中華倉鼠卵巢細胞cmp-唾液酸轉(zhuǎn)運體基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達

1、病原生物學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 中華倉鼠卵巢細胞CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達關(guān)鍵詞：中華倉鼠 卵巢細胞 唾液酸轉(zhuǎn)運體 基因克隆 基因表達 大腸埃希菌摘要：目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-

2、T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序

3、結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。正文內(nèi)容 目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)

4、物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-

5、sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的C

6、MP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且

7、28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子

8、生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在I

9、PTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42

10、a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。

11、 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3

12、.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大

13、腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見

14、1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese

15、 Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖

16、凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白

17、表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP

18、/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列

19、完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.

20、RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR

21、是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transpo

22、rter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的

23、RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構(gòu)建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結(jié)果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質(zhì)粒CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下表達的蛋白質(zhì)經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4kD。目的蛋白表達量占菌體總蛋白的38.5。 結(jié)論： 利用分子生物學(xué)技術(shù)成功實現(xiàn)CHO細胞CMP-sat基因的克隆及在大腸埃希菌

24、中的表達。目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉(zhuǎn)運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產(chǎn)物的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構(gòu)建CMP-sat基因的克隆載體CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構(gòu)建CMP-sat基因表達質(zhì)粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導(dǎo)下進行目的基因表達，表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE鑒定。 結(jié)果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產(chǎn)物和PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見1條1000bp左右的