12年臨床助理醫(yī)師測(cè)試輔導(dǎo)：急性胰腺炎和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法

1、12 年臨床助理醫(yī)師測(cè)試輔導(dǎo)：急性胰腺炎和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法2012年臨床助理醫(yī)師考試輔導(dǎo)：急性胰腺炎與細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法導(dǎo)讀：細(xì)胞凋亡（ apoptosis ）是由基因控制的細(xì)胞自主地有序死亡，又稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡，是一種消滅不需要的和損害的細(xì)胞的生命調(diào)控過(guò)程。凋亡細(xì)胞形成凋亡小體很快被臨近的細(xì)胞所吞噬，其特點(diǎn)是不引起炎癥反應(yīng)。機(jī)體以犧牲少部分細(xì)胞為代價(jià)換取整體的生存與穩(wěn)定。急性胰腺炎（ acutepancreatitis， AP）的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，激活的胰蛋白酶對(duì)胰腺實(shí)質(zhì)的自身消化是 AP發(fā)生的重要病理過(guò)程。近年來(lái)，人們已注意到急性水腫型胰腺炎的胰腺中存在著較多的凋亡細(xì)胞，而急性壞死型

2、胰腺炎（ acutenecrotizingpancreatitis ，ANP）卻很少出現(xiàn)凋亡細(xì)胞。這就提示細(xì)胞凋亡在 AP的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著一定作用。細(xì)胞凋亡的概念和檢測(cè)方法細(xì)胞凋亡在生命過(guò)程中具有重要的生物學(xué)意義，它嚴(yán)格控制著細(xì)胞死亡和增殖的平衡。細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生大體是細(xì)胞表面分子接受到誘導(dǎo)因子刺激后將信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)部，觸發(fā)了細(xì)胞內(nèi)部的遺傳機(jī)制，激活了核酸內(nèi)切酶，使細(xì)胞染色質(zhì) DNA降解。核酸內(nèi)切酶的活性依賴(lài)細(xì)胞內(nèi)高濃度的鈣離子，鈣離子達(dá)到水平的時(shí)間需要 30 90min ，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的升高是細(xì)胞發(fā)生調(diào)亡的一個(gè)重要條件。細(xì)胞凋亡過(guò)程中有一系列特征性的形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞學(xué)及分子生物

3、學(xué)方面的改變。其中最重要的特征之一就是凋亡細(xì)胞染色體基因組的片段化，是由依賴(lài)鈣離子的核酸內(nèi)切酶催化的，這種核酸內(nèi)切酶的性質(zhì)尚不清楚，但作用是十分肯定的。核酸內(nèi)切酶將核小體間的連接部位切割成單鏈 DNA片段，這種 DNA片段的斷裂不是隨機(jī)的，而是 185bp 的倍數(shù)，這種片段化在瓊脂糖電泳中表現(xiàn)為特殊的云梯狀帶型，據(jù)此可初步確定細(xì)胞凋亡的存在。細(xì)胞凋亡時(shí)染色體 DNA會(huì)產(chǎn)生單鏈切口，因此設(shè)計(jì)了原位切口翻譯及標(biāo)記技術(shù)。凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，小分子 DNA片段丟失，可用流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)檢測(cè)。1. 形態(tài)學(xué)上的改變：胰腺炎時(shí)的胰腺凋亡細(xì)胞主要表現(xiàn)為有完整的細(xì)胞膜、胞核固縮、凋亡小體形成，線(xiàn)粒體和酶原

4、顆粒完整。由于核小體 DNA破裂成碎片，同焦點(diǎn)激光掃描顯微鏡觀(guān)察到各種各樣的三維結(jié)構(gòu)。2. 端口標(biāo)記檢測(cè)（ triphosphate-biotinnick-endlabeling，TUNEL）：TUNEL廣泛用于檢測(cè)DNA碎片片段，該方法具有操作簡(jiǎn)單、結(jié)果特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，特別對(duì)于低水平凋亡檢測(cè)更敏感。kimura等用切除雙側(cè)腎上腺的大鼠誘導(dǎo)胰腺炎，采用半薄及超薄結(jié)構(gòu)模式實(shí)施TUNEL和同焦點(diǎn)激光掃描顯微鏡檢查，細(xì)胞凋亡的陽(yáng)性結(jié)果是一致的。但在結(jié)扎胰膽管的模型中用TUNEL檢測(cè)不出凋亡細(xì)胞，說(shuō)明不同方式誘導(dǎo)出的胰腺炎模型對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響。3. 流式細(xì)胞術(shù)（ flowcytometry ） ; 發(fā)生凋亡的細(xì)胞在細(xì)胞學(xué)上有一系列特征性改變，所有這些有別于壞死等其它類(lèi)型細(xì)胞死亡的特征都能利用流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)進(jìn)行研究