血清胱抑素C在腎損傷中研究及與血肌酐尿素氮關(guān)系的分析

1、血清胱抑素C在腎損傷中研究及與血肌酐尿素氮關(guān)系的分析張立軍摘要 目的 探討血清胱抑素C(cystatin C)作為早期腎功能損害及腎損傷時敏感標志物對臨床診斷的價值。方法 采用顆粒增強透射比濁法測定血清結(jié)果 560例血清胱抑素C高于正常參考值的患者中血清肌酐(Scr)、cystatin C的濃度，同時測定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。尿素氮(BUN)異常的分別是355例、結(jié)論 血清cystain C是反映早期腎臟損傷的敏感指標，422例。結(jié)合血清肌酐、尿素氮可以更準確判斷腎小球濾過功能。應(yīng)用cystatin C評價異常腎小球濾過率(GFR)有廣泛的前景。關(guān)鍵詞 血清胱抑素C；血清肌酐；

2、尿素氮Abstract Objective To discuss the value of using serum cystatin C as an early sensitive mark when kidney functional im-paired and kidney damni ed. Methods Using transmission turbidity method to test the density of serum cystatin C serumcreatinine (Scr) BUN .Results Among 560 patients whose values

3、 of serum cystatin C were over than the normal there were 355 patients whose values of Scr increased too and there were 422 patients who complicating singularity of BUN. Conclusion Serum cystatin C is a sen-sitive mark to re ect the kidney impairment it can be used to judge the ltration function of

4、glomerular instead of the te-dious endogenous creatinine clearane(Ccr)method.Using cystatin C to evaluate the abnormal glomerular ltraion rate(GFR)has a wide prospect.Key words Serum cystatin C;Serum creatinine;Urea nitrogen腎損傷疾病是臨床上一種常見的疾病，主要表現(xiàn)雙腎排泄過濾機體廢物能力的極大降低。早診斷、早治療，可逆轉(zhuǎn)損傷的腎功能，阻止腎臟疾病惡化。目前血清胱抑素C(c

5、ystatin C)檢測是近幾年發(fā)展起來的腎臟疾病早期診斷的新檢測項目，它是一種低分子量蛋白質(zhì)，由體內(nèi)有核細胞產(chǎn)生，來源恒定。作為一種血漿內(nèi)源性成分對此我們采用顆粒透射比濁法測定血清cystatin C的濃度，探討其在腎病中的變化情況，并同血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)進行比較。1 材料與方法1.1 研究對象 2010年16月6338例患者血清標本來自我院門診及住院患者共同檢測cystatin、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)，其中血清胱抑素C(cystatin C)1.55(mg/L)共560例，男性328例，女性232例。年齡9460歲368例，3059歲163例，1529歲23

6、例，014歲6例。cystatin C正常參考范圍0.501.55mg/L，血清肌酐(Scr)正常參考范圍44133mol/L、尿素氮(BUN)正常參考范圍2.47.5mol/L。各項正常參考范圍是依據(jù)全國臨床檢驗操作規(guī)程，結(jié)合本院實際情況做適當修改得出。1.2 儀器 cystatin C、Scr、BUN濃度測定采用貝克曼公司生產(chǎn)的LX20全自動生化分析儀。采用Excel 2003分析處1.4 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)以(s)表示，理。2 結(jié)果560例cystatin C(cysc)1.55mg/L的患者cystatin C、BUN、Scr性別年齡構(gòu)成比比較。cystatin C的值在1.55mg/L時

7、為異常，BUN的值在7.5mol/L為異常，Scr的值在133mol/L時為異常，各組的異常檢出率見表1。560例cystatin C(cysc)1.55mg/L的患者各年齡階段cystatin C、Scr、BUN均值結(jié)果比較。cystatin C的值在1.55 mg/L時為異常，BUN的值在7.5mol/L為異常，Scr的值在133mol/L時為異常，各年齡段均值見表2。從560例標本中選出cystatin C(cysc)、Scr、BUN數(shù)值最高30、60、90、120、150、180例患者，并計算cystatin C、BUN、Scr均值與BUN、Scr對應(yīng)cystatin C(cysc)均

8、值，分析cystatin C、Scr、BUN的相互關(guān)系，見表3。3 討論在1981年檢測了人胱氨酸蛋白酶抑制劑C(cystatinC)的氨基酸系列，它沒有顯示與已知任何超家族蛋白系列的同源性。直到兩年后研究者檢測了雞胱氨酸蛋白酶抑制劑的結(jié)構(gòu)，并發(fā)現(xiàn)兩種蛋白44%的氨基系列相同，才確定胱氨酸蛋白酶抑制劑C的功能半胱氨酸蛋白酶的抑制劑。又經(jīng)過二十多年的研究，人胱氨酸蛋白酶抑制劑家族目前已有明確11種蛋白組成。它們是胱氨酸蛋白酶抑制劑家族1中的胱氨酸蛋白酶抑制劑A和B，是惟一的細胞內(nèi)蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族2中的胱氨酸蛋白酶抑制劑C、D、E、F、S、SA和SN組成，它們是細胞外蛋白和細胞間蛋白。

9、胱氨酸蛋白酶抑制劑家族3由高和低分子量的激肽原(Kininogen)組成，它們主要是血管內(nèi)蛋白。1983年Anastasi等首次從雞蛋清中分離純化得到高純度的半胱氨酸蛋白酶抑制劑(cysteine proteinase inhibitor，CPI)，是這一類蛋白質(zhì)超大家族的成員之一，有半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、胱抑素C、-痕跡蛋白(-trace protein)、后球蛋白(post-globulin)之稱，目作者單位:518020 暨南大學(xué)第二臨床學(xué)院深圳市人民醫(yī)院檢驗科 (張立軍)當代醫(yī)學(xué)2011年1月第17卷第2期總第229期Contemporary Medicine, Jan. 2011,

10、Vol.17 No.2 Issue No.229表1 560例cystatin C(cysc)1.55mg/L的患者cysc、BUN、Scr性別年齡構(gòu)成比總數(shù)(男/女) 9460歲 5930歲 2915歲 014歲cysc1.55mg/L 560(328/232) 66%(368/560) 29%(163/560) 4%(23/560) 1%(6/560)BUN7.5mol/L 422(257/165) 70%(297/422) 26%(109/422) 4%(16/422) (0/422)Scr133mol/L 355(229/126) 66%(235/355) 29%(104/355) 5

11、%(16/355) (0/355)表2 560例cystatin C(cysc)1.55的患者各年齡階段cysc scr BUN均值cysc1.55mg/L 總數(shù)(男/女) 6094歲 3059歲 1529歲 014歲cysc均值mg/L 2.99 2.85 3.31 3.36 1.75BUN均值mol/L 14.05 13.46 14.36 20.1 4.86Scr均值mol/L 309.5 271.4 384.56 514.76 39.33表3 560例標本中數(shù)值最高30180例cysc、BUN、Scr均值與BUN、Scr對應(yīng)cysc均值560例中數(shù)值最高 30例 60例 90例 120例

12、 150例 180例cysc均值(mg/L) 9.21 7.53 6.5 5.95 5.43 5.05BUN均值(mol/L) 40.49 34.11 30.22 27.8 25.89 24.22Scr均值(mol/L) 1273.58 1098.05 968.33 857.36 733.65 683.41BUN對應(yīng)cysc均值 4.07 4.67 4.67 4.54 4.42 4.31Scr對應(yīng)cysc均值 6.47 6.69 6.2 5.66 5.21 4.83前中文多稱之為胱抑素C。它由122個氨基酸組成，帶正電荷，等電為比較血清胱抑素C在醫(yī)院常規(guī)檢測中相對血清肌酐(Scr)、點為9.3

13、，是一種堿性非糖化的低分子蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量為13 尿素氮(BUN)的優(yōu)勢，筆者從6338份醫(yī)院患者標本中統(tǒng)計出血清3001。胱抑素C異常標本560例，在560例血清胱抑素C異常標本中，血清Cystatin C是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為-微肌酐(Scr)異常355例，尿素氮(BUN)異常422例。各項正常參考范量蛋白或-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液圍的來源是依據(jù)全國臨床檢驗操作規(guī)程，結(jié)合我院實際情況中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13300Mr，由做適當修改得出。從橫向比較得出的這個數(shù)據(jù)中可以看出血清胱122個氨基酸殘基組成，由機體有核細胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率

14、恒定，不受抑素C在檢測中相對血清肌酐、尿素氮的優(yōu)勢。因此可以說胱抑素炎性反應(yīng)、膽紅素、溶血、血脂等影響，且與性別、年齡、體重、飲C(Cystatin C)因其分子量小，能自由通過腎小球濾過膜，幾乎完食無關(guān)。Cystatin C相對分子質(zhì)量低、等電點高，能自由地通過腎全被腎小管重吸收且不被分泌，能很好地替代血肌酐而成為一種小球濾過膜并在近曲小管上皮細胞重吸收和降解。由于cystatin 新的反映腎小球濾過率(GFR)的理想標志物4-5。在縱向比較時，4C的生成速度和血濃度穩(wěn)定，不受其他病理變化影響，腎臟是其個不同的年齡段中除最低年齡段(014歲)，檢測中的血清胱抑素惟一的濾過和代謝器官，因此其可

15、作為反映腎小球過率的一種理C和血清肌酐、尿素氮無論是在異常檢出率和均值上都無很大區(qū)想的內(nèi)源性標志物，當腎小球出現(xiàn)輕微損傷時血中cystatin C濃別，血清胱抑素C在低年齡段(014歲)檢測中具有很好優(yōu)勢，而血度即可出現(xiàn)升高，并隨著病情的加重而逐漸升高，所以cystatin C清肌酐與尿素氮由于小兒體重和代謝原因，不能真實反映早期腎被公認為是反映早期腎損害的敏感標志物之一2-3。損傷。在早期的研究中，胱氨酸蛋白酶抑制劑C濃度的測定只能通國內(nèi)外對血清胱抑素C的參考值從出生到101歲之間年齡過放射免疫擴散方法，此方法非常耗時，需要至少1020h，并且CV范圍的個體以及各種體液進行了研究，正常人血清

16、胱抑素C為值相當高(大約10%)。10年后發(fā)展了全自動的微粒子增強透射免疫比(0.960.20)mg/L，臍帶血為(2.080.33)mg/L，嬰兒(1個濁法和夾心酶免疫法，不僅快速而且精密度高，所以明顯促進胱氨月)為(0.180.04)mg/L，12酸蛋白酶抑制劑C再臨床常規(guī)實驗的發(fā)展。透射免疫比濁法可在自個月為(0.720.29)mg/L。腦脊液為(5.3710.36)mg/L，唾動生化分析儀上進行，有準確、簡便、快速的優(yōu)點。顆粒增強透射免液為(1.220.67)mg/L，關(guān)節(jié)液為(1.270.41)mg/L，尿液為疫比濁法是以多克隆抗體為基礎(chǔ)的改良免疫比濁分析法，利用碳二(0.110.1

17、25)mg/L。羊水中的濃度與血漿中的濃度接近，腦脊液亞胺反應(yīng)將抗胱抑素C IgG共價結(jié)合到Intex顆粒上，與抗原結(jié)合濃度為血漿的56倍，精漿中濃度最高，平均為51mg/L6。形成的免疫復(fù)合物被聚乙二醇-6000沉淀，在340nm處比濁，與同血清胱抑素C應(yīng)用中的不足，相對血清肌酐與尿素氮低廉的價樣處理的標準液比較，計算標本中胱抑素C的含量。整個分析過程格，血清胱抑素C的價格是昂貴的，增加患者負擔。從表2我們可以只需幾分鐘，可利用生化分析儀進行比濁測定，批內(nèi)和批間CV分別看到血清胱抑素C最大測定值大多小于10mg/L，在中至重度腎損為0.9%和2.2%，回收率為98%，黃疸、溶血和脂血標本均不

18、受影響。傷的患者的檢測結(jié)果中對患者腎損傷程度上的反映不如血清肌酐使cystain C在臨床的廣泛應(yīng)用成為可能。與尿素氮明顯。從方法學(xué)上顆粒增強透射免疫比濁法測血清胱抑白藜蘆醇對高糖環(huán)境近端小管上皮細胞氧化應(yīng)激的影響王興紅 李德恒摘要 目的 白藜蘆醇對高糖誘導(dǎo)的近端小管上皮細胞(proximal tubule epithelial cells,PTEC)氧化應(yīng)激的影響。方法 采用手工微分離法體外培養(yǎng)大鼠PTEC，行免疫細胞化學(xué)法鑒定細胞類型。將細胞分為正常對照組(NC)(DMEM培養(yǎng)基)、高糖組(25mmol/L)、白藜蘆醇治療組(高糖+Res組)，化學(xué)比色法測定各組PTEC還原型谷胱甘肽(re

19、duced glutathione hormone,GSH)水平和過氧化氫酶(catalase,CAT)活性。的一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)、過氧化氫(hydrogen peroxide,H2O2)、結(jié)果 高糖組NO和H2O2顯著高于NC組(P0.01)；高糖+Res組NO和H2O2與高糖組比較明顯降低(P0.05)；高糖組CAT活性和GSH水平顯著低于NC組(P0.05)；高糖結(jié)論 白藜蘆醇具有抑制氧化應(yīng)激和增強抗氧化能力，+Res組CAT活性和GSH水平較高糖組明顯升高(P0.05)，與NC組比較無明顯差異。來發(fā)揮對糖尿病腎病(diabetic nephropat

20、hy,DN)的防治作用。關(guān)鍵詞 白藜蘆醇；近端小管上皮細胞；氧化應(yīng)激Abstract Objective To observe the effect of Resveratrol on oxidative stress of rat proximal tubule epithelial cells (PTEC) under high concentration of glucose Methods PTEC were cultured with microdissected freehand and cells types identi ed by immunocy-tochemistry T

21、he cells were divided and cultivated in the following medium containing DMEM (control group),25mmol/L glucose,25mmol/L glucose and resveratrol respectively The level of NO, H2O2, GSH and CAT of PTEC was determined by chemical colorimetric method.Results The level of NO and H2O2 was signi cantly incr

22、eased in high glucose concentration group than that in control group(P0.01)however, the level was obviously decreased in low, 25mmol/L glucose and resveratrol and high glucose concentration group(P0.05)The activity of CAT and GSH was signi cantly decreased in high glucose concentration group than th

23、at in control group(P0.05); however, the activity was obviously increased,25mmol/L glucose and resveratrol and high glucose concentration group(P0.05) Conclusion Resveratrol can inhibit oxidatie stress and enhance oxidation resistance, to play the role in prevention and treatment of diabetic nephrop

24、athy.Key words Resveratrol; Proximal tubule epithelial cells; Oxidative stress糖尿病是我國中老年人常見的疾病，糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最為嚴重的并發(fā)癥之一，也是臨床上導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因之一。近年來隨著對自由基氧化損傷的不斷深入研究，證實氧化應(yīng)激是糖尿病及并發(fā)癥發(fā)生的主要病理生理機制之一1。應(yīng)用抗氧化治療，改善氧化應(yīng)激可延緩糖尿病并發(fā)癥的發(fā)展。白藜蘆醇(Resveratrol，Res)是一種含有芪類結(jié)構(gòu)非黃酮類多酚化合物，許多基礎(chǔ)研究和臨床觀察均表明，白藜蘆醇具有廣

25、泛的藥理作用2。本實驗試圖觀察白藜蘆醇對高糖誘導(dǎo)的近端小管上皮細胞(proximal tubule epithelial cells,PTEC)氧化應(yīng)激的影響，進一步為白藜蘆醇防治DN的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 實驗材料作者單位:462002 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生理學(xué)教研室 (王興紅 李德恒)養(yǎng)，自由飲水，日常光照。1.2 原代近端小管上皮細胞的培養(yǎng)及鑒定 用手工微分離法分離大鼠單根近端小管，原代培養(yǎng)大鼠近端小管上皮細胞。將近端腎小管置入2mlDMEM培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，置于37 5%CO2的培養(yǎng)箱中原代培養(yǎng)，于第3天更換第1次培養(yǎng)液，78d細胞基本鋪滿瓶底。免疫細胞化學(xué)SABC法鑒定細胞。1.3 實驗分組 用MTT法檢測高糖和Res對細胞增殖的影響，由此選出高糖及藥物濃度。PTEC生長至基本鋪滿瓶底，將