微生物學實驗報告

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上 2012級制藥專業(yè)工業(yè)微生物學實驗報告 姓名: 劉甜甜 學號: 班級: 制藥12-2班 指導老師：王健 日期：2014.6.11 一、實驗目的1、抑制或殺死微生物的一些物理、化學及生物的因素抑菌、殺菌的原理。2、掌握物理、化學及生物的因素抑菌、殺菌的試驗方法。3、了解細菌的形態(tài)特征、染色特點。4、了解細菌在普通培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、血平板上的菌落特征。5、掌握細菌分離劃線培養(yǎng)的方法。6、掌握細菌的初步生化反應。7、掌握細菌密集劃線法，掌握細菌K-B藥敏紙片法。 二、實驗內容1 細菌Grams stain染色，鏡檢，觀察記錄細菌形態(tài)和特色特征1.1 實驗原理：染色原理：

2、G+菌與G菌細胞壁不同，G+菌比G菌細胞內核糖核酸鎂鹽含量高，G+菌比G等電點低。1.2 實驗步驟：1.2.1.制片：涂片：取半滴生理鹽水置一潔凈玻片上，以無菌操作技術自平板上去菌落少許，與生理鹽水混勻，均勻涂布約1cm2大小，自然干燥； 固定：取含菌膜的玻片與酒精燈火焰上來回三次，使菌膜牢固附于玻片表面；1.2.2染色：初染：取結晶紫一到兩滴覆蓋于菌膜表面，輕微搖動，維持3040,細流水沖洗，切勿直接沖洗涂片區(qū)域； 媒染：取盧氏碘液12滴覆蓋菌膜表面，輕微搖動，維持3040,用上法細流水沖洗； 脫色：取95%酒精23滴于菌膜表面，輕微搖動，局部接近無色即可, 用上法細流水沖洗； 復染：取1：

3、10稀釋石炭酸復紅覆蓋涂片區(qū)域，輕微搖動，用上法細流水沖洗； 吸水紙初步吸干玻片水分，然后自然干燥；1.2.3 鏡檢：于涂片區(qū)域加半滴香波油，油鏡（100倍目鏡）下。1.3 實驗結果圖1：Grams stain（1000×）圖2：染色試驗三、分離培養(yǎng)1實驗原理：四區(qū)劃線法是把混雜著在一起的微生物或同一微生物群體的不同細胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)繁殖后生成個菌落。有時這些單菌落并非由單個細胞繁殖而來，故必須反復分離多次才能得到純種。其原理是微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離的目的。2實驗步驟2.1示教：觀察普通

4、平板、麥康凱平板、血平板、四區(qū)分離劃線平板，手機攝像。2.2 分離劃線培養(yǎng)： 預實驗：以滅菌接種環(huán)與普通平板背面做四區(qū)分離劃線； 正式試驗：以滅菌接種環(huán)取細菌少許，在普通平板上劃線，劃線區(qū)域約占整個平板的1/101/5,劃線間不能有交叉現(xiàn)象； 以滅菌接種環(huán)自第一區(qū)23個交叉，然后依次分離劃線，約占整個區(qū)域的1/31/4； 依上法進行3、4區(qū)分離劃線； 倒置平皿置37溫箱培養(yǎng)24h，觀察記錄實驗結果，手機攝像。3 實驗結果圖1：培養(yǎng)前圖2：培養(yǎng)后四、細菌初步生化反應：1實驗原理：具有的細菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。2實驗步驟2.1色素試驗：取濾紙條，兩次對折，以折

5、角小心取菌落少許，小心展開，觀察記錄，手機拍照；2.2 氧化酶試驗：取上述含菌濾紙條，滴加氧化酶試劑一滴，觀察記錄，手機拍照；2.3 觸酶試驗：以滅菌接種環(huán)取細菌少許，置一潔凈玻片表面，另設NS對照，各加一滴新制的3%H2O2, 觀察記錄，手機拍照；3 實驗結果圖3：色素試驗、氧化酶試驗（前）圖4：色素試驗、氧化酶試驗（后）圖5：觸酶試驗（前）圖6：觸酶試驗（后）五、細菌藥敏試驗：1實驗原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取平板中的水分溶解后并不斷先向紙片周圍擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內的細菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的

6、大小反應測試細菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥物對測試菌的MIC呈負相關（抑菌圈越大，MIC越?。?2實驗步驟：2. 1以滅菌接種環(huán)取細菌少許，與普通平板做密集劃線；2.2 以無齒鑷小心夾取定量藥效紙片，按六邊形貼于培養(yǎng)及表面，倒置平皿置37溫箱培養(yǎng)24h，觀察記錄實驗結果，手機拍照。3 實驗結果：圖7：藥敏培養(yǎng)前圖8：藥敏培養(yǎng)后六實驗分析與討論1無菌操作：所有取菌種前都要將接種環(huán)滅菌，取菌時培養(yǎng)基也不能開太大的口，取完以后應及時蓋好并放好，以防止菌種被污染。操作應當在火焰旁做。2冷卻操作：加熱滅菌接種環(huán)后，應室溫下冷卻，否則會因高溫殺死細菌。3接種操作時應當執(zhí)筆式握接種環(huán)，輕輕觸碰菌種，再

7、接種到有生理鹽水的玻片上，太少或者太多對實驗都有所影響。 4染色操作：邊染色邊輕輕晃動以讓染色劑充分覆蓋菌種，沖洗時不要傾斜太大角度，不可直接對著菌落沖洗,以防把細菌沖洗下去。5分離培養(yǎng)瓊脂很軟，劃線時注意手腕用力，只在其表面劃線。6生化實驗過程中細菌出現(xiàn)氣泡說明細菌中有過氧化氫酶。用試紙取菌種注意是否取到，否則做出來是無色的。對照實驗時注意菌種沒有加生理鹽水，而空白對照式生理鹽水，觸酶實驗時注意及時拍照。7藥敏實驗：紙片旁邊出現(xiàn)抑菌環(huán)。貼紙片時應注意力度不要把瓊脂劃破。七實驗小結 1.革蘭氏染色法除了可以觀察細菌形態(tài)外還可以鑒別細菌：不被酒精洗脫色保留藍紫色的為革蘭氏陽（G+），被酒精脫色復

8、染成紅色的為革蘭氏陰性菌（G）可知細菌為陰性菌。本次革蘭氏染色實驗結果呈現(xiàn)為紅色的棒狀桿菌，細菌單個存在，染色效果非常好，實驗很成功。2.分離培養(yǎng)是培養(yǎng)單一菌種的有效方法，本次試驗以小組形式呈現(xiàn)，每組2個平板，由于操作不熟練，細菌分布不夠均勻，有部分區(qū)域細菌并未呈單個分布，培養(yǎng)后的·細菌形態(tài)不夠漂亮，與老師相差甚遠。 3.藥敏試驗是探究細菌在體外培養(yǎng)時對不同抗生素敏感性的有效試驗。透明圈越大說明該藥物對此細菌的抑制作用越強。4.生化實驗常用來鑒定一些形態(tài)和其他方面不易區(qū)別的微生物，是微生物分類鑒定的依據(jù)之一。觸酶實驗有氣泡則為陽性，無氣泡·則為陰性。氧化酶實驗陽性變色，陰性

9、不變色。實驗感悟通過微生物實驗的學習與操作，我認識到了微觀世界的神奇與精彩，神秘而又充滿危險的微生物世界讓我充滿了好奇感，我曾想我會為親手將這種繁殖速度快，種類繁多，生命力頑強，無處不在的細菌，真菌培養(yǎng)出來而瘋狂！而后我終于親眼見證在工業(yè)微生物的課堂上培養(yǎng)出來的大腸桿菌！棒狀的大腸桿菌充滿了頑強的生命力，我為見到它而高興！在微生物實驗過程中，我們還學習到了顯微鏡的用法，雖然在高中時我們便已學過顯微鏡的用法，但早已忘卻，我用顯微鏡觀察到了呈現(xiàn)紅色的棒狀大腸桿菌。革蘭氏染色實驗中我意識到了實驗嚴謹性的重要性，取菌時需要無菌操作，只能用大拇指頂開皿蓋一個小口，接種環(huán)需要用酒精燈不斷高溫滅菌，冷卻，取菌時動作需小心，否則取到的只會是瓊脂，實驗宣告失敗。染色也應小心謹慎，時間必須控制在3040，否則染色效果可能不明顯。這個實驗對于我們制藥工程的學生來說是一次難得的體驗，這對于我們以后藥學實驗的研究奠定了一個良好的基礎，同時微生物學實驗使我們的眼界開闊，讓我意識到微生物制藥這個前景很好的研究方向，微生物與生化藥學一直廣受推崇，這也是一個新新的研究方向，想從事學術研究的同學可以考慮。微生物學老師很認真負責，這也讓我們受益匪淺，王老師教會我們很多微生物學知識，同時也教會我們實驗室安全知識，并且努力讓我們有機會去醫(yī)學院實驗室學習體驗這個實驗。我喜歡