所謂半保留復制就是以

1、三、判斷題1. 所謂半保留復制就是以 DNA親本鏈作為合成新子鏈 DNA的模板，這樣產(chǎn)生的新的雙鏈 DNA分子由一條舊鏈和一條新鏈組成。2. DNA的復制需要 DNA聚合酶和RNA聚合酶。3在高鹽和低溫條件下由 DNA單鏈雜交形成的雙螺旋表現(xiàn)出幾乎完全的互補性，這一過程可看作是一個復性(退火)反應。4. 在核酸雙螺旋(如DNA)中形成發(fā)夾環(huán)結構的頻率比單鏈分子低。發(fā)夾結構的產(chǎn)生需要回文序列使雙鏈形成對稱的發(fā)夾，呈十字結構。5B型雙螺旋是 DNA的普遍構型，而 Z型則被確定為僅存在于某些低等真核細胞中。6 病毒的遺傳因子可包括 l到300個基因。與生命有機體不同，病毒的遺傳因子可能是 DNA或

2、RNA(但不可能同時兼有!)，因此 DNA不是完全通用的遺傳物質(zhì)。7. Cot12與基因組大小相關。8C0C1/2與基因組復雜性相關。9非組蛋白染色體蛋白負責30nm纖絲高度有序的壓縮。10.大腸桿菌中，復制叉以每秒5O0個堿基對的速度向前移動，復制叉前的 DNA以大約 3000rmin的速度旋轉。11.“模板”或“反義” DNA鏈可定義為：模板鏈是被RNA聚合酶識別并合成一個互補的mRNA，這一 mRNA是蛋白質(zhì)合成的模板。12.在DNA復制中，假定都從53同樣方向讀序時，新合成 DNA鏈中的核苷酸序列同模板鏈一樣。13.DNA的53合成意味著當在裸露3-OH的基團中添加dNTP時，除去無機

3、焦磷酸DNA鏈就會伸長。14.在先導鏈上 DNA沿53方向合成，在后隨鏈上則沿35方向合成。15.如果 DNA沿35合成，那它則需以5三磷酸或3脫氧核苷三磷酸為末端的鏈作為前體。16.大腸桿菌 DNA聚合酶缺失35校正外切核酸酶活性時會降低 DNA合成的速率但不影響它的可靠性。17.復制叉上的單鏈結合蛋白通過覆蓋堿基使DNA的兩條單鏈分開，這樣就避免了堿基配對。18.只要子鏈和親本鏈中的一條或兩條被甲基化，大腸桿菌中的錯配校正系統(tǒng)就可以把它們區(qū)別開來，但如果兩條鏈都沒有甲基化則不行。19.大腸桿菌、酵母和真核生物病毒DNA的新一輪復制是在一個特定的位點起始的，這個位點由幾個短的序列構成，可用于

4、結合起始蛋白復合體。20.拓撲異構酶之所以不需要ATP來斷裂和重接 DNA鏈，是因為磷酸二酯鍵的能量被暫時貯存在酶活性位點的磷酸酪氨酸連接處。21.酵母中的拓撲異構酶突變體能夠進行 DNA復制，但是在有絲分裂過程中它們的染色體不能分開。22.靠依賴于DNA的DNA聚合酶所進行的 DNA復制要求有作為一個引發(fā)物的游離3OH的存在。游離的3OH可以通過以下三種途徑獲得：合成一個RNA引物、DNA自我引發(fā)的或者一個末端蛋白通過磷酸二酯鍵共價結合到一個核苷酸。23.當 DNA兩條鏈的復制同時發(fā)生時，它是由一個酶復合物： DNA聚合酶負責的真核生物的復制利用3個獨立作用的 DNA聚合酶，Pol的一個拷貝

5、(為了起始)和Po1的兩個拷貝(DNA多聚體化，當MFl將RNA引發(fā)體移去之后填入)。24.從ori開始的噬菌體復制的起始是被兩個噬菌體蛋白 O和 P所控制的，在大腸桿菌E.coli中 O和 P是 DnaA和 DnaC蛋白的類似物?；谶@種比較，O蛋白代表一個解旋酶而 P蛋白調(diào)節(jié)解旋酶和引發(fā)酶結合。25拓撲異構酶 和可以使 DNA產(chǎn)生正向超螺旋。26拓撲異構酶 解旋需要ATP酶。27. RNA聚合酶 合成 DNA復制的RNA引物。28線粒體 DNA的復制需要使用 DNA引物。29. 噬菌體整合到大腸桿菌基因組上是由一個位點專一的拓撲異構酶(入整合酶)催化的，它可以識別在兩條染色體上短的特異 D

6、NA序列。30在真核生物染色體 DNA復制期間，會形成鏈狀 DNA。31所有已知的基因轉變都需要一定量的 DNA合成。32根據(jù)不同物種同一蛋白質(zhì)中氨基酸的不同來估計突變率往往較實際的突變率低，因為一些突變體由于危及蛋白質(zhì)功能，在選擇壓力下從種群中消失。33因為組蛋白 H4在所有物種中都是樣的，可以預期該蛋白基因在不同物種中也是一樣的。34DNA修復機制有很多種，但所有這些機制都依賴于二倍體染色體上兩套遺傳信息的存在。35.自發(fā)的脫膘呤作用和由尿嘧啶DNA糖基化酶切去一個已脫堿基的胞嘧啶都會產(chǎn)生可被無膘呤嘧啶內(nèi)切核酸酶作為底物識別的同樣的中間產(chǎn)物。36.DNA修復的第一步是由專用于修復過程的酶催

7、化的，下面的步驟由 DNA代謝過程中的常用酶催化。37.大腸桿菌中 SOS反應的最主要作用是通過在原始 DNA損傷區(qū)附近導人補償突變來提高細胞存活率。38.DNA中四個常用堿基自發(fā)脫氨基的產(chǎn)物，都能被識別出來。39.在細菌細胞中，短片段修復是由損傷誘導的。相反，長片段修復是組成型的，且往往涉及長約150O一9000bp損傷 DNA片段的替換。40.真核生物中 DNA的修復沒有原核生物重要，這是因為體細胞的二倍體特征。41.一般性重組需要交換的雙方都有一長段同源 DNA序列，而位點專一重組僅需要短而專一的核苷酸序列。某些情況下，只需要交換雙方中的一方具有該序列即可。42.一般性重組包括 DNA片

8、段的物理交換，該過程涉及 DNA骨架上磷酸二酯鍵的斷裂 和重新形成。43.RecA蛋白同時具有位點專一的單鏈切割的活性和將單鏈從雙螺旋 DNA分子上脫離 的解旋酶的功能，但需要依賴于ATP活性。44.大腸桿菌的單鏈結合蛋白通過與糖磷酸骨架結合并使堿基暴露，從而解開單鏈上的短發(fā)夾結構。45.RecA蛋白同時與單鏈、雙鏈 DNA結合，因此它能催化它們之間的聯(lián)會。46.交叉鏈互換包括交叉鏈和未交叉鏈，至少其中一條鏈的磷酸骨架斷裂才可能使這個過程逆轉。47.基因轉變是真菌類偶然改變性別的方式；正常情況下，一次接合產(chǎn)生等量的雄性與雌性孢子，但偶然也會出現(xiàn)13或31的比例。48.當兩個 DNA的突變片段相

9、互間不能反式互補，則可以推測這兩個突變影響了同一種功能。這樣的兩個突變和每個不能反式互補的突變分為同一個互補群，并被認為是一個獨立遺傳單位的一部分。這個遺傳單位可能是一個順反子，或者如果突變穩(wěn)定地干擾了轉錄過程，這可能是一個多順反子轉錄單位。49.編碼區(qū)以外的突變不會導致細胞或生物體表型改變。50.若一個二倍體酵母細胞中發(fā)生了一個錯義突變，而這一突變將另外一個不同的氨基酸引入了一個分解代謝酶的催化位點，從而使得這個酶可以利用別的底物。這就是所謂的功能獲得性突變。51因為 T4噬菌體至少編碼30種參與基因組復制和轉錄的酶，它和寄主 DNA和RNA聚合酶都是獨立的，但它必須依賴寄主蛋白質(zhì)的復制機制

10、。52.小的DNA病毒，如 SV40和噬X174完全依賴寄主復制機制來復制它們的 DNA。53. 負鏈病毒不包含編碼蛋白的基因。54追蹤有外殼病毒的一個生活周期就等于游歷整個細胞。55當一個噬菌體侵染一個合適的大腸桿菌寄主細胞時，通常是裂解性侵染，釋放出幾百個子代噬菌體；更少見的是，它會整合到寄主染色體中，產(chǎn)生帶有原噬菌體染色體的溶原菌。56通過從寄主細胞表面出芽生殖的病毒常因為出芽造成細胞表面改變而致癌。57一種把新病毒按 DNA或RNA分類的簡易方法是看它的生長是否受放線菌素 D的抑制。放線菌素 D只阻遏依賴DNA的RNA合成，而對依賴RNA的復制酶無影響，如果病毒生長受它抑制，那肯定是

11、DNA病毒。58大病毒比小病毒更有可能存在重疊基因，因為它們有更多的基因。59因為類病毒不編碼任何蛋白但又能夠復制并在植物中造成嚴重的疾病，所以非常特殊。60.負責噬菌體 DNA合成的酶是在裂解循環(huán)的晚期形成的。61.溶源化是一個雙鏈 DNA病毒的生活周期中的一種狀態(tài)，是當病毒的基因組整合進一個宿主細胞的基因組時形成的狀態(tài)。62.c蛋白的穩(wěn)定性是影響溶源和裂解循環(huán)之間開關的一個關鍵。63.為了把噬菌體附著位點(attp)和在細菌染色體上的附著位點(attB)結合重組起來，噬菌體 DNA在感染大腸桿菌后靠末端cos位點退火成環(huán)。64下面哪些結構物能夠誘導乳糖操縱子?哪些是半乳糖苷酶的底物? (a

12、)l，4半乳糖苷 (b)l，4半乳糖苷 (c)1，6半乳糖苷 (d)l，6半乳糖苷 (e)上面既沒有誘導物，也沒有底物65下面哪些說法是正確的? (a)Lac A的突變體是半乳糖苷透性酶的缺陷 (b)在非誘導的情況下，每個細胞大約有4分子的半乳糖苷酶 (c)乳糖是一種安慰誘導物 (d)RNA聚合酶同操縱基因結合 (e)多順反子 mRNA是協(xié)同調(diào)節(jié)的原因 (f) Lac阻遏物是一種由4個相同的亞基組成的四聚體 (g)腺苷酸環(huán)化酶將 cAMP降解成 AMP (h) CAP和 CRP蛋白是相同的 (i)-35和-10序列對于RNA聚合酶識別啟動子都是很重要的 (j)色氨酸的合成受基因表達、阻遏、弱化

13、作用和反饋抑制的控制 (k)Trp的引導 mRNA能夠同時形成三個“莖環(huán)”結構 (l)在轉錄終止子柄部的 A-T堿基對可以增強結構的穩(wěn)定性 (m)真核生物和原核生物的轉錄和翻譯都是偶聯(lián)的 (n)在色氨酸濃度的控制下，核糖體停泊在 Trp引導區(qū)串色氨酸密碼子上，但并不與之脫離 (o)Ara C蛋白既可作為激活蛋白，又可作為阻遏蛋白起作用 (p)Ara C的表達不受調(diào)控66轉錄的起始位點(stp)決定在模板鏈上嘧啶核苷酸的位置，在此形成第一個雜合的 RNA和 DNA堿基對。67反轉錄病毒侵染常常同時導致子代病毒的非致死釋放和被侵染細胞內(nèi)致癌的永久性基因改變。68轉座酶可以識別整合區(qū)周圍足夠多的序列

14、，這樣，轉座子不整合到基因的中間，因為破壞基因?qū)毎侵滤赖摹?9轉座要求供體和受體位點之間有同源性。70TnA家族的轉座子通常轉移三種基因：轉座酶、解離酶和氨芐抗性基因。71Tn10高水平表達轉座酶。72水晰的基因組比人的基因組大。73高等真核生物的大部分 DNA是不編碼蛋白質(zhì)的。74. 假基因通常與它們相似的基因位于相同的染色體上。75在有絲分裂中，端粒對于染色體的正確分離是必要的。76大多數(shù)看家基因編碼低豐度的 mRNA。77所有真核生物的基因都是通過對轉錄起始的控制進行調(diào)控的。78所有高等真核生物的啟動子中都有TATA盒結構。79只有活性染色質(zhì)轉錄的基因?qū)?DNase 敏感。80. 內(nèi)

15、含子通常可以在相關基因的同一位置發(fā)現(xiàn)。8140以上的 Drosophila cirilis基因組是由簡單的7bp序列重復數(shù)百萬次組成。82衛(wèi)星 DNA在強選擇壓力下存在。83真核細胞中的RNA聚合酶僅在細胞核中有活性。84. 在RNA的合成過程中，RNA鏈沿35方向延長。85. 候選三磷酸核苷通過對生長中RNA鏈的磷酸的親和攻擊加到鏈上。86核不均一RNA是mRNA和rRNA的前體而不是tRNA的前體。87密碼子AUG專門起 mRNA分子編碼區(qū)的終止作用。88tRNAfMet的反密碼于是 TAC。89. RNA聚合酶能以兩個方向同啟動子結合，并啟動相鄰基因的轉錄。但是，模板鏈的選擇由另外的蛋白

16、因子確定。90細菌細胞用一種RNA聚合酶轉錄所有的RNA，而真核細胞則有三種不同的RNA聚合酶。91. 轉錄因子具有獨立的 DNA結合和轉錄激活結構域。92.每個轉錄因子結合位點被單個轉錄因子識別。93.糾正下列一段話中的錯誤： 在E. Coli中，通過RNA聚合酶同操縱基因的結合來起始轉錄。與轉錄起點堿基互 補的dNTP同亞基結合，然后是第二個dNTP通過與第一個 dNTP形成25磷酸 二酯鍵而結合上。當生成的RNA鏈約有12個核苷酸長度時， 亞基脫離 DNA聚合酶，RN鏈在全酶的作用下繼續(xù)延伸。當 DNA聚合酶在RNA鏈上遇到終止密碼子時，轉錄作用停止。94. 在tRNA分子中普遍存在的修

17、飾核苷酸是在摻入tRNA轉錄物結合前由標準核苷酸共價修飾而來。95如果tRNATyr加的反密碼子發(fā)生單個堿基變化后成為絲氨酸的反密碼子，被加入到無細胞系統(tǒng)，所得的蛋白質(zhì)在原來應為絲氨酸的位置都變成了酪氨酸。96. 在肽鏈延伸的過程中，加入下一個氨基酸比加人氨酰 tRNA 更能激活每個氨酰tRNA間的連接。97搖擺堿基位于密碼子的第三位和反密碼子的第一位。98核糖體小亞基最基本的功能是連接mRNA與tRNA，大亞基則催化肽鍵的形成。99. 蛋白質(zhì)合成時，每加人一個氨基酸要水解4個高能磷酸鍵(4個密碼子)，所消耗的總能量比起 DNA轉錄(每加入一個核苷酸用兩個高能磷酸鍵，6個密碼子)要少。100因

18、為 AUG是蛋白質(zhì)合成的起始密碼子，所以甲硫氨酸只存在于蛋白質(zhì)的 N末端。101通過延緩負載tRNA與核糖體結合以及它進一步應用于蛋白質(zhì)合成的時間，可使與不適當堿基配對的tRNA離開核糖體，提高蛋白質(zhì)合成的可靠性。102. 延伸因子eEF1幫助氨酰tRNA進入 A位點依賴于ATP內(nèi)一個高能鍵的斷裂。103三種RNA必須相互作用以起始及維持蛋白質(zhì)的合成。104G-U堿基負責fMet-tRNA對GUG的識別。105.限制與修飾現(xiàn)象是宿主的一種保護體系，它是通過對外源 DNA的修飾和對自身 DNA的限制實現(xiàn)的。106.限制性內(nèi)切核酸酶在 DNA中的識別切割位點的二級三級結構也影響酶切效率。一般來說，

19、完全切割質(zhì)?；虿《?DNA，要比切割線狀 DNA需要更多的酶，最高的需要20倍。107.如果限制性內(nèi)切核酸酶的識別位點位于 DNA分子的末端，那么接近末端的程度也 影響切割，如Hpa和Mbo 要求識別序列之前至少有一個堿基對存在才能切割。108.能夠產(chǎn)生防御病毒侵染的限制性內(nèi)切核酸酶的細菌，其本身的基因組中沒有被該核酸酶識別的序列。109限制性圖譜與限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)圖譜的最顯著的區(qū)別在于前者是一個物理圖譜而后者是一個連鎖圖。110用限制性內(nèi)切核酸酶Hpa 分別切割載體 DNA和供體 DNA后，可用Ecoli DNA 連接酶進行連接。111已知某一內(nèi)切核酸酶在一環(huán)狀 DNA上有3

20、個切點，因此，用此酶切割該環(huán)狀 DNA，可得到3個片段。112.迄今所發(fā)現(xiàn)的限制性內(nèi)切核酸酶既能作用于雙鏈 DNA，又能作用于單鏈 DNA。113基因工程中使用的類限制性內(nèi)切核酸酶不僅有內(nèi)切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。114.DNA多態(tài)性就是限制性片段長度多態(tài)性。115.用限制性內(nèi)切核酸酶 Pst 切割質(zhì)粒 pBR322后，再用外切核酸酶.coli 進行系列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突變體。116.甘油會使許多限制性內(nèi)切核酸酶的特異性發(fā)生改變，是導致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的辦法是酶切反應體系中，將甘油的濃度控制在5以下。117.具有EcoR 末端的外源片段只能以一個方

21、向插入到EcoR 末端的載體中。118.從Esherichia coli K中分離的限制性內(nèi)切核酸酶命名為 EcoK。119.同一種限制性內(nèi)切核酸酶切割靶 DNA，得到的片段的兩個末端都是相同的。120.在限制與修飾系統(tǒng)中，修飾主要是甲基化作用，一旦位點被甲基化了，其他的限制性酶就不能切割了121.稀有酶是指那些識別序列很長又不常用的限制性內(nèi)切核酸酶。122.T4 DNA連接酶和E.coli連接酶都能催化平末端和粘性末端的連接。123.T4 DNA連接酶和E.coli連接酶都能催化雙鏈 DNA和單鏈 DNA的連接。124.反轉錄酶能夠以單鏈RNA或單鏈 DNA為模板，在引物的引發(fā)下合成一條互補

22、的DNA鏈。以 RNA為模板合成的 DNA是互補 DNA(complementaly DNA, cDNA)。若是以 DNA模板合成 DNA，dNTP的摻人速度很低(約5個核苷酸秒)，比 T7 DNA 聚合酶的合成速度差不多低100倍。125.以RNA為模板，用反轉錄酶可同時產(chǎn)生單鏈和雙鏈的cDNA，雙鏈 DNA是由自身引 物引導合成。但這種自身引物引導的合成效率遠低于外加寡核苷酸引物引導的合 成。126.Ba131核酸酶(Ba131 nuclease)是 Ca2+依賴性的，在反應混合物中加入 EDTA便可抑制它的活性。127.外切核酸酶不能在雙鏈 DNA的 gap和 nick處切割 DNA。1

23、28.當一個 DNA結合蛋白同它識別的核苷酸序列結合以后，就保護了它們的磷酸二酯 鍵免遭切割，其結果，電泳膠上就有明顯可見的空缺帶(與對照相比)，這就是 DNA 足跡法。129.T4 DNA連接酶和E.coli連接酶作用時都需要ATP和NAD+作為輔助因子。130.多核苷酸激酶之所以能夠用于 DNA片段的標記，是因為它能夠?qū)蝹€的32P標記的單核苷酸加到每一 DNA鏈的5端。131.在反轉錄過程中，使用 AMV比使用 M-MLV可得到較多的產(chǎn)物。132.真核生物可能有兩種DNA連接酶，連接酶和連接酶 都能在 DNA合成和連接中起作用。133.DNA聚合酶有三種酶活性，其中35外切核酸酶的活性在

24、較多的dNTP存在 下，常被53合成酶的活性所掩蓋。134用同一種酶切割載體和外源 DNA得到粘性末端后，為防止它們自身環(huán)化，要用 CIP將它們脫磷酸。135.外切核酸酶的作用產(chǎn)物可以作為末端轉移酶的作用底物。136.用外切酶作系列缺失突變時，可以從突出的3端開始。137.nick和gap的含義是不同的，前者指 DNA的單鏈中有較小的缺失，后者僅是斷開 了一個磷酸二酯鍵。138.迄今發(fā)現(xiàn)的質(zhì)粒 DNA都是環(huán)狀的。139.線性質(zhì)粒同環(huán)狀質(zhì)粒一樣都不帶有宿主必需的基因。140.有 a、b、c三個質(zhì)粒，因為 a和 b能夠共存于一個細胞，a和 c也可共存于同一個細胞，所以 b和 c一定能夠共存于同一個

25、細胞。141.插入元件(IS)也是一種轉座元件，它除了有轉座酶基因外，還有附加基因。142.如果兩個不同的質(zhì)粒可以穩(wěn)定地共存于同一個細胞中，這兩種質(zhì)粒則屬于同一個不親和群。143.一個帶有反向重復序列的雙鏈 DNA經(jīng)變性后，復性時其單鏈可形成發(fā)夾環(huán)。144.能夠在不同的宿主細胞中復制的質(zhì)粒叫穿梭質(zhì)粒。145.任何一種質(zhì)粒都可以用氯霉素擴增的方法，增加它的拷貝數(shù)。146.只有完整的復制子才能進行獨立復制，一個失去了復制起點的復制子不能進行獨立復制。147CsCl-EB密度梯度離心法純化SC DNA原理是根據(jù) EB可以較多地插入到 SC DNA 中，因而沉降速度較快。148質(zhì)粒 Co1El同 pS

26、C101共整合后，得到重組質(zhì)粒 pSC134，具有兩個復制起點，這兩個起點在任何細胞中都是可以使用的。149pBR322可以用于粘性末端連接、平末端連接和同聚物接尾法連接，無論用哪種方法連接，都可以用同一種酶回收外源片段。150所謂穿梭質(zhì)粒載體是能夠在兩種以上的不同宿主細胞中復制的質(zhì)粒，所用的復制起點不同。151.一般情況下，質(zhì)粒既可以整合到染色體上，也可以獨立存在。152. Co1El是唯一用作基因工程的自然質(zhì)粒載體，它具有四環(huán)素抗性標記，因而很容易選擇。153.某一染色體 DNA經(jīng)內(nèi)切酶Sal 切割后，產(chǎn)生了若干個具有粘性末端的 DNA片段，將這些片段分別在 T4 DNA連接酶的作用下自身

27、連接成環(huán)，然后導人受體細胞，都可以進行獨立地復制。154如果細菌的某種表型特征在UV處理下喪失后不再恢復，這種表型有可能是質(zhì)粒賦予的。155基因克隆中，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體是沒有用的。156.代型載體(replacement vector)是指同一種限制性內(nèi)切核酸酶在DNA中具有兩 個切點。外源 DNA通過取代這兩個切點間的片段被克隆。157現(xiàn)在最常用的 pUC載體是 pUC18，它的分子量小，具有多克隆位點和易于選擇的分子標記，并且是松弛型復制。另外，這種載體可在輔助質(zhì)粒的幫助下合成單鏈 DNA。158.噬菌粒(phagemid)pUC118pUC119載體是集質(zhì)粒和絲狀噬菌體有利特征于一身

28、的載體，既能合成單鏈 DNA，又能合成雙鏈 DNA。159.噬菌體 DNA和 M13單鏈噬菌體 DNA在成熟前的 DNA復制都是用滾環(huán)模型。160.M13噬菌體每個世代裂解宿主后，可釋放100個子代噬菌體。161.以粘粒為載體的重組體雖然在平板上生長的速度不同，但是轉化子中插入片段的擴增量是相同的。162.氯霉素擴增 DNA時，加氯霉素的時間是重要的，因為加得太早，菌數(shù)不夠，加入時間過遲，菌齡過老，容易自溶。163所謂引物就是同 DNA互補的一小段RNA分子。164脈沖凝膠電泳采用一個很強的電場來分離非常長的DNA分子，其原理在于迫使 DNA分子根據(jù)長度的不同而具有不同的速度，并按大小順序通過

29、凝膠。165Agarose-EB電泳法分離純化 CCC DNA原理是根據(jù) EB可以較多地插入到 CCC DNA 中，因而遷移速度較快。166.如果 PCR的每一次循環(huán)都把上一次循環(huán)中合成的 DNA都加了一倍，那么，10個循環(huán)就擴增了1000倍，20個循環(huán)就擴增了100萬倍，30個循環(huán)就擴增了10億倍。167PCR既能用于擴增任何天然存在的核苷酸序列，又能重新設計任何天然核苷酸序列的兩個末端。因此，任意兩個天然存在的 DNA序列都能快速有效的擴增，并拼接在一起。168最有效的制備純RNA的方法是讓其在細胞中超表達，然后提純。169大量制備已被克隆基因編碼蛋白產(chǎn)物的常用方法是體外轉錄和翻譯。170

30、.通過報告基因與來自于目的基因上游和下游各種 DNA片段的結合，研究基因的調(diào)控序列。171.溫度敏感突變型是非常有用的，在這些突變型中，可以通過對溫度的改變控制這些突變體中異常表型的出現(xiàn)。172用人工合成的含有所需堿基變化的寡聚核苷酸，可以將特殊突變引入克隆的基因。173蛋白質(zhì)的氨基酸序列中各種重要信號都可以通過短氨基酸序列同報告蛋白的融合進行研究。174簡并引物是根據(jù)已知 DNA序列設計的引物群。175在 DNA貯存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。176密碼的偏愛性是指不同種屬的生物對簡并密碼具有不同的使用頻率。177插入到質(zhì)粒 DNA中的 EB可以用正丁醇抽提除去。178堿法和煮沸法

31、分離質(zhì)粒 DNA的原理是不相同的。179酚法和堿法分離質(zhì)粒 DNA都要用溶菌酶破壁，但堿法用的溶菌酶的濃度要高。180外源基因(或 DNA片段)插入到某一基因內(nèi)的位點后，這個基因不再有任何功能。181用不同的產(chǎn)生粘性末端的限制性內(nèi)切核酸酶分別切割載體和外源 DNA，得到的粘性末端是不親和的粘性末端。182.基因組 DNA文庫是含有某一生物中全部 DNA序列隨機克隆的克隆群，而cDNA文庫是含有某一生物中所有表達基因隨機克隆的克隆群。183.cDNA克隆較之基因組克隆最重要的優(yōu)越性就是它們含有一個基因的完整序列。184通過差示雜交后制備的 cDNA文庫使克隆那些只在特定分化細胞中表達基因的機率大

32、為提高。185在染色體步移中，可通過 DNA測序知道已到達所感興趣的基因。186一旦有了一套已知順序的基因組克隆，通過從文庫中獲得覆蓋目的突變基因所在基因組區(qū)的所有克隆，就可以進行染色體步移。187根據(jù)遺傳連鎖作圖把基因定位在基因組中是定位克隆的第一步，它為分離特定的人的基因提供了一個直接而快速的方法。188.人工感受態(tài)和自然感受態(tài)細胞都能吸收線性和環(huán)狀單鏈 DNA。189.人工導入基因和正常染色體基因間的同源重組，可以發(fā)生基因置換。190.為了保證重組 DNA分子在受體細胞中能夠穩(wěn)定地獨立存在下來,通常用recrm表型的細胞株作為受體菌。191.線性 DNA片段被導人哺乳動物細胞后，在細胞內(nèi)

33、酶的作用下，很快相互連接成重復的DNA大片段)并能在隨機位點整合到染色體中。192.不匹配的粘性末端是不能通過粘性末端連接的。193.用限制性內(nèi)切核酸酶切割載體、供體 DNA后，要加入 EDTASDS中止液使限制性內(nèi)切核酸酶失活，這樣有利于重組連接。194.限制性內(nèi)切核酸酶Bgl識別的序列為 A GATCT，BamH識別的序列為GGATCC，用它們分別切割載體 DNA和供體 DNA，不必使酶失活，就可以直接通過粘性末端連接法進行連接。195.具有E.coR 末端的外源片段只能以一個方向插入到E.coR 末端的載體中。196.不匹配的粘性末端可以通過部分填補后進行連接。197.低豐度的mRNA不

34、僅拷貝數(shù)少，而且種類也少。198.同聚物接尾法構建重組體，不僅連接效率高，而且也很容易回收插入的片段199.以噬菌體為載體的篩選方法比較簡便，凡能形成噬菌斑的就一定是重組體。200.核酸雜交探針就是帶有放射性標記的 DNA分子。201.Northern雜交中，為了防止RNA形成部分環(huán)狀發(fā)夾結構，影響遷移率，所以要 用變性緩沖液進行電泳。202探針的離體標記實際上是酶法標記。203切口移位法(nick translation)只能標記線性雙鏈 DNA不能標記環(huán)狀雙鏈 DNA。204通過原位菌落雜交得到的陽性克隆即是重組體，但不能判斷插入的外源基因是否進行了表達。205尼龍膜(nylon memb

35、rane)是核酸雜交的一種固體支持物，具有同 DNA結合能力強、韌性強，可反復洗脫使用，并且雜交信號本底低等優(yōu)點，就是成本高。206如果 DNA序列的某種變異在群體中是稀有的，稱為突變；若是普遍的，則稱為多態(tài)險。207用寡聚 DNA進行高度嚴緊的雜交可用于胎兒遺傳病的診斷，可檢測到因單個核苷酸變化而造成的基因突變。208.由于基因家族中成員之間是密切相關的，因此可以用其中一個成員作為探針進行高度嚴緊的雜交來檢測其他成員。209通過用化學標記法取代放射性標記法，并采用一種抗體來特異性地識別這種化學修飾，使得原位雜交的分辨率大大提高。210在雜交之前先用凝膠電泳將粗提取物中的RNA或 DNA分子進

36、行分離，假定雜交后只有一種或少數(shù)幾種大小的片段被探針雜交上了，就能肯定這種雜交是特異性的。211根據(jù)某一感興趣蛋白質(zhì)的序列、抗原性以及配基結合性質(zhì)制備探針，可從 DNA文庫中篩選到相應的基因。212.如果用其他的方法對某種蛋白質(zhì)已進行過鑒定，那么要確定某一克隆是否含有該蛋白編碼基因就相當容易了。213用DNA探針進行雜交反應非常敏感并具有選擇性，可用來測定某一特定 DNA序列在細胞基因組中的拷貝數(shù)。214雙重藥物選擇法富集哺乳動物細胞中稀有重組體的原理是：一種藥物用于選擇以任意方式整合外源 DNA的細胞，第二種藥物殺死帶有隨機整合 DNA的細胞。215就像對培養(yǎng)中的鼠胚性干細胞進行遺傳操作獲得

37、突變鼠一樣，用 DNA轉染培養(yǎng)中的單個植物細胞，能夠創(chuàng)造轉基因植物。216NC(硝酸纖維素膜)和尼龍膜都可作為電轉移 DNA支持物。217單克隆抗體是淋巴細胞和瘤細胞雜交后形成的單個雜交瘤細胞經(jīng)無性繁殖而產(chǎn)生的特異性抗體。218用免疫化學法篩選重組體不需要外源基因的表達。219用 DNA探針同RNA 分子雜交在測定一已知基因在某一細胞中是否表達時是很有 用的，但不能用于檢測轉錄起始位點、終止位點或內(nèi)含子的位置。220. 核酸雜交的原理是根據(jù) DNA分子間互補。221. 突出的3末端或凹缺的3末端都可以用Klenow大片段酶進行末端標記。222用多核苷酸激酶進行5末端標記前， DNA必須進行脫磷

38、酸，否則無法標記。223. X-gal顯色反應的基本原理是使載體上與受體互補的肽失活。224Norhern印跡和 Southern印跡的基本原理是一樣的，都是用于檢測結構基因的表達。225. 在液相液相和液相固相雜交中，它們的雜交效率都是一樣的。四、簡答題1.為什么只有 DNA適合作為遺傳物質(zhì)?2.在體內(nèi)，rRNA和 tRNA都具有代謝的穩(wěn)定性，而 mRNA的壽命卻很短,原因何在?3.堿基對間在生化和信息方面有什么區(qū)別?4.在何種情況下有可能預測某一給定的核苷酸鏈中“G”的百分含量?5.真核基因組的哪些參數(shù)影響 Cot12值?6.請問哪些條件可促使 DNA復性(退火)?7.為什么 DNA雙螺旋

39、中維持特定的溝很重要?8.大腸桿菌染色體的分子量大約是2.5×109Da1)，核苷酸的平均分子量是330Da，兩個鄰近核苷酸對之間的距離是0.34mn；雙螺旋每一轉的高度(即螺距)是3.4nm，請問： (l)該分子有多長? (2)該 DNA有多少轉?9.曾經(jīng)有一段時間認為，DNA無論來源如何，都是4個核甘酸的規(guī)則重復排列(如， ATCGATCGATCGATCG)，所以 DNA缺乏作為遺傳物質(zhì)的特異性。第一個直接推翻該四核苷酸定理的證據(jù)是什么?10.為什么在 DNA中通常只發(fā)現(xiàn) AT和 CG堿基配對?11.列出最先證實是 DNA(或RNA)而不是蛋白質(zhì)是遺傳物質(zhì)的一些證據(jù)。12.什么是

40、連鎖群?舉一個屬于連鎖基因座的例子。13.什么是順反子?用“互補”和“等位基因”說明“基因”這個概念。14.對于所有具有催化能力的內(nèi)含子，金屬離子很重要。請舉例說明金屬離子是如何作用的。15.列出真核生物mRNA與原核生物mRNA的區(qū)別。16.列出各種tRNA所有相同的反應及個別 tRNA的特有反應。17.為什么真核生物核糖體RNA基因具有很多拷貝?18.為什么說信使RNA的命名源自對真核基因表達的研究，比說源自對原核基因表達的研究更為恰當?19.說明為什么mRNA僅占細胞RNA總量的一小部分(3一5)。20.為何rRNA和tRNA分子比 mRNA穩(wěn)定?21.起始tRNA具有哪兩種與其他 tR

41、NA不同的特性?22.區(qū)別rRNA和mRNA在翻譯中的作用。23.氨基酸分子如何與正確的tRNA分子連接?24.簡要說明證明信使的存在及其本質(zhì)為RNA的證據(jù)。25.列舉4種天然存在的具有催化活性的RNA。26.型內(nèi)含子發(fā)生改變后，可以產(chǎn)生其他酶的活性嗎?如果可以，是哪些活性?這意味著型內(nèi)含子的催化中心有什么特點?27某些自剪接的內(nèi)含子具有可讀框，它們編碼何種蛋白?這與內(nèi)含子的移動有什么關系?28.描述 Meselson-Stahl試驗，說明這一實驗加深我們對遺傳理解的重要性。29.請列舉可以在線性染色體的末端建立線性復制的三種方式。30.為什么一些細菌完成分裂的時間比細菌基因組的復制所需的時間

42、要少?為什么在選擇營養(yǎng)條件下，E. coli中可以存在多叉的染色體或多達4個以上的開環(huán)染色體拷貝， 而正常情況下染色體是單拷貝的?31.在 DNA聚合酶催化新鏈合成以前發(fā)生了什么反應?32.DNA復制起始過程如何受DNA甲基化狀態(tài)影響?33.請指出在 oriC或X型起點起始的 DNA復制之間存在的重要差異。34.大腸桿菌被 T2噬菌體感染，當它的 DNA復制開始后提取噬菌體的 DNA，發(fā)現(xiàn)一些RNA與 DNA緊緊結合在一起，為什么?35.DNA連接酶對于 DNA的復制是很重要的，但RNA的合成一般卻不需要連接酶。解釋這個現(xiàn)象的原因。36.曾經(jīng)認為 DNA的復制是全保留復制，每個雙螺旋分子都作為

43、新的子代雙螺旋分子的模板。如果真是這樣，在Meselson和 Stahl的實驗中他們將得到什么結果?37.描述 Matthew和Franklin所做的證明 DNA半保留復制的實驗。38.解釋在DNA復制過程中，后隨鏈是怎樣合成的。39描述滾環(huán)復制過程及其特征。40.假如發(fā)生了堿基對的錯配會產(chǎn)生什么表型，它們怎樣被修復?41.為什么 DNA的甲基化狀態(tài)可以為復制的調(diào)節(jié)和 DNA的修復所利用?42.錯配修復的方向可以怎樣被調(diào)節(jié)(突變型到野生型或野生型到突變型)?43.RecA蛋白是怎樣調(diào)節(jié) SOS反應的?44.以圖4.1A為例，畫出圖4.1B所示分子同源區(qū)域交叉重組的產(chǎn)物，圖中用一條單線表示 DN

44、A雙螺旋，同源重組的靶位點用箭頭標出。圖4.1 各種重組的底物45.圖4.2所示為兩條同源的親代雙螺旋和兩套可能的重組產(chǎn)物。請畫圖表示兩親代雙螺旋間可以產(chǎn)生指定重組產(chǎn)物的 Holliday連接，在每條鏈的左端標明 Holliday連接的3或5端，這樣親代和重組雙螺旋間的關系就比較清楚。請指明為了產(chǎn)生每套重組產(chǎn)物哪些鏈應被切去。最后，畫出經(jīng)過一輪 DNA復制后的重組產(chǎn)物。 圖4.2 親代與重組的雙螺旋46.為什么基因內(nèi)互補只發(fā)生在：(1)某一基因座的等位基因間；(2)這些基因座的特殊等位基因?qū)﹂g?47.有很多突變對于野生型基因是隱性的，也就是說，在一個含有突變型和野生型基因二倍體細胞中，野生型的

45、特性能夠得到表達。請根據(jù)對突變過程的認識解釋這一事實。對于說明為什么有些突變是顯性的，有何見解?48.為了選擇下面兩種突變型，應對只含有葡萄糖、硫酸銨以及無機離子的基本培養(yǎng)基作何調(diào)整? (1) leu，亮氨酸營養(yǎng)缺陷型； (3) gal，不能以半乳糖作為唯一碳源的突變型。49.寫出利用突變研究以下問題的步驟： (l)氨基酸 X的代謝途徑； (2)Ecoli中細胞分裂的控制。50.在工業(yè)微生物菌種的選育中，人們喜歡用誘變的方法篩選解除了酶合成阻遏的突變株，而不要解除了酶活性反饋抑制的突變株。請解釋原因。51.為什么一個基因座的正向突變發(fā)生的頻率要比回復突變高?52.一個基因間阻遏物突變怎樣阻遏了

46、一個錯義突變?53.為什么吖啶類染料誘導的突變較堿基類似物誘導的突變對生物體更有害?54.羥胺對游離噬菌體和轉化 DNA都是高度特異的致變劑。它只與 DNA中的C反應，使之轉變成偶爾可與 A錯配的形式。 (1)羥胺誘導的堿基替代是什么? (2)推測羥胺是否可回復自身誘導的突變? (3)羥胺可以回復5溴尿嘧啶誘導的突變嗎? (4)5溴尿嘧啶可以回復羥胺誘導的突變嗎?55.在下列哪些基因中你可以分離到溫度敏感突變和琥珀突變? (l) lacO；(2) lacZ; (3) lacP；(4) lacI56.區(qū)別反向突變、回復突變和第二位點回復突變。57.指出突變頻率和突變率的區(qū)別。58.簡述大腸桿菌中

47、的增變基因。59.簡述怎樣利用化學誘變劑在細菌中的誘變來檢測它們致癌作用。60.簡述 Muller5技術，并說明如何利用它測得 X射線對果蠅突變頻率的影響。61.列舉幾種具以下特征突變：(1)不能合成特殊多肽；(2)組成型合成多肽。62.突變能影響高等真核生物結構基因表達的幾個水平?并指出每種突變最明顯的分子表型。63.當E.coli菌株 K同時被兩個特異的 T4噬菌體 r突變體所感染時，感染細胞裂解并釋放出正常數(shù)量的噬菌體后代。這些后代是重組的結果還是互補作用的結果?應怎 樣辨別?64.在E.coli中， A和 B基因座相隔了大約5的基因組，另一對標記 C和 D間隔1的基因組。哪對能被(1)

48、共轉化；(2)共轉導?65.當一個烈性噬菌體的所有基因全部表達時，如果不對轉錄進行時序性調(diào)控，將出現(xiàn) 什么問題?66.為什么噬菌體感染產(chǎn)生的溶源菌通常對其他的噬菌體的感染有免疫?67.請預測具有下列突變的噬菌體感染細菌的表型。并說明原因： (1)產(chǎn)生一個抗蛋白酶的 c蛋白的突變。 (2)具有阻止蛋白結合的OR2的突變。 (3)使N基因失去作用的突變。 (4)編碼 c I蛋白的基因突變。68鑒定化合物的致癌性的一個通用實驗是愛姆斯試驗，通過營養(yǎng)缺陷型菌的回復突變 確定其致癌性。用人噬菌體和E.coli設計一個實驗使之能用于致癌物的檢測。69為什么像流感病毒這樣的RNA 病毒的生命周期，有力地支持

49、了以下這一論點：與其說病毒是生命有機體，不如說它是“寄生的遺傳因子”。70.大腸桿菌噬菌體 T2的染色體是一個線性 DNA分子，它的兩端都有冗余并且可作循 環(huán)變換。解釋冗余的含義并說明這些分子是怎樣產(chǎn)生的。71.烈性噬菌體和溫和噬菌體的區(qū)別是什么?72.從噬菌體 MS2中提取出來的裸露染色體可以感染大腸桿菌的原生質(zhì)球(去除胞壁的細菌)，這會產(chǎn)生和具感染能力的噬菌體一樣的噬菌體顆粒。如果染色體先用RNA酶處理，就會失去感染能力；另外，如果標記感染的RNA，在子代中不出現(xiàn)標記。解釋這些現(xiàn)象。73.從噬菌體中提取的 DNA用兩種只攻擊單鏈 DNA的外切核酸酶處理。外切核酸酶 A只從突出的5端消化 D

50、NA，而外切核酸酶 B只攻擊自由的3端。這種處理對噬菌體 DNA的生物活性有什么影響?74比較真核生物與原核生物轉錄起始的第一步有什么個同。75轉錄涉及模板鏈和編碼鏈的分離，解釋在轉錄中單鏈 DNA是怎樣被保護的。76概括說明因子對啟動子調(diào)節(jié)的輔助功能。77什么是增效與減效突變?78細菌促旋酶突變通常是致死的，但是促旋酶拓撲異構酶突變卻可以成活，其原何在?79解釋因子是怎樣選擇專一性啟動子共有序列而啟動不同基因表達的(考慮對環(huán)境壓力的應答)。80 rpoN基因編碼因子:54，它具有不同于已知原核生物的因子的特征。請與E. coli的因子：70(RpoD)作比較討論這些特征。81在原核生物中，核

51、心酶與 DNA的松散結合和緊密結合之間存在種平衡，為什么這比核心多聚酶自身形成游離與結合平衡更有利?82正調(diào)控和負調(diào)控的主要不同是什么?83區(qū)別(1)啟動子增效突變與啟動子減效突變；(2)上游序列和下游序列。84解釋為什么操縱子和啟動子是反式隱性、順式顯性的，而編碼阻礙蛋白的基因既是反式顯性又是順式顯性。85為什么只有 DNA雙螺旋中的一條鏈能被正常的轉錄?86哪三個序列對原核生物mRNA的精確轉錄是必不可少的?87說明因 RNA聚合酶啟動子不同的相互作用如何導致不同基因的轉錄。88原核生物的核糖體 RNA和 tRNA的相對較穩(wěn)定并且半衰期長，而 mRNA卻不穩(wěn)定，很快被降解，請解釋這種穩(wěn)定性

52、的差異。89列舉兩種受調(diào)控蛋白控制的、與氨基酸的生物合成有關的操縱子。90什么是安慰誘導物?91葡萄糖是如何影響涉及糖代謝的操縱子(葡萄糖敏感型操縱子)的表達?92在大多數(shù)細菌操縱子中，結構基因通常緊靠在一起并由單個操縱序列啟動子區(qū)調(diào)控，而在一些例子中結構基因分散在染色體上。請問這些基因是如何以簡單的方式達到協(xié)同調(diào)節(jié)的。93. 反轉錄病毒與反轉錄轉座子有什么不同?94. gag和pol基因的蛋白產(chǎn)物是怎樣生成的? mRNA編碼的 Env蛋白是怎樣生成的?95. 蛋白酶為什么對反轉錄病毒生活史很重要?96. 列出轉化病毒正鏈RNA摻入到宿主雙鏈 DNA的詳細過程。97. 噬菌體整合到宿主基因組后

53、，46個宿主 DNA的核苷酸被復制，這是為什么?這與轉座子插入新位點有何相似之處?另外，兩個核苷酸從5U3的5和3被切除，這意味著遺傳信息從反轉錄病毒中被丟失嗎?98反轉錄病毒怎樣獲得像onc基因這樣的細胞基因?獲得此類基因會對反轉錄病毒基 因產(chǎn)生影響嗎?一個反轉錄病毒怎樣才會丟失如 pol和 env這樣的重要的基因而復制?99描述酵母 Ty元件的結構。它與反轉錄病毒有何相似之處?為什么它不形成感染粒子? 100你如何證明 Ty元件在轉座時經(jīng)歷了一個RNA中間體?101FB元件與copia因子有何不同?102列出病毒和非病毒超家族反轉錄轉座子之間的4種差異。103為什么說 Alu元件可能作為

54、DNA復制的起點?有什么理由不支持這種假說呢?104描述兩種轉座子引起基因組重排的方式。105 IS元件整合到靶位點時會發(fā)生什么?106一個復合轉座子和一個 IS元件之間的關系是什么?107列出一個轉座子插入到一個新位點所要求的步驟。108當(l)DNA在兩個定向重復之間(2)DNA在兩個反向重復之間發(fā)生重組的效應各是什么?109在什么過程中會形成一個共整合體?它的結構是什么?110Tn10元件只有在自己的轉座酶基因具有活性時發(fā)生轉座(與利用基因組中 Tn10元件表達的轉座酶的情況正好相反)，這種偏愛的原因是什么?111什么是雜種不育?是什么引起的?112即使不攜帶癌基因，反轉錄病毒依然會導致

55、癌變轉化。列舉這種現(xiàn)象發(fā)生的三種方式。113簡述大腸桿菌的插入序列，并指出它們對自發(fā)突變的重要性。114比較基因組的大小和基因組復雜性的不同： 個基因組有兩個序列，一個是 A，另個是 B，各將2000bP長。其中個是由400bp的序列重復5次而成，另一個則由50bp的序列重復40次而成，問： (1)這個基因組的大小怎樣? (2)這個基因組的復雜性如何?115. 一個基因如何產(chǎn)生兩種不同類型的mRNA分子?116. 在一個克隆基因的分析中發(fā)現(xiàn)：個含有轉錄位點上游3.8kb DNA的克隆，其 mRNA直接轉錄活性比僅含有3.1kb上游 DNA的克隆的轉錄活性大50倍。這表明了什么?117被加工的假基因與其他假基因有哪些不同?它是如何產(chǎn)生的？118非轉錄間隔區(qū)與轉錄間隔區(qū)分別位于 rRNA重復的什么位置?轉錄間隔區(qū)與內(nèi)含子 有何區(qū)別?119請描述 C值矛盾，并舉一個例說明。120在酵母基因中，其生活必需基因占多大比例?為什么有些基因可能是不必要的?121酵母mRNA的大小一般與基因的大小相致。而哺