《發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》ppt課件

1、Xin ZhangSchool of Marine Science Department of Food Science & TechnologyNingbo University發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)張張 鑫鑫寧波大學(xué)寧波大學(xué) 海洋學(xué)院海洋學(xué)院 食品科學(xué)與工程系食品科學(xué)與工程系625186乳酸菌的功能與運(yùn)用價(jià)值乳酸菌的功能與運(yùn)用價(jià)值抗菌，防腐，抗氧化，微生態(tài)益生菌等發(fā)酵保健食品酸奶；發(fā)酵代謝產(chǎn)物：有機(jī)酸，胞外多糖，抗菌肽，等；果蔬發(fā)酵酸菜等；環(huán)境廢物轉(zhuǎn)化，環(huán)境維護(hù)；等。乳酸菌的運(yùn)用乳酸菌的功能發(fā)酵工程的研討內(nèi)容構(gòu)成發(fā)酵工程的研討內(nèi)容構(gòu)成 工業(yè)微生物消費(fèi)菌株的分別與挑選； 菌株改造菌種選育 培育

2、基制備技術(shù)； 發(fā)酵過(guò)程控制與優(yōu)化； 產(chǎn)物的分別與純化第一部分：乳酸菌的分別、挑選與保藏第一部分：乳酸菌的分別、挑選與保藏第二部分：乳酸菌的培育與發(fā)酵測(cè)定第二部分：乳酸菌的培育與發(fā)酵測(cè)定附上：實(shí)驗(yàn)原始記錄附上：實(shí)驗(yàn)原始記錄 實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)預(yù)備實(shí)驗(yàn)一：實(shí)驗(yàn)預(yù)備 實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分別與挑選實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分別與挑選 實(shí)驗(yàn)三：菌種培育與保藏實(shí)驗(yàn)三：菌種培育與保藏 實(shí)驗(yàn)四：乳酸菌的發(fā)酵培育實(shí)驗(yàn)四：乳酸菌的發(fā)酵培育 實(shí)驗(yàn)五：乳酸菌發(fā)酵測(cè)定與產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn)五：乳酸菌發(fā)酵測(cè)定與產(chǎn)物分析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c意義及原理等一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c意義及原理等二、資料與方法或步驟二、資料與方法或步驟三、結(jié)果與分析三、結(jié)果與分析問(wèn)題回答問(wèn)

3、題回答實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)根本格式實(shí)驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)根本格式撰寫(xiě)完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告上交資料撰寫(xiě)完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告上交資料實(shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)二時(shí)間安排周XX培育基制備；分別：劃線分別；稀釋分別選菌落，接入斜面培育基標(biāo)志，培育；保管實(shí)驗(yàn)乳酸菌菌株斜面移接活化細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定產(chǎn)酸變化留意點(diǎn)：新保管的菌株可直接接種，不用再活化。菌種移接至發(fā)酵三角瓶，培育(E2)細(xì)胞生物量g/L：離心測(cè)菌體分量； 混濁度描畫(huà) 測(cè)定pH變化：酸度計(jì)發(fā)酵產(chǎn)物乳酸定性分析(E3)薄層層析法總實(shí)驗(yàn)流程總實(shí)驗(yàn)流程采樣分別(E1)乳酸菌菌株實(shí)驗(yàn)一：培育基制備與器材預(yù)備實(shí)驗(yàn)一：培育基制備與器材預(yù)備每組內(nèi)容每人倒1個(gè)平板用于劃線分別做一套稀釋倒平板，1個(gè)

4、稀釋度倒平板1個(gè)斜面培育基每人1支，第一部分第一部分MRS培育基200ML，營(yíng)養(yǎng)瓊脂30ML，無(wú)菌水試管4支9ML，無(wú)菌移液管5支1ML，留意：碳酸鈣按比例混合MRS培育基200ML加5克；培育基可幾個(gè)組合并配制。發(fā)酵模塊：共6個(gè)組，每3個(gè)組配600ML，營(yíng)養(yǎng)瓊脂一個(gè)班配1瓶。分別得到的乳酸菌菌株編號(hào)菌落察看生理生化特性略形狀鑒定略采樣稀釋倒平板編號(hào)，斜面培育與保管經(jīng)過(guò)產(chǎn)酸特性直接鑒定實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分別與培育實(shí)驗(yàn)二：乳酸菌的分別與培育第一部分第一部分實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 乳酸菌菌種的培育與保藏乳酸菌菌種的培育與保藏分別得到的乳酸菌菌株編號(hào)斜面移接與培育(每一株1株保藏1株待以下實(shí)驗(yàn)用留意點(diǎn)：注明菌種

5、編號(hào)與日期；如Lcd131,Lcd132；例：陳丹，第一組第3位同窗第一階段終了，總結(jié)安排一周完成時(shí)間安排 制藥班級(jí)，21人周三培育基制備；分別：劃線分別；稀釋分別周五選菌落，接入斜面培育基標(biāo)志，培育；配制發(fā)酵培育基；每個(gè)菌株接種2瓶平行實(shí)驗(yàn)下周一下周三接種發(fā)酵培育基標(biāo)志，每個(gè)菌株接種2瓶。開(kāi)場(chǎng)記錄時(shí)間。16至24h內(nèi)檢測(cè)一次發(fā)酵終了，樣品檢測(cè)，乳酸薄層層析法測(cè)定。周二周四周四實(shí)驗(yàn)乳酸菌菌株斜面移接活化細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定自選產(chǎn)酸變化留意點(diǎn)：新保管的菌株可直接接種，不用再活化。實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 乳酸菌培育與發(fā)酵測(cè)定乳酸菌培育與發(fā)酵測(cè)定菌種移接至發(fā)酵三角瓶，培育細(xì)胞生物量g/L：離心測(cè)菌體分量； 混濁度描畫(huà)

6、 測(cè)定pH變化：酸度計(jì)發(fā)酵產(chǎn)物乳酸定性分析E3薄層層析法總實(shí)驗(yàn)流程總實(shí)驗(yàn)流程第二部分第二部分發(fā)酵培育基的配制發(fā)酵培育基的配制接種3環(huán)培育瓶包扎方法闡明闡明細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定細(xì)胞濕密度：?jiǎn)挝惑w積細(xì)胞濕密度：?jiǎn)挝惑w積(ml)發(fā)酵液菌體的分量發(fā)酵液菌體的分量g濕重濕重; 方法：取一定量方法：取一定量(ml)發(fā)酵液，經(jīng)離心去除上清液，菌發(fā)酵液，經(jīng)離心去除上清液，菌體稱(chēng)重。體稱(chēng)重。細(xì)胞濃度：?jiǎn)挝惑w積細(xì)胞濃度：?jiǎn)挝惑w積(ml)活細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)(cfu)，單位，單位:cfu/ml 方法：取一定量方法：取一定量(ml)發(fā)酵液，經(jīng)適當(dāng)稀釋后。倒平板培育發(fā)酵液，經(jīng)適當(dāng)稀釋后。倒平板培育計(jì)數(shù)，再由菌落數(shù)與

7、稀釋倍數(shù)的積。計(jì)數(shù)，再由菌落數(shù)與稀釋倍數(shù)的積。光密度光密度OD：反映細(xì)胞的混濁度；：反映細(xì)胞的混濁度； 方法：由分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。方法：由分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。分析終了以后每一組清洗各自的分析終了以后每一組清洗各自的實(shí)驗(yàn)物品，包括斜面菌種等。實(shí)驗(yàn)物品，包括斜面菌種等。請(qǐng)同窗留意：請(qǐng)同窗留意：發(fā)酵液預(yù)處置可直接取發(fā)酵清液，調(diào)發(fā)酵液預(yù)處置可直接取發(fā)酵清液，調(diào)pH至至3左右左右因培育終了；因培育終了；最后一次分析檢測(cè)不用無(wú)菌操作！最后一次分析檢測(cè)不用無(wú)菌操作！實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的定性分析乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物乳酸的定性分析 -薄層層析法薄層層析法方法流程方法流程1.

8、發(fā)酵液預(yù)處置可直接取發(fā)酵上清液，調(diào)發(fā)酵液預(yù)處置可直接取發(fā)酵上清液，調(diào)pH至至3，另用自然，另用自然pH做對(duì)照；做對(duì)照；2.劃線及點(diǎn)樣時(shí)，不可將薄層刺破，點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不超越劃線及點(diǎn)樣時(shí)，不可將薄層刺破，點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不超越2mm，反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)要在同一位置。每次點(diǎn)樣后適當(dāng)吹干。反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)要在同一位置。每次點(diǎn)樣后適當(dāng)吹干。 3.顯色時(shí)，留意噴霧均勻。顯色時(shí)，留意噴霧均勻。4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處置：記錄顯色點(diǎn)與點(diǎn)樣點(diǎn)間的間隔。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處置：記錄顯色點(diǎn)與點(diǎn)樣點(diǎn)間的間隔。發(fā)酵液預(yù)處置展開(kāi)系統(tǒng)飽和點(diǎn)樣展開(kāi)顯色操作本卷須知操作本卷須知記錄計(jì)算，等展層溶劑：正丁醇：甲酸：水展層溶劑：正丁醇：甲酸：水=80：15：5V/V/

9、V；展開(kāi)系統(tǒng)的飽和：展開(kāi)系統(tǒng)的飽和：預(yù)先取適量配制好的展開(kāi)劑注入層析缸一邊，將已點(diǎn)樣的的薄板也放入層析預(yù)先取適量配制好的展開(kāi)劑注入層析缸一邊，將已點(diǎn)樣的的薄板也放入層析缸的另一邊，密閉層析缸缸的另一邊，密閉層析缸1520min，使展開(kāi)液蒸汽飽和層析系統(tǒng)，使展開(kāi)液蒸汽飽和層析系統(tǒng) 展開(kāi)：將薄板移至有適量展開(kāi)液的層析缸一邊展開(kāi)；展開(kāi)：將薄板移至有適量展開(kāi)液的層析缸一邊展開(kāi)； 顯色：顯色： 3%的溴甲酚綠酒精溶液噴霧，再用熱風(fēng)吹干，的溴甲酚綠酒精溶液噴霧，再用熱風(fēng)吹干， 留意：顯色液噴霧要足夠。顯色時(shí)間要充分。留意：顯色液噴霧要足夠。顯色時(shí)間要充分。1、描畫(huà)分別效果作圖或照片顯示； 2、計(jì)算Rf值； 3、分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果及誤差緣由。請(qǐng)記錄以下請(qǐng)記錄以下3個(gè)問(wèn)題個(gè)問(wèn)題四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論詳細(xì)操作步驟按照實(shí)驗(yàn)指點(diǎn)書(shū)詳細(xì)操作步驟按照實(shí)驗(yàn)指點(diǎn)書(shū)實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容格式參照下頁(yè)；報(bào)告一致提交