氨基酸的薄層層析

1、如何分離鑒定氨基酸混合液？如何分離鑒定氨基酸混合液？生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心氨基酸的薄層層析氨基酸的薄層層析(Thin layer chromatography of amino acids)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握薄層層析法的一般原理。掌握薄層層析法的一般原理。l掌握氨基酸薄層層析法的基本操作技術(shù)。掌握氨基酸薄層層析法的基本操作技術(shù)。l掌握如何根據(jù)移動(dòng)速率（掌握如何根據(jù)移動(dòng)速率（Rf值）來(lái)鑒定被分離值）來(lái)鑒定被分離的物質(zhì)（即氨基酸混合液）。的物質(zhì)

2、（即氨基酸混合液）。09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心層析技術(shù)層析技術(shù)l概念：概念：是利用化合物中各組分的物理性質(zhì)的差別（如溶解度、吸附能力、分子形狀和大小、分子極性等）使各組分在兩相中的分布不同，從而使各組分以不同速度隨流動(dòng)相向前移動(dòng)而達(dá)到分離的目的。l特點(diǎn)：特點(diǎn)：分離效率高，能分離各種性質(zhì)相類似的物質(zhì)。不僅可用于少量物質(zhì)的分離純分，也可用于大量物質(zhì)的分離純化和制備。09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心層析法的分類層析法的分類l氣相層析（以氣體為流動(dòng)相的層析法）氣相層析（以氣體為流動(dòng)相的層析法）l液相層析（以液體為流動(dòng)相的層析法，此為生液相層析（以液體為流動(dòng)相的層析法，

3、此為生物化學(xué)領(lǐng)域里常用的方法）物化學(xué)領(lǐng)域里常用的方法） 1.吸附層析：吸附層析：薄層吸附層析、薄層吸附層析、吸附柱層析吸附柱層析 2.分配層析：紙層析、柱層析、分配層析：紙層析、柱層析、薄層層析薄層層析 3.離子交換層析離子交換層析 4.凝膠層析：柱層析、薄膜層析凝膠層析：柱層析、薄膜層析 5.親和層析親和層析 09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 一般是將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作一般是將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作為為固定相固定相。當(dāng)。當(dāng)液相液相（展開(kāi)溶劑）在固定相上流動(dòng)時(shí)，（展開(kāi)溶劑）在固定相上流動(dòng)時(shí)，由于吸附劑對(duì)不同氨基酸的由于吸附劑對(duì)不同氨基酸的吸

4、附力不一樣吸附力不一樣，不同氨基，不同氨基酸在展開(kāi)溶劑中的酸在展開(kāi)溶劑中的溶解度不一樣溶解度不一樣，點(diǎn)在薄板上的混合，點(diǎn)在薄板上的混合氨基酸樣品隨著展開(kāi)劑的氨基酸樣品隨著展開(kāi)劑的移動(dòng)速率也不同移動(dòng)速率也不同，因而可以，因而可以彼此分開(kāi)。（即通過(guò)吸附彼此分開(kāi)。（即通過(guò)吸附- -解吸解吸- -再吸附再吸附- -再解吸的反再解吸的反復(fù)進(jìn)行，而將樣品各組分分離開(kāi)來(lái)）復(fù)進(jìn)行，而將樣品各組分分離開(kāi)來(lái)）09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心茚三酮水化后生成的茚三酮水化后生成的水合茚三酮水合茚三酮在加熱在加熱時(shí)被還原，此產(chǎn)物與氨基酸加熱分解產(chǎn)生的時(shí)被還原，此產(chǎn)物與氨基酸加熱分解產(chǎn)生的氨結(jié)合，以及另一分

5、子水合茚三酮縮合生成氨結(jié)合，以及另一分子水合茚三酮縮合生成藍(lán)紫色化合物藍(lán)紫色化合物而使氨基酸斑點(diǎn)顯色。而使氨基酸斑點(diǎn)顯色。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心茚三酮茚三酮水合茚三酮水合茚三酮Ninhydrin (2,2-Dihydroxyindane-1,3-dione)09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心茚三酮反應(yīng)（茚三酮反應(yīng)（ninhydrin reaction)09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料l吸附劑：吸附劑：l粘合

6、劑：粘合劑： l氨基酸的異丙醇溶液氨基酸的異丙醇溶液 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸丙氨酸、精氨酸、甘氨酸l展開(kāi)展開(kāi)-顯色劑顯色劑（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）l分析樣品：分析樣品：氨基酸混合液氨基酸混合液09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心器材器材l層析板、尺子、鉛筆層析板、尺子、鉛筆l燒杯、量筒燒杯、量筒l噴霧器、吹風(fēng)機(jī)噴霧器、吹風(fēng)機(jī)l毛細(xì)管、層析缸毛細(xì)管、層析缸l藥匙藥匙l烘烤箱烘烤箱09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心點(diǎn)樣點(diǎn)樣2cm1cm Ala Arg Gly Mix09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物

7、學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 展層、顯色展層、顯色Ala Arg Gly Mix09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心Rf =斑點(diǎn)至原點(diǎn)距離斑點(diǎn)至原點(diǎn)距離溶劑前緣至原點(diǎn)距離溶劑前緣至原點(diǎn)距離結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算 小心量出斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)中心距離，小心量出斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)中心距離，再量出原點(diǎn)中心至溶劑前沿的距離，計(jì)算再量出原點(diǎn)中心至溶劑前沿的距離，計(jì)算出它們的出它們的 值。值。 根據(jù)根據(jù)值，鑒定出混合樣品中氨基值，鑒定出混合樣品中氨基酸的種類，并繪出層析圖譜。酸的種類，并繪出層析圖譜。09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心The scan of TLC plate (silica gel G) with 10 essential oils(精油）09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)09年秋季學(xué)期生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心復(fù)習(xí)思考題復(fù)習(xí)思