5 U3000數(shù)據(jù)處理

1、 U3000軟件培訓教材 Part 5 數(shù)據(jù)處理和結果報告打印輸出 2012.TMO戴安產(chǎn)品培訓中心.服務熱線：800-810-5118, 400-650-5118客服郵箱：市場培訓電話)(傳真)(郵箱)目錄一、處理數(shù)據(jù)31、進入需要數(shù)據(jù)處理的樣品序列32、進入“校準和處理方法”中的“檢測”41）、執(zhí)行“Cobra向導”快速智能進行積分參數(shù)優(yōu)化62）、執(zhí)行“Smartpeaks“向導進一步進行積分優(yōu)化處理103、組分表的編輯121)、執(zhí)行“組分表向導”132）、優(yōu)化組分表“分組區(qū)”的各表格列163）、組分表各列的解釋和編輯184、定量用標

2、準方法191)、校準類型192)、校準級別203)、濃度單位214)、因子215)、其它各項215、校準211)、外標法（單點校準）實例：222)、外標法（多點線性校準）舉例223)、內標法舉例25二、報告格式的編輯修改和打印301、進入報告格式界面302、總覽323.積分基本譜圖和數(shù)據(jù)報告321）、修改報告的表頭332）、譜圖區(qū)域的優(yōu)化343) 、“積分結果”表的修改394、混合組分校正曲線圖425、.峰分析446、總結表457、審計跟蹤報告498、保存修改后報告模板499、指定打印設置50三、數(shù)據(jù)備份（發(fā)送、導出）和還原（導入）511、將軟件中的文件夾或樣品序列備份（發(fā)送到）512、將軟件

3、中的文件夾或樣品序列備份 （導出）543、文件夾或樣品序列文件備份的還原54一、處理數(shù)據(jù)編輯的樣品序列在儀器方法設定的色譜條件下完成了進樣，采集到色譜數(shù)據(jù)。調用其中已做好的標準樣品可對預先設定的處理方法中的積分參數(shù)進行優(yōu)化，并用已知濃度標準物做好校正，完善該處理方法文件并保存。未知樣品一旦完成分析測定，軟件會自動以該處理方法計算出樣品中每個組分的分析結果。1、進入需要數(shù)據(jù)處理的樣品序列在Chromleon Console左下側選擇“數(shù)據(jù)”，在數(shù)據(jù)導航界面選擇樣品序列，比如本例中選Exercise 1(Linear)。當點擊Exercise 1(Linear)序列后，在右邊的工作區(qū)顯示樣品序列中

4、所有樣品的信息。色譜數(shù)據(jù)處理區(qū)（Chromatography Studio）功能區(qū)介紹雙擊上圖序列表中某個標準品.切換到色譜數(shù)據(jù)處理區(qū)（Chromatography Studio）.進入色譜數(shù)據(jù)處理區(qū)，上部功能區(qū)中有剪貼板，導航，預置，窗格四區(qū)。在“預置”區(qū)中點擊“結果”圖標，顯示色譜圖和結果；點擊“校正和處理方法”圖標，進入處理方法界面，可對處理方法進行優(yōu)化和完善；點擊“等值圖和結果”圖標，可對DAD采集的色譜和光譜數(shù)據(jù)進行處理。點擊窗格區(qū)中各圖示，如等值圖，UV-Vis光譜，校準圖，可進入該界面。點擊“結果”圖標，下圖顯示色譜圖和結果表。2、進入“校準和處理方法”中的“檢測”點擊功能區(qū)“校

5、準和處理方法”圖標，可進入校準和處理方法界面，在色譜圖下方有檢測、組分表、校準等。點擊“檢測”進入積分參數(shù)設定，一般的軟件即便是變色龍6版本都要一一設定各參數(shù)，如在下面分組區(qū)的參數(shù)名稱列下拉菜單中可選各參數(shù)，在參數(shù)值列下必須設參數(shù)值?，F(xiàn)在變色龍7.1有快速智能積分參數(shù)優(yōu)化功能，在檢測界面，可以點擊“進行Cobra向導”執(zhí)行檢測參數(shù)的優(yōu)化。另一路徑也可執(zhí)行“Cobra向導”，直接點擊工具欄“數(shù)據(jù)處理主頁”右邊的“處理”出現(xiàn)一排彩色圖標，分為指針/縮放、檢測參數(shù)、手動峰檢測（積分）、組分表、手動峰識別等五區(qū)，進入檢測參數(shù)區(qū)的“Cobra向導”和“Smart Peaks”可對檢測參數(shù)進行快速和智能的

6、優(yōu)化。其它區(qū)的圖標也很直觀的顯示了許多功能。點擊“Cobra向導”圖標進行積分參數(shù)優(yōu)化。1）、執(zhí)行“Cobra向導”快速智能進行積分參數(shù)優(yōu)化點擊“Cobra向導”，軟件會自動進入積分區(qū)域基線噪聲范圍Cobra平滑寬度最小峰面積通道和進樣類型進行整個過程的優(yōu)化。進入“積分區(qū)域”，只要用光標在色譜圖上拖出一個積分區(qū)域，點擊下一步。進入“基線噪聲范圍”軟件會自動確定基線范圍， 直接點擊下一步。進入“Cobra平滑寬度”在色譜圖上點擊一個最窄的峰，一般是第一個峰，如果發(fā)現(xiàn)積分標記線有問題，可選中下面的“平滑寬度”，輸入合適的值，點擊下一步。進入“最小峰面積”在色譜圖上點擊一個面積最小的標準物質的峰，小

7、于這個面積的峰都不積分，最小峰面積設置為所選峰峰面積的90%。點擊下一步（Next）。進入通道和進樣類型，直接點擊完成。進入通道和進樣類型，直接點擊完成。2）、執(zhí)行“Smartpeaks“向導進一步進行積分優(yōu)化處理 如果測得的色譜峰之間未達到完全基線分離，尤其是復雜樣品的色譜分離圖，可以應用Smartpeaks向導功能，進一步進行積分優(yōu)化處理。下圖中選擇（Inpurity）樣品，雙擊：在上部“檢測參數(shù)”區(qū)，點擊“Smartpeaks“向導中間色譜圖區(qū)顯示的譜圖比較復雜，有的峰之間沒有達到基線分離。 在色譜圖上畫框選定并放大要進行處理的色譜區(qū)域，如下圖箭頭所示。 “Smartpeaks“向導會自

8、動優(yōu)化，顯示如下五種模式，第三種為谷到谷積分。選擇第三種積分方式，下圖中色譜峰顯示谷到谷積分方式。3、組分表的編輯單擊圖下“組分表”選項，進入組分表編輯界面，下面分組區(qū)表從左到右名稱、保留時間、窗口、通道、評估類型、標準方法、標準類型、級別、濃度單位、因子等列。為了進行校準有必要對這些參數(shù)進行設定，選擇功能區(qū)的“組分表向導”圖標或點擊“運行組分表向導”都是進一步進行組分復核，在Cobra向導處理方法已包含峰組分的處理。如點擊“運行組分表向導”彈出一小框告知當前的Cobra向導處理方法已包含峰組分的處理，選擇“更新”作演示。1)、執(zhí)行“組分表向導” 進入“時間范圍”，使用自動范圍，點擊下一步。

9、進入“篩選”，先前軟件已處理好，如果不合適，可選中“篩選峰”，輸入合適的峰面積，點擊下一步。進入“復核”，在下面組分表中可以輸入樣品名稱，如A,B,C,（也可在組分表界面輸入），點擊完成。2）、優(yōu)化組分表“分組區(qū)”的各表格列在組分表界面，首先優(yōu)化分組區(qū)的表格列排列，在列名處，右鍵單擊，下拉菜單中點擊表格列。在下圖中光標將標準品方法、校準類型、校準級別、濃度單位選中上移，點擊確定。新排列的樣品列表中標準品方法、校準類型、校準級別、濃度單位等排在左側，方便參數(shù)設定，下面進行各表格列解釋和編輯：3）、組分表各列的解釋和編輯a、標樣峰名稱在峰名稱列中輸入標樣組分的名字，如a,b,c。b、保留時間保留時

10、間列中各組分的保留時間是根據(jù)標準樣色譜圖中組分自動生成的。c、保留時間的正負范圍窗口窗口列中是自動生成的保留時間允許的正負范圍。在序列樣品分析過程中如果保留時間偏移過多，軟件會不識別樣品中該組分，此時可以適當增大該值的設定。雙擊窗口列下格，在組分窗口識別框中選最接近的峰的相對值，保留時間正負設定5，點擊“確定”窗寬列下第一行處輸入5，點擊F9或者右擊，選擇向下填充。窗口值會自上而下自動填充。4、定量用標準方法定量用標準方法的選擇，雙擊“標準品方法”列下小格，彈出“標準品方法”小框，一般選外標法（External），如果選內標法，必須要指定內標物峰并選定它作為內標峰。1)、校準類型第五列為校準類

11、型，雙擊“校準類型”列下小格，在彈出的校準類型框中有多種選擇。多點線性校準法：選自動校準、忽略原點、校準類型為WithOffset 單點校準法：選自動校準、強制通過原點，校準類型為Lin,如下圖所示：。2)、校準級別在樣品序列表中已設定標準品，其標志為黃色瓶，濃度級別都為1，即單點校準。在下圖左側數(shù)據(jù)處理下有進樣顯示，共4個標準樣品，在組分列表中顯示4個級別列，但因為是單點校準，4個級別列中輸入相同的濃度值，要分別輸入A、B、C各標準品的濃度值。也可以單擊級別2，3，4在下拉菜單中選“刪除”僅剩下一個級別。（備注：制藥行業(yè)標準中有需要做兩份重量接近的平行標準，這也屬于單點校準，此時在兩個級別列

12、中輸入各自的標準濃度值即可。）3)、濃度單位在濃度單位下輸入標準品的濃度單位一般為mg/ml；mg/l 。4)、因子如果某標準品的純度為98%,在響應因子下可為其輸入0.98，也可輸入生物效價等； 5)、其它各項其它各項略。5、校準點擊“校準”選項進入校準界面，分為4個部分：左邊是進樣序列，其中有4個標準品（在進樣序列表中可以選擇用于校準的標準樣，不參與的標準品可以改為未知樣等）；下面“分組區(qū)”顯示有四個標準品參與校準，但都是一個濃度級別；上面有標準品的色譜圖；其右邊顯示選定組分的標準曲線。1)、外標法（單點校準）實例：上圖為單點校準，校準類型為Lin，即強制通過原點，四個標準品參與校準，但都

13、是一個濃度級別。光標點擊在第一個組分峰，在右邊顯示出第一組分峰的標準曲線，光標移到第二個色譜峰，在右邊顯示出第二色譜峰的標準曲線，它們都是通過原點的曲線。2)、外標法（多點線性校準）舉例多點線性校準法，在校準類型中選自動校準、右邊選忽略原點，單擊確定。下圖中左邊數(shù)據(jù)處理下進樣表中有8個標準品，14都進20ul為一個濃度點，第5個標樣開始分別進30ul，40ul，50ul，60ul，共5個濃度級別，是采用一個標準品濃度，進不同的進樣量。在分組區(qū)中校正類型下顯示W(wǎng)ithOffset，即為多點校準 。顯示5個級別列，演示舉例中因為用的同一標準品，所以在15級別列中輸入濃度值相同。通常操作配5個不同濃

14、度點的標準品，進相同的進樣量，因此必須在各組分的15級別列中輸入各標準品相應的濃度值。在色譜圖中選定了中間的B峰，在右邊顯示的即為該組分的多點校準曲線。輸入設定完成，點擊左上角“保存”。下圖中分組區(qū)有8個標準品參與校準，前4個標準進相同的體積為同一濃度，在右邊的曲線上是第一點（包括4次進樣的平均值），共有5個濃度點，發(fā)現(xiàn)最后一個濃度點誤差較大（偏離直線較遠）。如果不想讓最后一點參與校正，可單擊最后一行“啟用”下小格，則對應的“”去掉了，校準注譯下顯示“被禁用”，表示該第五點不參與校準。下圖中右邊標準曲線下有一個紅色的梅花點，表示該點不參與校準，此時的標準曲線就成一條直線。最后點擊左上角變色龍圖

15、標右邊的“保存”，保存完整的外標多點校準方法，當你分析完待測樣品，軟件立即以此校準曲線自動計算出未知樣品中各組分的分析結果。（待測樣品的樣品稱重量，稀釋因子（定容體積）非常重要，可以在樣品序列的各未知樣品行中輸入。）3)、內標法舉例內標法必須要指定內標物峰并選定它作為內標峰。在“校準”界面下面分組區(qū)，如果指定A是內標峰，雙擊第一行A組分標準品方法列下“External”，彈出小框中在“使用該組分作為內標”前“”，內標選項中選“內標”點擊確定。表示做內標法并選中A組分為內標峰，原來的“External”改成“ISTD Internal”，再在標準品方法列下分別雙擊B、C兩組分的“External

16、”區(qū)：在彈出標準品方法小框中，選內標法，相關的ISTD組分下選A作為內標，點擊確定。此時分組區(qū)表中B、C 的標準品方法列下改為“Internal A”，表示以A作為內標物檢測B、C兩組分。備注：內標法做多點校準，配置多個級別標準品濃度時其內標物濃度最好是一致的。樣品中內標量僅可能與標準品中一致，假如不相同，可以在樣品序列表中樣品行的內標量列下輸入。如下圖舉例標準品中內標量是1.000mg/ml,樣品中內標量與標準品中不相同，第9，10行Sample A，可以在內標量列下輸入如1.200mg/ml。另外如稱取15mg樣品稀釋到10ml，在樣品重量列下輸15mg，稀釋列下輸10ml。點擊“保存”

17、如上所述，在組分表中輸入了對照品及內標物的濃度，又在樣品序列表中輸入了待測樣品的樣品重量，稀釋因子（倍數(shù)），同時又輸入了待測樣品中的內標濃度，那么變色龍色譜軟件會自動以內標法計算出b,c的校準曲線，當待測樣品分析完成，自動計算出各組分的最終結果，可以是百分含量或mg/l表示.如果想查看校準曲線，點擊功能區(qū)的“結果”和“校準圖”圖標，再點擊表格最下面“校準”選項，可以查看線性相關系數(shù)R2（Coeff.of Determination）、截距（Offset）和斜率（Slope）。二、報告格式的編輯修改和打印1、進入報告格式界面軟件已設定了幾個標準的報告格式，在樣品序列編輯時已選定好，如果現(xiàn)在要重選

18、報告模式，可以點擊左上角的變色龍圖標，在彈出框中選中“新建”在右邊下拉框中選擇“報告模板”。選擇變色龍7.1版本的某一標準模板，如“Default DAD”在下圖中選擇“使用新的報告模板作為序列的默認值”點擊完成。在某一樣品序列的色譜數(shù)據(jù)處理區(qū)（Chromatography Studio），點擊左下方的“報告設計器”進入結果報告和打印報告界面。功能區(qū)中有剪貼板、導航、字體、對齊、數(shù)字、單元格、編輯、保護、外部引用等區(qū)域。點擊工具欄的“頁面布局”，功能區(qū)中有預覽、頁面設置，自動重復、縮放調整、工作表選項、縮放、打印和輸出等區(qū)域，根據(jù)個人需要可進行結果報告的編輯和修改，完全可以制作個性化的結果報告

19、格式。（屬于高級應用）進入需要打印的界面：類似于Excel電子表格，如上圖最下方，分好幾頁顯示，有總覽、積分（基本譜圖和數(shù)據(jù)的報告）、校準曲線報告、峰分析報告、總結、審計跟蹤和色譜圖等選項。2、總覽序列總覽，顯示序列信息及進樣分析時間和完成狀態(tài)。3.積分基本譜圖和數(shù)據(jù)報告這一頁為基本譜圖和數(shù)據(jù)報告，一般需要打印。報告分為三個部分，上部為報告頭顯示進樣信息；中間是色譜圖區(qū)域；下部是組分結果表。圖中有動態(tài)連接的變色龍Chromeleon 對象，如報告表格、報告變量和色譜圖用紅色三角形標識（），包含文本或電子表格公式的單元格不做標識，此時可以進行報告模板的修改。1）、修改報告的表頭a、在黃色表頭區(qū)域

20、先刪除原表頭“色譜圖和結果”輸入單位名稱如上海CDC，選用功能區(qū)中“字體”和“對齊區(qū)”編輯使達到滿意的效果。 b、雙擊右側帶紅色的箭頭的單元格，可以對顯示的參數(shù)進行修改，但是不能直接輸入會把變量換成常量。而這些都是進樣信息，真的有誤操作如某樣品號的樣品重量輸錯，可在樣品序列表中糾正。2）、譜圖區(qū)域的優(yōu)化雙擊譜圖區(qū)域或點擊右鍵在下拉菜單中選擇“屬性”，彈出“屬性”對話框。屬性表參數(shù)解釋：譜圖信息：譜圖的顯示信息，字體，邊距，方向等時間軸（Time Scale）：橫坐標（保留時間）信號軸（Signal Scale）：縱坐標（紫外吸收值） 標題（Caption）：譜圖上方左中右三個位置的顯示內容個性

21、化色譜峰：每個峰的不同顏色，定界符，基線，峰寬峰標簽：峰名稱標示的狀態(tài)峰純度：疊加上峰純度指數(shù)及峰匹配因子 峰窗口：顯示組分表窗口，未識別峰組的窗口比較：多譜圖中峰比較的排列方式，偏移度等 重疊：需要重疊的譜圖的選擇。 a、譜圖信息選擇“譜圖信息”，可以對字的大小，字體等進行修改，譜圖是水平還是垂直放置，修改完關閉即可。b、峰標簽選擇“峰標簽”，可以僅選擇“已識別峰”，要在峰頂上只標峰名和保留時間，可以把峰號（peak number）刪除；還可改變峰標簽的旋轉角度等，修改完關閉即可。C、加入要疊加的譜圖 選擇“重疊”. 比如要對標樣”1”2”，”3”的譜圖進行疊加，在彈出框點下方的“添加”，將

22、要疊加的譜圖”2”，”3”一一選上。 在彈出框中先選樣品序列如“Exercise 1 (linear) 再選擇要疊加的標準樣還必須選擇通道，點擊疊加。下圖中已將第二,三個標樣加進來了。 同樣的道理可將其它要疊加的譜圖加進來。比較選項 在屬性框中選擇“比較”選項：將“時間偏移和信號偏移”左邊的兩個勾都去掉，此時三個色譜峰就完全重疊。重疊效果圖改變 如果把排列方式選為“堆棧”模式，顯示如下譜圖 3) 、“積分結果”表的修改包括報告列名和報告表行等修改。a、要改變列名時，可以雙擊積分結果表中的列名處，彈出“屬性報告列”框，在彈出框中“峰結果”右邊選連接的變量，可以選你所要的如“分離度”。也可以選“理

23、論塔板數(shù)”“信/噪比”“不對稱性”等，點擊確定。通過修改可以得到你所要求的滿意的結果報告列內容。結果報告中最受關心的是樣品量，單位可以是mg，mg/l，也可以是100%，只要在樣品序列表中未知樣品行已輸入樣品重量及稀釋因子，那么在下圖公式中乘上100即可得100的結果。峰結果中峰面積，變色龍用的單位是mAU*min ，有單位習慣用UAU*S只要在公式中乘1000再乘60即可。b、表格屬性的修改：在列名處點擊右鍵，彈出下拉菜單包括有表格屬性，插入列，刪除列等，可以進行表格屬性的修改，也可以進行插入列、刪除列的修改； 選擇“表格屬性”可以對積分結果表的行進行修改，在彈出“屬性”框中可以對要打印報告

24、的組分峰進行篩選，如在“包含未識別峰”前打勾，那么積分結果表中除了A、B、C組分外還有未知峰信息。通過修改可以得到你所要求的滿意的結果報告內容，最后點擊色譜工作區(qū)左上角的“保存”。4、混合組分校正曲線圖如有a，b，c 三個標準物，可以把3個標準曲線打印在一張圖中。 點擊下面的“校準”選項，進入校準表界面，把第一張A組分校準圖向左邊縮小，然后復制A組分圖得第二張A圖；也可點擊工具欄的“插入”及“校準”得第二張A圖。雙擊要修改的第二圖或者右擊選擇屬性，出現(xiàn)以下對話框，在組分下選中“選擇名稱固定組分”點擊右邊箭頭按鈕選B，第二圖由A標準曲線改為B標準曲線，同樣的方法得C的標準曲線圖。5、.峰分析 一

25、個分析方法是否可行要有分離度（Resol.）、對稱性（Asym.）、理論塔板數(shù)（Plates）信噪比等指標評定。變色龍軟件專門有一頁峰分析。點擊圖下面“峰分析”選項，在峰結果表中已有峰名稱、保留時間、半峰寬、類型、分離度、不對稱性、和塔板數(shù)列，假如需要加入信噪比，可以點擊如“類型”列處，在彈出的屬性報告列框中選“峰結果”右邊動態(tài)連接的“信噪比”，點擊確定，“類型”列立即改為“信噪比”列。6、總結表每當分析完一個樣品序列，可做標準品的統(tǒng)計，得到平均值和RSD ,也可對平行樣品進行統(tǒng)計。單擊列名處，圖中功能區(qū)出現(xiàn)：包含進樣類型、排序、分組、列、列屬性及結果圖等區(qū)域，上面有“總結表”。1）、點擊“總

26、結表”選擇要統(tǒng)計的對象在“包含進樣類型區(qū)”出現(xiàn)各種瓶標志，如果只選校準標準品，在“序列信息”下就顯示標準品進行統(tǒng)計。2）、也可在列表處單擊右鍵，在下拉菜單中點“表格屬性”選要統(tǒng)計的對象在彈出框中“篩選進樣”下有校準標準品、未知樣等，自定義條件下在“僅包含符合以下條件的進樣”前打勾，匹配選“所有”，再下面空格處點右邊箭頭按鈕，出現(xiàn)下拉菜單有級別、類型、位置、進樣量、重量、名稱等項，選中“級別”，中間的格中選“包含”再右邊自動出現(xiàn)0105級別，如只選01，圖中顯示4個同等級別的標準品進行統(tǒng)計。3）、要把組分A、B、C 的標準校準統(tǒng)計打印在一個表內，只要把“按組分A”區(qū)選中拉黑復制，然后在復制區(qū)中，

27、要把所有組分A都改為組分B.（不能直接改寫）在復制區(qū)雙擊“按組分 A”，彈出下面“報告公式屬性”表，左選中“組分”、動態(tài)連接右中選“名稱”，在右下角組分處單擊箭頭按鈕，可以從中選B組分，以此類推做組分C表，之后一起打印。4）、選擇平行樣品做統(tǒng)計如果要對平行樣品做統(tǒng)計，下圖中選“名稱”，中間選“包含”，右邊出現(xiàn)序列中5個級別的標準及Sample A和Sample B。選中Sample A 那么就對Sample A進行統(tǒng)計，如下圖中只顯示Sample A兩平行樣品，自己可以在表格中添加一行“平均”和一行“RSD”那么統(tǒng)計表就完美了。7、審計跟蹤報告 點擊圖下面的“審計跟蹤”選項，顯示分析整個樣品序列過程中系統(tǒng)參數(shù)的變化。8、保存修改后報告模板報告模板修改完成后，點擊左上角綠色變色龍圖標，保存-另存報告模板為，選擇保存路徑