第八章色譜定量基礎(chǔ)分析方法

1、Slide 1第八章定量基礎(chǔ)Slide 2 B BB BB=基線B V BV=峰谷點(diǎn)B P BP=基線滲透B H HH=水平基線(基線漂移）各種積分事件Slide 3校正 校正即是利用某個(gè)峰的峰高或峰面積來確定其對(duì)應(yīng)組分的濃度或含量 當(dāng)檢測(cè)器靈敏度針對(duì)不同的組分而變化；及檢測(cè)器對(duì)同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時(shí)須做校正Slide 4校正方法 *面積百分比法AREA% *峰高百分比法HEIGHT% 歸一化法NORM% 外標(biāo)法ESTD 內(nèi)標(biāo)法ISTD*不是校正方法Slide 5面積百分比法AREA%AREA(pk) AREA%=x100%AREA(pk)假定檢測(cè)器響應(yīng)都相同 所有組分都流出所有組分

2、都被檢測(cè)到優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)無需做校正以上所有的假定簡單、快速的定量過程需測(cè)量所有的組分進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格所有的面積都必須準(zhǔn)確Slide 6校正因子絕對(duì)響應(yīng)時(shí)間RF=含量/面積校正檢測(cè)器響應(yīng)與組分的含量及其它組分的存在無關(guān)含量 100100 200面積30002500 4000Slide 7歸一化法(NORM)RF(pk) x AREA(pk)NORM%= x100%RF(pk) x AREA(pk)假定所有組分都流出所有組分都被檢測(cè)到優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)簡單、快速的定量過程所有組分峰都要流出進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格需測(cè)量所有的組分必須校正所有的峰Slide 8外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法校正過程 首先準(zhǔn)備一個(gè)混合標(biāo)樣，其中感興趣組分的濃

3、度須準(zhǔn)確知道 運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品 建立校正表 運(yùn)行待測(cè)樣品并使用校正表分析它 需要時(shí)進(jìn)行再校正Slide 9單級(jí)校正 對(duì)每一峰只做一次校正 單級(jí)校正中做了如下假設(shè)：響應(yīng)因子不會(huì)因?yàn)槟撤鍖?duì)應(yīng)物質(zhì)的含量變化而發(fā)生變化響應(yīng)曲線須通過原點(diǎn)Slide 10單級(jí)校正因子含量響應(yīng)值(A或H)含量 響應(yīng)值 A或HA(istd)或H(istd)Slide 11多級(jí)校正 對(duì)每一峰需做至少兩次校正 可以補(bǔ)償檢測(cè)器對(duì)不同含量的樣品組分而給出非線性響應(yīng)。 響應(yīng)曲線可以不通過原點(diǎn)Slide 12定量分析Slide 13多級(jí)校正過程 首先準(zhǔn)備一個(gè)混合標(biāo)樣，其濃度應(yīng)高于欲分析物濃度 將濃標(biāo)樣等梯度稀釋，運(yùn)行每一級(jí)稀釋好的標(biāo)樣 在每

4、一級(jí)上進(jìn)行校正Slide 14多級(jí)校正過程（接上頁） 繼續(xù)稀釋混合標(biāo)樣，使其包含感興趣樣品的濃度范圍，并輸入每一級(jí)對(duì)應(yīng)的含量值 運(yùn)行待測(cè)樣品并使用校正表分析它 需要時(shí)進(jìn)行再校正Slide 15線性擬合（最小二乘法）含量響應(yīng)值(A或H)Slide 16點(diǎn)到點(diǎn)校正曲線含量響應(yīng)值(A或H)Slide 17非線性擬合含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)Slide 18外標(biāo)法（ESTD）含量面積(pk) x RF(pk)優(yōu)點(diǎn)校正檢測(cè)器的響應(yīng)只對(duì)欲分析的組分峰做校正無需所有峰都能被檢測(cè)到缺點(diǎn)進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確儀器必須有良好的穩(wěn)定性需定期做再校正Slide 19內(nèi)標(biāo)法

5、（ISTD）面積(pk) x RF(pk) x ISTD濃度含量面積(ISTD) x RF(ISTD)優(yōu)點(diǎn)進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求只對(duì)欲分析的組分峰做校正校正檢測(cè)器的響應(yīng)缺點(diǎn)必須加一個(gè)組分進(jìn)到樣品Slide 20選擇內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)1. 樣品中不存在2. 可迅速容易得到3. 化學(xué)性質(zhì)與樣品相似4. 與樣品有相同的濃度范圍5. 不會(huì)與樣品發(fā)生反應(yīng)6. 在感興趣組分附近流出7. 可得到分離良好的、干凈利落的峰8. 色譜性質(zhì)穩(wěn)定Slide 21定量方法總結(jié)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)AREA%無需校正檢測(cè)器的響應(yīng)必須一致進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求所有組分峰都須流出所有組分峰都須被檢測(cè)到所有面積都須準(zhǔn)確NORM%進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求所有組分峰都須

6、流出所有組分峰都須測(cè)定必須校正所有的峰ESTD校正檢測(cè)器的響應(yīng)進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確只對(duì)感興趣峰做校正儀器需有很好穩(wěn)定性無需所有峰都流出無需所有峰都被檢測(cè)到其結(jié)果的報(bào)告可選擇不同的單位ISTD進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求必須在所有樣品中加入只對(duì)感興趣峰做校正一個(gè)組分校正檢測(cè)器的響應(yīng)樣品和標(biāo)樣的準(zhǔn)備工作其結(jié)果的報(bào)告可選擇不同更加復(fù)雜的單位Slide 22本章將學(xué)到:如何設(shè)置并調(diào)試定量數(shù)據(jù)如何編輯定量結(jié)果如何產(chǎn)生定量報(bào)告定量數(shù)據(jù)分析Slide 23步驟 3: 用參考信號(hào)限定抽提離子步驟 2: 保留時(shí)間窗口參考信號(hào)步驟 1: 在萃取參考信號(hào)窗口峰積分化學(xué)工作站定量概念Slide 24分析標(biāo)準(zhǔn)物分析未知物建立標(biāo)準(zhǔn)曲線由曲

7、線計(jì)算含量ResponseAmountStd 1UnknownUnknown amtUnknown responseStd 2定量過程Slide 25優(yōu)點(diǎn): 可以糾正下列微小變化3進(jìn)樣量3響應(yīng)值3保留時(shí)間要求:3與被分析物化學(xué)性質(zhì)類似3樣品中不含有該物質(zhì)3所有樣品和標(biāo)樣中加入量相同內(nèi)標(biāo): 分析前加于所有樣品和標(biāo)樣中的化合物內(nèi)標(biāo)Slide 263連同校正表下載方法文件.3下載第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)文件3選擇 Calibrate / Set Up Quantitation.設(shè)置定量數(shù)據(jù)資料Slide 27選擇Calibrate / Set Up Quantitation.定量數(shù)據(jù)資料表 參考峰窗口：用于內(nèi)

8、標(biāo) 非參考縫窗口：用于其它化合物 相關(guān)窗口：允許目標(biāo)離子與限定離子的保留時(shí)間之差 默認(rèn)值：峰起點(diǎn)與終點(diǎn)須在此范圍內(nèi) 濃度單位 內(nèi)標(biāo)濃度Slide 28單擊 Insert Above輸入化合物Slide 29雙擊鼠標(biāo)右鍵選擇峰輸入化合物名稱如果該化合物是內(nèi)標(biāo)，選擇內(nèi)標(biāo)框。注意最先輸入內(nèi)標(biāo)化合物用十字標(biāo)選擇目標(biāo)和限定離子，同時(shí)擊鼠標(biāo)左右鍵單擊 “Save” 保存這一信息保存最后一個(gè)化合物后單擊 Exit輸入化合物 (續(xù))Slide 30請(qǐng)注意! 重要! 切記!內(nèi)標(biāo)位置須領(lǐng)先于以它為內(nèi)標(biāo)的其它化合物!內(nèi)標(biāo)指令Slide 31用于:增加新級(jí)別級(jí)別再校正刪除級(jí)別如何增加新級(jí)別:3 加載下一個(gè)標(biāo)樣的數(shù)據(jù)文

9、件3 選擇 Calibrate/Update./Update One Level3 為新的級(jí)別 ID 賦值及改變化合物濃度更新校正表10。000010。000Slide 32再校正分別選擇對(duì)濃度和保留時(shí)間是否再校正分別對(duì)濃度和保留時(shí)選擇再校正的方式（取代或平均）選擇再校正的級(jí)別選擇RecalibrateSlide 33化合物信息 - 第 1頁Slide 34化合物信息 - 第 2頁Slide 35化合物信息 - 第 3頁標(biāo)正曲線可以對(duì)化合物的濃度進(jìn)行修正Slide 36校正曲線注意保存方法！定量數(shù)據(jù)庫作為方法的一部分Slide 37定量報(bào)告選項(xiàng)Slide 38“MultiView” 窗口結(jié)果演

10、示交叉定量Slide 391. 選擇 Method/Edit Method.2. 選定Quant Report3. 選定報(bào)告格式和目的地4. 保存方法!自動(dòng)定量報(bào)告Slide 40允許手動(dòng)積分:從Qedit/Graphics 進(jìn)行從打印機(jī)輸出報(bào)告可以用于刪除錯(cuò)誤使用 Qedit手動(dòng)再積分Slide 41當(dāng)前數(shù)據(jù)聲明顯示在所有報(bào)告中!Changing Data StatesSlide 42使用下列工具:Trace Mode QuantLocate a Peak/Locate all CompoundsEasyID如果 peaks/限定離子找不到, 檢查:1. 積分2. 數(shù)據(jù)文件中的質(zhì)量數(shù)3. 時(shí)間范圍4. 信號(hào)相關(guān)窗口如果出現(xiàn)奇怪的校準(zhǔn)曲線, 檢查:1. 數(shù)量2. 積分事件3. 響應(yīng)定量數(shù)據(jù)庫故障排除Slide 43列出所有相關(guān)化合物和內(nèi)標(biāo)的定量過程詳細(xì)資料定量過程資料Slide 44查找峰/查找所有化合物Slide 45修正保留時(shí)間校正離子比率設(shè)置信號(hào)萃取窗口EasyIDSlide 46點(diǎn)擊Quantitate/Trace Mode Quant對(duì)痕量樣品進(jìn)行處理Slide 47輸入待測(cè)化合物編號(hào)Slide 48通過自動(dòng)提取目標(biāo)離子方法查找目標(biāo)化