實驗3-環(huán)境微生物的檢測(共5頁)

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上實驗三 環(huán)境微生物的檢測一、實驗目的1.了解周圍環(huán)境中微生物的分布情況。2.懂得無菌操作在微生物實驗中的重要性。3.了解四大類微生物的菌落特征。二、實驗原理在我們周圍的環(huán)境中存在著種類繁多的、數量龐大的微生物。土壤、江河湖海、塵埃、空氣、各種物體的表面以及人和動物體的口腔、呼吸道、消化道等都存在著各種微生物。由于它們體積微小，人們用肉眼無法觀察到它們個體的存在。但是只要稍加留意，我們就可以在發(fā)霉的面包、朽木上看到某些微生物群體。這些現(xiàn)象表明，自然界只要有微生物可以利用的物質和環(huán)境條件，微生物就可以在其上生長繁殖。據此，我們在實驗室里就可以用培養(yǎng)基來培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)基是

2、用人工配制的、適合微生物生長繁殖和產生代謝產物用的混合養(yǎng)料。其中含有微生物所需要的六大營養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機鹽、生長因子、氣體和水分。此外，根據不同的微生物的要求，在配制培養(yǎng)基時還需用酸液或堿液調節(jié)至適宜的pH。配制好的培養(yǎng)基必須進行滅菌。所謂滅菌是指采用各類的物理或化學因素，使物體內外的所有微生物喪失其生長繁殖能力的措施。經過滅菌后的物體是無菌的。消毒是與滅菌完全不同的概念，它是指用較溫和的物理因素殺死物體表面和內部病原微生物的一種常用的衛(wèi)生措施。滅菌的方法較多，廣泛使用的是高溫滅菌，其中最常用的是高壓蒸汽滅菌法。此法是把待滅菌的物品放在一個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進行的。在1.05kg

3、/cm2的蒸汽壓力下，溫度可達121。一般只要維持1520min，就可殺死一切微生物的營養(yǎng)體和它們的各種孢子。微生物的接種技術是生物科學研究中的一項最基本操作技術。為了確保純種不被雜菌污染，在整個接種過程中，必須進行嚴格的無菌操作。在實驗過程中必須牢固樹立無菌概念，經常保持實驗臺及周圍環(huán)境的清潔，嚴格無菌操作，避免雜菌的污染，這是保證實驗成功的必要條件。如將微生物接種到適合其生長的固體培養(yǎng)基表面，在適宜的溫度下(一般細菌37：霉菌等28)，培養(yǎng)一段時間(一般2448h)后，少量分散的菌體或孢子就可生長繁殖成肉眼可見的細胞群體，此即菌落。如平板上的菌落是由單個細胞(或單個孢子)生長繁殖而成的，就

4、是一個純種細胞群或克隆；若培養(yǎng)后大量菌落聚集在一起形成的為菌苔。不同種的微生物可形成大小、形態(tài)各異的菌落，根據微生物菌落形態(tài)的不同，可初步鑒別出四大類微生物：細菌、放線菌、酵母菌和霉菌。細菌的菌落呈圓形、較小而薄、透明或不透明、質地“細膩”，有的具有色澤，有的邊緣不整齊，有的表面濕潤、光滑，有的表面干燥有褶皺。此外，細菌常因分解含氮化合物而產生臭味。酵母菌的菌落通常比細菌菌落大，圓形、厚、不透明、色素單一，多為乳白，少數為橙或紅色。酵母菌因普遍能發(fā)酵含碳有機物產醇，故菌落多伴有酒香味。防線菌菌落小而致密，或堅硬、或呈粉狀。不少放線菌還產生特殊的土腥味。霉菌菌落大而疏松、或大而緊密。氣生菌絲會發(fā)

5、育形成一定形狀、構造和色澤的子實器官，所以菌落表面往往有肉眼可見的構造和顏色。三、實驗材料人體表和空氣中的微生物。四、實驗器材與試劑1.器材恒溫培養(yǎng)箱、無菌平皿、電爐、酒精燈、火柴、無菌棉簽和記號筆。2.試劑牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、酵母膏葡萄糖培養(yǎng)基(簡稱YPD)、高氏一號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基。五、 實驗操作I.融化培養(yǎng)基將裝有無菌培養(yǎng)基的三角瓶置水浴中煮沸，待培養(yǎng)基融化后取出，當冷至5060左右時，進行下一步。II、倒平板有持皿法和疊皿法，操作要點如下：1.持皿法(1)將無菌培養(yǎng)皿疊放在酒精燈左側，以便拿取。(2)點燃酒精燈。(3)酒精燈旁，左手握三角瓶底部，傾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手小

6、指與小尾魚際(即小指邊緣)夾住棉塞并將其拔出(切勿將棉塞放在桌上)，隨之將瓶口在火焰上過一下(不可灼燒，以防爆裂)，以殺死可能沾在瓶口的雜菌。然后將三角瓶從左手換至右手(用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部)。操作中瓶口應保持在火焰23cm，瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。左手拿起一套平皿，用無名指和小指托住皿底，用中指和拇指夾住皿蓋，食指于皿蓋上為支點，在火焰旁，打開皿蓋，讓三角瓶伸入，隨后倒入培養(yǎng)基。一般倒入15ml左右培養(yǎng)基即可鋪滿整個皿底。蓋上皿蓋，置水平位置待凝。然后將三角瓶移至左手，瓶口在次過火并塞緊瓶蓋。2. 疊皿法此法適于在超干凈臺上操作，基本步驟同持皿法。不同之處是左

7、手不必持皿，而是將瓶皿疊放在酒精燈的左側并靠近火焰。按上述方法用右手拿三角瓶，左手打開最上面的皿蓋，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋后即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平皿。操作中瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。III、貼標簽待培養(yǎng)基完全凝固后，在皿底帖上標簽，注明檢測類型，組別及日期(也可用記號筆書寫在皿底)IV、檢測方法環(huán)境中微生物種類多樣，檢測方法也各異，先選幾種列舉如下：1.空氣 檢測實驗室空氣中的微生物時，只要打開無菌平板的皿蓋，讓其暴露在空氣中一段時間(510min)然后將皿蓋蓋上即可。2.桌面 檢測實驗臺桌面微生物是，可用一根無菌棉簽，先在無菌平板的圖4-1 含菌棉簽平板劃線示意圖

8、左：開啟皿蓋法 右：劃線示意圖一個區(qū)域內濕潤和試劃幾下，然后用其擦抹桌面等物體表面，在以此棉簽在平板的另一區(qū)域作來回劃線接種(如圖4-1)。本操作應以無菌操作要求進行，即在火焰旁用左手拿起平板，用中指 無名指和小指托住皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并開成一縫，右手持棉簽在培養(yǎng)基表面劃線接種，無菌棉簽濕潤和試劑區(qū)可作為無菌對照。3.頭發(fā) 移去放在桌面上的無菌平板的皿蓋，是頭發(fā)部位位于平板的上方，并用手指撥動頭發(fā)數次，在蓋上皿蓋即可。4.手指 可用未洗的手指先在無菌平板的培養(yǎng)基一側(約一半的面積)作劃線接種，并在皿底作好標記。然后用肥皂、流水洗手，用洗凈的手指于平板培養(yǎng)基的另一側作同樣的劃線接種，蓋好皿蓋。待培養(yǎng)后比較兩雜菌生長的情況。5.口腔 打開無菌平板培養(yǎng)基的皿蓋，使口對著平板培養(yǎng)基的表面，以咳嗽或打噴嚏的方式接種，然后蓋上皿蓋。V、培養(yǎng)將以上各種檢測平板倒置于28培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至下周實驗時觀察并計數各平板上的菌落數。VI、觀察注意觀察不同類型菌落的大小、外形和顏色等特征，將觀察結果記錄在實驗報告上。