培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

1、惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書(shū)編號(hào)：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 1 頁(yè) 共 6 頁(yè) 1.目的規(guī)范本中心微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的內(nèi)部質(zhì)量控制工作。2適用范圍適用于實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)基使用前的質(zhì)量驗(yàn)收、使用過(guò)程中的質(zhì)量控制。3. 職責(zé)3.1 檢驗(yàn)人員：按照本規(guī)程規(guī)對(duì)培養(yǎng)基使用前及使用過(guò)程中進(jìn)行質(zhì)量控制，確保培養(yǎng)基符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。3.2 科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗(yàn)人員對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制。4使用前的質(zhì)量控制4.1生產(chǎn)企業(yè)提供的材料培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家隨產(chǎn)品應(yīng)提供下列文件：培養(yǎng)基、獨(dú)立成分、添加成分名稱；批號(hào)；使用前的pH；儲(chǔ)藏信息和有效期；性能評(píng)價(jià)和所用測(cè)

2、試菌株；技術(shù)數(shù)據(jù)清單；質(zhì)控證書(shū)/必要的安全、危害數(shù)據(jù)。4.2驗(yàn)收實(shí)驗(yàn)室收到培養(yǎng)基后，應(yīng)填寫(xiě)“培養(yǎng)基驗(yàn)收檢查記錄單”，檢查包裝及完整性，標(biāo)識(shí)是否清晰等，驗(yàn)收合格后按照“培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)使用規(guī)程”對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行編號(hào)。4.3 貯存及使用前質(zhì)量確認(rèn)商品化培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按供應(yīng)商提供的貯存條件、有效期進(jìn)行貯存。 驗(yàn)收合格的培養(yǎng)基應(yīng)建立“商品化干粉培養(yǎng)基目錄清單”，使用前對(duì)容器密閉性進(jìn)行復(fù)查。開(kāi)封的脫水培養(yǎng)基，每次使用前應(yīng)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行檢查，通過(guò)粉末的流動(dòng)性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等判斷培養(yǎng)基的質(zhì)量變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變則不應(yīng)再使用。制備好的成品培養(yǎng)基應(yīng)建立“ 成品培養(yǎng)基目錄清單”，每次使

3、用前應(yīng)檢查：顏色是否發(fā)生變化?/是否蒸發(fā)/脫水?/是否有微生物生長(zhǎng) ?等。如果發(fā)生上述異常情況，則不應(yīng)再使用。5制備好的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制新購(gòu)的不同批次的商品化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基性能測(cè)試，符合要求后使用。成品培養(yǎng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應(yīng)包括物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)的測(cè)試，根據(jù)測(cè)試結(jié)果及時(shí)填寫(xiě)“實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基測(cè)試結(jié)果記錄單”。5.1物理指標(biāo)控制 測(cè)試2025的pH值瓊脂層厚度；色澤；透明度和（或）是否存在肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)；凝膠穩(wěn)定性、粘稠度和濕度。5.2微生物學(xué)指標(biāo)控制可根據(jù)要求選用定量方法、半定量方法或定性方法（詳見(jiàn)表1-表）對(duì)培養(yǎng)基性能進(jìn)行測(cè)試，具體操作方法詳見(jiàn)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)“培養(yǎng)基性能測(cè)試指南”

4、。微生物污染的控制從每批制備好的培養(yǎng)基中選取至少一個(gè)（或1%）平板或試管，置于37或按特定標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溫度培養(yǎng)18h。生長(zhǎng)特性.1生長(zhǎng)率惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書(shū)編號(hào)：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 2 頁(yè) 共 6 頁(yè) 將適量測(cè)試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和液體培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基上菌株的生長(zhǎng)率應(yīng)達(dá)規(guī)定的最低限值。.1.1定量方法生長(zhǎng)率PR的計(jì)算： PR = NS/NONS：從一個(gè)或多個(gè)待測(cè)培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。N0：從一個(gè)或多個(gè)規(guī)定的參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)（該菌落總數(shù)應(yīng)100cfu ）。要求：非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率

5、最低應(yīng)為0.7，該類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長(zhǎng)；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率最低應(yīng)為0.1；每平板（或每試管）的接種水平為10CFU100CFU。.1.2 半定量方法半定量方法采用生態(tài)測(cè)量技術(shù)在平板上劃線，平板板連續(xù)劃線區(qū)域得分的總和即為生長(zhǎng)指數(shù)G，G值不應(yīng)超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的允許范圍。.1.3 定性方法定性方法采用劃線法觀察。.2選擇性將濃度為104CFU/mL106CFU/mL的非目標(biāo)菌工作菌株懸浮液接種至選擇培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性應(yīng)達(dá)到規(guī)定值。.2.1定量方法選擇因子SF： SF = DO - DSDO：能在參考培養(yǎng)基上生長(zhǎng)至少10個(gè)菌落的最高稀釋度DS：能在測(cè)試培養(yǎng)基上顯示生長(zhǎng)的最

6、高稀釋度 要求：非目標(biāo)菌在選擇性培養(yǎng)基上的SF至少為2 ；半定量和定量法中，非目標(biāo)菌應(yīng)部分或全部被抑制。生理生化特性（選擇性和特異性）規(guī)定培養(yǎng)基的基本特性，使用一套適當(dāng)?shù)臏y(cè)試菌株對(duì)培養(yǎng)基上的目標(biāo)菌的生理生化特性（菌落形態(tài)、大小等）和非目標(biāo)菌的被抑制程度進(jìn)行測(cè)試。5.3性能評(píng)價(jià)和結(jié)果解釋按照規(guī)定得到的所有測(cè)試菌株的性能均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基品質(zhì)優(yōu)良；若只有物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基可被接收。表1 計(jì)數(shù)用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株參考培養(yǎng)基控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)Baird-ParkerS生長(zhǎng)率3724-48h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA定量PR0

7、.5黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外有透明帶選擇性3748h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部抑制特異性3724-48h表皮葡萄球菌ATCC12228定性黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外無(wú)透明帶MYPS生長(zhǎng)率3024-48h臘樣芽胞桿菌ATCC11778TSA定量PR0.7具沉淀帶的粉色菌落選擇性3748h大腸桿菌ATCC25922定性全部抑制特異性3748h 枯草芽胞桿菌ATCC6633定性不具沉淀帶的粉色菌落惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書(shū)編號(hào)：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 3 頁(yè) 共 6 頁(yè) 表1計(jì)數(shù)用選擇性培養(yǎng)基(續(xù))培養(yǎng)基

8、用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株參考培養(yǎng)基控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)VRBG（結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂）S生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.5帶有或不帶沉淀帶的粉紅色或紅色菌落鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028選擇性3720h糞鏈球菌ATCC29212/19433定性全部抑制VRBL（紫紅膽汁乳糖）S生長(zhǎng)率3020h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.5帶有或不帶沉淀帶的淡紫色菌落選擇性3020h糞鏈球菌ATCC29212/19433定性全部抑制特異性3020h銅綠假單胞菌ATCC27853定性-無(wú)色至淺棕色菌落CT-SMAC（改良山梨醇麥康凱瓊脂）S生長(zhǎng)

9、率3724h大腸桿菌O157：H7ATCC43894/43895TSA定量PR0.5透明菌落，表面淡黃棕色，菌落直徑約1mm選擇性3724h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特異性3724h大腸桿菌ATCC11775/25922定性粉色菌落BGBLB（煌綠乳糖膽鹽肉湯）L生長(zhǎng)率3024-48h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA半定量濁度2+，導(dǎo)管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁弗氏檸檬酸桿菌ATCC25922/8739選擇性糞鏈球菌ATCC29212/19433定性不生長(zhǎng)ECL生長(zhǎng)率442448h大腸桿菌ATCC25922半定量濁度2+，導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁選擇性4424

10、48h銅綠假單胞菌ATCC27853b定性不生長(zhǎng)EC-MUG/LS-MUGL生長(zhǎng)率442448h大腸桿菌ATCC25922半定量濁度2+，導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁，產(chǎn)生熒光選擇性442448h銅綠假單胞菌ATCC27853b定性不生長(zhǎng)乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)L生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并變黃色選擇性3724h鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028定性不產(chǎn)氣、仍為紫色LST（月桂酸肉湯）L生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣選擇性3724h福氏志賀氏菌CMCC51572定性表2 計(jì)數(shù)用非選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株參考培養(yǎng)基控制方

11、法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)PCA（平板計(jì)數(shù)瓊脂）S生長(zhǎng)率3072h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.7金黃色葡萄球菌ATCC6538枯草芽孢桿菌ATCC6633惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書(shū)編號(hào)：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 4 頁(yè) 共 6 頁(yè) 表3 選擇性增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)EEL生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922/8739半定量VRBG上10CFU粉紅至紅色菌落，有或沒(méi)有沉淀帶鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028選擇性糞腸球菌ATCC29212全部抑制RVSL生長(zhǎng)率41.524h鼠傷寒沙門(mén)菌

12、ATCC14028半定量XLD或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU腸炎沙門(mén)氏菌ATCC13076銅綠假單胞菌ATCC27853選擇性41.524h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA上全抑制糞鏈球菌ATCC29212TSA上10CFUSC(亞硒酸鹽胱氨酸)L生長(zhǎng)率3724h鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028半定量XLD或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)）+大腸桿菌ATCC25922+銅綠假單胞菌ATCC27853b選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA上10CFU糞鏈球菌ATCC29212TTB(四硫磺酸鈉煌綠增菌液)L生長(zhǎng)率3724h鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC1

13、4028半定量XLD或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)）傷寒沙門(mén)菌CMCC50071選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922TSA上10CFU堿性蛋白胨水L生長(zhǎng)率3724h霍亂弧菌CMCC16109半定量TCBS或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)）副溶血性弧菌CMCC20001選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA上10CFU福氏志賀氏菌CMCC515727.5%氯化鈉肉湯L生長(zhǎng)率3724h金黃色葡萄球菌ATCC6538半定量B-P平板或其他培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)）表4 非選擇性增菌培養(yǎng)基

14、培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)BHI生長(zhǎng)率3724h金黃色葡萄球菌ATCC6538定性濁度12蛋白胨鹽L稀釋202545min大腸桿菌ATCC25922定量+/-50%菌落數(shù)/至（+/-50%原始菌落數(shù)金黃色葡萄球菌ATCC25923惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書(shū)編號(hào)：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 5 頁(yè) 共 6 頁(yè) 表4 非選擇性增菌培養(yǎng)基（續(xù)）培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)乳糖蛋白胨肉湯L生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922定性導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣選擇性3724h鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028定性SCD

15、LP液體培養(yǎng)基L生長(zhǎng)率3724h銅綠假單胞菌ATCC27853定性濁度12大腸桿菌ATCC25922金黃色葡萄球菌ATCC6538液體沙氏培養(yǎng)基L生長(zhǎng)率265天白色念珠菌CMCC98001定性濁度12真菌培養(yǎng)基L生長(zhǎng)率265天白色念珠菌CMCC98001定性濁度12表5 選擇性分離培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)亞硫酸酸鉍瓊脂（BS）S生長(zhǎng)率3748h鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028定性良好生長(zhǎng)(2)菌落呈黑色，有金屬光澤福氏志賀氏菌CMCC51572菌落呈棕色選擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）無(wú)典型菌落糞鏈球菌ATCC29212/19433

16、全部抑制（0）-XLDS生長(zhǎng)率3724h鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028定性良好生長(zhǎng)(2)菌落呈黑色福氏志賀氏菌CMCC51573菌落呈無(wú)色選擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）無(wú)典型菌落糞鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制（0）-血瓊脂平板S生長(zhǎng)率372448h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生長(zhǎng)溶血，透明溶血環(huán)糞鏈球菌ATCC29212定性良好生長(zhǎng)溶血,草綠色溶血環(huán)TCBSS生長(zhǎng)率372448h霍亂弧菌CMCC16109定性良好生長(zhǎng)菌落較大，呈黃色副溶血性弧菌CMCC20001定性良好生長(zhǎng)菌落較大，呈綠色4號(hào)瓊脂S生長(zhǎng)率372448h霍亂

17、弧菌CMCC16109定性良好生長(zhǎng)菌落較大、扁平透明、濕潤(rùn)、中心帶有黑色非O1群霍亂弧菌CMCC17045定性良好生長(zhǎng)菌落較大、扁平透明、濕潤(rùn)、中心帶有黑色選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部或部分抑制（01）惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書(shū)編號(hào)：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 6 頁(yè) 共 6 頁(yè) 表5 選擇性分離培養(yǎng)基（續(xù)）培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)伊紅美蘭瓊脂S生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長(zhǎng)菌落紫黑色帶金屬光澤鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028定性良好生長(zhǎng)菌落灰白色半透明

18、福氏志賀氏菌CMCC51573定性良好生長(zhǎng)菌落灰白色半透明TSI(三糖鐵瓊脂)S生長(zhǎng)率3724-48h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長(zhǎng)斜面及底層均變黃，產(chǎn)氣，硫化氫陽(yáng)性普通變形桿菌CMCC49001定性良好生長(zhǎng)斜面及底層均變黃，產(chǎn)氣，硫化氫陽(yáng)性福氏志賀氏菌CMCC51573定性良好生長(zhǎng)底層變黃，斜面變紅，不產(chǎn)氣，硫化氫陰性鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028定性良好生長(zhǎng)底層變黃，斜面變紅，產(chǎn)氣，硫化氫陽(yáng)性表6 非選擇性分離培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂S生長(zhǎng)率3724h大腸桿菌ATCC25922定性良好生長(zhǎng)(2)-鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028c小腸

19、耶爾森氏菌ATCC237155記錄培養(yǎng)基驗(yàn)收檢查記錄單 HSCDC/ZJ-19-29A 商品化培養(yǎng)基目錄清單 HSCDC/ZJ-19-30A 成品培養(yǎng)基目錄清單 HSCDC/ZJ-19-31A 實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基測(cè)試結(jié)果記錄單 HSCDC/ZJ-19-33A6參考文獻(xiàn)6.1 GB/T27405-2008.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測(cè)S.6.2 SN/T1538.1-2005.培養(yǎng)基制備指南 第1部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則S.6.3 SN/T1538.2-2007.培養(yǎng)基制備指南 第2部分：培養(yǎng)基性能測(cè)實(shí)用指南S.6.4紀(jì)紹梅.微生物培養(yǎng)基質(zhì)控與圖解M.北京:北京科學(xué)技術(shù)出版社,20