生物化學(xué)課程要點1

1、導(dǎo) 論生物化學(xué)是生命的化學(xué)，是研究生物體的化學(xué)組成（生物分子）和生命活動過程中的化學(xué)變化的一門科學(xué)。 一、生物化學(xué)主要涉及以下幾個方面的內(nèi)容 生物分子的結(jié)構(gòu)與功能：生物分子包括生物小分子和生物大分子，生物小分子主要有氨基酸、單糖、核苷酸、脂肪酸、甘油和維生素等，構(gòu)成相應(yīng)的生物大分子蛋白質(zhì)、多糖、核酸和脂肪等。生物分子之間的相互作用：生物體生命活動的執(zhí)行和實施是通過生物分子之間的相互作用完成的。生物分子的合成與分解。合成的代謝產(chǎn)物除了用來構(gòu)成生物體外，還可以儲存和運(yùn)輸能量。生物分子的分解可為合成代謝提供原料，并釋放出大量的能量來完成生物體的生命活動。能量的產(chǎn)生、儲存和利用。生物分子的組裝與協(xié)調(diào)。

2、遺傳信息的貯存、傳遞和表達(dá)調(diào)控。二、本課程的結(jié)構(gòu)、重點與難點 第一部分：生物分子的結(jié)構(gòu)與功能。包括氨基酸和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能（第二章、第三章）；酶的結(jié)構(gòu)與功能（第四章）；核酸的結(jié)構(gòu)與功能（第五章）；糖類的結(jié)構(gòu)與功能（第六章）；脂類與生物膜的結(jié)構(gòu)與功能（第七章）。重點：氨基酸與蛋白質(zhì)、酶、核酸的結(jié)構(gòu)與功能。難點：氨基酸的酸堿性質(zhì)；蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的確定；蛋白質(zhì)的分離與鑒定；酶反應(yīng)動力學(xué)酶的活性調(diào)節(jié)；核苷酸與核酸的結(jié)構(gòu)；RNA的結(jié)構(gòu)特征。 第二部分：物質(zhì)代謝及其調(diào)節(jié)。包括生物能學(xué)和代謝總論（第八章、第九章、第十二章、第十四章）；糖代謝（第十章、第十一章、第十三章）；脂類代謝（第十五章）；氨基酸代謝（

3、第十六章）；核苷酸代謝（第十七章）；物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)（第十八章）。重點：生物體內(nèi)ATP的產(chǎn)生；糖代謝；脂類代謝；物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)。難點：生物氧化還原反應(yīng)中自由能變化；電子傳遞與氧化磷酸化；三羧酸循環(huán)（檸檬酸循環(huán)）；脂肪酸的生物合成；核苷酸的生物合成第三部分：遺傳信息的貯存、傳遞和表達(dá)調(diào)控。包括DNA的復(fù)制、修復(fù)與重組（第十九章）；基因的轉(zhuǎn)錄與加工（第二十章）；蛋白質(zhì)的生物合成（第二十一章）；基因的表達(dá)與調(diào)控。重點：基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。難點：真核生物的基因表達(dá)調(diào)控 第一章 氨基酸與蛋白質(zhì)1. 蛋白質(zhì)的生物學(xué)意義 2. 蛋白質(zhì)的元素組成3. 蛋白質(zhì)的氨基酸組成 4. 肽5. 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu) 6. 蛋白質(zhì)

4、分子結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系7. 蛋白質(zhì)的性質(zhì) 8. 蛋白質(zhì)的分類蛋白質(zhì) 是由許多不同的-氨基酸按一定的序列通過酰胺鍵（肽鍵）縮合而成的，具有較穩(wěn)定的構(gòu)象并具有一定生物功能的大分子。第一節(jié) 蛋白質(zhì)的生物學(xué)意義1. 生物體的組成成分 2. 酶 3. 運(yùn)輸4. 運(yùn)動 5. 抗體 6. 干擾素7. 遺傳信息的控制 8. 細(xì)胞膜的通透性 9. 高等動物的記憶、識別機(jī)構(gòu)第二節(jié) 蛋白質(zhì)的組成一、 蛋白質(zhì)的元素組成C（5055%）、H（68%）、O（2023%）、N（1518%）、 S（04%）、N的含量平均為16%凱氏（Kjadehl）定氮法的理論基礎(chǔ)。二、蛋白質(zhì)的氨基酸組成氨基酸 是蛋白質(zhì)的基本組成單位。從細(xì)菌

5、到人類，所有蛋白質(zhì)都由20種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸（20 standard amino acids)組成。（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)通式：19種氨基酸具有一級氨基（-NH3+）和羧基（-COOH）結(jié)合到碳原子（C），同時結(jié)合到（C）上的是H原子和各種側(cè)鏈（R）；Pro具有二級氨基（-亞氨基酸）COOH COO- l lH2NCH +H3NCH l lR R不帶電形式 兩性離子形式 C如是不對稱C（除Gly），則：1. 具有兩種立體異構(gòu)體 D-型和L-型2. 具有旋光性 左旋（-）或右旋（+）（二）氨基酸的分類1. 根據(jù)R的化學(xué)結(jié)構(gòu)（1）脂肪族氨基酸：1）疏水性：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Cy

6、s；2）極性：Arg、Lys、Asp、Glu、Asn、Gln、Ser、Thr（2）芳香族氨基酸：Phe、Tyr（3）雜環(huán)氨基酸：Trp、His（4）雜環(huán)亞氨基酸：Pro2. 根據(jù)R基團(tuán)的極性分（1）非極性氨基酸：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Met、Pro、Trp（2）極性氨基酸：1）不帶電：Ser、Thr、Asn、Gln、Tyr、Cys；2）帶正電：His、Lys、Arg；3）帶負(fù)電：Asp、Glu3. 其它氨基酸第三節(jié) 氨基酸的性質(zhì)無色晶體，熔點極高（200以上），有不同味道；水中溶解度差別較大（極性和非極性），不溶于有機(jī)溶劑。一 氨基酸的構(gòu)型和旋光性除Gly外，19種氨

7、基酸的-碳原子都是不對稱碳原子，因此有兩種光學(xué)異構(gòu)體。 Thr、Ile有四種光學(xué)異構(gòu)體。 旋光性：使偏振光平面逆時針方向（左手，）或順 時針方向（右手，）旋轉(zhuǎn)的性質(zhì)。二 酸堿性質(zhì)Henderson-Hasselbalch 方程 ：HA = A- + H+ Ka=H+×A-/ HAH+×（A-/ HA) 兩邊取負(fù)對數(shù) pKapHlg（A-/ HA） pHpKa+ lg（A-/ HA）pKa+ lg(堿/酸) 在這里能接受H+（質(zhì)子受體）的A-被看作廣義的堿，而能釋放H+（質(zhì)子供體）的HA被看作廣義的酸。 Gly 的 解 離甘氨酸解離曲線等電點（等電pH，pI）兩性電解質(zhì)凈電荷

8、為零時溶液的pH值。等電點時，電解質(zhì)在電場中不運(yùn)動側(cè)鏈不解離的中性氨基酸pIpK1pK2/2三 化學(xué)性質(zhì)1. 氨基酸的甲醛滴定可直接用來測定氨基酸濃度2. 與亞硝酸反應(yīng)3. ?；磻?yīng)4. 烴基化反應(yīng)（1） Sanger反應(yīng)：2,4-二硝基氟苯（DNFB）（2） Edman反應(yīng)：苯異硫氰酸酯（PITC）5. 生成西佛堿的反應(yīng)6. 脫氨基反應(yīng)7. 成酯反應(yīng)8. 成酰氯反應(yīng)9. 疊氮反應(yīng)10. 成肽反應(yīng)11. 與茚三酮的反應(yīng)紫色復(fù)合物：570 nm亮黃色化合物：脯氨酸、羥脯氨酸 440 nm四 氨基酸的紫外吸收第四節(jié) 蛋 白 質(zhì) 結(jié) 構(gòu)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)層次一 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)氨基酸脫水縮合成肽肽 與 肽

9、鍵牛催產(chǎn)素：促使子宮收縮、分娩牛加壓素：促使小動脈收縮及腎小管重吸收水，抗利尿激素舒緩激肽：促進(jìn)血管舒張及水、鈉排出，降壓兩種腦啡肽：強(qiáng)烈鎮(zhèn)痛物質(zhì)，類似于鴉片劑蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 概況 :理想方法是從N端直接測至C端 ，間接法序列測定前的準(zhǔn)備工作：樣品的純度:97%以上 相對分子質(zhì)量肽鏈的數(shù)目氨基酸組成一級結(jié)構(gòu)的測定主要用小片段重疊的原理 蛋白質(zhì)測序的一般步驟1. 測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。2. 拆分蛋白質(zhì)分子中的多肽鏈。3. 測定多肽鏈的氨基酸組成。4. 斷裂鏈內(nèi)二硫鍵。5. 分析多肽鏈的N末端和C末端。6. 多肽鏈部分裂解成肽段。7. 測定各個肽段的氨基酸順序8. 確定肽段在多肽鏈中

10、的順序。9. 確定多肽鏈中二硫鍵的位置。序列測定方法 （1）末端分析：包括N端分析，C端分析 N端分析方法 二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法） 丹磺酰氯法（DNS法）：最常用，黃色熒光，靈敏度極高，DNS-多肽水解后的DNS-氨基酸不需要提取。 苯異硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Edman降解法 ） 氨肽酶（aminopeptidase, Apase）法 A B BN端亮氨酸氨肽酶（Leucine amino peptidase, LAP）專一性:A=非極性氨基酸時 快A=其它氨基酸時 慢A=Leu時 最快N端氨基封閉的幾種情況：焦谷氨酰環(huán)化：焦谷氨酸氨肽酶 乙

11、?；?環(huán)肽 C端分析 硼氫化鋰還原法 肼解法：也稱聯(lián)氨法 氨基酸酰肼與苯甲醛作用變?yōu)樗蝗苄缘亩交苌颎ln、Asn、Cys易破壞，Arg轉(zhuǎn)變?yōu)轼B氨酸 羧肽酶（carboxypeptidase, Cpase）法 4種羧肽酶的來源和專一性 （2）肽鏈的拆開和分離 共價鍵：過甲酸氧化 SS+HCOOOH SO3H巰基乙醇還原： 非共價鍵：8mol/L尿素，SDS （3）肽鏈的部分水解 化學(xué)方法： 溴化氰（CNBr）裂解法:酶解方法 （4）肽段的分離和氨基酸序列測定 電泳法 根據(jù)分子量大小分離離子交換層析法（DEAECellulose、DEAESephadex） 根據(jù)肽段的電荷特性分離反相法 根

12、據(jù)肽段的極性分離凝膠過濾 （5）找重疊肽從而推斷整個肽鏈的氨基酸序列 （6）二硫鍵位置的確定 對角線電泳 過甲酸 磺基丙氨酸二 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)不可能的空間構(gòu)象側(cè)鏈對螺旋的影響無規(guī)卷曲指不能歸入明確的二級結(jié)構(gòu)如折疊片和螺旋的多肽區(qū)段。常構(gòu)成酶的活性中心和蛋白質(zhì)的特異功能部位。燙發(fā)的生物化學(xué)原理 角蛋白結(jié) 構(gòu) 域按結(jié)構(gòu)域的分類三 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)肌紅蛋白的三級結(jié)構(gòu)四 蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)締合蛋白的優(yōu)越性第五節(jié) 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能一 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)決定其高級結(jié)構(gòu)（三維結(jié)構(gòu)、構(gòu)象）。多聚丙氨酸在pH7溶液中能自發(fā)形成螺旋，而多聚賴氨酸卻不能。二 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)具有種族特異性細(xì)胞色素C進(jìn)化樹三 蛋白質(zhì)

13、的三維結(jié)構(gòu)決定其生物學(xué)功能。蛋白質(zhì)變性與復(fù)性第六節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化一 根據(jù)分子大小不同的純化方法1. 透析和超濾：利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜的性質(zhì)。2. 密度梯度離心：質(zhì)量和密度大的顆粒比質(zhì)量和密度小的顆粒沉降得更快，當(dāng)某種蛋白質(zhì)顆粒沉降到與自身密度相等的密度梯度介質(zhì)中時，即停止不前。3. 凝膠過濾：分子排阻層析，分子篩，凝膠滲透層析二 根據(jù)蛋白質(zhì)帶電情況分離純化蛋白質(zhì)具有兩性電離的性質(zhì)，在不同pH值溶液中帶電情況不同。1. 離子交換層析2. 蛋白質(zhì)電泳（NativePAGE，SDSPAGE）3. 等電聚焦蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點蛋白質(zhì)在其等電點偏酸溶液中帶正電荷，在偏堿溶液中帶負(fù)電荷，

14、在等電點pH時為兩性離子。電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同的蛋白質(zhì)所帶凈電荷密度不同，遷移率即異，在電泳時可以分開。1. 自由界面電泳：蛋白質(zhì)溶于緩沖液中進(jìn)行電泳。2. 區(qū)帶電泳：將蛋白質(zhì)溶液點在浸了緩沖液的支持物上進(jìn)行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。（1）紙上電泳：用濾紙作支持物。（2）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。1）圓盤電泳：玻璃管中進(jìn)行的凝膠電泳。2）平板電泳：鋪有凝膠的玻板上進(jìn)行的電泳。等電聚焦電泳：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在其等電點時，凈電荷為零，在電場中不再移動。三 親和層析法利用蛋白質(zhì)與其配體（ligand）之間的相互作用，如抗原與抗體、酶與底物、激素與受體、

15、細(xì)胞因子與受體等蛋白質(zhì)與配體之間發(fā)生特異性結(jié)合，而這種結(jié)合又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應(yīng)抗體（或抗原）選擇性地結(jié)合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開，達(dá)到分離提純的目的。 四 檢測技術(shù)1. SDSPAGE2. 免疫印跡技術(shù)（Western-blotting）蛋白質(zhì)的電泳分離將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上，用非特異性，非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域免疫學(xué)檢測。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端，極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度，使其成為使用最廣泛的免疫化學(xué)方法之一。 3. 酶聯(lián)免疫分析（enzyme

16、 linked immunosorbant assay ，ELISA）將已知的抗體或抗原結(jié)合在某種固相裁體上，并保持其免疫活性。 測定時，將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)。 用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離成分。 然后加入酶的作用底物催化顯色，底物顯色后用肉眼或分光光度計判定結(jié)果，進(jìn)行定性或定量測定。第七節(jié)蛋白質(zhì)的性質(zhì)一 蛋白質(zhì)的相對分子量蛋白質(zhì)相對分子量在10 0001 000 000之間。測定分子量的主要方法有滲透壓法、超離心法、凝膠過濾法、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。最準(zhǔn)確可靠的方法是超離心法（Svedberg于1940年設(shè)計）：蛋白質(zhì)顆粒在255

17、0*104 g離心力作用下從溶液中沉降下來。沉降系數(shù)（s）：單位（cm）離心場里的沉降速度。v =沉降速度（dx/dt）=離心機(jī)轉(zhuǎn)子角速度（弧度/s）x =蛋白質(zhì)界面中點與轉(zhuǎn)子中心的距離（cm）沉降系數(shù)的單位常用S，1S=1×10-13（s）蛋白質(zhì)分子量（M）與沉降系數(shù)（s）的關(guān)系二 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)1. 加高濃度鹽類（鹽析）：加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出。分段鹽析：調(diào)節(jié)鹽濃度，可使混合蛋白質(zhì)溶液中的幾種蛋白質(zhì)分段析出。血清球蛋白（50%(NH4)2SO4飽和度），清蛋白（飽和(NH4)2SO4)。2. 加有機(jī)溶劑3. 加重金屬鹽4. 加生物堿試劑單寧酸、苦味酸、鉬酸、鎢酸、三氯乙酸能沉淀生

18、物堿，稱生物堿試劑。三 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)思考題一個谷氨酸溶液，用5m1 1mo1/LNa0H來滴定，溶液的pH從1.0上升到7.0，下列數(shù)值中哪一個接近于該溶液中所含谷氨酸的毫摩爾數(shù)? E.18.0 一、A型題（1-32)1.使蛋白質(zhì)和酶分子顯示巰基的氨基酸是 A.蛋氨酸 B.胱氨酸 C.半胱氨酸 D.谷氨酸 E.賴氨酸2.蛋白質(zhì)分子引起280nm光吸收的最主要成分是 A.肽鍵 B.半胱氨酸的-SH基 C.苯丙氨酸的苯環(huán) D.色氨酸的吲哚環(huán) E.組氨酸的咪唑環(huán)3.天然蛋白中不存在的氨基酸是 A.半胱氨酸 B.瓜氨酸 C.脯氨酸 D.蛋氨酸 E.絲氨酸4.以下哪一種氨基酸不具備不對稱碳原子 A.

19、甘氨酸 B.絲氨酸 C.半胱氨酸 D.蘇氨酸 E.丙氨酸5.維系蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵是 A.氫鍵 B.肽鍵 C.鹽鍵 D.疏水鍵 E.范德華力6.下列氨基酸不含極性側(cè)鏈的是 A.絲氨酸 B.蘇氨酸 C.亮氨酸 D.酪氨酸 E.半胱氨酸7.下列對氨基酸的敘述錯誤的是 A.賴氨酸和精氨酸都是堿性氨基酸 B.谷氨酸和天冬氨酸各含兩個氨基 C.絲氨酸和酪氨酸均含羥基 D.纈氨酸和亮氨酸屬支鏈氨基酸 E.苯丙氨酸和酪氨酸均含苯環(huán)8.下列含有兩個羧基的氨基酸是 A.丙氨酸 B.酪氨酸 C.賴氨酸 D.甘氨酸 E.谷氨酸9.組成蛋白質(zhì)的基本單位是A.L-氨基酸 B.D-氨基酸 C.L-氨基酸 D.L,D-

20、氨基酸 E.D-氨基酸10.下列哪一物質(zhì)不屬于生物活性肽 A.胰高血糖素 B.短桿菌素S C.催產(chǎn)素 D.胃泌素 E.血紅素11.下列關(guān)于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)敘述中，不正確的是 A.一級結(jié)構(gòu)決定二、三級結(jié)構(gòu) B.二、三級結(jié)構(gòu)決定四級結(jié)構(gòu) C.三級結(jié)構(gòu)即具有空間構(gòu)象 D.無規(guī)卷曲是在一級結(jié)構(gòu)上形成的 E.螺旋又稱為二級結(jié)構(gòu)12.可以裂解肽鏈中蛋氨酸殘基末端的試劑有 A.羥胺 B.溴化氰 C.胃蛋白酶 D.中等強(qiáng)度的酸 E.胰蛋白酶13.有一血清清蛋白（pI=6.85）的混合物，在哪種條件下電泳、分離效果最好 A.pH4.9 B.pH5.9 C.pH6.5 D.pH8.6 14.可用于測定多肽N端氨基酸的試

21、劑有 A.丹磺酰氯 B.巰基乙醇 C.溴化氫 D.羥胺 E.甲酸15.變性蛋白質(zhì)的特點是 A.粘度下降 B.喪失原有的生物活性 C.顏色反應(yīng)減弱 D.溶解度增加 E.不易被胃蛋白酶水解 16.蛋白質(zhì)變性是由于 A.蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)改變 B.蛋白質(zhì)空間構(gòu)象的改變 C.輔基的脫落 D.蛋白質(zhì)水解 E.以上都不是 17.下列有關(guān)蛋白質(zhì)片層結(jié)構(gòu)的敘述正確 的是 A.主鏈骨架呈鋸齒狀 B.兩個相鄰的肽平面呈折紙狀 C.片層結(jié)構(gòu)是一種較伸展的肽鏈結(jié)構(gòu) D.若干矩齒狀肽鏈骨架平行或反平行排列，鏈間靠氫鍵維系 E.以上都正確18.可用于蛋白質(zhì)定量的測定方法有 A.雙縮脲法 B.紫外吸收法 C.Folin酚試劑法

22、 D.凱氏定氮法 E.以上都可以 19.蛋白質(zhì)多肽鏈具有的方向性是 A.從3端到5端 B.從5端到3端 C.從C端到N端 D.從N端到C端 E.以上都不是20.血漿蛋白質(zhì)的pI大多為pH5-6，它們在血液中的主要存在形式是 A.兼性離子 B.帶負(fù)電荷 C.帶正電荷 D.非極性分子 E.疏水分子21.蛋白質(zhì)分子中的螺旋和片層都屬于 A.一級結(jié)構(gòu) B.二級結(jié)構(gòu) C.三級結(jié)構(gòu) D.域結(jié)構(gòu) E.四級結(jié)構(gòu)22.螺旋每上升一圈相當(dāng)于氨基酸殘基的個數(shù)是 B.3.6 E.2.5 23. 維持蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要化學(xué)鍵是 A.疏水鍵 B.鹽鍵 C.肽鍵 D.氫鍵 E.二硫鍵24.關(guān)于蛋白質(zhì)分子三級結(jié)構(gòu)的描述，其

23、中錯誤的是 A.具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈都具有生物學(xué)活性 B.天然蛋白質(zhì)分子均有這種結(jié)構(gòu) C.三級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性主要是次級鍵維系 D.親水基團(tuán)多聚集在三級結(jié)構(gòu)的表面 E.決定盤曲折疊的因素是氨基酸殘基25. 下列蛋白質(zhì)通過凝膠過濾層析時最先被洗脫的是 A.馬肝過氧化氫酶(相對分子質(zhì)量247500) B.肌紅蛋白(相對分子質(zhì)量16900) C.人血清清蛋白(相對分子質(zhì)量68500) D.牛乳球蛋白(相對分子質(zhì)量35000) E.牛胰島素(相對分子質(zhì)量5733)26.在生理pH 下，下列哪一種是帶正電荷的氨基酸 A.半胱氨酸 B.谷氨酸 C.賴氨酸 D.色氨酸 E.纈氨酸27.蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)及高級結(jié)構(gòu)

24、決定于 A.亞基 B.分子中鹽鍵 C.氨基酸組成和順序 D.分子內(nèi)部疏水鍵 E.分子中氫鍵28.蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定因素是 A.蛋白質(zhì)溶液的粘度大 B.蛋白質(zhì)在溶液中有布朗運(yùn)動 C.蛋白質(zhì)分子表面帶有水化膜和同種電荷 D.蛋白質(zhì)溶液有分子擴(kuò)散現(xiàn)象 E.蛋白質(zhì)分子帶有電荷29.有關(guān)血紅蛋白(Hb)和肌紅蛋白(Mb) 的敘述不正確的是 A.都可以和氧結(jié)合 B.Hb和Mb都含鐵 C.都是含輔基的結(jié)合蛋白 D.都具有四級結(jié)構(gòu)形式 E.都屬于色蛋白類 30.下面哪一種氨基酸是前體摻入多肽后才合成的 A.脯氨酸 B.賴氨酸 C.羥脯氨酸 D.谷氨酸 E.絲氨酸31.有一蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物在pH 6用陽離子交換柱層

25、析時，第一個被洗脫下來的氨基酸是 A.Val(pI5.96) B.Lys(pI9.74) C.Asp(pI2.77) D.Arg(pI10.76) E.Tyr(pI5.66)32.經(jīng)測定，一血清標(biāo)本的含氮量為10g/L ，那么，蛋白質(zhì)的濃度是多少 A. 52.5g/L B. 57.5g/L C. 62.5g/L D. 67.5g/L E. 72.5g/L 二、B型選擇題(33-52)A.堿性氨基酸 B.亞氨基酸C.芳香族氨基酸D.含硫氨基酸E.含羥基氨基酸33.脯氨酸34.色氨酸35.蛋氨酸36.絲氨酸37.組氨酸A一級結(jié)構(gòu)B二級結(jié)構(gòu)C三級結(jié)構(gòu)D四級結(jié)構(gòu)E超二級結(jié)構(gòu) 38.蛋白質(zhì)變性，何結(jié)構(gòu)未

26、破壞39.亞基具有幾級結(jié)構(gòu)40.有活性的血紅蛋白 A.凝膠過濾B.離子交換層析C.親和層析D.超速離心E.聚丙烯酰胺凝膠電泳41.根據(jù)蛋白質(zhì)的密度與形態(tài)來分離蛋白質(zhì)42.根據(jù)蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性來分離蛋白質(zhì)43.根據(jù)蛋白質(zhì)分子量和所攜帶的電量來分離蛋白質(zhì)A.胰蛋白酶B.8mol/L 尿素C.溴化氰D.2-巰基乙醇E.過甲酸44.削弱或斷裂氫鍵45.還原二硫鍵46.水解賴氨酸或精氨酸羧基側(cè)肽鍵A.鹽鍵 B.二硫鍵C.肽鍵D.疏水鍵E. 3,5-磷酸二酯鍵47.連接蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的鍵為48.連接核酸一級結(jié)構(gòu)的鍵為49.在蛋白質(zhì)分子中谷氨酸和精氨酸側(cè)鏈之間可形成A.-巰基乙醇B.鹽酸胍C.碘乙酸D.S

27、DSE.以上都不是50.能與蛋白質(zhì)半胱氨酸的-SH反應(yīng)生成羧甲基衍生物的是51.使蛋白質(zhì)亞基解聚和變性但不向蛋白質(zhì)分子中引入負(fù)電荷的是52.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量時可用作去污劑的是三、答案及題解 1. C評析：組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸中只有半胱氨酸是含有巰基的氨基酸。2.D評析：280nm 波長附近具有最大光吸收峰是色氨酸的一個特點。3. B評析：瓜氨酸不存在于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中，只是參加尿素的合成。4. A評析：組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸中只有甘氨酸不具有不對稱碳原子。5. B評析:維系蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵是肽鍵。6. C評析:絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸側(cè)鏈都含有極性的側(cè)

28、鏈基團(tuán)，亮氨酸屬于非極性疏水性氨基酸。7. B評析:谷氨酸的兩個羧基，一個在碳原子上，一個在碳原子上。 8. E評析：天冬氨酸和谷氨酸都是酸性氨基酸，各含兩個羧基。9. A評析：組成蛋白質(zhì)的基本單位是L-氨基酸（除甘氨酸外）。10. E評析：血紅素屬于鐵卟啉化合物，是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素等的輔基。11.B評析：一級結(jié)構(gòu)是空間結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)，具有二條以上多肽鏈組成的蛋白質(zhì)才具有四級結(jié)構(gòu)。12.B評析：溴化氰專一水解蛋氨酸羧基側(cè)的肽鍵。13.D評析：選擇pH8.6條件下電泳時距離清蛋白的pI6.85最遠(yuǎn)所以帶電荷最多，分離效果最好。14.A評析：丹磺酰氯和2，4-二硝基氟苯做為測 定多肽鏈N-

29、未端氨基酸的試劑。15.B 評析：蛋白質(zhì)變性后，由于空間結(jié)構(gòu)破壞因此生物學(xué)活性喪失。變性的蛋白質(zhì)溶解度下降，粘度增加，呈色反應(yīng)增強(qiáng)，易被蛋白酶消化。16.B評析：蛋白質(zhì)變性是由于空間構(gòu)象的改變，而一級結(jié)構(gòu)不改變。17.E評析：片層屬二級結(jié)構(gòu)，其形狀呈折紙狀。在片層結(jié)構(gòu)中，多肽鏈充分伸展，折疊成鋸齒狀結(jié)構(gòu)，平行的多肽鏈之間通過氫鍵維持穩(wěn)定。18.E評析：蛋白質(zhì)定量的測定方法有雙縮脲法、紫外吸收法、Fol i n酚試劑法、凱氏定氮法和考馬斯亮藍(lán)法等。19.D評析：蛋白質(zhì)多肽鏈的方向是從N端往C端方向。20.A評析：血液中的pH為7.2,大于血漿蛋白質(zhì)的等電點,因此血漿蛋白質(zhì)在血液中帶負(fù)電荷。21.

30、 B評析：螺旋和片層都屬于蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)。22.B評析: 螺旋每上升一圈相當(dāng)于氨基酸殘基的個數(shù)是3.6個氨酸酸殘基。23.C評析: 維持蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要化學(xué)鍵是氫鍵。24.A評析：一條多肽鏈組成的蛋白質(zhì)必需具有三級結(jié)構(gòu)才具有生物學(xué)活性，而二條以上多肽鏈組成的蛋白質(zhì)有四級結(jié)構(gòu)才具有生物學(xué)活性。25.A評析：大分子先被洗脫，因小分子進(jìn)入凝膠微孔后被洗脫。26.C評析：在生理pH 下，賴氨酸的-氨基帶正電荷，谷氨酸側(cè)鏈羧基帶負(fù)電荷。本題中其余的氨基酸側(cè)鏈均不帶電荷。27.C評析：蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)是空間結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)分子中氨基酸的排列順序稱為蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。28.C評析：蛋白質(zhì)在溶液中穩(wěn)定因

31、素是水化膜和電荷。29.D評析：血紅蛋白有四個亞基組成具有四級結(jié)構(gòu)，而肌紅蛋白只有一條多肽鏈組成故只有三級結(jié)構(gòu)。30.C評析：羥脯氨酸不直接摻入多肽中。它是在蛋白質(zhì)合成后或合成過程中經(jīng)過化學(xué)修飾而成的。故它在生物體內(nèi)沒有相應(yīng)的遺傳密碼。31.C評析：離子交換劑是通過化學(xué)反應(yīng)將帶電基 團(tuán)引入到隋性支持物上形成的，如果 帶電基團(tuán)帶負(fù)電，能結(jié)合陽離子，稱陽離子交換劑，如果帶電基團(tuán)帶正電，能結(jié)合陰離子，稱陰離子交換劑。在pH 6條件下，Asp帶負(fù)電荷，Lys和Arg帶正荷，Val為兼性離子，陽離子交換 劑能吸咐帶正電荷的Lys和 Arg，排斥帶負(fù)電荷的Asp，故Asp第一個被洗脫下來。 32.C評析：

32、因蛋白質(zhì)含氮量平均為16%，測得含氮量即可計算蛋白質(zhì)的 濃度。1g 氮相當(dāng)6.25g蛋白質(zhì)。33.B評析：脯氨酸由于未端的C與氨基發(fā)生環(huán)化，比其他的氨基酸上的氨基少一個氫，故為亞氨基酸。34.C評析:色氨酸因含有吲哚環(huán)，故為芳香族氨基酸。35.D評析:蛋氨酸因為分子中含有硫和甲基故又稱為甲硫氨酸。36.E評析:絲氨酸因為分子中含有羥基故又稱為含有羥基的氨基酸。37.A 評析:組氨酸含有咪唑基，在生理條件下可帶有正電荷 ，故為堿性氨基酸。38.A評析：蛋白質(zhì)變性后，空間結(jié)構(gòu)破壞，不涉及一級結(jié)構(gòu)的改變。39.C 評析：具有完成三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈稱為蛋白質(zhì)的亞基。40.D評析:血紅蛋白是由2個亞基和2

33、個亞基組成的四聚體故有四級結(jié)構(gòu)。41.D評析：不同蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同可用超速離心的方法將它們分開。42.C評析: 根據(jù)蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性分離蛋白質(zhì)的是親和層析法。它是利用配體與待分離物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合而與其它物質(zhì)分離的方法，所以分離提純的效率極高。43.E評析:蛋白質(zhì)在高于或低于其pI 的溶液中是帶電的，在電場中能向電場的正極或負(fù)極移動。這種通過蛋白質(zhì)在電場中泳動而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù)，稱為電泳。44.B評析:尿素可破壞維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的次級鍵。45.D 評析:2-巰基乙醇是還原劑可使二硫鍵還原。46.A 評析:胰蛋白酶能水解賴氨酸或精氨酸的羧基所形成的肽鍵。47.C評析：蛋白質(zhì)

34、分子中氨基酸的排列順序稱為蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)，氨基酸之間是通過肽鍵連接。 48.E評析:核酸的一級結(jié)構(gòu)是指其中核苷酸的排列順序。核苷酸之間以.3,5-磷酸二酯鍵相連。49.A評析:谷氨酸的側(cè)鍵的羧基可與精氨酸側(cè)鍵的胍基之間形成鹽鍵。50.C評析:碘乙酸可與半胱氨酸-SH反應(yīng),生成羧甲基衍生物,其反應(yīng)式為:R-SH+ICH2COO- R-S-CH2COO- 51.B評析:6mol/L 鹽酸胍是一般蛋白質(zhì)的變性劑。52.D評析:大約一個SDS分子可與兩個肽鍵反應(yīng)，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量時可用作去污劑。第二章 酶的結(jié)構(gòu)與功能1. 酶的化學(xué)本質(zhì)、結(jié)構(gòu)和特性；2.

35、酶的作用動力學(xué)；3. 酶的作用機(jī)理；4. 酶的應(yīng)用；5. 別構(gòu)酶、共價調(diào)節(jié)酶、同工酶的概念、性質(zhì)、生物學(xué)意義。第一節(jié) 酶 通 論一、酶的概念 （一）酶的生物學(xué)意義 N2 + 3H2 _某些微生物_2NH3 （二）酶是生物催化劑 1酶與一般催化劑的共同點 （1）用量少而催化效率高 （2）能加快化學(xué)反應(yīng)的速度，但不改變平衡點，反應(yīng)前后本身不發(fā)生變化 （3）降低反應(yīng)所需的活化能 例 2H2O22H2O+O2 反 應(yīng)活化能非催化反應(yīng)75.24kJ/mol鈀催化反應(yīng)48.9kJ/molH2O2酶催化8.36kJ/mol2酶作為生物催化劑的特殊點 （1）高的催化效率 以摩爾為單位進(jìn)行比較，酶的催化效率比化

36、學(xué)催化劑高1071013倍，比非催化反應(yīng)高1081020倍。 例 2H2O22H2O+O2 1mol H2O2酶能催化 5×106mol H2O2的分解 1mol Fe3+只能催化6×10-4mol H2O2的分解 轉(zhuǎn)換數(shù)（turnover number, TN or kcat）: 每秒鐘或每分鐘，每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)，或每秒鐘或每分鐘每摩爾酶轉(zhuǎn)換底物的摩爾數(shù)。 （2）高的專一性（3）溫和的反應(yīng)條件 （4）酶在體內(nèi)受到嚴(yán)格調(diào)控 如酶濃度的調(diào)節(jié)、激素調(diào)節(jié)、反饋調(diào)節(jié)、抑制劑和激活劑的調(diào)節(jié)、別構(gòu)調(diào)節(jié)、酶的共價修飾調(diào)節(jié)、酶原活化等。 （5）酶的催化活力與輔酶、輔基和金屬離子有

37、關(guān) （三）酶的化學(xué)本質(zhì) 1大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)（Most enzymes are proteins） 1926年美國Sumner脲酶的結(jié)晶，并指出酶是蛋白質(zhì) 1930年Northrop等得到了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的結(jié)晶，并進(jìn)一步證明了酶是蛋白質(zhì)。 20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)某些RNA有催化活性，還有一些抗體也有催化活性，甚至有些DNA也有催化活性，使酶是蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)概念受到很大沖擊。 2某些RNA有催化活性 1982年美國T. Cech等人發(fā)現(xiàn)四膜蟲的rRNA前體能在完全沒有蛋白質(zhì)的情況下進(jìn)行自我加工，發(fā)現(xiàn)RNA有催化活性 1983年美國S.Altman等研究RNaseP（由20%蛋白質(zhì)和8

38、0%的RNA組成），發(fā)現(xiàn)RNaseP中的RNA可催化E. coli tRNA的前體加工。 Cech和Altman各自獨立地發(fā)現(xiàn)了RNA的催化活性，并命名這一類酶為ribozyme（核酶），2人共同獲1989年諾貝爾化學(xué)獎。 3抗體酶（abzyme） 抗體：與抗原特異結(jié)合的免疫球蛋白。 抗體酶：指具有催化功能的抗體分子，在抗體分子的可變區(qū)（即肽鏈的N端）是識別抗原的活性區(qū)域，這部分區(qū)域被賦予了酶的屬性。 1986年美國Schultz和Lerner兩個實驗室同時在Science上發(fā)表論文，報道他們成功地得到了具有催化活性的抗體。 4有些DNA也有催化活性 1995年Cuenoud等發(fā)現(xiàn)有些DNA分

39、子亦具有催化活性。 （四）酶的組成 1單純蛋白質(zhì)酶類 2綴合蛋白質(zhì)酶類 全酶=酶蛋白+輔助因子（輔酶、輔基或金屬離子） 輔酶（coenzyme）：與酶結(jié)合比較松弛，可透析除去。如輔酶I、輔酶II。 輔基（prosthetic group）：與酶結(jié)合緊密（以共價鍵結(jié)合），透析不能除去，須用化學(xué)的方法除去。如細(xì)胞色素氧化酶中的鐵卟啉。 （五）根據(jù)酶蛋白分子的特點將酶分成三類 1單體酶（monomeric enzyme） 2寡聚酶（oligomeric enzyme） 3多酶復(fù)合物（multienzyme complex） 二、酶的命名和分類 1961年國際酶學(xué)委員會（enzyme commissi

40、on）提出的酶的命名和分類方法。 （一）命名 1系統(tǒng)名稱（systematic name） （1）標(biāo)明底物，催化反應(yīng)的性質(zhì) 例:G-6-PF-6-P G-6-P異構(gòu)酶 （2）兩個底物參加反應(yīng)時應(yīng)同時列出，中間用冒號（:）分開。如其中一個底物為水時，水可略去。 例1： 丙氨酸+-酮戊二酸 谷氨酸+丙酮酸 丙氨酸:-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶 例2： 脂肪+H2O 脂酸+甘油 脂肪水解酶 2習(xí)慣名稱（recommended name） （1）底物 （2）反應(yīng)性質(zhì) （3）底物，反應(yīng)性質(zhì) （4）來源或其它特點 （二）系統(tǒng)分類法及編號 1分類: 6大類酶，氧轉(zhuǎn)水 裂異連2編號: 用4個阿拉伯?dāng)?shù)字的編號表示，數(shù)字

41、中用“·”隔開，前面冠以EC（為Enzyme Commission）。EC 類.亞類.亞亞類.排號，如EC l.1.1.1 Enzyme Handbook， Thomas E Barman編，Vol I, Vol II 1969年。 Enzyme Handbook，Thomas E. Barman編 Supplement I, 1974年。 （三）六大類酶催化反應(yīng)的性質(zhì) 1氧化還原酶類（oxido-reductases） 催化氧化還原反應(yīng)的酶，包括氧化酶類、脫氫酶類、過氧化氫酶、過氧化物酶等。 氧化酶類：催化底物脫氫，并氧化生成H2O或H2O2 。例：鄰苯二酚氧化酶（EC .1，鄰苯

42、二酚：氧氧化酶） 鄰苯二酚 鄰苯醌脫氫酶類：直接催化底物脫氫 例：乳酸脫氫酶（EC .27，L-乳酸：NAD+氧化還原酶） 2轉(zhuǎn)移酶類（transferases） 催化基團(tuán)的轉(zhuǎn)移 例：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）（EC .2，L-丙氨酸： 酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶） 3水解酶類（hydrolases） 4裂合酶類（lyases） 從底物移去一個基團(tuán)而形成雙鍵或逆反應(yīng) 例1：例2：5異構(gòu)酶類（isomerase） 催化異構(gòu)化反應(yīng) 例：6連接酶類（ligases, 也稱synthetases合成酶類） 將兩個小分子合成一個大分子，通常需要ATP供能。 例： 乙酸 + CoA-SH + ATP 乙酰-S-CoA

43、+ AMP + PPi在某些細(xì)菌中可發(fā)生以下反應(yīng)：半胱氨酸丙酮酸NH3H2S 半胱氨酸去硫氫基酶 CO2NH3H2O氨甲酰磷酸2ADPPi氨甲酰磷酸合成酶I三、酶的分離、提純及活力測定 （一）酶的分離提純 1選材 2破碎細(xì)胞 3抽提 4去核酸、去多糖 5純化 6保存 由于酶的特殊性，在純化過程中要注意 :1全部操作在低溫04。 2在分離提純過程中，不能劇烈攪拌。 3在提純?nèi)軇┲屑右恍┍Ｗo(hù)劑，如少量EDTA、少量-巰基乙醇。 4在分離提純過程中要不斷測定酶活力和蛋白質(zhì)濃度，從而求得比活力，還要計算總活力。 步驟酶活力蛋白質(zhì)濃度比活力總活力(NH4)2SO4 沉淀   

44、; 乙醇沉淀    總活力單位體積的酶活力(U/ml)×分離溶液總體積(ml)純化倍數(shù)每次比活力/第一次比活力回收率每次總活力/第一次總活力（二）酶活力的測定（P336） 酶活力（enzyme activity, 也稱酶活性）：催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力。用一定條件下催化某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率來表示。酶活力的測定：單位時間酶催化的化學(xué)反應(yīng)量；或完成一定反應(yīng)所需要的時間。 1測定酶活力時應(yīng)注意幾點 （1）應(yīng)測反應(yīng)初速度（initial velocity or initial speed） （2）酶的反應(yīng)速度一般用單位時間內(nèi)產(chǎn)物的增加量來表示

45、。 （3）測酶活力時應(yīng)使反應(yīng)溫度、pH、離子強(qiáng)度和底物濃度等因素保持恒定。 （4）測定酶反應(yīng)速度時，應(yīng)使S>>E。 2酶活力和比活力表示方式 （1）酶活力（enzyme activity） 酶活力的定義 酶單位的定義：酶活力的大小用酶活力單位來表示，簡稱酶單位（unit, U）。1961年國際酶單位（IU），1972年Katal（簡稱Kat）單位 。習(xí)慣上沿用的單位如 :乳酸脫氫酶的活力可用丙酮酸的增加量表示，也可用340nm光吸收的增加量來表示。 （2）酶的比活力（specific activity，也稱比活性） 比活力：指每mg蛋白質(zhì)所具有的酶活力，一般用U/mg蛋白質(zhì)來表示，

46、比活力說明酶的純度。 比活力= 酶活力（U/ml）/蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）比活力有時也可用每g或每ml酶含多少個活力單位來表示。 ） （3）轉(zhuǎn)換數(shù)（TN or kcat)：在最適底物濃度時，每分鐘或每秒鐘每分子酶轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)。（4）分子活性（molecular activity）：在最適底物濃度時，每分鐘每分子酶轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)。（5）催化中心活性（catalytic center activity：每分鐘每一個催化中心所轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)。3. 酶活力的測定方法 （1）分光光度法（spectrophotometry） 該法要求酶的底物和產(chǎn)物在紫外或可見光部分光吸收不同。 優(yōu)點：簡便、迅速

47、、準(zhǔn)確。 一個樣品可多次測定，有利于動力學(xué)研究。可檢測到10-9mol/L水平的變化。 例: 人血清乳酸脫氫酶活力的測定（2）熒光法（fluorometry） 該法要求酶反應(yīng)的底物或產(chǎn)物有熒光變化。 主要的優(yōu)點：靈敏度很高，可以檢測10-12mol/L的樣品。 酶蛋白分子中的Tyr、Trp、Phe殘基以及一些輔酶、輔基，如NADH NADPH、FMN、FAD等都能發(fā)出熒光。 （3）酶偶聯(lián)分析法(enzyme coupling assay) 第一個酶的產(chǎn)物為第二個酶的底物，這兩個酶系統(tǒng)在一起反應(yīng)。 P1無光吸收或熒光變化，偶聯(lián)后, P2有光吸收或熒光變化。例：測己糖激酶的活性 （4）電化學(xué)法（e

48、lectrochemical method） 有離子選擇性電極法、微電子電位法、電流法等。離子選擇性電極法要求在酶反應(yīng)中必須伴隨有離子濃度的變化或氣體的變化（如O2、CO2、NH3等）。 例: 葡萄糖氧化酶活性的測定 第二節(jié) 酶的作用動力學(xué)（kinetics）P351 什么是動力學(xué)？ 什么是酶作用動力學(xué)？一 底物濃度對酶反應(yīng)速度的影響 1米氏方程的提出 中間復(fù)合物學(xué)說： 第二步: ESE+P VES 1913年Michaelis和Menten推導(dǎo)了米氏方程 2米氏方程的推導(dǎo) 基本前提：反應(yīng)方程式: 在米氏方程推導(dǎo)中引入3個假設(shè): （2） S>>ES ESS E=ES平衡法推導(dǎo)：裂合

49、酶：催化底物移去一個基團(tuán)而形成雙鍵的反應(yīng)及其逆反應(yīng)。連接酶：催化有ATP參與的合成反應(yīng)。不同之處：1. 裂合酶催化的合成反應(yīng)不需要ATP的參與，稱為合酶。連接酶催化的反應(yīng)需要ATP參與，稱為合成酶。合酶與合成酶的區(qū)別。2. 裂合酶催化底物合成雙鍵。穩(wěn)態(tài)法推導(dǎo)： 1925年Briggs和Haldame對米氏方程作了一次重要的修正，提出了穩(wěn)態(tài)的概念。 所謂穩(wěn)態(tài)是指反應(yīng)進(jìn)行一定時間后，ES的生成速度和ES的分解速度相等，亦即ES的凈生成速度為零，此時ES的濃度不再改變，達(dá)到穩(wěn)態(tài)，也稱恒態(tài)。穩(wěn)態(tài)法推導(dǎo)要點 推導(dǎo)方法（P357） 結(jié)果: 3米氏方程的討論 （1）S<<Km時：v= Vmax /Km×S =KS 符合一級反應(yīng)動力學(xué)。（2） S>>Km時：v= Vmax 符合零級反應(yīng)動力學(xué)。（3） SKm 時：v= Vmax /2。 Km代表反應(yīng)速率達(dá)到最大反應(yīng)速