紅曲色素分離純化工藝研究

1、 紅曲色素分離純化工藝研究 目錄 摘要4一、緒論51.1 紅曲色素概述51.1.1紅曲色素來源51.1.2紅曲色素主要成分51.1.3紅曲色素結(jié)構(gòu)特點51.1.4紅曲色素性質(zhì)61.2紅曲色素的應(yīng)用61.2.1在肉制品中的應(yīng)用61.2.2在調(diào)味品中的應(yīng)用71.2.3在酒類中的應(yīng)用71.2.4在腌制蔬菜中的應(yīng)用71.2.5在面制品中的應(yīng)用71.3紅曲色素發(fā)展狀況7二、實驗部分82.1紅曲霉提取分離82.1.2實驗方法92.1.3紅曲霉的分離純化92.2紅曲色素在紅曲霉中的提取92.2.1傳統(tǒng)乙醇提取法102.2.2微波輔助提取法102.2.3超聲輔助提取法102.2.4超臨界Co2萃取法112.3

2、紅曲色素分離純化112.3.1硅膠板薄層層析法112.3.2柱層析法112.3.3高效液相色譜法122.3.4高速逆流色譜法12三、結(jié)果分析133.1高速逆流色譜法分離純化不同的色素組分133.2色素組分的結(jié)晶純化153.3最終樣品純度檢驗和鑒定163.4總結(jié)21四、展望：21參考文獻：22致 謝24紅曲色素分離純化工藝研究戴亭亭1201精細化工摘要:紅曲色素是由紅曲霉發(fā)酵生產(chǎn)的天然食用色素,其作為添加劑在食品的各個領(lǐng)域中都有很好的應(yīng)用前景。文章較全面地介紹了紅曲色素的結(jié)構(gòu)組成、主要對紅曲色素采用高速逆流色譜法分離純化工藝進行分析研究，篩選弱極性分離溶劑系統(tǒng)正乙烷-醋酸乙酯-甲醇-水，得到6種

3、色素組分在不同溶劑體系中的分配系數(shù)，產(chǎn)率達到了85%，另外得到的6中色素組分的摩爾吸光系數(shù)概括為13333、14871、9390、10360、27621、29849L/（mol.cm）。在最后有對紅曲色素的一系列方面進行展望，目的是為了更近一步的研究紅曲霉素。關(guān)鍵詞：紅曲色素 分離純化 高速逆流色譜Monascus pigments purification technology was studiedDaiTingting1201精細化工Abstract: Red pigment is a natural food coloring from red Aspergillus fermenta

4、tion, which is used as an additive in food products in various fields have a very good prospect. Article comprehensively introduces the red pigment structure composed mainly red pigment using high-speed countercurrent chromatography purification process of analysis and study, separate screening weak

5、ly polar solvent system n-hexane - ethyl acetate - methanol - water to give 6 kinds of pigment components in different solvent system partition coefficient, the yield reached 85%, while the resulting pigment component 6 molar absorption coefficient summarized as 13333,14871,9390,10360,27621,29849L /

6、 (mol. cm). Finally, there are a series of aspects of the red pigment were prospects, the purpose is to research one step closer to the red Aspergillus. Kevwords: monascus pigments；separation and purification ；high-speed counter-current chromatography一、緒論1.1 紅曲色素概述1.1.1紅曲色素來源紅曲色素是一種以玉米、大豆、大米等作為原料，通過

7、一系列的步驟，如：發(fā)酵培養(yǎng)、提取、濃縮、萃取、濃縮、精制租后得到的純天然的紅色色素，它的商品名為紅曲紅，另外它具有天然色素的一般特性，當然它除了具有天然色素的一般特性以外，它還具有自己獨特的優(yōu)點：首先它作為一種色素，就應(yīng)具有色素必要的著色性，此外，它擁有抗菌的功能，還具有保健的功能，作為食品添加劑，它具有天然、安全以及多種用處的特點1。 1.1.2紅曲色素主要成分據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，紅曲色素是有紅色、黃色、橙色3種色素組成的，而且它們性質(zhì)非常相近，但化學(xué)結(jié)構(gòu)是不同的，目前我們知道的結(jié)構(gòu)有16種。談到它的應(yīng)用價值，我們通常都會提起的是以下六種醇溶性的色素：紅曲素(Monascin) 2-4 、紅色的紅斑

8、紅曲胺(Rubrop-unctamine)、紅曲玉紅胺(Monascrubramine)、橙色的紅斑紅曲素(Rubropunctatin)、紅曲玉紅素(Mott-as-corubrin)、黃色的安卡紅曲黃素(Ankaflabin)。除了這六種之外，目前已有兩種新的色素被發(fā)現(xiàn)，并進行研究。六種色素的成分是不同的，所以它的物理化學(xué)性質(zhì)也不同，但在應(yīng)用時我們會發(fā)現(xiàn)具有實際應(yīng)用價值的屬紅色色素。紅曲色素中的黃色成分約占5%，其性質(zhì)比較穩(wěn)定，但因其含量低，故一般紅曲都呈現(xiàn)偏紅色調(diào)的顏色。表1 紅曲色素的主要組成色素種類 色素顏色 分子式 分子量紅斑紅曲胺 紅色 C23H22O5 354紅曲玉紅胺 紅色

9、C23H27O5 381紅曲玉紅素 橙色 C23H26O5 382紅斑紅曲素 橙色 C21H23O5 353安卡紅曲黃素 黃色 C23H30O5 386紅曲素黃色 黃色 C21H26O5 3581.1.3紅曲色素結(jié)構(gòu)特點紅曲色素是紅曲霉的次級代謝產(chǎn)物，從分子結(jié)構(gòu)上看主要包括脂肪酸和多聚酮兩個部分，它的合成也包括兩個部分：第一部分是：多聚酮合成途徑，產(chǎn)生生色團；第二部分是：脂肪酸合成途徑，產(chǎn)生脂肪酸，在通過轉(zhuǎn)酯化作用連接到生色團上。即一分子乙酰CoA和3分子丙二酰CoA在聚酮體合酶的作用下生成四酮化合物, 四酮化合物再與1分子丙二酰CoA生成五酮化合物，像這樣如此循環(huán)使酮基化合物碳鏈加長產(chǎn)生聚酮

10、發(fā)色團，脂肪酸與乙酰 CoA作用生成聚酮酸，聚酮酸與發(fā)色團的羥基進行酯化反應(yīng)，最后成為色素分子5。1.1.4紅曲色素性質(zhì)紅曲色素為紅色或暗紅色液體或粉末或糊狀物。輕微的腥臭味; 大約60攝氏度的熔點;溶于乙醇、乙醚、冰醋酸,難溶于水、甘油上的紅曲色素測試的pH值pH2-9的緩沖溶液可以認為對它的PH值是比較穩(wěn)定的；耐熱性：在100攝氏度以上時，它的醇溶液對紫外線也是相當?shù)姆€(wěn)定，但太陽能會使得它的色度降低；它對金屬離子也是極其穩(wěn)定的：例如：0.01mol/ L的鈣離子，鎂離子，鐵離子，銅離子等；另外，它也不受百分之0.1的過氧化氫，亞硫酸鈉，維生素等氧化還原劑的影響，但在氯漂白的情況下，對蛋白質(zhì)

11、的染色性能較好。表2 紅曲色素和其他幾種色素性質(zhì)比較1.2紅曲色素的應(yīng)用1.2.1在肉制品中的應(yīng)用紅曲色素具有較好的顏色性能和較強的抑菌作用，因此將它替代亞硝酸鹽作為染色劑廣泛用于肉類產(chǎn)品。紅曲色素和亞硝酸鹽著色原理完全不同:亞硝酸鹽是與肌紅蛋白是通過形成亞硝基肌紅蛋白而進行著色的，但紅曲色素則是直接染色的。紅曲色素和亞硝酸鹽都可以把肉染成比較特別的肉紅色，而且使肉類具有特別的風(fēng)味，而且在食品中加入紅曲色素還可以延長食物的保質(zhì)期，據(jù)研究也表明了紅曲色素的安全性較高，可以放心使用。在腌制食品時，加入適量的紅曲色素不但可以將亞硝酸鹽的用量降低百分之六十五左右，還可以使腌制的食品具有好看的顏色，還有

12、利于保存。1.2.2在調(diào)味品中的應(yīng)用糖化增香曲（醬油專用）是基于紅菌株復(fù)合紅曲菌株，把它在醬油釀造的使用，不僅可以使醬油的顏色透明好看，還可以使原料總氮利用率和醬油出品率明顯提高，做出來的醬油香味，清新甜美的很明顯，質(zhì)量優(yōu)于普通醬油的過程。研究發(fā)現(xiàn)，將紅曲色素粉末直接進入醬醅中發(fā)酵醬油紅色指數(shù)明顯增加，提高了醬油的口感，使得味道更加鮮美可口。1.2.3在酒類中的應(yīng)用丹溪紅曲酒是采取壓濾工藝生產(chǎn)的，在發(fā)酵過程中加入適量的紅曲色素，不但可以保留了發(fā)酵過程中的醋液、粗蛋白、礦物質(zhì)和少量的醛、酯等物質(zhì)，還可以使釀出來的酒具有獨特的香氣，口感非常好，還具有一些營養(yǎng)價值，值得人們學(xué)習(xí)此種方法進行釀酒。此外

13、也有其它研究，都證實了這一點，更加肯定了，其在酒類的作用。1.2.4在腌制蔬菜中的應(yīng)用在腌制蔬菜生產(chǎn)時，用紅曲色素作為著色劑處理蔬菜，可以使得蔬菜的色澤更加鮮亮，色澤更加誘人。紅曲色素可以作為泡菜外加色素，主要是通過物理吸附作用滲透到蔬菜里面。蔬菜細胞在腌制加工過程中，細胞膜變成通透性膜,它能吸收植物細胞色素的其他輔料而改變原始的顏色。1.2.5在面制品中的應(yīng)用利用紅曲色素可以生產(chǎn)饅頭、面包、餅干等一系列面粉制品。在面包生產(chǎn)過程中，添加紅曲水浸出溶液,添加量不同對面包的顏色、香氣、味道和口感影響效果并不是很大，只是，隨著添加量的增加它的顏色也會加深變紅。與直接添加紅曲粉相比，在所有方面的都有顯

14、著差異，尤其是香味，與不是添加紅曲提取物制成的面包相比，更清新獨特。1.3紅曲色素發(fā)展狀況自古以來，紅曲是一個藥食兩用天然食品添加劑,歷史悠久。紅曲作為著色劑已被廣泛應(yīng)用于肉制品，紅曲的更多的藥用價值和保健福利等功能人類將進一步深入探討，在肉類和其他食品中使用為人類健康發(fā)揮更大的作用。作為天然色素，紅曲色素一直以來被認為是安全性較高的食用色素，試驗證明不含黃曲霉毒素。動物性試驗也表明，食用紅曲色素及其制品的食物均未發(fā)現(xiàn)急、慢性中毒現(xiàn)象，也無致突變作用,此外，還具有降低血脂、血壓，抗突變4 ，防腐、保鮮等生理活性，因此紅曲色素具有“天然、營養(yǎng)、多功能”的多重優(yōu)點。本草綱目中記載，紅曲消食活血，健

15、脾燥胃，治赤白痢，下水谷，治打撲傷損，治女人血氣痛及產(chǎn)后惡血不盡6。二、實驗部分本文章主要研究紅曲色素的分離純化，我們首先要把紅區(qū)色素提取出來，然而紅曲色素70%-80%存在于菌體內(nèi)，20%-30%分泌到發(fā)酵液中。在實驗部分，我們要做的首先是把紅曲霉從紅曲米中提取出來，然后再從紅曲霉中提取出紅區(qū)色素，以達到分離純化的實驗?zāi)康摹?.1紅曲霉提取分離2.1.1儀器與藥品序號儀器規(guī)格1紅曲米產(chǎn)自廣西宣武2培養(yǎng)基孟加拉紅培養(yǎng)基實驗室培養(yǎng)PDA培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)肉湯3無菌生理鹽水實驗室培養(yǎng)4試管、三角燒瓶、量筒、玻璃棒、PH試紙、紗布實驗室用品5高壓蒸汽滅菌鍋（1） 培養(yǎng)基的配制按實際用量計算后，按配方

16、稱取藥品放入三角瓶中，其中營養(yǎng)肉湯1.8g,營養(yǎng)瓊脂0.33g,孟加拉紅3.16g加水100ml加熱溶解并不斷攪拌至完全溶解后包扎，于115高壓滅菌20分鐘（由于當時疏忽導(dǎo)致滅菌溫度沒有達到121）（2） 生理鹽水的配制 稱取Nacl0.85g加水100ml后加熱溶解，包扎于115下滅菌20分鐘（3） 其他工具滅菌 移液槍頭，移液管等（4）無菌檢查 將無菌的營養(yǎng)肉湯，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基放入37恒溫箱中，孟加拉紅培養(yǎng)基放入28恒溫箱中培養(yǎng)24-28h,無菌生長即可實驗方法將無菌培養(yǎng)基加熱溶解后于超凈工作臺倒平板，每皿厚度應(yīng)為15-20mm,待冷卻凝固后取2-3顆紅曲米，采用點植法將之放入培養(yǎng)基中培養(yǎng)

17、，貼上標簽，其中孟加拉紅6皿，PDA3皿放入28恒溫箱中培養(yǎng)，其余放入37恒溫箱中，培養(yǎng)24-28h觀察結(jié)果 72個小時后觀察的現(xiàn)象28 PDA3皿生長正常，孟加拉紅6皿生長；37PDA3皿較28生長得快，營養(yǎng)瓊脂6皿生長較慢或基本不生長，營養(yǎng)肉湯兩個三角瓶其中一個產(chǎn)氣泡，都有渾濁現(xiàn)象 接種一周后發(fā)現(xiàn)有類似酵母菌生長，經(jīng)顯微鏡觀察后初步確定為酵母菌。于超凈工作臺將孟加拉紅培養(yǎng)基中得酵母菌接種于PDA斜面培養(yǎng)基，于37恒溫箱中培養(yǎng)24-48h后觀察，生長狀況良好2.1.3紅曲霉的分離純化接種2周后于超凈工作臺取未染雜菌的紅曲霉采用平板劃線法接種于PDA培養(yǎng)基后于28恒溫箱中培養(yǎng)24-48h后觀察

18、，紅曲霉基本不生長2.2紅曲色素在紅曲霉中的提取傳統(tǒng)的方法，比如乙醇提取法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、超臨界CO2萃取法這些方法都是近些年來，用傳統(tǒng)溶劑浸提法為基礎(chǔ)，而發(fā)展的新型提取技術(shù)，也是目前國內(nèi)外提取天然產(chǎn)物的最常用的方法。2.2.1傳統(tǒng)乙醇提取法 溶劑提取法是利用樣品各組分在某一溶劑中溶解度的差異，將各組分完全或部分地分離的方法。紅曲色素主要通過紅曲霉菌株發(fā)酵，然后用乙醇浸提法對發(fā)酵液和菌體內(nèi)的紅曲色素進行提取而得。 浸提液 濃縮液減壓蒸餾過濾噴霧干燥熱浸清 紅曲米粉 60%乙醇成品乙醇配制水乙醇乙醇紅曲渣圖1 紅曲色素提取工藝流程圖2.2.2微波輔助提取法微博輔助提取是微波萃取

19、和常規(guī)溶劑提取組合形式的新方法，使等待提取作為微波場，使用不同組分的差別的吸收微波能力允許基體物質(zhì)的某些區(qū)域或萃取系統(tǒng)的某些組件是選擇性地加熱，從而使得被萃取物質(zhì)從基體或體系中分離7。 2.2.3超聲輔助提取法超聲波是一種彈性波，它可以產(chǎn)生并且提供一個強大的能量，超聲波能量大多都作用在液體中，稀疏處于振動狀態(tài)時，聲波穿透比細菌細胞中的電磁波更深，停留時間較長，液體射進了很多小孔，在封閉孔這些小的時刻，產(chǎn)生瞬時壓力可達3000兆帕?xí)r關(guān)閉，這產(chǎn)生氣蝕，使生殖細胞破裂，并使用超聲波空化產(chǎn)生超聲波輔助提取，增加細胞滲透性，還包括：一個超聲機械振動，乳化擴散，和其它的多級粉碎效應(yīng)，有助于細胞每個成份、部

20、件的轉(zhuǎn)移、擴散，從而減少了萃取時間，增加的提取率。2.2.4超臨界Co2萃取法超臨界流體萃取技術(shù),通過調(diào)整超臨界流體的壓力和溫度控制氣相的濃度和蒸汽壓力這兩個參數(shù),從而達到隔離材料的目的,超臨界流體萃取(醫(yī)藥)技術(shù)結(jié)合了兩個函數(shù)的溶劑萃取和蒸餾的特點8。超臨界二氧化碳系統(tǒng)具有良好的化學(xué)惰性,便宜,操作條件溫和,無毒的優(yōu)點,沒有污染,容易分離,在超臨界流體萃取(醫(yī)藥)技術(shù)已經(jīng)廣泛的使用9?；诖罅康目茖W(xué)實驗表明,超臨界二氧化碳萃取的最佳工藝條件如下:28Mpa萃取壓力,萃取溫度50攝氏度,提取時間為3.7 h,在這種情況下,紅曲色素的提取天然色素可達到1628 U /毫升10。當粒子直徑0.3m

21、m紅曲米原料,提取從20Mpa、50攝氏度溫度、萃取壓力、CO2流量10kg/h,提取時間為4 h,得到更好的提取條件11。2.3紅曲色素分離純化為了進一步開發(fā)紅曲色素，色素混合物中各組件和它們的溶解度，穩(wěn)定性等，國內(nèi)外學(xué)者在篩選產(chǎn)生色素菌株發(fā)酵優(yōu)化條件，優(yōu)化色素的提取工藝，改變萃取技術(shù)等的基礎(chǔ)上對所產(chǎn)生的色素上分析純化進行研究，目前紅曲色素的分離和純化技術(shù)，包括在硅膠板薄層色譜，柱色譜法，高效液相色譜，高速逆流色譜法。下面主要介紹高速逆流色譜法分離純化紅曲色素的工藝研究。2.3.1硅膠板薄層層析法硅膠板薄層層析是目前紅色素分離使用的一種主要方法，通過使用不同的展開劑，可以得到所需要的色素帶。

22、張慧娟等利用薄層色譜法從紅曲色素分離純化的各種紅曲素12。甘純洛基用丙酮提取色素，采用GF-254的硅膠為固定相，用乙醚：苯：乙醇：水20：22：40：15（V/V）為展開劑，從紅曲色素分離出7個斑點，有五個紅色斑點和一個黃色斑點還有一個為熒光性質(zhì)的無色斑點13。 TLC不需要特殊設(shè)備，操作也比較簡單，分離效果更好，展開速率較快，對制板要求高，制備TLC板如果是不均勻的，或者如果有小孔，將影響擴大效果，從而影響最終的結(jié)果。2.3.2柱層析法對于初步的分離我們可以采用紅曲色素法，其中有人利用從石油中得到的石油醚和乙酸乙酯比例為四比一，作為洗滌液，采用代謝物質(zhì)較為低的極性物質(zhì)14，實驗得出，對于比

23、例為五比一的混合物洗脫液，紅曲素的三個構(gòu)件分離主要有，正己烷、乙酸乙酯、混合液，其中乙酸乙酯甲醇的混合物的比例為五比一對于流量控制在2Ml的紅曲色素，和流速為三毫升每分鐘的洗脫劑，是最好的分離效果的體現(xiàn)。15。2.3.3高效液相色譜法想得到較為純正的紅曲色素只要是采用HPLC，部分的科學(xué)研究者采用HPLC來分析有機溶劑在溶劑中的萃取紅曲色素，經(jīng)過分離得到了二十種構(gòu)件，鐘立人等科學(xué)研究者，采用不同于其他的分離方法來分離紅曲色素的樣品溶液，研究結(jié)果表明,除了有6種脂溶性色素,有各種水溶性紅色顏料成分16。2.3.4高速逆流色譜法（1）試劑與儀器序號儀器規(guī)格1乙腈徐州紫一試劑廠2液相色譜系統(tǒng) 英國W

24、aters公司3TBE300B高速逆流萃取色譜上海同田生物技術(shù)有限公司4Eyelan-1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀美國 Eyela 公司；51100LC/MS Trap XCT液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用儀日本Agilent 公司（2）實驗方法紅曲色素測定6 種紅曲色素采用 HPLC-DAD-MS 進行分析測定和結(jié)構(gòu)鑒定，測定條件參照文獻18。色價測定方法參照國家標準。高速逆流色譜法分離紅曲色素條件1、溶劑的體系B為正已烷-醋酸乙酯-甲醇-水(2.8:7.5:4:4，V/V)，2、溶劑的體系A(chǔ)為正已烷-醋酸乙酯-甲醇 -水(9:0:7.6:2.9，V/V)。3、下層液作為流動相，取上層液為固定相。4、循環(huán)水浴

25、溫度：27；螺旋管柱轉(zhuǎn)速：900r/min( 正轉(zhuǎn))；分離樣品流速3.0ml/min；檢測波長：274nm。稱取10g紅曲色素樣品采用70% 乙醇溶液(固液比 1:10)超聲波萃取兩遍，合并萃取液，真空濃縮至原體積 1/2 即析出色素粗提物，總色價為59413U，得率大于 98.5%。三、結(jié)果分析3.1高速逆流色譜法分離純化不同的色素組分紅曲色素屬于難溶性物質(zhì)與水基本上不溶，所以在做預(yù)分離之前需要選擇一些溶劑比如呈現(xiàn)中性和弱極性的溶劑，研究發(fā)現(xiàn)對于正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇- 水溶劑系統(tǒng)對于色素的分離最有幫助，采用正交的試驗方法，對正己烷 - 醋酸乙酯 -甲醇 - 水溶劑系統(tǒng)進行最終發(fā)熱優(yōu)

26、化，其中可以分為六種化合物主要是，2 種紅色素、2 種黃色素和2種橙色素；O2。采用HPLC的方法17來檢測分配系數(shù)在不同溶劑中的K值，經(jīng)過試驗的驗證得出，在體系四的溶劑中分配系數(shù)差值最大的是紅曲色素，在不同的條件下差異的大小不同，通過差異性來實現(xiàn)紅曲色素的分離，在使用的溶劑的系列七中，紅曲色素的分配系數(shù)比值大約在4.2，這一比例有助于R1和R2的分離。如下表所示：表1 紅曲色素的分配系數(shù)溶劑體系體積配比KR1KR2KR1/KR2KY1KY2KY1/KY2KO1KO2KO2/KO114:5:5:40.130.221.803.072.890.897.535.800.7729:0:4:50.640

27、.641.190.821.581.511.011.311.8937.6:2.8:7.5:2.50.250.562.647.607.400.9516.7414.680.89410:0:7.5:2.50.020.031.410.180.261.440.370.501.3657.5:2.5:5:50.070.162.473.292.530.776.824.920.7265:6:7.5:2.50.050.081.560.550.591.033.041.091.0472.5:7.7:5:50.260.833.2215.9416.601.7335.3933.440.94其中結(jié)論如上圖所示，分離得到的紅色的

28、組分采用的是系列四，其中收集的組分是呈現(xiàn)紅色的結(jié)晶體系，其中采用的是體系七，最為重要是分離的各個組分的樣品都不太一樣，純度大于百分之九十的物質(zhì)就是采用真空法回收純化得到的物質(zhì)。A. 正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水(10:0:7.5:2.5，V/V)；B. B . 正 己 烷- 醋酸乙酯- 甲醇- 水(2.5:7.5:5:5，V/V ) 。圖2 紅曲色素HSCCC譜圖3.2色素組分的結(jié)晶純化通過結(jié)晶之后一共得到兩種的晶體其中二者的顏色都是黃色，作為結(jié)晶的溶劑主要是丙酮，其中呈現(xiàn)的形狀為針狀顏色是橙色，另一種是長方體顏色是紫色如一下的表格所示，經(jīng)過化學(xué)的分離和純化得到了六種白色的結(jié)晶體，其

29、中收率在百分之八十一和百分之八十四。表2 不同分離步驟紅曲色素的收率紅曲色素R1R2Y1Y2O1O2乙醇溶液萃取樣 /mg389.686.1290.8122.4181.4170.7逆流萃取色譜分離樣 /mg364.381.1281.5119.5176.1165.4結(jié)晶樣 /mg324.273.0244.9101.6149.7138.9總收率/%83.2284.7884.2282.9682.5481.403.3最終樣品純度檢驗和鑒定C. 6種紅曲色素樣品一級質(zhì)譜圖圖2 6種紅曲色素樣品的純化和鑒定圖此次實驗采用HPLC面積歸一化法對進行6種紅曲色素晶體的純度檢測。如圖 A 所示，所測得 6 種樣

30、品的純度均大于 98.5%?？梢宰鳛闇y量紅曲色素的標準對照樣，并且可以應(yīng)用于紅曲Azaphilone類化合物的藥物開發(fā)和藥效研究。如圖 B 所示，6 種紅曲色素光譜圖所示，根據(jù)特征吸收峰的一致性可以分成 3 組，R 1 和 R 2 ：304、413、524nm。Y1和Y 2：231、291、387nm；O1和O2：213、247、286、467nm。由 HPLC-MS 測得 6 種紅曲色素標準品的一級 MS 譜圖(圖C)，可確定 R 1 、R 2 、Y1 、Y 2 、O1 和 O2 的相對分子質(zhì)量分別為 353、381、358、386、354 和 382，根據(jù) Teng 等19的研究結(jié)果表明，

31、由光譜圖的一致性和相對分子質(zhì)量確定R 1 、R 2 、Y 1 、Y 2 、O 1 和O 2 分別為 rubropunctatamine、monascorubramine、monascin、ankaflavin、rubropunctatin 和 monascorubrin。本工作所制備的 6 種紅曲色素的摩爾吸光系數(shù)分別為13313、13877、9380、9360、25621、25849L/(mol·cm)，其對應(yīng)色價分別為 37714、36424、26200、24248、72375、67667U/g。目前市場上的紅曲色素商品(黃色素或紅色素)的色價為 1000015000U/g，本工

32、作所制備色素產(chǎn)品的純度顯著高于市售相關(guān)產(chǎn)品。3.4總結(jié)本章節(jié)的萃取的主要溶劑是乙醇， - 高速逆流萃取色譜法分離 - 結(jié)晶組合技術(shù)，獲得的兩種產(chǎn)品主要是紅色素和橙色素的結(jié)晶體，其中二者的純度都大于百分之九十八，通過比較此種方法步驟簡單且方便，其中平均每一種色素的收率都保持在百分之八十以上，本章節(jié)得出的一套生產(chǎn)純度較高紅曲色素的技術(shù)路線，可以為此類的化合物藥物開發(fā)提供了技術(shù)的參考。.四、展望：最近十幾年的發(fā)展，對于安全性的問題已不容忽視特別是合成色素方面不斷涌現(xiàn)，作為一些純天然并且安全性較高的食用色素，研究方面各國的科學(xué)家都在進行深入而廣泛的研究，其中最為突出的是應(yīng)用方面最有成效的方面，比如組成

33、色素的成分、結(jié)構(gòu)的分離、安全等的方面，在紅曲色素的領(lǐng)域不斷擴大20。雖然研究人員已經(jīng)對紅曲色素的研究取得了長遠的發(fā)展，但是在一些細小的領(lǐng)域發(fā)展的不如人意，所以要想徹底的了解必須要清楚其化學(xué)成分、以及合成的途徑進而從微觀的世界進行合成進行調(diào)控，其中成分的確定、性能的差異、產(chǎn)品的色素含量等都是紅曲色素的發(fā)展方向具有深遠的意義。參考文獻：1 崔莉紅曲色素提取及其黃色組分制備與檢測技術(shù)研究D .泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，20082王金字紅曲色素的研究及應(yīng)用新進展J,食品科技，2010，31 (1) ，24 5-24 83崔莉，張德權(quán)，張培正紅曲色素的研究現(xiàn)狀分析J 食品科技，2008(8)：1151194屈炯 紅曲色素組分分離及其功能的初步研究ED 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué),20085嵇豪,蔣冬花,葉硯,周琴,王長春. 紅曲色素的提取工藝及其穩(wěn)定性研究J. 中國調(diào)味品. 2010(07) 6朱自強超臨界流體技術(shù)一 原理與應(yīng)用M 北京：化學(xué)出版社，20007李艷紅，微波法提取紅花黃色素的工藝研究J.食品研究與開發(fā)，2009（11）：53-55.8李天祥 ， 王靜康 超 臨界Co2流體萃取技 術(shù)在天然物提取上的研究進展J天津大學(xué)學(xué)報， 2002(4)：