微生物的遺傳和變異

1、第5章 微生物的遺傳和變異本章要點：1.遺傳變異的物質(zhì)基礎。 2.基因突變的特點和機制。3.菌種如何選育及如何誘變育種? 4.基因重組。5.基因工程的原理和操作步驟。 6.如何保藏菌種？5.1 基因?qū)z傳性狀的控制 5.1.1遺傳和變異的物質(zhì)基礎DNA遺傳變異的物質(zhì)基礎曾是生物學中激烈爭論的重大問題。1944年Avery等人以微生物為研究對象進行的三個經(jīng)典實驗有力地證實了核酸是遺傳物質(zhì)，基因是其信息單位，染色體是其存在形式。一.證明核酸是遺傳變異的物質(zhì)基礎的經(jīng)典實驗1.轉化實驗轉化指A品系的生物吸收了來自B品系生物的遺傳物質(zhì)從而獲得B品系的遺傳性狀的現(xiàn)象。轉化現(xiàn)象是格里菲斯（Griffith）

2、于1928年研究肺炎鏈球菌感染小白鼠的實驗中發(fā)現(xiàn)，后經(jīng)艾弗里（Avery）等于1944年證實的。2.噬菌體感染實驗1952年，侯喜（A.D.Hershey）和蔡斯（M.Chase）為了證實噬菌體的遺傳物質(zhì)是DNA，用放射性同位素標記大腸桿菌T2噬菌體進行實驗(圖5-1)。 圖5-1 噬菌體感染實驗3.植物病毒重建實驗1956年Fraenkel-Conrat等用含RNA的煙草花葉病毒進行了病毒(TMV)重建實驗(圖5-2)，證實了RNA是遺傳物質(zhì)。 圖5-2 TMV重建實驗5.1.2 DNA的結構與復制一.DNA的化學組成DNA是一種大分子化合物，由4種核苷酸組成。每一種核苷酸又由堿基、脫氧核糖

3、和磷酸3部分構成。4種核苷酸的差異僅在于堿基不同。在DNA中，4種堿基是；腺嘌呤 (adenine，A)、鳥嘌呤(guanine，G)、胞嘧啶(cytosine，C)和胸腺嘧啶(thymine，T)。脫氧核糖1位上的碳原子與嘌呤9位上的氮原子相連，5位上的碳原子與磷酸相連，就構成了4種不同的核苷酸。二.DNA的雙螺旋結構模型1953年美國遺傳學家沃森(James Deway Watson)和英國物理學家克里克( Francis Harry Compton Crick)根據(jù)英國晶體衍射專家維爾金斯(Maurice Hugh Frederick Wilkins)對脫氧核糖核酸的X射線衍射資料，以及

4、堿基含量分析、鍵長鍵角資料、酸堿滴定數(shù)據(jù)等，提出了像麻花、油條一樣扭在一起的DNA雙螺旋結構模型（圖5-3、5-4）。 圖5-3 DNA的一級結構 圖5-4 DNA分子雙螺旋結構示意圖三.DNA的復制通過實驗證明，DNA的復制是以半保留復制(semiconservative replication)形式進行的。其復制過程是這樣的：首先堿基對間的氫鍵斷裂，兩條核苷酸鏈的螺旋松開，堿基顯露出來，就像拉鏈一樣拉開。然后以每條單鏈為模板，按照堿基對互補的要求，在DNA多聚酶的催化作用下，通過堿基配對，逐漸合成一條新的核苷酸鏈，再和舊鏈形成新的雙螺旋。5.2 基因突變突變泛指細胞內(nèi)(或病毒顆粒內(nèi))的遺傳

5、物質(zhì)的分子結構或數(shù)量突然發(fā)生的可遺傳的變化。突變往往導致產(chǎn)生新的等位基因及新的表現(xiàn)型。狹義的突變專指基因突變，也稱點突變，而廣義的突變則包括基因突變和染色體畸變。突變的概率一般很低，約為10-6×10-9。突變是工業(yè)微生物產(chǎn)生變種的根源，是育種的基礎，但也是菌種發(fā)生退化的主要原因。5.2.1微生物突變體的主要類型基因突變的類型極為多樣。人們可從不同的角度對基因突變進行分類，并給以不同的名稱。根據(jù)突變體表型不同，可把突變分成以下幾種類型：營養(yǎng)缺陷型、抗性突變型、條件致死突變型、形態(tài)突變型、抗原突變型、其他突變型。5.2.2基因突變的分子基礎一.堿基置換及其對遺傳信息的影響堿基置換是指D

6、NA中核苷酸的一個堿基被另一個堿基所取代。其中一個嘌呤被另一個嘧啶或是一個嘧啶被另一個嘌呤所取代（GC或CG），叫顛換(transversion)；如果一個嘌呤被另一個嘌呤或是一個嘧啶被另一個嘧啶所取代，稱轉換(transition)。根據(jù)它們對氨基酸序列的影響不同，可分為下列幾種情況：1.同義突變：由于遺傳密碼具有簡單性，所以有些堿基替換并不造成氨基酸的變化。2.錯義突變：指堿基替換后引起氨基酸序列的改變。有些錯義突變嚴重影響到蛋白質(zhì)的活性，甚至使活性完全喪失，從而影響了基因的表型。3.無義突變：編碼區(qū)的單堿基突變導致終止密碼子的形成，使mRNA的翻譯提前終止，形成不完整的肽鏈，因而其產(chǎn)物一

7、般是沒有活性的。二.移碼突變及其產(chǎn)生由于在DNA分子的編碼區(qū)插入或缺失非3的整數(shù)倍個(1個、2個或4個)核苷酸而導致的閱讀框架的位移。因為遺傳信息是按3個堿基為一組依次排列而成的，蛋白質(zhì)的翻譯是從起始密碼子開始，按密碼子順序依次向下讀碼。當在起始密碼子后面加入1個、2個或4個堿基后，則后面的所有密碼子的閱讀框都發(fā)生改變，結果翻譯出來的蛋白質(zhì)的氨基酸序列與野生型完全不同。當然，如果插入或缺失的堿基正好是3個或其整數(shù)倍，那么在翻譯出的多肽上可能是多一個、幾個或少一個、幾個氨基酸，而不完全打亂整個氨基酸序列。三.缺失和重復大片段的缺失或重復(超過幾個堿基對)是基因突變的主要原因之一。特別是在放線菌中

8、的自發(fā)突變中，缺失或重復范圍從幾個基因到幾十個基因。5.2.3 基因突變的特點 一.不對應性：即突變的性狀與引起突變的原因間無直接的對應關系。 二.自發(fā)性：由于自然界環(huán)境因素的影響和微生物內(nèi)在的生理生化特點，在沒有人為誘發(fā)因素的情況下，各種遺傳性狀的改變可以自發(fā)地產(chǎn)生。 三.稀有性：生物的基因自發(fā)突變是隨時發(fā)生的，但發(fā)生的幾率是很低的，即突變率很低，也很穩(wěn)定， 一般在10-610-9之間。這反映了物種和基因的相對穩(wěn)定性。 四.獨立性：基因突變的發(fā)生一般是獨立的，即在某一群體中既可能發(fā)生抗青霉素的突變型，也可發(fā)生抗鏈霉素或其他某藥物的突變型，而且還可發(fā)生不屬抗藥性的突變型。 五.可誘變性：通過各

9、種物理、化學誘變劑的作用，提高突變率，一般可提高10105倍。 六.可逆性：基因突變的過程是可逆的。通常存在于某種生物中的野生型基因A可突變?yōu)閷幕騛，這個過程稱為正向突變；反之，由基因a也可以突變成野生型基因A，稱為回復突變或回變。 七.穩(wěn)定性：突變的根源是遺傳物質(zhì)結構發(fā)生了穩(wěn)定的變化，產(chǎn)生的變異性狀是穩(wěn)定的、可遺傳的。5.2.4基因突變的機制突變是DNA分子結構或數(shù)目的變化。據(jù)引起變化的原因可分為自發(fā)突變和誘發(fā)突變；據(jù)DNA變化的程度可分為基因突變和染色體畸變。一.堿基置換AT TA 顛換 CG GC 轉換堿基對的轉換可由互變異構和化學誘變引起。1.互變異構 在DNA分子的四種堿基中，

10、胸腺嘧啶(T)和鳥嘌呤(G)可以酮式或烯醇式出現(xiàn)。胞嘧啶(C)和腺嘌呤(A)可以氨基式或亞氨基式出現(xiàn)。在生物體中，一般以酮式和氨基式結構存在。但在極少數(shù)情況下，胸腺嘧啶分子中的N3位上的氫能轉移到C4位氧上， 使酮式轉變?yōu)橄┐际剑查g即恢復為酮式，這種分子結構上的互變稱為互變異構。如果就在變?yōu)橄┐际降乃查g，DNA的復制剛好到達這一部位，這時的胸腺嘧啶就不再與腺嘌呤配對，而與鳥瞟嶺配對。2.化學誘變劑引起的堿基對置換 能夠引起DNA分子中堿基對置換的誘變劑很多，常見的有堿基結構類似物，如亞硝酸、羥胺、燒化劑等。它們可直接或間接地引起DNA分子的堿基對置換。 二.移碼突變移碼突變指DNA分子中增

11、添或缺失少數(shù)幾個堿基對，而造成其后面全部遺傳密碼發(fā)生 轉錄和翻譯錯誤的基因突變。點突變一般只涉及到一個密碼子的改變，而移碼突變涉及到了突變點以后所有密碼子的改變，因此是一類影響較大的突變。與染色體畸變相比，移碼突變?nèi)詫儆贒NA分子的微小損傷。三.染色體畸變由于某些理化因素的作用造成DNA分子的大損傷所引起的突變叫染色體畸變。包括染色體的缺失、重復、插入、易位和倒位，也包括染色體數(shù)目的變化。染色體結構上的變化可分為染色體內(nèi)畸變和染色體間畸變兩類。引起染色體畸變的原因很多，可以自發(fā)地進行，也可以誘發(fā)進行。亞硝酸等誘發(fā)點突變的誘變劑，也可引起染色體畸變。物理誘變劑一般以引起染色體畸變?yōu)橹鳌?.紫外線

12、：DNA具有強烈的紫外吸收能力，尤其是核酸鏈上的堿基對。其主要生物學效應是其對DNA的作用，包括使DNA鏈斷裂、DNA鏈內(nèi)或鏈間交聯(lián)、嘧啶堿的水合作用及胸腺嘧啶二聚體的形成。2.X射線、射線和快中子：X射線、射線和快中子等屬于電離輻射，穿透力強，碰到原子或分子便產(chǎn)生次級電子，次級電子可產(chǎn)生電離作用。它們的直接效應是堿基間、DNA間、糖與磷酸間的化學鍵斷裂；間接效應是電離作用引起水或有機分子產(chǎn)生自由基作用于DNA分子，導致缺失或其他損傷。3.熱 ：可使胞嘧啶脫氨基變成尿嘧啶，從而引起堿基配對錯誤；還可引起鳥嘌呤脫氧核糖鍵移動，從而在DNA復制時出現(xiàn)堿基對的錯配。4.生物誘變因子：轉座因子也是實驗

13、室中常用的誘變因子，它們可在基因組的任何部位插入，引起該基因的失活導致突變。轉座因子是細胞中能改變自身位置的一段DNA序列。5.3 菌種的選育選種是根據(jù)微生物的特性，采用各種分離篩選方法，從自然界中或從生產(chǎn)實踐中選出符合人們要求的菌種。育種是根據(jù)微生物遺傳變異的原理，在已有的菌種基礎上，采用誘變或雜交的方法，迫使菌種發(fā)生變異，然后在變異的菌株中挑選出符合生產(chǎn)實際要求的菌種。5.3.1從自然界中獲得新菌種一.從自然界中選種1.樣品采集根據(jù)我們的目的到最合適的地方去采集樣品。在這方面，掌握了解微生物的生態(tài)知識有利于菌種的篩選。從土壤中采集樣品，又稱采土。采土的時候，應注意土壤肥瘦、采土深度、采土季

14、節(jié)、采土方法。2.增殖培養(yǎng)增殖培養(yǎng)是往樣品中加人適合某些微生物生長繁殖的物質(zhì)，或創(chuàng)造有利于某些微生物生長繁殖的環(huán)境條件，這樣就促進了某些微生物大量繁殖，如往土樣中加入一些石油，能利用石油的微生物容易生長繁殖；把土樣加入到含糖濃度高的培養(yǎng)基中，并把pH調(diào)到4以下，就可使酵母菌得到增殖。3.分離純化分離純化有很多方法：平板劃線分離法、稀釋涂布分離法、單孢直接挑取法、菌絲尖端切割法等。4.性能測定性能測定分粗測和精測。粗測又稱初篩，主要起定性的作用，一般在培養(yǎng)皿上進行。經(jīng)初篩后的菌種還要進行精測，才能適合生產(chǎn)的需要。精測又稱復篩，一般采用接近生產(chǎn)工藝條件的三角燒瓶液體進行振蕩培養(yǎng)或用臺式發(fā)酵罐進行發(fā)

15、酵，然后測定發(fā)酵液，再進行分析比較，最后選出比較理想的菌種。二.從生產(chǎn)中選種在生產(chǎn)過程中，經(jīng)常注意那些菌體形態(tài)或菌落性狀以及某些生理性能上發(fā)生自然變異的微生物，將它們挑選出來，進行比較試驗，有時可以選出更加理想的菌種。自發(fā)突變與定向培育一.自發(fā)突變的原因引起微生物自發(fā)突變的因素很多，主要有以下幾方面：DNA復制、微生物自身產(chǎn)生誘變物質(zhì)、環(huán)境對微生物的誘變作用等。二.自發(fā)突變的偶然性及其熱點S. Luria等人提出突變是一個偶然事件，突變概率很低，這些突變可發(fā)生在任一瞬間、任一堿基，這是難以預見的，因此任何時間、任何基因或任一個基因位置都有可能發(fā)生突變，這似乎說明突變是隨機的，但有些事實證明突變

16、并非是完全隨機的，突變位置也并非是完全隨機分布的。發(fā)現(xiàn)突變熱點和突變頻率有某種規(guī)律性。所謂突變熱點是指同一基因內(nèi)部突變率特別高的位點。3. 定向育種定向育種是指在某一特定條件下，長期培養(yǎng)某一微生物菌群，通過不斷轉接傳代以積累其自發(fā)突變，并最終獲得優(yōu)良菌株的過程。由于自發(fā)突變的頻率較低，變異程度較輕微，故用此法育種十分緩慢。5.4 誘變育種誘變育種是人為的利用物理和化學等因素，使誘變的細胞內(nèi)遺傳物質(zhì)染色體或DNA的片段發(fā)生缺失、易位、倒位、重復等畸變，或DNA的某一部位發(fā)生改變(又稱為點突變)，從而使微生物的遺傳物質(zhì)DNA和RNA的化學結構發(fā)生變化，引起微生物的遺傳變異，然后設法從群體中選出少數(shù)

17、優(yōu)良性狀的菌株，以供科學實驗或生產(chǎn)實踐中使用。5.4.1物理誘變一.紫外線(UV)誘變DNA和RNA的嘌呤和嘧啶有很強的紫外光吸收能力，最大的吸收峰在260nm。對于紫外的作用已有多種解釋，但研究的比較清楚的一個作用是使DNA分子形成嘧啶二聚體，阻礙堿基正常配對，并可能引起突變或死亡。另外嘧啶二聚體的形成，還會妨礙雙鏈的解開，影響DNA的復制和轉錄。二.激光誘變激光輻射可以通過產(chǎn)生光、熱、壓力和電磁場效應的綜合作用，直接或間接地影響生物有機體，引起細胞DNA或RNA、質(zhì)粒、染色體畸變效應、酶的激活或鈍化，以及細胞分裂和細胞代謝活動的改變。不同種類的激光輻射生物有機體，所表現(xiàn)出的細胞學和遺傳學變

18、化也不同。三.離子束注入誘變通過對人們所希望的離子進行加速，從而對細胞進行刻蝕加工。注入細胞內(nèi)部的離子可對部分基因進行修飾、加工、引導外源基因，尤其是大分子基因組轉入受體細胞，實現(xiàn)在新遺傳背景下的誘變育種及遺傳轉化。四.徽波輻射誘變微波能夠透射到生物組織內(nèi)部，使偶極分子和蛋白質(zhì)的極性側鏈以極高的頻率振蕩，增加分子的運動，導致熱量的產(chǎn)生。微波還能夠?qū)滏I、疏水鍵和范德華力產(chǎn)生作用，使其重新分配，從而改變蛋白質(zhì)的構象與活性。五.空間誘變高空誘變就是利用高空探測氣球搭載微生物，經(jīng)過大氣的平流層或電離層的電離輻射而誘發(fā)細胞變異。5.4.2 化學誘變化學誘變就是利用化學誘變劑處理分散均勻的微生物細胞群，

19、以引起堿基置換、染色體斷裂、基因重組或基因突變等生物學效應，使后代產(chǎn)生變異。然后采用簡便、快速、簡單的篩選方法，可篩選符合育種目標的菌株，以供生產(chǎn)實踐或科學研究用。化學誘變劑是靠各自的活性基團，靠它們特有的化學特性直接與生物分子進行各種特定的化學反應，從而引起生物分子化學性質(zhì)的變化?；瘜W誘變劑的種類很多，根據(jù)它們對DNA的作用機制，可以分為三大類：第一類是烷化劑，它與一個或多個核酸堿基起化學變化，因而引起DNA復制時堿基配對的轉換而發(fā)生變異。例如硫酸二乙酯、亞硝酸、甲基磺酸乙酯、N-甲基-N-亞硝基胍、亞硝基甲基脲等。第二類是一些堿基類似物，它們通過代謝作用滲入到DNA分子中而引起變異，例如&

20、#160;5-溴尿嘧啶、5-氨基尿嘌呤、2-氨基嘌呤、8-氮鳥嘌呤等。第三類是吖啶類，它造成DNA分子增加或減少一、二個堿基，從而引起堿基突變點以下全部遺傳密碼在轉錄和翻譯時產(chǎn)生錯誤。5.5 基因重組將兩個不同性狀個體內(nèi)的基因通過一定途徑轉移到一起，經(jīng)過遺傳分子間的重新組合，形成新的遺傳型個體的過程稱為基因重組或遺傳重組。5.5.1 原核微生物的基因重組原核微生物的基因重組形式很多，機制較遠時，其特點是片段性，僅一小段DNA序列參與重組；單向性，即從供體菌向受體菌（或從供體基因組向受體基因組）作單方向轉移；轉移機制獨特而多樣，基因重組的方式主要有轉化、轉導、接合和原生質(zhì)體融合幾種形式。5.5.

21、2 真核微生物的基因重組在真核微生物中，基因重組方式很多，主要有有性雜交、準性雜交、原生質(zhì)體融合和遺傳轉化等，其中原生質(zhì)體融合和遺傳轉化與原核生物中介紹過的內(nèi)容基本相同，這里僅介紹有性雜交和準性雜交。一.有性雜交雜交是在細胞水平上進行的一種遺傳重組方式。有性雜交一般指細胞間的接合和隨之發(fā)生的染色體重組，并產(chǎn)生新遺傳型后代的一種育種技術。凡能產(chǎn)生有性孢子的酵母菌、霉菌和覃菌，原則上都可應用與高等動、植物雜交育種相似的有性雜交方法進行育種。二.準性雜交 準性生殖是一種類似于有性生殖，但比它更為原始的一種兩性生殖方式，它可使同種生物兩個不同菌株的體細胞發(fā)生融合，且不以減數(shù)分裂的方式而導致低頻率的基因

22、重組并產(chǎn)生重組子。因此可以認為，準性生殖是在自然條件下真核微生物體細胞間的一種自發(fā)性的原生質(zhì)體融合現(xiàn)象。準性生殖常見于某些真菌，尤其是還未發(fā)現(xiàn)有性生殖的半知菌類。5.6 基因工程基因工程（Genetic engineering）或重組DNA技術(Recombinant DNA technology)是指在基因水平上的遺傳工程，它是用人為的方法將所需的某一供體生物的遺傳物質(zhì)DNA分子提取出來，在離體條件下切割后，把它與作為載體的DNA分子連接起來，然后導入某一受體細胞中，讓外來的遺傳物質(zhì)在其中進行正常的復制和表達，從而獲得新物種的一種育種技術。5.6.1基因工程的發(fā)展歷史微生物育種的實踐推動著微

23、生物遺傳變異基本理論的研究，而對遺傳變異本質(zhì)的日益深入研究又大大促進了遺傳育種的發(fā)展。1927年，發(fā)現(xiàn)X射線能誘發(fā)生物體突變，以后又發(fā)現(xiàn)紫外線等物理因子的誘變作用，于是很快被應用于早期的青霉素生產(chǎn)菌種Penicillium chrysogenum（產(chǎn)黃青霉）的誘變育種中，并取得了顯著成效；1946年，當發(fā)現(xiàn)了化學誘變劑的誘變作用，并初步研究了它們的作用規(guī)律后，在生產(chǎn)實踐中就掀起了利用化學誘變劑進行誘變育種的熱潮；幾乎在同一時期，由于對真核微生物的有性雜交、準性雜交和原核微生物種種基因重組現(xiàn)象的研究，在育種實踐上出現(xiàn)了各種雜交育種新技術；步入20世紀50年代以來，由于對遺傳物質(zhì)的存在形式、轉移方

24、式以及結構功能等問題研究，促進了分子遺傳學的飛速發(fā)展。5.6.2基因工程的主要過程基因工程技術涉及如下步驟：目的基因（即外源基因或供體基因）的獲取，通常包括DNA的純化技術、酶促消化或機械切割、以游離目的DNA序列；載體系統(tǒng)的選擇，對細菌細胞來說，合適的克隆載體有質(zhì)粒和細菌噬菌體；目的基因與克隆載體的連接，形成重組體；將重組DNA分子轉到合適的宿主中，如大腸桿菌，當利用質(zhì)粒時，對一重組的病菌載體來說此過程又稱為轉化或轉染；“工程菌”或“工程細胞株”的表達、監(jiān)測及實驗室和一系列生產(chǎn)性試驗等，利用細胞培養(yǎng)技術，培養(yǎng)篩選轉化的細胞，一個轉化的宿主細胞能生長并產(chǎn)生遺傳上相同的克隆細胞，每個細胞都攜帶著

25、轉化的目的基因。 圖5-5 基因工程的主要原理與操作步驟示意圖5.6.3 基因工程的應用 基因工程正在或即將使人們的某些夢想和希望變成現(xiàn)實?；蚬こ虖V泛應用于工業(yè)、食品、農(nóng)業(yè)、醫(yī)療、采礦、冶煉、材料、能源、環(huán)境保護和生物學基本理論的研究，帶動了生物技術的高速發(fā)展。重要的應用有：基因工程藥物、轉基因植物和轉基因動物、改造傳統(tǒng)工業(yè)發(fā)酵菌種、基因治療、基因工程在微生物研究中的應用、基因工程在環(huán)境保護中的應用等。5.6.4 基因工程研究展望基因工程的興起導致生物科學發(fā)生了深刻的變化，主要表現(xiàn)引發(fā)了生物科學中技術上的創(chuàng)新和迅猛發(fā)展；技術上的重大突破，促使生物科學獲得前所未有的高速發(fā)展；為改造生物提供強有

26、力的手段，使生物學進入創(chuàng)造性的新時期。5.7 菌種保藏與滅菌5.7.1菌種的退化和防治一.菌種退化生產(chǎn)菌株生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標記的丟失稱為菌種退化。菌種退化可以是形態(tài)上的，也可以是生理上的，具體表現(xiàn)有菌落和細胞形態(tài)的改變；生長速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少；代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力地下降；致病菌對宿主侵染力的下降，抗不良環(huán)境條件（抗噬菌體、抗低溫、抗高溫等）能力的減弱等。二.菌種退化的原因1.基因突變 菌種退化的主要原因就是那些控制生產(chǎn)性狀的基因發(fā)生負突變。退化性變異是大量存在的，而進化性變異則是個別的。2.分離現(xiàn)象 遺傳育種獲得的菌種若是多核（或是單核）但DNA雙鏈之一發(fā)生突變，隨著傳代，其生產(chǎn)性狀也將

27、發(fā)生退化。這種退化不是基因突變引起的，而是由于誘變獲得的高產(chǎn)株本身不純。三.菌種退化的防治1.從菌種選育時考慮在育種過程中，應盡可能使用孢子或單核菌株，避免對多核細胞進行處理，采用較高劑量使單鏈突變的同時，另一條單鏈喪失了模板作用，可以減少出現(xiàn)分離回復現(xiàn)象；同時，在誘變處理后應進行充分的后培養(yǎng)及分離純化，以保證獲得菌株的“純度”。2.從菌種保藏角度考慮不論在實驗室還是在生產(chǎn)實踐上，必須嚴格控制菌種可傳代次數(shù)。斜面保藏的時間較短，只能作為轉接和短期保藏的種子用，應該在采用斜面保藏的同時，采用沙土管、凍干管和液氮管等能長期保藏的手段。3.從菌種培養(yǎng)的角度考慮各種生產(chǎn)菌對培養(yǎng)條件的要求和敏感性不同，培養(yǎng)條件要有利于生產(chǎn)菌株，不利于退化菌株的生長。4.從菌種管理的角度考慮 菌種復壯就是在菌種發(fā)生退化后，通過純種分離和性能測定，從退化的群體中找出尚未退化的個體，以達到恢復該菌種原有性狀的一種措施，但這是一種消極的措施。5.7.2菌種保藏的原理和方法 一.定期移植保藏法將菌種接種于適宜的斜面或液體培養(yǎng)基，也可進行穿刺培養(yǎng)，待生長成健壯的菌體（對數(shù)期細胞、有性孢子或無性孢子）后，將菌種放置4冰箱保藏，每間隔一定時間需重新移植培養(yǎng)一次。二.液體石蠟保藏法在生長良好的斜面表面覆蓋一層無菌的液體石蠟，液面高出培養(yǎng)基1cm，將