺傳物質(zhì)的總量）。原核基因組含有大量單一順序，僅有少量的重復(fù)順序。 真核基因組含少量單一順序和大量重復(fù)順序。原核生物的細(xì)胞中除了主染色體以外，還含有各種質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座因子。真核生物除了核染色體以外，還存在細(xì)胞器 DNA 。第一節(jié) 原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)一、類核的結(jié)構(gòu) E.coli2.4× 109Da， 42000 Kb （ 1300 微米），閉合環(huán)

23、狀，約編碼2000 個(gè)基因。類核（ nucleoid ）：原核生物的 DNA位于細(xì)胞中央支架 (scafford ）： 100 個(gè) DNA 環(huán)組成，每個(gè)環(huán)長(zhǎng)40Kb ，13 微米。每 200bp 就有一個(gè)負(fù)超螺旋（=-0.05 ） ,即基因組中含 5%的負(fù)超螺旋。 超螺旋以兩種狀態(tài)存在： （ 1）自由狀態(tài)的超螺旋，可在環(huán)內(nèi)傳遞張力。（ 2）蛋白結(jié)合超螺旋受到束縛，不能傳遞張力。二、重疊基因 (overlapping gene)三、質(zhì)粒 (plasmid) 特點(diǎn) :雙鏈環(huán)狀 DNA 分子；帶有一些特殊基因 (抗生素抗性基因 )；具有復(fù)制起始區(qū)；可經(jīng)整合到宿主的染色體中，和細(xì)菌染色體同步復(fù)制；學(xué)習(xí)

24、必備歡迎下載質(zhì)粒類型 1.抗性質(zhì)粒：帶有抗性基因，可使宿主細(xì)菌對(duì)某些抗生素產(chǎn)生抗性2.致育因子：可以通過接合在供體和受體之間傳遞遺傳物質(zhì)，其基因組具有轉(zhuǎn)移區(qū)，重組區(qū)和復(fù)制區(qū)3.Col質(zhì)粒 :含編碼大腸桿菌素基因。4.降解質(zhì)粒 :這種質(zhì)粒編碼一種特殊蛋白，可使宿主菌代謝特殊的分子，如甲苯或水楊酸。 5.侵入性質(zhì)粒。如根癌農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒。第二節(jié)真核基因組的復(fù)雜性分子量約為3× 1012 道爾頓長(zhǎng)度為2× 106Kb ，形態(tài)為線狀，約編碼100 萬(wàn)個(gè)以上的基因。人類細(xì)胞在二倍體的核中 DNA 長(zhǎng)約 30 億個(gè)堿基對(duì)估計(jì)編碼 3 萬(wàn)個(gè)基因，每條染色體含堿基8千萬(wàn)至 3億不等。現(xiàn)

25、已有5 千個(gè)基因被編目，1900 個(gè)基因已進(jìn)行了染色體定位，600 個(gè)已被克隆分離出來(lái)。若將一個(gè)細(xì)胞中每條染色體的DNA首尾彼此相接，全長(zhǎng)約 200cm。染色質(zhì) (chromatin): 從細(xì)胞中獲取的DNA 和蛋白質(zhì)的復(fù)合物常染色質(zhì)異染色質(zhì)在染色質(zhì)中和結(jié)合的有兩類蛋白：組蛋白非組蛋白八聚體H3 2-H4 22× H2A-H2B核心顆粒染色質(zhì)小體(166bp)146bp核小體DNA166bp( 200bp)H120bpDNA 連接區(qū)(常為 3234bp)核小體的組成三、染色體的高級(jí)結(jié)構(gòu)10nm 的核絲； 30nm 螺旋管；放射環(huán)模型；螺旋環(huán)模；放射、螺旋環(huán)共存模型；袢環(huán)模型；螺旋折疊

26、 U.K.1988) 等模型；側(cè)環(huán)模型第三節(jié)著絲粒和端粒一 . 著絲粒：由三個(gè)功能區(qū)組成；中部的元件(II) 由 8090bp 組成， A+T 含量高， >90%；左側(cè)的元件(I) 含有 PuTCACPuTG順序（ Pu 是嘌呤）；右側(cè)的元件 (III) 是由 26bp 組成的保守區(qū)，此區(qū)也是A-T豐富區(qū)；所有真核生物的著絲粒功能都相同，但其DNA 卻具有種的特異性。二：端粒：共同特點(diǎn)：每一個(gè)端粒都含有一系列的短的正向重復(fù)順序。Cn(A/T)m，其中n>1，而m=1 4。在端粒區(qū)域中有一種特殊的不連續(xù)排列，產(chǎn)生單鏈斷裂的形式，這種結(jié)構(gòu)并不能被連接酶將缺口封閉起來(lái)，而在正常情況下連接

27、酶是可以作用DNA 鏈上的缺刻（nick ）。提純的天然的端粒區(qū)可直接用E.ColiDNA多聚酶I 進(jìn)行缺口平移(nick translation) 。在端粒區(qū)的最末端可能帶有3-OH 的單鏈末端回折成了發(fā)夾(hairpin) 結(jié)構(gòu)。端粒的雙鏈部分中含有T2G4 的順序在3末端，排列方向是朝向染色體的中心部位。細(xì)胞中，端粒是和一些非組蛋白相結(jié)合，形成復(fù)合體，常表現(xiàn)為異染色質(zhì)或構(gòu)成染色體的末端結(jié)節(jié)。 端粒的功能：保持染色體的穩(wěn)定；使線形 DNA 順利復(fù)制；影響染色體的行為；可能控制細(xì)胞的壽命；和核骨架的組成有關(guān)第四節(jié)染色體的核型和分帶1 核型 (Karyotype)：在一個(gè)細(xì)胞中全套的中期染色體

28、稱為核型2 染色體帶型 G 帶： iemsa 染色 ；最常用先用加熱或蛋白水解酶進(jìn)行預(yù)處理，然后用染料染色，結(jié)果呈現(xiàn)清晰特異的帶。反映了染色體上的豐富區(qū)。用電鏡掃描可在帶區(qū)見到收縮的痕跡，但不可長(zhǎng)期保存。 C 帶； Q 帶：芥子奎吖因（ guinacrine mustard ）染色；直接將未染色的中期染色體染色，在與帶相同的區(qū)域產(chǎn)生另外的熒光帶在熒光顯微鏡下清晰可見。其學(xué)習(xí)必備歡迎下載？感性較強(qiáng)。 T 帶； N 帶； R 帶 :Reverse；是和帶相反的帶，即帶的深染區(qū)正是帶的淺染區(qū)。反之亦然。用常規(guī)顏料染色。第五節(jié)單一順序和重復(fù)順序一、單一順序(Unique sequence )在基因組中

29、有一個(gè)或幾個(gè)拷貝。不編碼真核基因(大多 )編碼(4070%) 原核基因二、短片段重復(fù)順序（1）正向重復(fù)又叫順向重復(fù)； （ 2）反向重復(fù)；（ 3）回文順序：是一種旋轉(zhuǎn)對(duì)稱。特點(diǎn)是正讀反讀意思都一樣。存在于各種蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)。三、長(zhǎng)片段重復(fù)順序輕度重復(fù)順序 : 在基因組中含有2-10 拷貝 ，酵母 tRNA基因、人和小鼠的珠蛋白基因等。中度重復(fù)順序 : 長(zhǎng)約 300bp 基因組中約有10-幾千個(gè)拷貝的順序。如rRNA和 tRNA 基因。 tRNA 基因一般都分布于基因組中，而rRNA 常集中分布于核仁形成區(qū)。基因家族（gene family ）：在真核生物基因組中，來(lái)源相同、結(jié)構(gòu)相似、功能相關(guān)的

30、基因?；虼兀╣ene family ）：相同或相關(guān)的基因排列在一起。分散的基因家族其成員不在同一基因簇（gene cluster）內(nèi)，串聯(lián)基因家族的成員都集中串聯(lián)在一起。有的基因家族成員不僅結(jié)構(gòu)和功能不同，表達(dá)的時(shí)間也不同。孤散子（ orphons）：由串聯(lián)重復(fù)順序中派生出的單個(gè)基因，遠(yuǎn)離其家族，表達(dá)會(huì)發(fā)生改變。假基因：基因家族中因突變而失去功能的基因不能產(chǎn)生具有生物活性的蛋白質(zhì)。加工假基因（ processed pseudogenes）。有以下的特點(diǎn)：缺少正常的內(nèi)含子；3末端有多聚腺苷酸；5端的結(jié)構(gòu)和 mRNA 的 5端十分相似；兩側(cè)有順向重復(fù)順序的存在。對(duì)以上特點(diǎn)作何推論？因此人們推測(cè)它

31、似乎和mRNA 一樣經(jīng)過了轉(zhuǎn)錄后加工，因此也稱其為加工假基因；四 、 Alu 家族 ：長(zhǎng)約 300bp； Alu 順序也稱為短的分散因子；由RNA 多聚酶 III 轉(zhuǎn)錄的。在基因組中 30 萬(wàn)個(gè)拷貝；在 170bp 處有一 AluI的酶切位點(diǎn)；由兩個(gè) 130bp 的串聯(lián)重復(fù)順序組成；在二聚體的右半部有31bp 插入序列，此插入順序來(lái)自7SL RNA 。 Alu 順序有何應(yīng)用價(jià)值？短的分散因子 (short interspersed elements, SINEs): 由 RNA多聚酶轉(zhuǎn)錄的 .長(zhǎng)的分散因子 (long interspersed elements, LINEs): 在哺乳動(dòng)物中

32、,由 RNA 多聚酶轉(zhuǎn)錄的 .L1 家族：長(zhǎng) 6500bp 左右 稱為長(zhǎng)的分散因子； 在基因組中約6 萬(wàn)個(gè)拷貝； 由 RNA 多聚酶 II 轉(zhuǎn)錄的。屬于一種轉(zhuǎn)座因子五高度重復(fù)順序：衛(wèi)星 DNA (satellite DNA) ：衛(wèi)星 DNA(satellite DNA) 是一類高度重復(fù)序列DNA在介質(zhì)氯化銫中作密度梯度離心，離心速度可以高達(dá)每分鐘幾萬(wàn)轉(zhuǎn)；此時(shí) DNA 分子將按其大小分布在離心管內(nèi)不同密度的氯化銫介質(zhì)中，小的分子處于上層，大的分子處于下層；從離心管外看，不同層面的 DNA 形成了不同的條帶。 根據(jù)熒光強(qiáng)度的分析，可以看到在一條主帶以外還有一個(gè)或多個(gè)小的衛(wèi)星帶。 這些在衛(wèi)星帶中的D

33、NA 即被稱為衛(wèi)星DNA ，這種 DNA 的 GC 含量一般少于主帶中的DNA ，浮力密度也低。 隱蔽衛(wèi)星 DNA(cryptic satellite)自私 DNA（selfish DNA ）伊甸園 DNA (Gardenof Eden DNA ；小衛(wèi)星(minisatellite ) 重復(fù)序列可變數(shù)DNA 指紋（ DNA fingerprints ）第六節(jié)C值矛盾C 值矛盾 (C-value paradox) ：值和生物結(jié)構(gòu)或組成的復(fù)雜性不一致的的現(xiàn)象?？赡墚a(chǎn)生的原因是什麼？斷裂基因間隔順序 (spacer):基因間不編碼的部分 (有轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)和不轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))間插順序 (intervenin

34、g sequence) : 基因內(nèi)部不編碼的區(qū)域,即內(nèi)含子 (intron)可編碼的內(nèi)含子 :成熟酶 ,內(nèi)切酶一、內(nèi)含子的發(fā)現(xiàn)二、內(nèi)含子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)(一 ) 內(nèi)含子和外顯子的分布(二 )內(nèi)含子的相對(duì)性三、內(nèi)含子的生物學(xué)意義：有利于儲(chǔ)存較多的遺傳信息；有的內(nèi)含子可編碼內(nèi)切酶。成熟酶歸巢調(diào)控提高進(jìn)化速率學(xué)習(xí)必備歡迎下載第五章DNA 的復(fù)制第一節(jié)半保留復(fù)制的驗(yàn)證半 保 留 模 型 （ semioconservetivemodel ） 全 保 留 復(fù) 制 模 型 (conservetivemodel)分散模型(Dispersive model)。驗(yàn)證半保留復(fù)制的實(shí)驗(yàn)一、Meselson-Stahl 實(shí)驗(yàn)

35、二、 Taylar 實(shí)驗(yàn)三、姐妹染色單體差別染色方法（ sister- chromatid differential staining ）5溴脫氧尿嘧啶（ 5-Bromodeoxy uridine ，簡(jiǎn)稱 BUdR ）斑色染色體（ Harlequin chromosome ）四、 Cairns 復(fù)制模型 型復(fù)制第二節(jié)參與 DNA 復(fù)制的酶和蛋白一、快停突變與慢停突變快停突變：把細(xì)菌培養(yǎng)溫度提高（42 45）復(fù)制迅速停止。快停突變所涉及的產(chǎn)物和鏈的延伸有關(guān)慢停突變：將細(xì)菌培養(yǎng)溫度提高，DNA 合成并不立即停下來(lái)，延續(xù)一段時(shí)間后合成才會(huì)停止。慢停突變表明突變的基因和復(fù)制起始有關(guān)。篩選出與 DNA

36、合成、延伸有關(guān)的蛋白和酶。二、原核生物復(fù)制的酶系統(tǒng)（一） DNA 聚合酶1.DNA 聚合酶的共同特點(diǎn)（1）需要提供合成模板； （ 2）不能起始新的DNA 鏈，必須要有引物提供3' OH ；（ 3）合成的方向都是5 3（4）除聚合 DNA 外還有其它功能。復(fù)制的特異性 （復(fù)制的忠實(shí)性） ：(1)合成前錯(cuò)誤控制：能夠通過匹配的化學(xué)特點(diǎn)加以識(shí)別，檢查進(jìn)入的堿基是否和模板互補(bǔ)，這是一種合成前的預(yù)防措施。(2) 校正控制：在新的堿基加到鏈上以后，來(lái)檢查堿基是否配對(duì)。發(fā)生錯(cuò)配時(shí)，會(huì)把剛加上去的錯(cuò)誤堿基切除。2.DNA聚合酶的結(jié)構(gòu)和功能DNA 聚合酶有 6 個(gè)結(jié)合位點(diǎn)：(1)模板結(jié)合位點(diǎn)；(2) 引

37、物結(jié)合位點(diǎn)； (3)引物 3 OH 結(jié)合位點(diǎn)； (4)底物 dNTP 結(jié)合位點(diǎn)； (5)5 3外切酶結(jié)合位點(diǎn)；(6)3' 5'校正位點(diǎn)。（二） DNA 聚合酶的功能特點(diǎn)：主要用于 DNA 的修復(fù)和后隨鏈中RNA 引物的置換。使用的模板范圍較寬（ 1）有引物的ssDNA （線狀或環(huán)狀） 。（ 2）有缺口的dsDNA （無(wú)論大小）；（ 3）有切口（ nick ）的雙鏈 DNA 。 1.5 3聚合功能 2.3 5外切活性 3.5 3外切活性 (1)切口平移（ nick translation ）； (2)鏈的置換； (3)模板轉(zhuǎn)換（ template-switching ） 4. 內(nèi)

38、切酶活性（三） DNA 多聚酶的結(jié)構(gòu)全酶在 DNA 上的裝配分為三個(gè)階段： （ 1）一個(gè) 二聚體加上一個(gè) 復(fù)合體識(shí)別引物模板形成一種前起始復(fù)合物。（2）DNA 在于 , 復(fù)合體結(jié)合的位點(diǎn)構(gòu)象發(fā)生改變，而對(duì)核心酶產(chǎn)生了高親和。使核心酶能與 DNA 結(jié)合。（ 3） 二聚體結(jié)合核心聚合酶，使其二聚化。（四）DNA 連接酶其作用機(jī)制是分三步進(jìn)行：1、 E ATP E AMP ppi 在 E.coli 中，E NAD E AMP NMN（煙酰胺單核苷酸） 2、 E-AMP上的 AMP轉(zhuǎn)移到 DNA 的 5-PO4 上使其活化3、活化的 5PO4與相鄰的 3OH 作用形成3 5磷酸二酯鍵，并釋放出AMP

39、。單鏈結(jié)合蛋白又稱為雙螺旋去穩(wěn)定蛋白；由177 個(gè) aa 組成；在 E.coli 中以四聚存在；分子量為74KDa，每個(gè)分子可以覆蓋32nt；在原核中 SSB 與 DNA 結(jié)合表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。 （ 1）SSB 之間的相互作用；（ 2）第一個(gè) SSB 和 DNA 的結(jié)合改變了 DNA 的結(jié)構(gòu)。（六）解旋酶 (helicase)第三節(jié)復(fù)制的起點(diǎn)、方向和終點(diǎn)一 . 研究方法： 1. 用同位素標(biāo)記電鏡觀察及變性法2. 用噬菌體插入標(biāo)記法同步培養(yǎng) 不同步培養(yǎng)3. 變性定性法（ denaturation mapping ） 4.雙向電泳法學(xué)習(xí)必備歡迎下載不同生物復(fù)制起點(diǎn)和方向：E.coli 定點(diǎn)、雙向?qū)ΨQ

40、復(fù)制。T7 在近一端的17處開始，向兩端延伸。枯草桿菌有固定的起始點(diǎn)，雙向不對(duì)稱復(fù)制。質(zhì)粒R6K 早期為單向復(fù)制，復(fù)制了約1/5 時(shí)基因組進(jìn)行雙向復(fù)制。質(zhì)粒 Col E1 有固定起始點(diǎn)，但卻為單向復(fù)制。mt DNA 進(jìn)行 D （displaced loop ）環(huán)復(fù)制 。真核有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)（i ），雙向等速?gòu)?fù)制。（一）環(huán)狀DNA 復(fù)制復(fù)制起始區(qū)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是： （1）富含 A T，這可能和雙鏈易于解開起始復(fù)制有關(guān)； （2）含有多個(gè)回文結(jié)構(gòu)（ 9 14 個(gè) GATC ）8 個(gè) GATC 較保守 ,CATC 中的 “ A已”甲基化 ;（ 3）具有 4 個(gè)反向重復(fù)順序，作為蛋白結(jié)合位點(diǎn)； （4）此順序的

41、右側(cè)毗鄰區(qū)域有兩個(gè)起動(dòng)子，其可能的作用是：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生引物；產(chǎn)生復(fù)制必要的蛋白；產(chǎn)生調(diào)節(jié)功能的RNA ；起轉(zhuǎn)錄激活作用。哪些 DNA 進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制 ?真核 rDNA 的擴(kuò)增 ,F 因子 DNA 的轉(zhuǎn)移 , 裂解途經(jīng)的復(fù)制 , X174,M13.G4 等單鏈環(huán)狀 DNA 噬 菌體 第二階段復(fù)制都是進(jìn) 行滾環(huán)復(fù)制的 .（二）線狀DNA 復(fù)制DNA 中間起始復(fù)制DNA 末端起始復(fù)制線性雙鏈 DNA 的復(fù)制有的是從一端開始的: 腺病毒（ Adenovirus ） 29DNAs脊髓灰質(zhì)病毒（ poliovirus) ；腺病毒 DNA 全長(zhǎng) 35937 bp,線性雙鏈，兩端各有反向重復(fù)順序103 162 bp

42、，兩末端各有 50 bp 為復(fù)制起點(diǎn)。其復(fù)制是以單鏈置換（strand displacement）形成一個(gè)大的莖環(huán)或叫平鍋形結(jié)構(gòu)來(lái)進(jìn)行的。（三）復(fù)制的終止1.E.coli 的復(fù)制終止 (環(huán)狀 DNA 復(fù)制終止 ) 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)終止區(qū)域（ terE,D,A和 ter C,B ），位于相遇點(diǎn)的另一側(cè) 100Kb 處。每一終止順序?qū)δ骋环较蛞苿?dòng)的復(fù)制叉來(lái)說是特異的。ter 順序有一個(gè) 23bp的區(qū)域，在體外可導(dǎo)致復(fù)制的終止，但其功能顯示了一定的方向性。終止需要tus 基因的產(chǎn)物 Tus，Tus 能識(shí)別 ter 保守順序，并阻止復(fù)制叉繼續(xù)前進(jìn)。ter-Tus 復(fù)合物可能通過抑制螺旋酶來(lái)實(shí)行終止2.線

43、性 DNA 的復(fù)制終止兩個(gè) 5有空缺的分子通過 3端凸出的重復(fù)序列互補(bǔ)配對(duì)。DNA 多聚酶從 3端延伸填補(bǔ)起這個(gè)空缺，留下最后的裂隙由連接酶封閉，產(chǎn)生了一個(gè)大分子串聯(lián)體。由限制酶在連接處交錯(cuò)切割， 產(chǎn)生 3 凹端，由 DNA 多聚酶在 3 -OH 上延伸填滿新的空缺， 產(chǎn)生兩條完整的雙鏈。第四節(jié) 復(fù)制的過程一、半不連續(xù)復(fù)制1、岡崎片段： 任何一種DNA 聚合酶合成方向都是從5'向 3'方向延伸， 而 DNA 模板鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械碾p鏈，這樣在一條鏈上，DNA 合成方向和復(fù)制移動(dòng)方向相同（前導(dǎo)鏈），而在另一條模板上卻是相反的（后滯鏈） 。那么在復(fù)制叉中新鏈?zhǔn)侨绾魏铣傻哪?？Reiji

44、Okazaki 在 DNA 合成實(shí)驗(yàn)中添加放射性的脫氧核苷酸前體觀察到前導(dǎo)鏈連續(xù)合成，滯后鏈分段合成。 這些分段合成的新生 DNA 片段稱岡崎片段。細(xì)菌岡崎片段長(zhǎng)度1000-2000 核苷酸，真核生物岡崎片段長(zhǎng)度100-200 核苷酸。（ 1）脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)：以E.coli為材料，在培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中加入同位素3H 標(biāo)記的 dTTP ，經(jīng) 30 秒后， DNA 剛開始復(fù)制，分離DNA ，然后在堿中沉淀，變性，讓新合成的單鏈和模板鏈分開，再用CsCl 密度梯度離心，以沉降的快慢來(lái)確定片段的大小，再檢測(cè)放射標(biāo)記，結(jié)果表明被3H 標(biāo)記的片段，也就是新合成的片段，沉淀系數(shù)為20S 左右，即都是長(zhǎng)10002

45、000Nt 的 DNA 片段，而親本鏈要比它大 2050 倍。（ 2）脈沖追逐實(shí)驗(yàn)：早期合成的DNA片段以后的命運(yùn)又是如何的？是依然如舊的短片段，還是連接成了長(zhǎng)片段。這個(gè)實(shí)驗(yàn)是先進(jìn)行標(biāo)記培養(yǎng)30 秒，以后除去同位素繼續(xù)培養(yǎng)幾分鐘，再分離DNA在堿中沉淀，檢測(cè)結(jié)果。先合成的（帶標(biāo)記）的DNA 不再是短片段，而和總DNA 的情況相似，沉淀系數(shù)為 70S120S 較長(zhǎng)的片段， 這意味著剛開始合成的片段都是短片段，以后再連接成長(zhǎng)片段， 人們就把最初合成的短片段稱為岡崎片段（Okazaki fragment ）。學(xué)習(xí)必備歡迎下載形成前導(dǎo)鏈小片段的原因：細(xì)胞內(nèi)都存在有dTTP 和 dUTP，而 DNApo

46、l 卻并不能區(qū)分它們，因此也會(huì)將dUTP加入到DNA中，形成A ·U對(duì)。那么在DNA中為什么沒有U 的存在呢？這是因?yàn)镋.coli 細(xì)胞里有雙重“保險(xiǎn)” ，防止了U 的“混入”。第一道關(guān)是細(xì)胞里的變成 dUMP ， dUMP 是不能作為DNA 合成的底物，這樣它就不再能加入啶 N-糖苷酶（ uracil N-glycosylase ），它可以切斷混合尿苷的糖苷鍵，形成無(wú)dUTPase，它能使dUTPDNA 中。第二道關(guān)是尿嘧Pu 和 Py 位點(diǎn)（ apurinicor apyrimidinic， AP ），再由 AP 內(nèi)切酶在AP 位點(diǎn)切出一個(gè)缺口，進(jìn)一步進(jìn)行切除修復(fù)。在細(xì)胞內(nèi)尿嘧啶

47、 N- 糖苷酶作用較快，而AP 酶作用較慢， 在新鏈合成之初約1200bp 就有可能摻進(jìn)一個(gè)U ，但很快就被尿嘧啶N- 糖苷酶切斷糖苷鍵，在AP 酶未作用前在脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中就提取了，用NaOH 沉淀時(shí)， AP 位點(diǎn)十分易斷裂，所以前導(dǎo)鏈也成了小片段。復(fù)制體和回環(huán)模型：雙螺旋復(fù)制是同時(shí)復(fù)制的：每一個(gè)復(fù)制叉含有特別大的多聚體復(fù)合體，它是一個(gè)不對(duì)稱的二聚體，可能同時(shí)催化兩條鏈。在電鏡下觀察到雙螺旋DNA 聚合酶 也同樣具有兩個(gè)活性部位；復(fù)制體（ replisome ）：是由解旋酶、引發(fā)酶和DNAPol 全酶組成的復(fù)合體?；丨h(huán)模型：DNA 合成時(shí)，沿著復(fù)制叉的方向移動(dòng)。后隨鏈模板形成了一個(gè)回環(huán)，使環(huán)中

48、RNA 引物和岡崎片段的合成方向與前導(dǎo)鏈一致，以適應(yīng)雙鏈在同一復(fù)制體上進(jìn)行復(fù)制。特點(diǎn)：聚合酶和引發(fā)體聯(lián)系在一起可以協(xié)調(diào)它們的作用；復(fù)制體中的DNA Pol是二聚體； 后隨鏈?zhǔn)切纬苫丨h(huán)復(fù)制的。二、真核生物的復(fù)制、真核生物聚合酶和有關(guān)蛋白、真核生物復(fù)制特點(diǎn)：1 基因組中有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；2 一般要等第一輪復(fù)制結(jié)束后第二輪才開始。3 真核的復(fù)制起點(diǎn)到兩邊的復(fù)制終點(diǎn)稱為一個(gè)復(fù)制子或一個(gè)復(fù)制單位。DNA 開始合成的位置，一個(gè)初始起點(diǎn) (或者雙向復(fù)制起點(diǎn) -大多數(shù)起點(diǎn)是雙向的)，兩側(cè)有一些二級(jí)起點(diǎn)。 初始起點(diǎn)經(jīng)常是 0.5-2kbp長(zhǎng)，而二級(jí)起點(diǎn)可跨越50kbp，因此稱為起始地帶4真核和原核復(fù)制子的大小是非常相似的，但復(fù)制的速率真核要比原核慢得多；5 真核的復(fù)制起始點(diǎn)的數(shù)目和復(fù)制單位的大小是隨著細(xì)胞的特點(diǎn)變化而改變的，如不同的生長(zhǎng)速率的細(xì)胞和不同組織的細(xì)胞。6 并非所有的復(fù)制子都同時(shí)進(jìn)行DNA 復(fù)制。而是有一定的起始時(shí)間順序。不同類型的細(xì)胞復(fù)制起始的順序也不同。、真核生物復(fù)制起始區(qū)結(jié)構(gòu)。(1)T 蛋白具有解鏈酶活性，通過水解ATP 解開雙鏈， RF-A立即和單鏈結(jié)合，使之穩(wěn)定；(2) 復(fù)制叉移動(dòng)一段距離，pol -引發(fā)酶復(fù)合物結(jié)合到復(fù)制區(qū)，合成第一段 RNA 引物； (3)RF-C 結(jié)合到引物上，使 pol 合成第一條岡崎片段；(4)到前導(dǎo)鏈和后滯鏈的分界區(qū)， pol從單鏈上