p185neu和p21ras在肺癌組織中表達(dá)及相互關(guān)系

1、p185neu 和p21ras 在肺癌組織中表達(dá)及相互關(guān)系 【關(guān)鍵詞】 肺腫瘤 關(guān)鍵詞: 肺腫瘤;p185neu ;p21ras ;免疫組織化學(xué) 摘 要:目的 檢測c-erbB-2基因產(chǎn)物p185neu 和ras基因產(chǎn)物p21ras 在肺癌組織的表達(dá)情況，以揭示c-erbB-2和ras基因在肺癌形成中的作用及其相互關(guān)系. 方法 運(yùn)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測55例原發(fā)性肺癌組織中2種基因產(chǎn)物. 結(jié)果 10例小細(xì)胞肺癌組織均無p185neu 和p21ras 的陽性表達(dá).28例肺鱗癌中p185neu 和p21 ras 陽性表達(dá)率分別是46%（13/28）和54%（15/28）.16例肺腺癌中p18

2、5neu 陽性表達(dá)率為56%（9/16），p21 ras 陽性表達(dá)率為62%（10/16）.肺鱗癌和肺腺癌中2種蛋白的陽性表達(dá)率均無顯著性差異（P>0.05）.p185neu 陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性（r=0.36，P<0.05），與其他臨床病理因素?zé)o關(guān);p21ras 陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小等臨床病理因素?zé)o關(guān).p185neu 和p21ras 在肺癌組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.52，P<0.01）. 結(jié)論 c-erbB-2和ras基因的改變與非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的發(fā)生有關(guān)，這2種基因在NSCLC的形成和發(fā)展中具有協(xié)同作用.同

3、時，檢測p185neu 和p21ras 還有助于評估肺癌患者的預(yù)后. Keywords:lung neoplasms;p185neu ;p21ras ;immunohis-tochemistry Abstract:AIM To shed light on the relationship among c-erbB-2gene，ras gene，and the carcinogenesis of lung cancer by measuring p185neu and p21ras （the products of the c-erbB-2gene and ras gene respective

4、ly）in lung cancer tissues.METHODS Two genesproducts were detected in primary lung cancer tissues by SABC，an immunohistochemical method，for55cases.RESULTS Of10cases of small cell lung cancer（SCLC），none was p185neu or p21ras positive.And of28cases of squamous carcinoma，the rates of p185neu and p21ras

5、positive expression were46%（13/28）and54%（15/28）respectively.Of16cases of adenocarcinoma，the rates of the two genespositive expression were56%（9/16）and62%（10/16）respectively.There was no significant differ-ence between the positive expression rates of the two genes in the squamous and adenocarcinoma（

6、P>0.05）.The p185neu positive expression was significantly correlated（r=0.36，P<0.05）to lymph node metastasis but not significantly corre-lated to other clinical pathological factors.However，p21ras positive expression had no significant correlation with such clinical pathological factors

7、 as lymph node metastasis and the size of tumor.The expression of p185neu and p21ras was posi-tively correlated（r=0.52，P<0.01）in lung cancer tissues.CONCLUSION Change in c-erbB-2gene and ras gene is re-lated to the carcinogenesis of non-small cell lung cancer and plays a cooperative role in t

8、he carcinogenesis and development of NSCLC.Detecting p185neu and p21ras is useful for the eval-uation of the prognosis of lung cancer patients. 0 引言 癌基因的激活在腫瘤的發(fā)病機(jī)制中起重要的作用.大量研究結(jié)果表明，肺癌的發(fā)生是一個涉及多基因、多階段的事件，至少需要兩個或兩個以上活化的癌基因協(xié)同作用才能使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化1，2 .許多研究顯示，c-erbB-2原癌基因擴(kuò)增和過度表達(dá)與乳腺癌，卵巢癌和胃癌等多種癌癥密切相關(guān)3-5 ，該基因的激活使患者

9、的存活期明顯縮短.ras基因的活化與肺癌，尤其與非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）關(guān)系密切.目前有關(guān)肺癌形成中這兩種基因相互關(guān)系的報(bào)道較少.我們通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測c-erbB-2基因產(chǎn)物p185neu 和ras基因產(chǎn)物p21ras 在肺癌組織中的表達(dá)情況，探討c-erbB-2和ras基因在肺癌形成中的作用及二者的相互關(guān)系. 1 材料和方法 1.1 材料 選用西京醫(yī)院1997/1999年間臨床資料齊備的肺癌患者的纖維支氣管鏡活檢標(biāo)本55（鱗癌28，腺癌16，小細(xì)胞癌10，大細(xì)胞癌1）例.男性47例，女性8例，年齡1872（平均54.42）歲.40g・L-1 甲醛固定標(biāo)本，

10、石蠟包埋，肺癌組織學(xué)類型按WHO標(biāo)準(zhǔn)分類6 . 1.2 試劑及染色方法 采用武漢博士德生物公司提供的即用型試劑盒.采用SABC染色方法，操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行.切片脫蠟至水后，用30mL・L-1 H2 O2 處理10min，正常山羊血清封閉.分別滴加一抗，4過夜，PBS洗滌，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37孵育20min，滴加試劑SABC，20min后用DAB液顯色，蘇木精復(fù)染，封片，顯微鏡下觀察.用PBS代替第一抗體作陰性對照，用已知乳腺癌陽性切片作陽性對照. 1.3 結(jié)果判定方法 p185neu 陽性以細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中有棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞.p21ras 蛋白

11、主要以細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性.陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)參照Barnes提出的半定量分析方法，陽性細(xì)胞數(shù)量計(jì)04分，無計(jì)0分;小于或等于25%計(jì)1分;26%50%計(jì)2分;51%75%計(jì)3分;大于75%計(jì)4分.染色強(qiáng)度計(jì)13分，淺黃色計(jì)1分;棕黃色計(jì)2分;棕褐色計(jì)3分;將兩項(xiàng)指標(biāo)評分相乘，根據(jù)總分分為四級即陰性（-）為0分，弱陽性（+）為12分，陽性（）為34分，大于4分則為強(qiáng)陽性（）. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用2 檢驗(yàn)和非參數(shù)相關(guān)性分析. 2 結(jié)果 2.1 肺癌組織中p185neu 和p21ras 的表達(dá) p185neu 陽性產(chǎn)物主要位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中（Fig1）.55例肺癌中22例呈陽性反應(yīng)，

12、占40%，無1例小細(xì)胞肺癌呈陽性反應(yīng).腺癌的陽性率為56%，鱗癌的陽性率為46%，兩者相比無顯著性意義（P>0.05）.p21ras 陽性產(chǎn)物主要位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)和細(xì)胞質(zhì)中（Fig2），55例肺癌中有25例呈陽性反應(yīng)，占45%，無1例小細(xì)胞肺癌呈陽性反應(yīng).腺癌的陽性率為62%，鱗癌的陽性率為54%，兩者的差異無顯著性意義（P>0.05）. 2.2 p185neu ，p21ras 與臨床病理因素之間的關(guān)系 p185neu 蛋白過量表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（r=0.36，P<0.05）.p185neu 過量表達(dá)與其他臨床病理因素?zé)o明顯相關(guān)性（P&gt

13、;0.05）.p21ras 過量表達(dá)與臨床病理因素?zé)o明顯相關(guān)性（P>0.05，Tab1）. 2.3 肺癌組織中兩種蛋白表達(dá)的相互關(guān)系 在55 例肺癌組織中p185neu 和p21ras 均為陽性表達(dá)者占17例.經(jīng)2×2交叉分類資料檢驗(yàn)及非參數(shù)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，p185neu 和p21ras 在肺癌組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.52，P<0.01）. 圖1 圖2 略 表1 肺癌不同病理因素中p185neu 和p21ras 的表達(dá)略 3 討論 c-erbB-2基因是1981年由Shih等7 在研究化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤的DNA中發(fā)現(xiàn)的一種原癌基因.

14、該基因定位于人染色體17q218 ，編碼相對分子質(zhì)量為185×103 的跨膜糖蛋白p185neu .近些年來，c-erbB-2基因與腫瘤之間的相關(guān)性已引起人們極大的興趣，但大量研究重點(diǎn)集中在c-erbB-2基因與乳腺癌、卵巢癌及胃癌之間關(guān)系方面，而有關(guān)肺癌中c-erbB-2基因擴(kuò)增和蛋白過度表達(dá)情況的報(bào)道較少.已有初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示c-erbB-2基因與NSCLC有一定的相關(guān)性，如Osaki等9 研究發(fā)現(xiàn)40例肺腺癌組織切片中，p185neu 陽性表達(dá)17例，陽性表達(dá)率達(dá)42%.但是目前仍缺乏肺鱗癌中p185neu 陽性表達(dá)情況的研究.而本研究結(jié)果顯示，NSCLC中存在p185neu

15、過度表達(dá)，鱗癌和腺癌的陽性表達(dá)率分別為46%和56%，兩者無顯著性差異.同時，p185neu 陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性，與其他臨床病理因素?zé)o關(guān)，由此說明p185neu 過度表達(dá)促進(jìn)了受體二聚化和寡聚化，增強(qiáng)酪氨酸激酶活性，激活異常細(xì)胞信號，進(jìn)而形成腫瘤細(xì)胞惡化表型，c-erbB-2基因高水平表達(dá)與肺癌的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，檢測p185neu 有助于評估肺癌患者的預(yù)后. ras原癌基因?qū)?xì)胞的增殖及分化具有重要作用.其產(chǎn)物p21ras 是一種G蛋白，與GTP和GDP有高度的親和性，具有GTP酶的活性，它從細(xì)胞表面受體傳遞增殖信號至細(xì)胞核中發(fā)揮作用.p21ras 過度表達(dá)或ras基因

16、突變會使信號傳導(dǎo)發(fā)生障礙，引起腫瘤形成.Harada等10 用p21ras 單抗研究116例NSCLC標(biāo)本，其中鱗癌陽性者為56%，腺癌為72%，p21ras 陽性與生存期呈負(fù)相關(guān).而我們的結(jié)果顯示，55例肺癌組織中，鱗癌與腺癌的陽性表達(dá)率分別為54%和62%，兩個陽性表達(dá)率相比無顯著性差異.p21ras 陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小等臨床病理因素?zé)o明顯相關(guān)性，由此揭示p21ras 過度表達(dá)可能是一個獨(dú)立于組織類型、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之外的不良預(yù)后因素. 我們的結(jié)果顯示p185neu 與p21ras 表達(dá)水平在肺癌組織中呈正相關(guān)，這表明c-erbB-2和ras基因在肺癌形成過程中具有協(xié)同作

17、用，可能的解釋是這兩種基因均位于細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中，當(dāng)細(xì)胞表面c-erbB-2表達(dá)產(chǎn)物大量聚集后，通過級聯(lián)反應(yīng)可導(dǎo)致ras癌基因的活化，同時，p21ras 的結(jié)合也可能導(dǎo)致c-erbB-2基因擴(kuò)增或表達(dá)產(chǎn)物的磷酸化，這兩種癌基因之間相互作用機(jī)制目前尚不完全清楚，仍需進(jìn)一步探討. 參考文獻(xiàn): 1Slamon DJ，Dekernion JB，Verma IM，Cline MJ.Expression of cellular oncogenes in human malignancies J.Science，1984;224（4646）:256-262. 2Pulciani S，Santos E，La

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