無(wú)菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證

1、浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無(wú)菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案 驗(yàn)證方案申請(qǐng)人: 日期: 年 月 日驗(yàn)證方案審核人: 日期: 年 月 日驗(yàn)證方案審批人: 日期: 年 月 日1. 概述： 無(wú)菌檢查法是為了檢查藥典要求無(wú)菌的醫(yī)療器械產(chǎn)品是否無(wú)菌而建立的檢查法， 是作為批準(zhǔn)無(wú)菌產(chǎn)品放行的檢驗(yàn)或監(jiān)督部門(mén)對(duì)無(wú)菌產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督中的一個(gè)重要項(xiàng)目。它是根據(jù)用于實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基中是否有微生物生長(zhǎng)來(lái)判定樣品的無(wú)菌性 ， 液體培養(yǎng)基變渾濁一般表明樣品受微生物的污染?；谖⑸镂廴镜牟痪鶆蛐裕篃o(wú)菌檢查法結(jié)果的可信度受許多因素制約， 如抑菌因素、檢查法、檢驗(yàn)量、檢查用的培養(yǎng)基質(zhì)量、操作環(huán)境、無(wú)菌技術(shù)等。檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證

2、是現(xiàn)代質(zhì)量保證體系中關(guān)系到質(zhì)控技術(shù)、方法、手段的科學(xué)性、準(zhǔn)確性的重要組成部分 ，是保證檢驗(yàn)結(jié)果的公正、 科學(xué)、準(zhǔn)確的基礎(chǔ)。2. 驗(yàn)證目的： 驗(yàn)證所采用的方法和條件是否適合于供試品的無(wú)菌檢查。即確認(rèn)供試品在該檢驗(yàn)量、該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不計(jì)。3. 驗(yàn)證范圍： 適用于創(chuàng)可貼無(wú)菌檢查法的驗(yàn)證。4. 驗(yàn)證人員及職責(zé)姓名職務(wù)職責(zé) 劉傳杰經(jīng)理負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的批準(zhǔn)實(shí)施、驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)周德標(biāo)QC驗(yàn)證方案、驗(yàn)證報(bào)告的起草并負(fù)責(zé)驗(yàn)證過(guò)程中現(xiàn)場(chǎng)的監(jiān)控及取樣張思東QC負(fù)責(zé)按制訂無(wú)菌檢驗(yàn)規(guī)程實(shí)施檢驗(yàn)和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)5. 文件準(zhǔn)備和培訓(xùn) 檢查驗(yàn)證所需的各類(lèi)文件資料，應(yīng)齊全；相關(guān)的文件草案是否已

3、具備。文件編碼文件名稱(chēng)存放部門(mén)HY-QC-012無(wú)菌檢驗(yàn)操作規(guī)程品管部6. 驗(yàn)證條件6.1. 儀表量器經(jīng)過(guò)校驗(yàn)合格，且在有效期內(nèi)。6.2. 供試品：隨機(jī)抽取浙江紅雨醫(yī)藥有司生產(chǎn)的3個(gè)批次醫(yī)用無(wú)菌創(chuàng)可貼6.3. 培養(yǎng)基及試劑：6.3.1. 試劑試液： 0.9%氯化鈉、氯化鈉蛋白胨緩沖液，配制記錄見(jiàn)附件16.3.2. 培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 杭州微生物試劑有限公司 批號(hào)：20140221-00 改良馬丁培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 杭州微生物試劑有限公司 批號(hào)：20131118-00營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家： 杭州微生物試劑有限公司 批號(hào)：20150428-03改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 生產(chǎn)廠家：

4、 杭州微生物試劑有限公司 批號(hào)：20140322-00蛋白胨 生產(chǎn)廠家：杭州微生物試劑有限公司 批號(hào)：20140417-00培養(yǎng)基配制記錄見(jiàn)附件2。6.4. 驗(yàn)證用菌株：金黃色葡萄球菌   【CMCC（B）26003】銅綠假單胞菌     【CMCC（B）10104】枯草芽孢桿菌     【CMCC（B）63501】生孢梭菌       【CMCC（B）64941】白色念珠菌     【CMCC（F）98001】 黑曲霉         【CMCC（F）9

5、8003】標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)自：浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究中心各驗(yàn)證用菌種傳代記錄見(jiàn)附件3。6.5. 無(wú)菌檢驗(yàn)儀器及相關(guān)設(shè)備：壓力蒸汽滅菌器型 號(hào)： YXQ-LS-50S11 生產(chǎn)廠家： 上海博訊儀器有限公司校驗(yàn)日期： 2015-05-25 有效期：2016-05-24生化培養(yǎng)箱（細(xì)菌培養(yǎng)）型 號(hào)：SPX-250 生產(chǎn)廠家： 金壇市富華儀器有限公司校驗(yàn)日期：2015-05-25 有效期：2016-05-24生化培養(yǎng)箱（霉菌培養(yǎng)）型 號(hào)： SPX-250B 生產(chǎn)廠家：金壇市富華儀器有限公司校驗(yàn)日期： 2015-05-25 有效期：2016-05-247. 驗(yàn)證內(nèi)容：7.1. 培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查：每批培養(yǎng)基隨機(jī)

6、取不少于5支，培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。培養(yǎng)基無(wú)菌性檢查記錄日期：培養(yǎng)基培養(yǎng)天數(shù)支數(shù)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基123456 結(jié)論注備： 檢測(cè)人/日期： 復(fù)核人/日期： 7.2供試品的制備 創(chuàng)可貼供試品：將包裝好的創(chuàng)可貼打開(kāi)，用剪刀將創(chuàng)可貼剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中浸泡1小時(shí)，取水層作為供試品。7.3. 試驗(yàn)菌液的制備7.3.1. 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面中,置3035培養(yǎng)18-24小時(shí)，分別取用3-5ml 0.9的無(wú)菌氯化鈉溶液，反復(fù)吹洗，沖下菌苔，震蕩80次，用10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100 C

7、FU的菌懸液。 7.3.2. 接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至12ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,3035培養(yǎng)1824小時(shí)，取上述培養(yǎng)物1ml加9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100 CFU的菌懸液。      7.3.3. 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，置2328培養(yǎng)24-48小時(shí)，取上述培養(yǎng)物1ml加9ml 0.9的無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數(shù)小于100CFU的菌懸液。7.3.4. 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中,置23-28培養(yǎng)5-7天，使大量孢子形成。用3-5ml0.9的無(wú)菌

8、氯化鈉溶液將孢子洗脫并過(guò)濾孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)作為原液，取1m原液加9ml 0.9的無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增逐級(jí)稀釋制成每1ml含孢子數(shù)小于100CFU的孢子懸液。7.4. 培養(yǎng)基靈敏度檢查取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100 CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌菌懸液各1ml，每種培養(yǎng)基各接種2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100 CFU的白色念珠菌、黑曲霉菌懸液各1ml，每種培養(yǎng)基各接種2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果?？瞻讓?duì)照管無(wú)菌生長(zhǎng),加菌的培養(yǎng)基管

9、均生長(zhǎng)良好,判靈敏度檢查合格。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基： 日期： 培養(yǎng)天數(shù)支數(shù)菌種 123金黃色葡萄球菌12銅綠假單胞菌12枯草芽孢桿菌12生孢梭菌12空白對(duì)照結(jié)論 檢測(cè)人/日期： 復(fù)核人/日期： 改良馬丁培養(yǎng)基：日期 支數(shù)培養(yǎng)天數(shù)菌種12345白色念珠菌12黑曲霉菌12空白對(duì)照結(jié)論注備：“+”表示長(zhǎng)菌，“”表示不長(zhǎng)菌，“±”表示可疑長(zhǎng)菌 檢測(cè)人/日期： 復(fù)核人/日期： 7.5. 擬驗(yàn)證的創(chuàng)可貼無(wú)菌檢查試驗(yàn)方法 分別取創(chuàng)可貼供試品，加入相應(yīng)的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，細(xì)菌于3035培養(yǎng)14天， 真菌于2328培養(yǎng)14天。同時(shí)每天觀察并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。日期：培養(yǎng)基培養(yǎng)

10、天數(shù)支數(shù) 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 改良馬丁培養(yǎng)基1234567891011121314結(jié)論注備：“+”表示長(zhǎng)菌，“”表示不長(zhǎng)菌，“±”表示可疑長(zhǎng)菌 檢測(cè)人/日期： 復(fù)核人/日期： 7.6. 驗(yàn)證試驗(yàn)的方法7.6.1. 將創(chuàng)可貼供試品分別人工污染小于100cfu的金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、黑曲霉、白色念株菌菌懸液后加入相應(yīng)的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，作為供試品陽(yáng)性對(duì)照組；另分別取裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為陽(yáng)性對(duì)照組；同時(shí)平行做緩沖液的陰性對(duì)照組。7.6.2. 細(xì)菌于3035培養(yǎng)5天， 真菌于2328培養(yǎng)5天。每天觀察并記錄

11、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 7.7. 可接受標(biāo)準(zhǔn) 陰性對(duì)照呈陰性，陽(yáng)性對(duì)照呈陽(yáng)性，供試品陽(yáng)性對(duì)照組微生物生長(zhǎng)情況與陽(yáng)性對(duì)照組一致，說(shuō)明創(chuàng)可貼按照無(wú)菌檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作，供試品對(duì)微生物生長(zhǎng)無(wú)不良影響，則創(chuàng)可貼的無(wú)菌檢查方法通過(guò)。7.8. 試驗(yàn)記錄日期 菌株次數(shù)培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽 改良馬丁培養(yǎng)基 1 2 3 4 5 （d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照生孢梭菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照枯草桿菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照銅綠假單胞菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照黑曲霉陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照白色念株菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照注備：“+”表示長(zhǎng)菌，“”表示不長(zhǎng)菌，“±”表示可疑長(zhǎng)菌 檢測(cè)人/日期： 復(fù)核人/日期： 日期 菌株次數(shù)培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽 改良馬丁培養(yǎng)基 1 2 3 4 5 （d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照生孢梭菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照枯草桿菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照銅綠假單胞菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照黑曲霉陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照白色念株菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照注備：“+”表示長(zhǎng)菌，“”表示不長(zhǎng)菌，“±”表示可疑長(zhǎng)菌 檢測(cè)人/日期： 復(fù)核人/日期： 日期 菌株次數(shù)培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽 改良馬丁培養(yǎng)基 1 2 3 4 5 （d） 1 2 3 4 5金黃色葡萄球菌陽(yáng)性供試品陽(yáng)性對(duì)照生孢梭