硬脂酸鎂標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、XXXX公司當(dāng)前版本編號STP-MM-02-001-Rev.00. 12替代版本編號規(guī)程名稱硬脂酸鎂操作規(guī)程硬脂酸鎂操作規(guī)程起 草 人日 期20 年 月 日審 核 人日 期20 年 月 日批 準(zhǔn) 人日 期20 年 月 日生效日期頒發(fā)部門質(zhì)量部分發(fā)部門1.目的 建立硬脂酸鎂檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)范硬脂酸鎂檢驗(yàn)操作2.范圍 適用于硬脂酸鎂的檢驗(yàn)3.依據(jù)： 中國藥典2010版二部4.職責(zé)4.1 起草：QC 審核：QA 批準(zhǔn)人：質(zhì)量負(fù)責(zé)人4.2 QC實(shí)施本規(guī)程4.3 QA監(jiān)督本規(guī)程的實(shí)施5.內(nèi)容5.1 性狀本品為白色輕松無砂性的細(xì)粉；微有特臭；與皮膚接觸有滑膩感。本品在水、乙醇或乙醚中不溶。 5.2 鑒

2、別5.2.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器和高效液相色譜儀稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀釋至1000ml，即得。氨試液：取濃氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得。氯化銨試液：取氯化銨10.5g，加水使溶解成100ml，即得。磷酸氫二鈉試液：取磷酸氫二鈉結(jié)晶12g，加水使溶解成100ml，即得。氫氧化鈉試液取氫氧化鈉4.3g，加水使溶解成100ml，即得。碘試液：取用碘滴定液0.05mol/L，取碘13. 0g，加碘化鉀36g與水50ml溶解后，加鹽酸3滴與水適量使成1000ml，搖勻，用垂熔玻璃濾器濾過。5.2.2分析步驟5.2.2.1取本品約5.0g，置圓底燒瓶中，加無過氧化物乙醚50ml

3、、稀硝酸20ml與水20ml，加熱回流至完全溶解，放冷，移至分液漏斗中，振搖，放置分層，將水層移至另一分液漏斗中，用水提取乙醚層2次，每次4ml，合并水層，用無過氧化物乙醚15ml清洗水層，將水層移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。5.2.2.1.1取上述溶液，加氨試液，觀察：滴加氯化銨試液，即生成白色沉淀；再加磷酸氫二鈉試液1滴，振搖，即生成白色沉淀；分離，沉淀加氨試液，不溶解。5.2.2.1.2取上述溶液，加氫氧化鈉試液，即生成白色沉淀；沉淀分成兩份，一份加過量的氫氧化鈉試液，沉淀不溶解；另一份中加碘試液，沉淀轉(zhuǎn)成紅棕色。5.2.2.2在硬脂酸與棕櫚酸相對含量檢查項(xiàng)下

4、記錄的色譜圖中，供試品溶液兩主峰的保留時間應(yīng)分別與對照品溶液兩主峰的保留時間一致。5.3 檢查：5.3.1酸堿度5.3.1.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器溴廨香草酚藍(lán)指示液：取溴麝香草酚藍(lán)0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3.2ml使溶解，再加水稀釋至200ml，即得。0.1mol/L鹽酸滴定液：取鹽酸9ml，加水適量使成1000ml，搖勻。0.1mol/L氫氧化鈉滴定液：取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml，加新沸過的冷水使成1000ml，搖勻。5.3.1.2 分析步驟取本品1.0g，加新沸過的冷水20ml，水浴上加熱1分鐘并時時振搖，放冷，濾過，取續(xù)濾液10ml，加溴麝香草酚藍(lán)指示液0.0

5、5ml，用鹽酸滴定液（0.1mol/L）或氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴至溶液顏色發(fā)生變化，滴定液用量不得過0.05ml。5.3.2氯化物5.3.2.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀釋至1000ml，即得。標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液：稱取氯化鈉0.165g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于l0g的Cl)。硝酸銀試液：即硝酸銀滴定液5.3.2.2分析步驟量取鑒別（1）項(xiàng)下的供試品溶液1.0ml，加水使成25ml，再加稀硝酸10ml，置50ml納氏比色

6、管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試品溶液。另取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液10.0ml，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，搖勻，即得對照溶液。于供試品溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，不得更濃。5.3.3硫酸鹽5.3.3.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器稀鹽酸：取鹽酸234ml，加水稀釋至1000ml，即得標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：稱取硫酸鉀0.181g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。25%氯化鋇溶液：取氯化鋇25g，加水使溶解成75ml，即得。5.3.3.2

7、 分析步驟取鑒別（1）項(xiàng)下的供試品溶液1.0ml，加水使成約40ml置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml ，搖勻，即得供試品溶液。另取6.0ml標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得對照溶液。于供試品溶液與對照溶液中，分別加入25%氯化鋇溶液5ml，用水稀釋至50ml，充分搖勻，放置10分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，不得更濃（0.6%）。5.3.4干燥失重5.3.4.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器5.3.4.2分析步驟取本品，在80熾灼至恒重，計(jì)算減失重量不得過5.0% 。 失重% = ×100%式中 W瓶+樣-熾灼后恒

8、重的稱量瓶與樣品重量；W瓶-熾灼前恒重的稱量瓶重量。W樣-樣品稱樣量5.3.5鐵鹽5.3.5.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器稀鹽酸：取鹽酸234ml，加水稀釋至1000ml，即得。標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液：取硫酸鐵銨FeNH4 (S04)2 ·12H2O0.863g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10µg的Fe)。5.3.5.2分析步驟取本品0.50g，熾灼灰化后，加稀鹽酸5ml與水10ml，煮沸，放冷，濾過，濾液加過硫酸銨50mg，用水稀釋成3

9、5ml，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液5.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深（0.01%）。5.3.6重金屬5.3.6.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器稀醋酸：取冰醋酸60ml，加水稀釋至1000ml，即得。醋酸鹽緩沖液（pH3.5）：取醋酸銨25g，加水25ml溶5解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2moI/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH值至3.5 (電位法指示），用水稀釋至100ml，即得。標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液：稱取硝酸鉛0.1599g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勾，作為貯備液。精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1

10、ml相當(dāng)于l0µg的Pb）。硫代乙酰胺試液：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。臨用前取混合液（由1mol/L氫氧化鈉溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml組成）5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加熱20秒鐘，冷卻，立即使用。5.3.6.2分析步驟取本品2.0g，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml，使恰潤濕，低溫加熱至硫酸除盡，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸汽除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml與稀醋酸2ml，加熱溶解后，放冷，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后

11、，移置納氏比色管中，加水稀釋成5ml，作為甲管；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5)2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml，作為乙管；再在甲、乙兩管中分別加硫代乙酖胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深（含重金屬不得過百萬分之十五）。5.4硬脂酸與棕櫚酸相對含量5.4.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器和GC-14C氣相色譜儀三氟化硼的甲醇溶液：取三氟化硼一水合物或二水合物適量（相當(dāng)于三氟化硼14g），加甲醇溶解并稀釋至100ml，搖勻。5.4.2分析步驟取本品

12、0.1g,精密稱定，置錐形瓶中，加三氟化硼的甲醇溶液5ml，搖勻，加熱回流10分鐘使溶解，從冷凝管加正庚烷4ml,再回流10分鐘，放冷后加飽和氯化鈉溶液20ml,振搖，靜置使分層，將正庚烷層通過裝有無水硫酸鈉0.1g（預(yù)先用正庚烷洗滌）的玻璃柱，移入燒杯中，作為供試品溶液。照氣相色譜法試驗(yàn)，用聚乙二醇20M為固定相的毛細(xì)管柱，起始柱溫70，維持2分鐘，以每分鐘5的速率升溫至240，維持5分鐘；進(jìn)樣口溫度為220，檢測器溫度為260。分別稱取棕櫚酸甲酯與硬脂酸甲酯對照品適量，加正庚烷制成每1ml中分別約含5mg與10mg的溶液，取1l注入氣相色譜儀，棕櫚酸甲酯峰與硬脂酸甲酯峰的分離度應(yīng)大于3.0

13、。精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用正庚烷稀釋至刻度，搖勻，取1l注入氣相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使棕櫚酸甲酯峰與硬脂酸甲酯峰應(yīng)能檢出。再取供試品溶液1l注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按下式面積歸一化法計(jì)算硬脂酸鎂中硬脂酸在脂肪酸中的百分含量。硬脂酸百分含量（%）= 式中 A為供試品中硬脂酸甲酯的峰面積； B為供試品中所有脂肪酸脂的峰面積。 同法計(jì)算硬脂酸鎂中棕櫚酸在總脂肪酸中百分含量。硬脂酸相對含量不得低于40%，硬脂酸與棕櫚酸相對含量的總和不得低于90%。5.5微生物限度5.5.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器和無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯

14、化鈉4. 0g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。5.5.2 分析步驟微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為3035；霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23285.5.2.1細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)5.5.2.1.1供試品檢查平皿法取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為1:10的供試液。取1:10的供試液1ml，加無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至10ml，作為1:10

15、0的供試液。取相應(yīng)稀釋級的供試液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入1520ml溫度不超過45的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。5.5.2.1.2陰性對照試驗(yàn)取試驗(yàn)用的稀釋液1ml，置無菌平皿中，注人培養(yǎng)基,凝固，倒置培養(yǎng)。每種計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個平板，均不得有菌生長。5.5.2.1.3培養(yǎng)和計(jì)數(shù)除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)3天，霉菌、酵母菌培養(yǎng)5天，逐日觀察菌落生長情況，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，必要時，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至7天進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級供

16、試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)；酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌計(jì)數(shù)。在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。然后將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌數(shù)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)，與玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基中的霉菌和酵母菌數(shù)或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行比較，以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌數(shù)為計(jì)數(shù)結(jié)果。每1g供試品中除細(xì)菌數(shù)不得過1000個、霉菌及酵母菌數(shù)不得過1

17、00個。5.5.2.2控制菌檢查5.5.2.2.1供試品檢查取細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)的供試液10ml，直接或處理后接種至適量（不少于100ml)的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時，必要時可延長至48小時。取上述培養(yǎng)物0.2ml，接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)，于5小時、24小時在366nm紫外光下觀察，同時用未接種的M U G 培養(yǎng)基作本底對照。若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加人數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。本底對照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性。如MUG陽性、靛基質(zhì)陽性，判供試品檢出大腸埃

18、希菌；如MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌；如MUG陽性、靛基質(zhì)陰性，或MUG陰性、錠基質(zhì)陽性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824小時。若平板上無菌落生長或生長的菌落與表1所列的菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出大腸埃希菌。若平板上生長的菌落與表1所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)進(jìn)行分離、純化、染色鏡檢和適宜的鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為大腸埃希菌。本品不得檢出大腸埃希菌。5.5.2.2.2陽性對照試驗(yàn)陽性對照試驗(yàn)方法同供試品的控制菌檢查，對照菌的加菌量為10100cfu。陽性對照試驗(yàn)應(yīng)檢出大腸埃希菌。5.5.2.2.3陰性對照試驗(yàn)取稀釋液10ml照相應(yīng)控制菌檢查法檢査，作為陰性對照。陰性對照應(yīng)無菌生長。5.6含量測定5.6.1儀器及試液一般實(shí)驗(yàn)儀器氨-氯化銨緩沖液（pH10.0）：取氯化銨5.4g，加水20ml溶解后，加濃氨溶液35ml，再加水稀釋至100ml，即得。乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05mol/l）：取乙二胺四醋酸二鈉19g，加適量的水使溶解成1000ml，搖勻。鉻黑T指示劑：取鉻黑T0.1g，加氯化鈉10g，研磨均勻，即得。5.6.2 分析步驟取本品約0.2g，精密稱定，加正丁醇-無水乙醇（1：1）溶液50ml