腫瘤分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題(共8頁(yè))

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上一 腫瘤流行病學(xué)腫瘤流行病學(xué)腫瘤流行病學(xué)是研究人群中腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、分布規(guī)律及其影響因素的一門(mén)學(xué)科，以闡明腫瘤的流行規(guī)律、擬訂腫瘤的防治對(duì)策及檢驗(yàn)?zāi)[瘤防治對(duì)策效果。肺癌危險(xiǎn)因素1. 吸煙；2. 職業(yè)因素：接觸砷的無(wú)機(jī)化合物、石棉、二氯甲醚、鉻及其他化合物，鎳冶煉、芥子體、氯乙烯、煤油、焦油和石油中的多環(huán)芳烴，煙草的加熱產(chǎn)物、硫酸煙霧等；3. 氡：廣泛存在于自然界的土壤、巖石、建筑材料中；4. 空氣污染：城市中每天燃燒的大量化石燃料以及柏油路的鋪設(shè)和機(jī)動(dòng)車(chē)輛的使用，均可導(dǎo)致居民密集區(qū)空氣的污染；5. 飲食營(yíng)養(yǎng)失衡：（體重下降）在致癌的環(huán)境因素中，飲食和營(yíng)養(yǎng)是重要構(gòu)成部

2、分，營(yíng)養(yǎng)狀況能夠通過(guò)改變表遺傳來(lái)導(dǎo)致癌癥發(fā)生，尤其是維生素和必需氨基酸；6. 人乳頭瘤病毒感染；7. 機(jī)體免疫力低下，內(nèi)分泌失調(diào)，及家庭遺傳對(duì)肺癌的發(fā)生/可能起到一定作用。二 癌基因與抑癌基因癌基因基因組中存在的一類(lèi)能促進(jìn)細(xì)胞分裂并有潛在致癌作用的基因。癌基因活化的機(jī)制逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)；病毒插入，進(jìn)入或靠近宿主細(xì)胞原癌基因而增強(qiáng)后者的表達(dá)；點(diǎn)突變，在ras癌基因中特別重要；染色體移位，不同染色體的一部分合并，造成基因重排，表達(dá)增加，如CML患者9號(hào)和22號(hào)染色體移位；基因擴(kuò)增。抑癌基因是一類(lèi)可以抑制細(xì)胞分裂，并有抑制癌變作用的基因，突變或缺失而功能失活后能使正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞。抑癌基因的失

3、活機(jī)制Knudson氏的兩次打擊論：二個(gè)等位基因中的一個(gè)缺失；另一個(gè)等位基因突變；基因5，端CpG島胞嘧啶(C-5)高度甲基化，抑制抑癌基因的轉(zhuǎn)錄。P53基因的功能阻滯細(xì)胞周期；促進(jìn)細(xì)胞調(diào)亡；參與DNA損傷修復(fù)，維持基因組穩(wěn)定；抑制腫瘤血管生成三 細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)G proteinG蛋白，由、三個(gè)不同亞基組成的GTP結(jié)合蛋白，具有GTP酶活性和七個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，在細(xì)胞信號(hào)通路中起信號(hào)轉(zhuǎn)換器或分子開(kāi)關(guān)的作用。Second messenger第二信使，受細(xì)胞外信號(hào)的作用，在胞質(zhì)溶膠內(nèi)形成或向胞質(zhì)溶膠釋放的細(xì)胞內(nèi)小分子。通過(guò)作用于靶酶或胞內(nèi)受體，將信號(hào)傳遞到級(jí)聯(lián)反應(yīng)下游，如cAMP、cGMP、Ca2+、I

4、P3和DAG等。Receptor tyrosine kinase (RTK)受體酪氨酸激酶，細(xì)胞表面一類(lèi)具有細(xì)胞外受體結(jié)構(gòu)域、可使酪氨酸磷酸化的跨膜受體蛋白，在細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。MAP kinase cascadeMAP激酶級(jí)聯(lián)式反應(yīng)，是多種生長(zhǎng)因子及其他信號(hào)分子與RTK作用后信號(hào)傳導(dǎo)的下游通路，級(jí)聯(lián)式反應(yīng)中的最后一個(gè)蛋白激酶MAPK進(jìn)入細(xì)胞核，將特異的轉(zhuǎn)錄因子磷酸化，并與特定的DNA序列結(jié)合，最終可啟動(dòng)DNA的合成，導(dǎo)致細(xì)胞分裂。Focal adhesion kinase (FAK)局部粘附性激酶，是一種酪氨酸蛋白激酶，在局部粘附區(qū)域內(nèi)濃度集中，特別是在細(xì)胞接觸位點(diǎn)的質(zhì)膜內(nèi)表

5、面，在由整合素介導(dǎo)的細(xì)胞骨架重組反應(yīng)中，起著效應(yīng)分子的作用。Receptor-like protein tyrosine phosphatase (RPTPs)受體樣蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶，一類(lèi)橫跨質(zhì)膜，行使著細(xì)胞表面受體的作用，并參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞粘附作用的分子。簡(jiǎn)述細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的基本概念、過(guò)程和特征細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)是細(xì)胞通過(guò)將信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)部來(lái)完成細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境刺激所產(chǎn)生的相應(yīng)反應(yīng)的過(guò)程。在信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中，通過(guò)加上或移去磷酸基團(tuán)從而改變下游一系列蛋白質(zhì)的活性是信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中一個(gè)最顯著的特征。以GTP結(jié)合蛋白作為“開(kāi)關(guān)”的某種細(xì)胞活動(dòng)與另外一些同樣需要GTP結(jié)合蛋白參與調(diào)控的細(xì)胞活動(dòng)過(guò)程相偶聯(lián)

6、。信號(hào)傳導(dǎo)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，包括一個(gè)沿著信號(hào)傳導(dǎo)途徑的信號(hào)通道，通常由一系列性質(zhì)獨(dú)特的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)是通過(guò)改變其構(gòu)象才成為有活性或者無(wú)活性的形式。通道中的每一個(gè)組份被其上游的組份所調(diào)控；反過(guò)來(lái)，該組份又被其下游的組份實(shí)施著調(diào)控。主要有兩種信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程，一種是配體與細(xì)胞膜表面上的受體結(jié)合后通過(guò)激活GTP結(jié)合蛋白而傳導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)；另一種則是配體與受體結(jié)合后直接激活與受體相關(guān)的酶活性而傳導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)。簡(jiǎn)述磷脂酰肌醇(PI)衍生的幾種主要的第二信使及其在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的作用(1) 甘油二酯(DAG)：甘油二酯激活的效應(yīng)器分子式蛋白激酶(PKC)，PKC是一種多功能的絲氨酸/蘇氨酸激酶，可將許多不

7、同的蛋白底物磷酸化。PKC在細(xì)胞生長(zhǎng)與分化、細(xì)胞代謝和轉(zhuǎn)錄激活等細(xì)胞生命活動(dòng)中起著非常重要的作用。(2) 肌醇1,4,5-三磷酸(IP3)：IP3是水溶性小分子，能夠迅速擴(kuò)散進(jìn)胞漿，與光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)表面IP3特異受體結(jié)合。IP3受體不僅僅是受體，還是四聚體的Ca2+通道，IP3與受體結(jié)合后通道打開(kāi)，Ca2+擴(kuò)散至胞漿，與各種靶分子結(jié)合，觸發(fā)特異性反應(yīng)的發(fā)生。四 細(xì)胞周期末端分化細(xì)胞細(xì)胞具有末端分化結(jié)構(gòu)，例如神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、紅細(xì)胞等，它們失去了分裂能力，一旦分化形成即維持其分化狀態(tài)直至死亡。靜息細(xì)胞在正常情況下不分裂，但適宜的刺激物可誘導(dǎo)其開(kāi)始DNA的合成并進(jìn)入細(xì)胞周期的細(xì)胞。例如肝細(xì)胞，部分肝

8、切除手術(shù)可誘導(dǎo)其增殖。死亡受體傳遞細(xì)胞凋亡信號(hào)的受體，屬于腫瘤壞死因子受體超家族。與其配體結(jié)合而接受死亡信號(hào)，并激活誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路。TUNEL即末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的dUTP標(biāo)記技術(shù)。凋亡細(xì)胞會(huì)激活一系列的DNA內(nèi)切酶，切斷基因組DNA，產(chǎn)生一系列3-OH末端，在TdT作用下，將脫氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3末端，從而進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。什么是細(xì)胞周期的驅(qū)動(dòng)機(jī)制？Cdk在細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用，各種Cdk在細(xì)胞周期的各個(gè)特定時(shí)間被激活，通過(guò)磷酸化底物，驅(qū)使細(xì)胞完成細(xì)胞周期，這就是細(xì)胞周期的驅(qū)動(dòng)機(jī)制。如在關(guān)鍵的G1期的啟動(dòng)中，Cdk起著核心的作

9、用，當(dāng)細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子的刺激，從G0期進(jìn)入早G1期，并在Cdk-Cyclin復(fù)合物的作用下，通過(guò)R點(diǎn)，生成有活性的E2F，E2F作為轉(zhuǎn)錄激活因子促進(jìn)DNA復(fù)制相關(guān)基因的表達(dá)，使細(xì)胞進(jìn)入S期。細(xì)胞凋亡和壞死有哪些主要區(qū)別？在（上）35頁(yè)表格舉例說(shuō)明細(xì)胞凋亡主要有哪些誘發(fā)因素？在（上）35頁(yè)表格五 腫瘤免疫調(diào)節(jié)免疫編輯免疫編輯是腫瘤細(xì)胞和免疫系統(tǒng)相互作用的一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程。惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，受到免疫系統(tǒng)的編輯作用，其主要包括三個(gè)階段：消除、靜態(tài)平衡和逃逸。免疫消除和免疫監(jiān)視理論相似，即免疫系統(tǒng)能夠識(shí)別和消除不斷出現(xiàn)的、新生的轉(zhuǎn)化惡性細(xì)胞，對(duì)機(jī)體起著重要的保護(hù)作用。但某些腫瘤細(xì)胞在免疫系統(tǒng)的作用下，

10、經(jīng)選擇得以幸存，并進(jìn)入一種靜止、休眠狀態(tài)，即所謂靜態(tài)平衡。在免疫系統(tǒng)發(fā)生波動(dòng)和弱化時(shí)，潛伏的腫瘤細(xì)胞便得以逃逸控制而進(jìn)入腫瘤生長(zhǎng)的快車(chē)道，病情而隨之惡化。免疫監(jiān)視免疫系統(tǒng)發(fā)揮著“哨兵”的功能，能夠識(shí)別和消除不斷出現(xiàn)的、新生的轉(zhuǎn)化惡性細(xì)胞，抑制腫瘤形成，保證組織的穩(wěn)態(tài)，對(duì)機(jī)體起著重要的保護(hù)作用。免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞的種類(lèi)及其在腫瘤中的作用1) 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T regulatory cell, Treg)：Treg細(xì)胞是機(jī)體維持外周免疫耐受的最為重要的細(xì)胞亞群，這一只占CD4+T細(xì)胞5-10%的特定亞群的缺失，將導(dǎo)致致命性的自身免疫綜合征。根據(jù)其來(lái)源主要分為自然Treg(nature Treg, nT

11、reg)和誘導(dǎo)性Treg細(xì)胞(induced Treg, iTreg)。業(yè)已證實(shí)，腫瘤微環(huán)境中存在的Treg細(xì)胞，可以顯著抑制針對(duì)腫瘤細(xì)胞的天然和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。在腫瘤組織中，Treg細(xì)胞占CD4亞群的比例一般不超過(guò)50%，但可以保持這一水平至腫瘤的晚期階段。另外，在胃腸道、卵巢腫瘤發(fā)生的最初階段，Treg的比例就顯著增高。目前已采用諸如靶向抗體、抑制iTreg的誘導(dǎo)分子、抑制Treg功能等多種策略抑制Treg在腫瘤組織的免疫調(diào)節(jié)功能，對(duì)于腫瘤的治療，具有十分重要的意義。2) 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated macrophage, TAM)：腫瘤微環(huán)境中，巨噬細(xì)胞的出現(xiàn)往往

12、與某些腫瘤加速進(jìn)展關(guān)聯(lián)，包括能直接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，血管新生和免疫抑制。我們將能夠殺死微生物和攻擊腫瘤細(xì)胞并釋放多種炎性介質(zhì)的巨噬細(xì)胞，稱(chēng)為經(jīng)典的巨噬細(xì)胞，M1細(xì)胞；能抑制免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)Th2反應(yīng)，啟動(dòng)血管新生和組織重建修復(fù)的巨噬細(xì)胞稱(chēng)為M2細(xì)胞，即TAM。決定巨噬細(xì)胞極化的因素主要是腫瘤微環(huán)境中的多種蛋白。3) 髓性來(lái)源的抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cell, MDSC)：MDSC在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮著重要作用。在腫瘤組織中，浸潤(rùn)的MDSC主要是通過(guò)產(chǎn)生NO和高水平的精氨酸酶抑制T細(xì)胞的功能。同時(shí)，高水平的精氨酸酶和NO可直接誘導(dǎo)T細(xì)胞的凋亡。4)

13、 CD8調(diào)節(jié)性T細(xì)胞：目前認(rèn)為，CD8+T細(xì)胞亞群含有Treg細(xì)胞，這些細(xì)胞可識(shí)別不同的抗原，功能上與CD4+Treg相似。5) NKT調(diào)節(jié)性細(xì)胞：雖然NKT細(xì)胞在機(jī)體抗腫瘤中起著十分重要的作用，但近來(lái)研究表明，NKT細(xì)胞具有免疫抑制作用。六、腫瘤轉(zhuǎn)移腫瘤轉(zhuǎn)移是指惡性腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤，通過(guò)各種轉(zhuǎn)移方式，到達(dá)繼發(fā)組織和器官后得以繼續(xù)增殖生長(zhǎng)，形成與原發(fā)腫瘤相同性質(zhì)的繼發(fā)腫瘤的全過(guò)程。腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的基本生物學(xué)特征，是臨床上絕大多數(shù)腫瘤患者的致死因素。腫瘤轉(zhuǎn)移的基本過(guò)程腫瘤轉(zhuǎn)移包括多個(gè)步驟，可被形象的稱(chēng)為多階梯瀑布過(guò)程。各種腫瘤轉(zhuǎn)移的基本過(guò)程是相似的，它們一般包括以下步驟：早期原發(fā)癌生長(zhǎng)；

14、腫瘤血管生成；腫瘤細(xì)胞脫離并侵入基質(zhì)；進(jìn)入脈管系統(tǒng)；癌栓形成；繼發(fā)組織器官定位生長(zhǎng)；轉(zhuǎn)移癌繼續(xù)擴(kuò)散。概括的說(shuō)，主要是兩大步，首先，腫瘤侵襲-腫瘤細(xì)胞從原發(fā)瘤進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。腫瘤細(xì)胞不斷增殖，并從瘤母體分離，然后侵犯和破壞周?chē)＝M織，腫瘤細(xì)胞移動(dòng)進(jìn)入基質(zhì)，同時(shí)新生毛細(xì)血管的形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。其次，腫瘤轉(zhuǎn)移-腫瘤細(xì)胞從循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)入繼發(fā)器官。腫瘤細(xì)胞隨循環(huán)系統(tǒng)到達(dá)繼發(fā)臟器，牢固的粘附在脈管的內(nèi)皮層，并通過(guò)分泌多種蛋白溶解酶，降解脈管的基底膜，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逸出循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)入繼發(fā)器官，反應(yīng)性的通過(guò)自分泌、旁分泌或內(nèi)分泌方式產(chǎn)生多種信號(hào)因子，單獨(dú)或聯(lián)合調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)。七、腫瘤微環(huán)境腫瘤

15、微環(huán)境指腫瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、免疫細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等相互作用形成的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的特殊環(huán)境，這一環(huán)境具有腫瘤組織血供不足、間質(zhì)壓力高、營(yíng)養(yǎng)相對(duì)缺乏等特點(diǎn)。腫瘤微環(huán)境的異質(zhì)性是其最顯著的特征，主要表現(xiàn)在：不同病人具有不同的微環(huán)境；同一病人的腫瘤發(fā)展不同階段微環(huán)境不同；同一病人、同一發(fā)展階段不同部位的腫瘤微環(huán)境不同。腫瘤相關(guān)的基質(zhì)細(xì)胞1) 腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(TAFs)：是腫瘤微環(huán)境中數(shù)量最多、分布較廣的表型改變了的成纖維細(xì)胞。TAFs的來(lái)源可能有以下幾個(gè)途徑：腫瘤周?chē)g質(zhì)中的成纖維細(xì)胞；血管周?chē)?xì)胞；骨髓來(lái)源的間充值干細(xì)胞；經(jīng)過(guò)“上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化”的上皮腫瘤細(xì)胞；經(jīng)過(guò)“

16、內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化”的血管內(nèi)皮細(xì)胞。TAFs能夠誘發(fā)腫瘤形成，在腫瘤形成的階段起了重要作用。TAFs可以通過(guò)與腫瘤細(xì)胞之間的相互作用促進(jìn)腫瘤的血管生成，進(jìn)而提高腫瘤的惡性程度。2) 腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞：內(nèi)皮細(xì)胞是腫瘤血管生成的基礎(chǔ)，血管形成必須依賴(lài)于內(nèi)皮細(xì)胞的激活，遷移并最終形成血管腔。處于腫瘤微環(huán)境中的血管內(nèi)皮細(xì)胞呈不夠成熟及快速分裂狀態(tài)，并且表達(dá)腫瘤內(nèi)皮標(biāo)志物以及與血管發(fā)生密切相關(guān)的整合素、CD15、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體等，促進(jìn)腫瘤血管的生成。3) 腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞：腫瘤微環(huán)境在促進(jìn)腫瘤惡變的同時(shí)也改變著募集而來(lái)的免疫細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等，這些細(xì)胞通過(guò)釋放趨化因子、血管生長(zhǎng)因

17、子、基質(zhì)降解酶等促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。同時(shí)，腫瘤微環(huán)境也能調(diào)控周?chē)鞣N免疫細(xì)胞的代謝機(jī)能，為加速腫瘤組織的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移服務(wù)。八名詞解釋腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cells，CSC）是惡性腫瘤中能夠自我更新及分化形成腫瘤中多種癌細(xì)胞類(lèi)型的原始癌細(xì)胞。CSC源自組織中成體干細(xì)胞或祖細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，其生物學(xué)功能是作為惡性腫瘤的起始細(xì)胞，具有高度致瘤性。CSC還具有高轉(zhuǎn)移性和耐藥性，被認(rèn)為是惡性腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的根源。問(wèn)答題簡(jiǎn)述腫瘤干細(xì)胞的鑒定目前常用的鑒定方法主要有以下幾種：(1) 致瘤試驗(yàn)(Tumorigenic assay)：這項(xiàng)試驗(yàn)的依據(jù)是假定，癌細(xì)胞群中只有CSC具有無(wú)限增殖能力，

18、而絕大多數(shù)分化的癌細(xì)胞致瘤能力有限，因而將少量癌細(xì)胞植入NOD-SCID免疫缺陷小鼠后，只有CSC能夠形成腫瘤，而分化的癌細(xì)胞不能致瘤。通常的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)是干細(xì)胞植入2000個(gè)或以下細(xì)胞能形成腫瘤，而非干細(xì)胞在相同實(shí)驗(yàn)條件下需增加100倍或以上細(xì)胞數(shù)量才具有致瘤能力。(2) 球體形成試驗(yàn)(Sphere assay)：成體干細(xì)胞的一個(gè)重要特性是可以在含細(xì)胞因子的無(wú)血清培養(yǎng)基中形成懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞團(tuán)，稱(chēng)為球體。CSC也具有球體形成能力，如腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、胰腺癌和肺癌的CSC均能在合適條件下形成細(xì)胞球體。(3) 標(biāo)記滯留試驗(yàn)(Label-retention assay)：干細(xì)胞分裂后其中一個(gè)子代細(xì)胞

19、不再分裂、停留在干細(xì)胞階段，而令一個(gè)子代細(xì)胞則進(jìn)入活躍增殖期并發(fā)生分化，此類(lèi)活躍增殖細(xì)胞又稱(chēng)為短暫放大細(xì)胞或祖細(xì)胞，干細(xì)胞的這種分裂方式稱(chēng)為不對(duì)稱(chēng)分裂。根據(jù)這一特性，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入核苷酸前體如溴脫氧尿嘧啶(BrdU)，使其摻入到分裂細(xì)胞的DNA中，然后去除標(biāo)記物繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間，用抗BrdU熒光抗體進(jìn)行染色，干細(xì)胞表現(xiàn)為高熒光強(qiáng)度，因而又稱(chēng)標(biāo)記滯留細(xì)胞。(4) 集落形成試驗(yàn)(Colony-forming assay)：CSC具有無(wú)限增殖能力，因而在瓊脂糖凝膠或Matrigel生物膠上培養(yǎng)時(shí)具有顯著的集落形成率，而分化的癌細(xì)胞增殖能力有限，通常不能形成集落。(5) 侵襲試驗(yàn)(Invasio

20、n assay)：通常采用體外Matrigel生物膠侵襲試驗(yàn)進(jìn)行鑒定，其原理是將生物膠涂鋪在8m孔徑Transwell網(wǎng)上模擬基底膜，然后將待測(cè)細(xì)胞置于上層小室內(nèi)，下層孔內(nèi)放置10%血清的培養(yǎng)基及細(xì)胞因子，具有轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞在血清或細(xì)胞因子的刺激下穿越生物膠，此類(lèi)細(xì)胞可以計(jì)數(shù)定量分析。(6) 耐藥試驗(yàn)(Drug resistant assay)：CSC具有耐藥性，其機(jī)理尚未完全闡明。一些腫瘤的CSC表達(dá)ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，尤其是采用SP分選技術(shù)獲得的CSC，通常都進(jìn)行耐藥測(cè)試?？刹捎肕TT比色法、核素標(biāo)記的核苷酸摻入法、集落培養(yǎng)法等。九名詞解釋腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過(guò)程中，由

21、腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)而合成分泌的或是由機(jī)體對(duì)腫瘤反應(yīng)而異常產(chǎn)生/或升高的，反應(yīng)腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類(lèi)物質(zhì)。包括腫瘤胚胎性抗原、異位激素、酶和同工酶、血漿蛋白、腫瘤抗原及癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物等。存在于病人的血液、體液、細(xì)胞和組織中，可用生物化學(xué)、免疫學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行測(cè)定，對(duì)腫瘤的輔助診斷、鑒別診斷、療效觀測(cè)、預(yù)后評(píng)估有一定的臨床價(jià)值。問(wèn)答題1. 簡(jiǎn)述腫瘤分子診斷中的新技術(shù)？1) 比較基因組雜交技術(shù)(comparative genomic hybridization, CGH)：CGH是Kalioniemi等于1992年首次報(bào)道，主要用于腫瘤分子遺傳學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)研究的一種新方法。CGH是在

22、熒光原位雜交的基礎(chǔ)上演變而來(lái)，其實(shí)質(zhì)是雙色熒光原位雜交。其基本原理是將待測(cè)樣本基因組DNA和正常對(duì)照基因組分別用兩種不同顏色的熒光標(biāo)記，與正常中期染色體進(jìn)行原位抑制雜交，通過(guò)檢測(cè)基因組各個(gè)位點(diǎn)兩種標(biāo)記熒光素的強(qiáng)度，進(jìn)行定量對(duì)比分析，即可探明待測(cè)樣本基因組DNA拷貝數(shù)的變化。通過(guò)CGH，可以在全基因組范圍內(nèi)了解腫瘤基因組DNA拷貝數(shù)的變化，包括缺失、擴(kuò)增、復(fù)制等，并在染色體上定位這些改變，充分了解腫瘤細(xì)胞遺傳學(xué)異常與其分化、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等因素之間的關(guān)系，為腫瘤的臨床病理診斷提供強(qiáng)有力的依據(jù)，為腫瘤的基因診斷和基因克隆提供線索，該方法已成為研究腫瘤基因組遺傳不穩(wěn)定性的重要方法。2) mRNA差

23、異展示技術(shù)：是1992年由Liang等首先報(bào)道的。其原理主要依據(jù)RNA末端為polyA結(jié)構(gòu)，而與polyA相鄰的堿基組合只有12種。于此對(duì)應(yīng)合成12種引物，即在oligodT后面加上兩個(gè)相鄰堿基，形成與polyA的3端結(jié)合的錨引物，每種可以錨定mRNA總數(shù)的1/12。每種引物可以覆蓋1/12的mRNA群體，用每種引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，將獲得1/12的cDNA亞群體。然后用一個(gè)5端的任意引物對(duì)每個(gè)cDNA亞群體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，來(lái)自不同mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物大小是不同的，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，可將500bp以?xún)?nèi)的分子明顯分辨出來(lái)。在PCR反應(yīng)時(shí)加入熒光素、地高辛等標(biāo)記，電泳后進(jìn)行顯色反應(yīng)，就能發(fā)現(xiàn)有差異的

24、DNA片段，即差異表達(dá)基因的cDNA。從電泳膠上切下這些片段，擴(kuò)增后進(jìn)行測(cè)序，并與Genbank中已知序列進(jìn)行同源性比對(duì)，即可獲得該片段的基因類(lèi)型或發(fā)現(xiàn)新的全長(zhǎng)基因。3) 基因表達(dá)系列分析技術(shù)(SAGE)：SAGE是由Velcu-lescu等1995年首先報(bào)道，近幾年逐步發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)快速分析基因表達(dá)信息的技術(shù)。它通過(guò)快速和詳盡分析成千上萬(wàn)個(gè)表達(dá)序列標(biāo)簽來(lái)尋找出表達(dá)豐度不同的基因序列，從而較完整的獲得基因組表達(dá)信息。SAGE的原理主要有以下三點(diǎn)：(1) 從轉(zhuǎn)錄本的3端特定位置分離出的該轉(zhuǎn)錄本特異的標(biāo)簽包含有足夠的能代表該轉(zhuǎn)錄本所需之信息，能夠唯一確認(rèn)一種轉(zhuǎn)錄物；(2)分離自不同轉(zhuǎn)錄本的標(biāo)簽可以

25、被串聯(lián)成一定長(zhǎng)度后克隆進(jìn)載體、并以連續(xù)的形式輸入計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理，能對(duì)數(shù)以千記的轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行分析；(3) 同一標(biāo)簽的重復(fù)次數(shù)代表該轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)水平。目前已廣泛應(yīng)用在腫瘤生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域，極大的推動(dòng)了差異表達(dá)基因的研究發(fā)展，促進(jìn)了腫瘤分子診斷預(yù)測(cè)水平的提高。4) 基因芯片技術(shù)：是1995年斯坦福大學(xué)的Schena等首先報(bào)道的一種能對(duì)全基因組基因的表達(dá)水平進(jìn)行同步分析的新方法。這一技術(shù)將大量探針有序固定在固相支持物的表面，與待測(cè)樣品中的靶基因按堿基配對(duì)原理進(jìn)行雜交，再通過(guò)激光共聚焦顯微鏡、電子計(jì)算機(jī)系統(tǒng)分析，迅速得出待測(cè)樣本表達(dá)信息的分子生物學(xué)和遺傳學(xué)方法?；蛐酒夹g(shù)快速、平行、高效、高通量

26、的分析生物信息的特點(diǎn)，徹底改變了傳統(tǒng)的單基因模式，為在全基因組范圍內(nèi)研究疾病特別是腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的基因改變提供了一個(gè)強(qiáng)有力的工具，對(duì)全面、精確、深入的探索腫瘤的發(fā)病機(jī)制具有十分重要的意義。5) 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)：該技術(shù)是將純化的多肽、蛋白或其他分子作為探針高密度的排列固定于固相支持介質(zhì)表面而構(gòu)成微陣列，根據(jù)探針物理、化學(xué)或生物學(xué)特性的不同，選擇性的從待測(cè)生物樣品中捕獲蛋白。經(jīng)原位清洗除去未與探針結(jié)合的分子，再利用各種檢測(cè)技術(shù)定性、定量分析芯片上結(jié)合的蛋白。蛋白芯片高通量、平行分析、簡(jiǎn)便迅速的優(yōu)點(diǎn)使其在腫瘤分子預(yù)測(cè)診斷等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。6) 熒光定量PCR技術(shù)：是指在

27、常規(guī)PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記的探針，通過(guò)熒光信號(hào)積累對(duì)PCR的全程進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)其定量功能。該技術(shù)在腫瘤分子診斷中目前主要用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞或微轉(zhuǎn)移灶中微量腫瘤DNA或RNA的檢測(cè)、SNP的檢測(cè)、基因表達(dá)及甲基化研究等。舉例說(shuō)明如何應(yīng)用分子生物學(xué)新技術(shù)篩選腫瘤標(biāo)志物以蛋白質(zhì)芯片技術(shù)為例，該技術(shù)是將純化的多肽、蛋白或其他分子作為探針高密度的排列固定于固相支持介質(zhì)表面而構(gòu)成微陣列，根據(jù)探針物理、化學(xué)或生物學(xué)特性的不同，選擇性的從待測(cè)生物樣品中捕獲蛋白。經(jīng)原位清洗除去未與探針結(jié)合的分子，再利用各種檢測(cè)技術(shù)定性、定量分析芯片上結(jié)合的蛋白。利用該技術(shù)快速、簡(jiǎn)便、高通量平行分析的特點(diǎn)，對(duì)正常人和腫瘤患者

28、的血液、尿液、腦脊液等樣品進(jìn)行分析鑒定，通過(guò)比較不同疾病狀態(tài)下的差異表達(dá)蛋白發(fā)現(xiàn)具有診斷或預(yù)測(cè)價(jià)值的生物標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的早期診斷和預(yù)測(cè)。十名詞解釋基因診斷與基因治療基因診斷是采用分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的相關(guān)技術(shù)，如核酸分子雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析以及DNA序列測(cè)定等，直接檢測(cè)機(jī)體遺傳物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)水平和表達(dá)水平的異常，從而對(duì)疾病做出判斷?；蛑委熤傅氖且揽繉?dǎo)入人體或外源的遺傳物質(zhì)來(lái)治病的一種治療手段。包括糾正人自身基因結(jié)構(gòu)或功能上的錯(cuò)亂；或依靠外源遺傳物質(zhì)殺滅病變的細(xì)胞；或抑制外源病原體遺傳物質(zhì)的復(fù)制等。Ex vivo：指將外源基因的載體在體外導(dǎo)入自體或異體細(xì)胞，經(jīng)體

29、外細(xì)胞擴(kuò)增后，回輸患者體內(nèi)，讓外源基因表達(dá)以改善癥狀。In vivo：不需要細(xì)胞抑制，直接將外源遺傳物質(zhì)注射入機(jī)體內(nèi)，如DNA可通過(guò)載體與導(dǎo)入系統(tǒng)注入體內(nèi)，在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄、表達(dá)而發(fā)揮治療作用。病毒載體與非病毒載體：病毒載體是指利用病毒能夠感染細(xì)胞的特性將外源基因?qū)氚屑?xì)胞基因治療載體，由于對(duì)野生型病毒的生物學(xué)認(rèn)識(shí)尚不足，目前為止只有少數(shù)幾種病毒（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、皰疹病毒和痘苗病毒等）被成功改造為基因轉(zhuǎn)移載體。非病毒載體是指除病毒載體外被用于基因治療的轉(zhuǎn)移載體，目前常用的主要包括裸DNA/質(zhì)粒DNA，脂質(zhì)體載體及陽(yáng)離子多聚物載體等。問(wèn)答題基因治療面臨的關(guān)鍵是什么？目前在這些方面有什

30、么發(fā)展？基因治療關(guān)鍵中的首要問(wèn)題，是能使治療基因在特定的靶細(xì)胞高效表達(dá)。首先，嘗試建立靶向性的基因?qū)胂到y(tǒng)，應(yīng)用靶細(xì)胞表明的受體和它相應(yīng)的配體，與多聚陽(yáng)離子連接，通過(guò)后者與基因的質(zhì)粒DNA形成復(fù)合物，攜帶基因到達(dá)靶細(xì)胞。其次，嘗試靶向轉(zhuǎn)錄。真核生物有著復(fù)雜的機(jī)理來(lái)調(diào)控特定細(xì)胞群體特定基因的表達(dá)，可以利用這些調(diào)控元件來(lái)使目的基因相對(duì)特異的在腫瘤組織中表達(dá)，目前已經(jīng)有多種腫瘤選擇性的啟動(dòng)子用于基因治療?；蛑委熕玫幕蜣D(zhuǎn)移系統(tǒng)各有何優(yōu)缺點(diǎn)？你認(rèn)為那種基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)的發(fā)展前景好？病毒載體系統(tǒng)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高，表達(dá)持久，但其最大的缺點(diǎn)是具有較強(qiáng)的免疫原性，并可在整合過(guò)程中誘發(fā)突變，且導(dǎo)入的治療基因長(zhǎng)度有

31、限。非病毒載體系統(tǒng)較為安全，轉(zhuǎn)基因大小無(wú)限制，但其轉(zhuǎn)導(dǎo)效率偏低。十一名詞解釋EMT：上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型。指腫瘤侵襲階段，具有極性的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)換成具有活動(dòng)能力、能夠在細(xì)胞基質(zhì)間自由移動(dòng)的間質(zhì)細(xì)胞的現(xiàn)象，可促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生遷移和侵襲。它以上皮細(xì)胞極性的喪失及間質(zhì)特性的獲得為重要特征。EMT是一系列特定的細(xì)胞外刺激下發(fā)生的蛋白質(zhì)變性和轉(zhuǎn)錄改變的集合過(guò)程，從而使細(xì)胞發(fā)生長(zhǎng)期的、可逆性改變。移植性腫瘤動(dòng)物模型：指把動(dòng)物或人的腫瘤移植到同系、同種或異種動(dòng)物體內(nèi)，經(jīng)傳代后，它的組織學(xué)類(lèi)型明確，移植成活率、生長(zhǎng)速度、自發(fā)消退率、宿主荷瘤壽命、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性穩(wěn)定，并能在受體動(dòng)物中繼續(xù)傳代。主要分為同種移植

32、和異種移植兩大類(lèi)。問(wèn)答題簡(jiǎn)述腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的比較醫(yī)學(xué)腫瘤動(dòng)物模型及應(yīng)用24頁(yè)十二名詞解釋Targeted Vectors (Carriers)：靶向載體。是可將藥物通過(guò)局部給藥、胃腸道或全身血液循環(huán)而選擇的濃集于靶組織、靶器官、靶細(xì)胞或細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的載體制劑。一般具備以下特點(diǎn)：顆粒小，能在循環(huán)中通過(guò)毛細(xì)血管到達(dá)靶部位；載體能夠較好地負(fù)載藥物，載藥量足夠高，以滿(mǎn)足在靶區(qū)的治療濃度；經(jīng)過(guò)外包裝的藥物在靶位點(diǎn)釋放，仍應(yīng)具有足夠的生物學(xué)活性；有足夠的循環(huán)半衰期以確保到達(dá)靶部位；載體的生物相容性好，其降解產(chǎn)物能被機(jī)體清除或?qū)C(jī)體無(wú)害；抗原性小，熱源性小，不易形成血栓。 Enhanced permeabi

33、lity and retention effect (EPR)：通透性增強(qiáng)與滯留效應(yīng)。腫瘤組織由于快速生長(zhǎng)的需求，血管生成很快，導(dǎo)致新生血管外膜細(xì)胞缺乏、基底膜變形，因而納米級(jí)的嵌段共聚物膠束能穿透腫瘤的毛細(xì)血管壁的“縫隙”進(jìn)入腫瘤組織，而腫瘤組織的淋巴系統(tǒng)回流不完善，造成粒子在腫瘤部位蓄積，這就是所謂的EPR效應(yīng)，在實(shí)體瘤中是一種非常典型的現(xiàn)象。問(wèn)答題簡(jiǎn)述抗癌藥物（基因）靶向給藥的主要策略1) 利用或逃避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取的被動(dòng)靶向腫瘤：具有疏水性表面的顆粒易優(yōu)先被肝臟攝取，其次是脾和肺。而親水性的納米粒不易被肝脾攝取，是一種長(zhǎng)循環(huán)的給藥系統(tǒng)。通過(guò)接枝或嵌段共聚物的親水區(qū)和疏水區(qū)形成的核-殼型

34、膠束納米粒，直徑在100nm或更小，并具有親水的表面，可避開(kāi)肝脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取而在血液中長(zhǎng)期循環(huán)，最終被動(dòng)靶向腫瘤部位。2) 通過(guò)EPR效應(yīng)靶向腫瘤，屬于被動(dòng)靶向的一種，在當(dāng)前的靶向制劑研究中有比較廣泛的應(yīng)用。3) 腫瘤特異性靶向：為主動(dòng)靶向，主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面特異的分子標(biāo)記和腫瘤組織部位的微環(huán)境，來(lái)實(shí)現(xiàn)藥物特異性傳遞的。目前主要有以下途徑：利用單克隆抗體靶向腫瘤表面抗原，受體介導(dǎo)的靶向，利用腫瘤特異性分子或微環(huán)境激活原藥，通過(guò)腫瘤血管系統(tǒng)靶向腫瘤。4) 其他靶向策略：主要包括三種類(lèi)型，磁性制劑的腫瘤靶向、栓塞靶向制劑及熱敏介導(dǎo)的靶向等。十三NAChR的結(jié)構(gòu)、分型、與腫瘤的研究現(xiàn)狀NAChR是煙堿型乙酰膽堿受體，是一類(lèi)位于細(xì)胞膜上的、配體門(mén)控的陽(yáng)離子通道蛋白，由五個(gè)亞單位組成的同源或異源的五聚體。新近的研究表明，除神經(jīng)系統(tǒng)和肌肉組織，NAChR和其生理激動(dòng)劑Ach及乙酰膽堿酯酶（AChE）廣泛表達(dá)于的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，包括癌癥細(xì)胞。神經(jīng)NACh