中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物設(shè)計性實(shí)驗(yàn)

1、 中樞神經(jīng)抑制藥的急性毒性研究【摘要】目的：從未知藥物篩選出具有中樞神經(jīng)抑制作用的目標(biāo)藥物，通過給小鼠腹腔注射，觀察藥物對中樞神經(jīng)的抑制作用，并測定其LD50，以評價該藥物的平安性。方法：預(yù)實(shí)驗(yàn)：將小鼠隨機(jī)分成三組，通過腹腔注射母液，篩選出具有中樞抑制作用的目標(biāo)藥物，再將15只小鼠隨機(jī)分成5組，確定LD0和LD100。正式實(shí)驗(yàn)：將45只小鼠隨機(jī)分成5組，按計算好的劑量，對小鼠進(jìn)行腹腔注射，觀察小鼠的死亡情況，以測定LD50。結(jié)果：4號藥為中樞抑制藥，預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們組確定抑制藥的最大劑量為5mg/ml，最小劑量為2.5mg/ml，根據(jù)正式實(shí)驗(yàn)得到得數(shù)據(jù)經(jīng)計算 LD50為3.82mg/ml。結(jié)論：受

2、試藥物的LD50為3.82mg/ml【關(guān)鍵詞】藥物毒性；LD50 ；中樞抑制藥中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物是近年來銷售額增長較快的藥物類別， 2006 年全球市場規(guī)模到達(dá) 591 億美元，年均增長率 9.46%，主要包括三個用藥市場：抗抑郁和抗焦慮藥、抗精神病藥、抗癲癇藥物。2005、2006 年我國中樞神經(jīng)藥物市場容量約為 71.96 億元和 82.07 億元。2本課題研究未知中樞抑制藥物的急性毒性反響，測定LD50，分析其平安性。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物動物名稱：小鼠體重范圍：1822g動物來源：廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供1.2 藥品藥品：中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物包括興奮藥和抑制藥、生理鹽水來源：廣東藥學(xué)院

3、藥科學(xué)院藥理系提供1.3 實(shí)驗(yàn)步驟1.3.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定正式實(shí)驗(yàn)做的藥物，探索該抑制藥物的0%和100%有效動物反響的劑量范圍，以便正式實(shí)驗(yàn)時確定各組劑量。實(shí)驗(yàn)過程：1、確定主題，準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)課上匯報本組預(yù)實(shí)驗(yàn)方案，并和其他 小組討論實(shí)驗(yàn)的可行性以及需要注意的問題2、開始實(shí)驗(yàn)，有三組不同編號的試樣藥物分別為4號、5號、6號，通過現(xiàn)象自己做判定得結(jié)果。取小鼠18只，稱其體重，標(biāo)記并且記錄各自的重量；3、從18只老鼠中隨機(jī)選取3只小鼠，用于母液的篩選，以0.1ml/10g的劑量，分別注射三組試樣藥物，觀察現(xiàn)象并做好記錄，判定哪個編號是何種藥物，從中選擇我們組的目標(biāo)藥物中樞抑制藥；4、剩下的

4、15小鼠，分為5組，每組3只小鼠，進(jìn)行抑制藥物的研究。母液為20mg/ml，等比進(jìn)行稀釋，通過二分法確定藥物稀釋后的濃度。根據(jù)小鼠體重以0.2ml/10g的劑量腹腔注射藥物的不同濃度，在30分鐘內(nèi)觀察各組小鼠的反響，并記錄死亡小鼠的數(shù)量5、 通過實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象觀察，得出結(jié)果，找到了我們組抑制藥能引起小鼠的0%和100有效率劑量及其所在的范圍。1.3.2 正式實(shí)驗(yàn)按預(yù)計實(shí)驗(yàn)的實(shí)施方法進(jìn)行，完成所選興奮藥物的LD50的測定。實(shí)驗(yàn)劑量的計算：r=(Dmin/Dmax)(1/(n-1)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Dmax=5 mg/ml及Dmin=2.50 mgml，設(shè)正式實(shí)驗(yàn)的劑量組數(shù)n=5，劑量公比r=0.8409

5、，那么各組劑量為：1)5 mgml2) 5*0.8409=4.20mgml3) 4.20mgml*0.8409=3.54mgml4) 3.54mgml*0.8409=2.97 mgml5) 2.97mgml*0.8409=2.50 mgml 實(shí)驗(yàn)過程： 1、取小鼠45只，稱重，標(biāo)記，隨機(jī)分為5組，使不同性別和體重能均勻分配于各組，每組9只，進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)；2、各組動物分別腹腔注射相應(yīng)濃度上述已算好的劑量的藥液0.2ml/10g，立即仔細(xì)觀察，記錄動物反響情況、死亡時間和數(shù)目。3、根據(jù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，計算LD501.3.2 實(shí)驗(yàn)匯報、點(diǎn)評、總結(jié)1.4 數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果以小

6、鼠是否死亡為指標(biāo)，以注射濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，以幾率單位為縱坐標(biāo)，通過EXCEL作圖求得回歸方程，從而計算出LD50。2 結(jié)果表1 預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選藥物情況組別 編號 現(xiàn)象 藥物1 5 小鼠變得很暴躁，上下跳動，異常活潑，呼吸加快，最后死亡 興奮藥2 4 小鼠變得安靜嗜睡，呼吸微弱，3min后死亡 抑制藥3 6 沒出現(xiàn)任何異?，F(xiàn)象 生理鹽水 表2 預(yù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別 劑量mgml 現(xiàn)象 死亡率11052.543三只小鼠全部死亡,死亡時間約4min三只小鼠全部死亡,死亡時間約10min三只小鼠全部存活，嗜睡一只死亡，兩只嗜睡，有呼吸一只死亡，兩只嗜睡，有呼吸100100066.766.72345表3

7、正式實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果組別劑量mgml現(xiàn)象死亡小老鼠數(shù)1234554.203.542.972.509只小老鼠全部死亡6只小老鼠死亡，3只存活，嗜睡四肢無力，翻正反射消失，呼吸抑制1只小老鼠死亡，8只存活，嗜睡四肢無力，翻正反射消失，呼吸抑制1只小老鼠死亡，8只存活，嗜睡四肢無力，翻正反射消失，呼吸抑制全部存活，嗜睡，四肢無力翻正反射消失，呼吸抑制96110表4 中樞神經(jīng)抑制藥LD50的測定組別劑量mg/ml總動物死亡動物數(shù)死亡率%劑量對數(shù)幾率單位1599100.00.6997.3324.29666.70.6235.4433.549111.10.5493.7742.979111.10.4733.77

8、52.59000.398 圖1 LD50的測定結(jié)果回歸方程為：y=16.385x-4.5243LD50=10(5+4.5243)/16.358=3.82mg/ml3 討論1、本實(shí)驗(yàn)是作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的設(shè)計性實(shí)驗(yàn)。在這次實(shí)驗(yàn)中，鍛煉了我的綜合實(shí)驗(yàn)技能，很大程度上提高了我們的動手能力和思考能力，培養(yǎng)了我們團(tuán)隊(duì)協(xié)作的精神，并且學(xué)會了LD50的測定方法。2、作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物主要影響遞質(zhì)和受體而發(fā)揮作用，其藥理效應(yīng)主要表現(xiàn)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的增強(qiáng)或抑制。其抑制作用一般變現(xiàn)為鎮(zhèn)靜、催眠、抑郁甚至死亡。13、預(yù)實(shí)驗(yàn)時，觀察三組試樣藥物注射完后小鼠的表現(xiàn)，第一只小鼠變得很暴躁，上下跳動，異?；顫?/p>

9、，呼吸加快，最后死亡。第二只小鼠變得安靜嗜睡，呼吸微弱，約3min后死亡。第三只小鼠沒出現(xiàn)任何異?，F(xiàn)象。由此推斷三種藥物分別是興奮藥，抑制藥，生理鹽水。4、本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不理想，幾率單位對濃度對數(shù)做回歸曲線圖，線性相關(guān)較差，即預(yù)測藥物的給藥量與動物死亡率間不能呈現(xiàn)正態(tài)分布。 5、實(shí)驗(yàn)誤差的來源可能是：1注射器的刻度不標(biāo)準(zhǔn)，或者里面含有少量氣泡，導(dǎo)致每次并非嚴(yán)格按規(guī)定劑量給藥,用移液管稀釋濃度時操作不夠標(biāo)準(zhǔn)存在較大誤差。2腹腔注射給藥時，推注速度不均一，推注過快有可能影響小鼠的死亡情況。3實(shí)驗(yàn)中，給藥，配制藥液時，均由不同組員進(jìn)行配制，進(jìn)而可能出現(xiàn)主觀性誤差。4小鼠個體存在較大差異，并且數(shù)量有限。5本次設(shè)置小鼠的觀察時間為30分鐘，觀察這段時間內(nèi)小鼠死亡的情況，可能會由于觀察時間缺乏導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生誤差。6實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理不夠科學(xué)，如沒有求出LD50的可信區(qū)間，也沒有進(jìn)行t-檢驗(yàn)等。4 結(jié)論1、 根據(jù)小鼠的藥后反響，可判斷5號藥物為中樞神經(jīng)興奮藥，4號藥物為中樞 神經(jīng)抑制藥，6號藥物為生理鹽水，應(yīng)選擇4號藥物為目標(biāo)藥物進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研