HPLC流動相的緩沖液

1、HPLC流動相的緩沖液緩沖液流動相可以根據(jù)下而的操作步驟配制： 將緩沖液藥品溶解在水中制成緩沖液（溶液A 用pH il確定或涮節(jié)溶液A的pH。將一定體枳（如200ml）的有機溶劑B與由步驟2配制的溶液A （如800ml）混合制成最終流動相（此 處的有機相為20%）。檢査垠終流動相的pH （此處為選項）。由于測定含有有機涮節(jié)劑的流動相pH計發(fā)生潔移.使其測定pH不很可靠.所以上血的步驟4 一般只有在考察誤差的主婆來源時采用，大多數(shù)實驗室皆略去此步驟。步驟1 一般是將配制緩沖液所用的兩種試劑（A1和A2）分別按訃算址先溶解在水中制成水溶 液.然后再將這兩種溶液按一定的比例混合得到預期pH的溶液兒

2、若在此步驟2中調節(jié)pH,則可以采用 溶劑A i商定溶劑B.也可反過來滴定并通過pH訃測址得到所需pH的報終緩沖溶液。在大多數(shù)實驗室中, pH的測雖精度通常不會達到±0.05-0.1個pH單位，這會顯著影響一些樣品的分離?！癷HPLC方法對pH 非常敬感時，步驟2只能大致確定pH值。將準確稱重的緩沖液配制試劑與精確體積的脫氣蒸怖水混合使其成為均一的溶液（不進一步調整 pH）,如此配得得緩沖溶液得pH可以控制在非常窄得范圉內（土002單位），已知準確pH值得緩沖液濃溶 液已有市售。為了改善峰形或塔板數(shù).有時在流動相中加入酸或堿（如三乙胺、乙酸等）.如果這些添加劑并非 為配制緩沖溶液時所采

3、用得試劑，那么將這些試劑加入到流動相中后，還需重新滴加酸或堿.使流動相達 到所需的pH值。常用緩沖液的配制片緩沖液被稀釋或濃縮時，pH也應不變。其pH值應近似恒定不變，或為其中的離解的陽離子（K+. Na+）或陰離子（C卜、Br-）被其它種類的離子替換時.表1T 中給出響應的配制方法，平衡陽離子為 Na+緩沖液的最終濃度為0.lmol/L對于其它濃度的緩沖溶液或陽離子種類（通常K+）更好.表中的數(shù) 據(jù)也可供參考。較稀的或較濃的緩沖溶液.及包含有不同陽離子的溶液.其pH值會與表中的數(shù)據(jù)稍有出 入。在方法建立過程中，粘確的流動和pH值往往并不重婆.重要的是每次新配制的流動相的pH值與第一 次基木相

4、同（最好控制在土002范鬧內）。注熱 只有十緩沖溶液的pH在緩沖試劑解離常數(shù)pKIa±l范圉 內時.緩沖溶液才具有有效的緩沖容量（如乙酸鹽的pKa=4.6.其適宜的pH范困為3656）。表1低pH值（25C）磷酸鹽緩沖溶液的配制方法溶液Al： 0.1M磷酸。配制糖確pH值緩沖液時，所用磷酸需滴定H3PO4的含雖c 溶液A2： 0.1M磷酸二氫鈉溶液，稱雖138g NaH2PO4H2O溶解于水中.定容于1L容雖瓶中。PH2.0A體積(ml)A2體枳(ml)2.8pHAl 體積(ml)A2休枳(ml)5654351758252.24555453.01108902.43456553.255

5、9452.6250750表2不同pH值（259）醋酸緩沖溶液的配制方法溶液Al： 0.1M醋酸溶液。60g （5.8ml）冰醋酸溶于水中，定容到1L容址瓶中。溶液A2： 0.1M醋酸鈉溶液。8.2g C2H3O2Na （或13.6g C2H3O2Na-3H2O）溶解于水中定容到1L容雖瓶PHAl體積(ml)A2體枳(ml)pHAl 體積(ml)A2體積（ml）3.6926744.84006003.88801205.02967044.08201805.2210790PHAl體枳(ml)A2體枳(ml)pHAl 體積(ml)A2體積(ml)3.0930705.23606603.28701265.4

6、3206803.48101905.62707263.67502605.82307643.87003006.01908104.06603406.21408564.26103706.4609404.45604406.6409604.65104906.8309704.84605407.0109855.0410590表4中等pH值(25°C)磷酸緩沖液的配制方法溶液A1：0.1M磷酸二氫鈉溶液。13.8g N3H2PO4-H2O溶于水中.定容到1L容雖瓶中。溶液A2： 0.1M磷酸氫二鈉溶液c268g Na2HPO4-7H2O(或359g Na2HPO4-12H2O)溶于水中，定容到1L容雖

7、瓶中。PHA1體積(ml)A2體積(ml)pHAl 體積(ml)A2體積(ml)5.6948527.03906105.8920807.22807206.08771237.41908106.28151857.61308706.47352657.8859156.66853158.0539476.8510490表5和6給出了適于pH=7-10.6范碉的兩種有機堿緩沖液配制方法，這種有機堿緩沖液可以有效低減緩硅膠基柱的柱效降低°表5高pH (25t)甘氨酸緩沖溶液的配制方法溶液A1：02Mft氨酸。15.01g廿宓酸溶于水中，定容于IL容址瓶中。溶液A2：0.1M NaOH 溶液.稀釋較濃的

8、NaOH溶液。PHA1體積(ml)A2體枳(ml)pHAl 體積(ml)A2體積(ml)8.6252.09.62511.28.8253.09.82513.69.0254.410.02516.09.2256.010.42519.39.4258.410.62522.7529.4g C6H5O7Na3-2H2O溶解于水中.定容到IL容雖瓶中。表6(25CTris緩沖溶液的配制方法4.24.44.67366105102643904905.45.617696824904表3溶液A1：溶液A2：不同pH值(25C)檸椽酸緩沖溶液的配制方法0.1M檸椽酸溶液c 21.0g檸檬酸溶于水中，定容到1L容雖瓶中。0.1M檸椽酸鈉溶液。商pH值溶液 Al： 0.1M Tris (無堿,12.11gTris 溶于水中. 溶液A2： 0.1MHCI溶液，稀釋較濃HCI溶液。定容到1L容址瓶中。PHAl體積(ml)A2體枳(ml)pHAl 體積(ml)A2體積（ml）7.15045.78.15026.27.25044.78.25022.97.