HPLC法測定蔬菜與水果中擬除蟲菊酯類農藥殘留量

1、HPLC法測定蔬菜與水果中擬除蟲菊酯類農藥殘留量Carrie（紹興文理學院 化學化工學院 化學 紹興 312000）摘要：目的：建立蔬菜有機氯農藥和擬除蟲菊酯類農藥的殘留氣相色譜分析方法。方法：樣品用丙酮和正己烷提取。中性氧化鋁和弗羅里硅土固相萃取柱凈化，經丙酮和正己烷混合溶劑洗脫，洗脫液吹氮濃縮，采用高效液相色譜法定量分析。結果表明：本方法簡便、快速、靈敏、準確，可以滿足葉類蔬菜中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥檢測的需要。有機氯和擬除蟲菊酯類農藥能較好地分離，峰面積與其濃度均具有良好線性。關鍵詞：高效液相色譜法；葉類蔬菜;有機氯類農藥；擬除蟲菊酯類農藥；引言有機氯及擬除蟲菊酯類農藥為高效殺蟲劑，在

2、蔬菜等農作物使用廣泛，其殘留問題已引起人們的高度重視，隨著全球范圍內對食品安全問題的日益關注，需要檢測的項目日益增多，規(guī)定的限量日益苛刻。但蔬菜的種類繁多，多數(shù)蔬菜基質雜，色素較深，因此對農藥殘留分析，凈化步驟很重要。擬除蟲菊酯類農藥是防治農、林業(yè)等方面的有害昆蟲及作為媒介傳播病害昆蟲的常用殺蟲劑。它們在農作物生產上的使用，增加了作物的產量，但是不科學的使用會導致其在水果、蔬菜中殘留超標，從而危害消費者的健康。因此，許多國家都對這兩類農藥在農作物中的殘留限量作了嚴格的規(guī)定。目前，測定擬除蟲菊酯類農藥殘留的方法主要有氣相色譜法(GC) 和高效液相色譜法(HPLC)等。采用氣相色譜一質譜聯(lián)用技術和

3、液相色譜一質譜聯(lián)用技術，能夠提高農藥多殘留分析檢測的靈敏度，實現(xiàn)多組分同時分析。根據(jù)目前的報道，采用氣相色譜一火焰光度檢測器(或氣相色譜一氮磷檢測器)方法，多數(shù)只能檢測有機磷類農藥；采用氣相色譜一電子捕獲檢測器法只能檢測果蔬食物中擬除蟲菊酯類農藥。本實驗即是采用高效液相色譜法(HPLC)法對葉類蔬菜中的農藥的殘留量進行快速檢測，此法簡便、快速、靈敏、準確，可以用來檢測葉類蔬菜中擬除蟲菊酯類農藥殘留量。正文：一.實驗部分1實驗試劑和儀器1.1試劑表1-1 實驗用試劑一覽表試劑規(guī)格丙酮農殘級正己烷農殘級無水硫酸鈉分析純A.R.中性氧化鋁分析純A.R.氯氰菊酯濃度96佛羅里硅藻土-單標準儲備液-單標

4、準中間液-單標準使用液-1.2 儀器表1-2 實驗所用到的主要儀器儀器名稱型號高效液相色譜儀Agilent 1200 Series表1-3 實驗所用儀器條件液相色譜柱ODS-C18（250mm×4.6mm 5m）檢測波長230nm流動相乙腈溶液流速1ml/min進樣器最大容量50L2.實驗步驟及其現(xiàn)象2.1 樣品的制備與提取 稱取經組織搗碎機絞碎的新鮮蔬菜或水果樣品10g于50mL帶蓋塑料離心管中，根據(jù)樣品含水量多少加入適量的無水硫酸鈉除水。然后向離心管樣品中加入10mL丙酮:正己烷（3:7，體積比）混合溶劑，混勻后在超聲波提取器中提取15min，然后用滴管吸取上層液體，將提取液轉移

5、至100mL燒杯中。逐次向離心管樣品殘渣中加入3mL、2mL混合提取劑，重復以上萃取、離心分離操作兩次，合并離心管上層提取液至同一燒杯中。若合并提取液中還存在水分，再加適量無水硫酸鈉除水。2.2 柱層析凈化與濃縮 在30cm(長)×1cm(內徑)玻璃管層析柱底部加少許玻璃棉，按順序分別裝上無水硫酸鈉、中性氧化鋁、和60100目佛羅里硅藻土各約1.0cm高度，輕輕敲實。先用3mL丙酮預洗層析柱，棄掉淋洗液。再將燒杯中的樣品提取液全部轉移至柱內，用3mL丙酮:正己烷（1:2，體積比）混合洗脫劑洗脫3次，收集洗脫液于接液管中。將接液管置于50恒溫水浴中用氮氣吹脫至洗脫液體積少于0.30mL

6、，再轉移濃縮后的洗脫液至2mL的樣品瓶中，用正己烷定容至1mL，加蓋密封，置于冰箱（0-4，由于本次實驗室溫較低，所以沒有使用冰箱）中保存。2.3 測定 在計算機上設置好液相色譜操作條件，用50L微量進樣器吸取20L氯氰菊酯單標準使用液進樣，繪制完整的單標準色譜圖。再用50L微量進樣器吸取20L樣品測試瓶中的樣品制備液進樣，繪制完整的色譜圖。二 結果與討論1 實驗原始記錄2繪制氯氰菊酯（正己烷溶液）的工作曲線 根據(jù)上圖可知氯氰菊酯（正己烷溶液）的工作曲線方程為y=3×109x+25.8663樣品數(shù)據(jù)記錄保留時間(min)峰面積(mAus)2.2227.25將上表樣品的數(shù)據(jù)代入氯氰菊酯

7、（正己烷溶液）的工作曲線中，可得樣品中氯氰菊酯的濃度為4.61×10¯10mol/L.4.小結 樣品的預處理非常重要，其農藥殘留物的提取效率直接影響到最后測定結果的準確度，由于新鮮蔬菜的含水量較大，因此預處理過程中要注意除水，切不可將含水分的樣品制備液進樣。由上述數(shù)據(jù)處理結果可知樣品中氯氰菊酯的濃度為4.61×10¯10mol/L，即1.92×10¯4mg/kg小于我國農殘標準中最大殘留量0.2mg/kg(GB 4829.4-1994),所以該蔬菜符合國家食品安全規(guī)定。三結論采用高效液相色譜測定蔬菜中的擬除蟲菊酯類農藥殘留，凈化效果好，色譜峰分離效果好，能快速檢測出蔬菜水果中的擬除蟲菊酯類農藥殘留量，是測定蔬菜中的擬除蟲菊酯類農藥殘留量的好方法。參考文獻1 國家技術監(jiān)督局.中華人民共