淀粉酶粗酶液最適反應(yīng)溫度的測(cè)定

1、本科學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名： 學(xué)號(hào)： 學(xué)院： 專業(yè)、班級(jí)： 實(shí)驗(yàn)課程名稱 指導(dǎo)教師及職稱 開(kāi)課學(xué)期 至 學(xué)年 學(xué)期 云南師范大學(xué)教務(wù)處編印實(shí)驗(yàn)序號(hào)及名稱：實(shí)驗(yàn)三、淀粉酶粗酶液最適反應(yīng)溫度的測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)間：實(shí)驗(yàn)地：睿智3棟121實(shí)驗(yàn)室一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私獠煌瑴囟葪l件對(duì)酶活性的影響，掌握酶最適反應(yīng)溫度的測(cè)定方法。二、 實(shí)驗(yàn)原理：酶促反應(yīng)與一般化學(xué)反應(yīng)一樣，受溫度的影響，反應(yīng)速度隨溫度的升高而加快，但因?yàn)槊甘堑鞍踪|(zhì)，在溫度升高的同時(shí)蛋白質(zhì)的變性速度也在加快，從而又會(huì)使反應(yīng)速度變慢，直至使酶完全失活。因此溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響具有雙重性，其表現(xiàn)是兩種對(duì)抗效應(yīng)的綜合效果。所以只有在某一溫度范圍內(nèi)時(shí)，酶促反應(yīng)速

2、度才會(huì)隨著溫度的升高而升高，達(dá)到最大時(shí)的反應(yīng)溫度稱為酶作用的最適溫度。三、 實(shí)驗(yàn)材料（一）材料1.淀粉酶發(fā)酵粗酶液2.0.1mol/L，pH5.5的乙酸-乙酸鈉緩沖液配制方法：（1）在1000mL燒杯中加入800mL去離子水。（2）加入11.57g三水乙酸鈉和0.85mL冰乙酸于燒杯中，攪拌溶解。（3）測(cè)定溶液的pH，若pH偏離5.5，用乙酸溶液或乙酸鈉溶液調(diào)節(jié)至5.5。 （4）用去離子水定容至1000mL。（5）室溫儲(chǔ)存，用前要檢查pH。若要長(zhǎng)期儲(chǔ)存，需加入0.2%的疊氮化鈉來(lái)防止微生物生長(zhǎng)變質(zhì)。3. D-葡萄糖（C6H12O6）標(biāo)準(zhǔn)液，濃度為1mg/mL4. 2%（w/v）可溶性淀粉溶液（

3、現(xiàn)配現(xiàn)用）稱取2.0克可溶性淀粉，用約80mL緩沖液調(diào)勻，加熱煮沸 直到淀粉完全溶解；5. DNS試劑（二）儀器1.試管及試管架 2.10mL離心管3.離心機(jī) 4.移液器5.電子天平 6.恒溫水浴鍋7.pH計(jì) 8.渦旋混合器9.紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、比色皿、記時(shí)器10.電磁爐、搪瓷缸四、 實(shí)驗(yàn)方法、步驟及注意事項(xiàng)：1.本實(shí)驗(yàn)在室溫至70 之間選擇不同溫度測(cè)定淀粉酶粗酶液酶活力，以找出酶在此條件下的最適溫度。反應(yīng)pH為5.5。2.用緩沖液稀釋酶液至合適倍數(shù)。3.取18支試管，分別按下表編號(hào)并放入相應(yīng)溫度的水浴中試管號(hào)對(duì)照1支反應(yīng)2支對(duì)照1支反應(yīng)2支對(duì)照1支反應(yīng)2支對(duì)照1支反應(yīng)2支對(duì)照1支反應(yīng)2支對(duì)照1支反應(yīng)2支反應(yīng)溫度室溫30405060704.按淀粉酶酶活測(cè)定方法測(cè)定在不同溫度條件下淀粉酶發(fā)酵粗酶液的酶活力。5.計(jì)算結(jié)果6.結(jié)果處理：列出不同溫度下酶活力的實(shí)驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)，并繪出溫度曲線，找出最適溫度。注意事項(xiàng)：1、每個(gè)同學(xué)都參與實(shí)驗(yàn)2、稱量天平分開(kāi)使用3、稱量器皿用后摖凈后再使用，避免叉污染試劑。4、使用前檢查儀器設(shè)備是否完好，使用后及時(shí)清理干凈。五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：結(jié)果溫度 ODAB平均值室溫2.6812.6982.690302.7642.7862.775402.9242.9352.930502.8572.9032.880