PRPBPBM聯(lián)合GTR修復(fù)犬牙Ⅱ度根分叉病變的研究

1、PRP，BPBM聯(lián)合GTR修復(fù)犬牙度根分叉病變的研究         【摘要】  目的 應(yīng)用富血小板血漿（PRP）、多孔牛骨無機(jī)材料（BPBM）和引導(dǎo)組織再生術(shù)（GTR）聯(lián)合修復(fù)犬牙度根分叉病變，探討其是否能增強(qiáng)GTR的療效。 方法 人工構(gòu)建Beagle犬下頜第一磨牙和第二、三前磨牙度根分叉病變模型，隨機(jī)采用GTR/PRP/BPBM（實(shí)驗(yàn)組）或GTR（對照組）治療，12周后經(jīng)組織學(xué)觀察牙周組織再生情況。 結(jié)果 GTR組的新生牙骨質(zhì)長度和新生牙槽骨面積分別為（57.7±7.8）%和（30.8

2、77;7.4）%，GTR/PRP/BPBM組為（76.3±10.1）%和（59.9±13.1）%，兩組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 在本實(shí)驗(yàn)條件下，PRP復(fù)合BPBM不能明顯增強(qiáng)GTR對度根分叉病變的再生作用。 【關(guān)鍵詞】  根分叉病變；引導(dǎo)組織再生，牙周； 血小板，血漿置換；疾病模型，動物ABSTRACT:  Objective  The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of plateletrich plasma（PRP）, bovine porous bone

3、 mineral （BPBM）and guided tissue regeneration （GTR） used in combination，compared to GTR alone in the treatment of grade molar furcation defects in dogs.  Methods  Class periodontal furcation defects model in six adult Bealge dogs were created surgically and subsequently treated with either

4、 GTR alone or a combination of GTR/BPBM/PRP.  The animals were sacrificed at 12 weeks postsurgery for histologic analysis.  Results  The percentage of new cementum length and new alveolar area in GTR and GTR/BPBM/PRP was 57.7±7.8, 76.3±10.1 and 30.8±7.4, 59.9±13.1.

5、  No statistically significant differences were observed between the two groups.  Conclusion  The results suggested that PRP/ BPBM added no benefit to GTR in the treatment of grade molar furcation defects.   KEY WORDS:  furcation defect; guided tissue regeneration,perio

6、dontal; blood platelets; plasma exchange; disease models, animal根分叉病變因其骨破壞形式和解剖結(jié)構(gòu)的特殊性，是牙周病治療中的難點(diǎn)。引導(dǎo)組織再生術(shù)（guided tissue regeneration，GTR）是治療根分叉病變的常用技術(shù)，但有研究認(rèn)為單純GTR的療效并不能肯定，如與其他生物材料和生長因子聯(lián)合應(yīng)用，可能更有助于促進(jìn)牙周組織的再生1。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討富血小板血漿（plateletrich plasma，PRP）復(fù)合多孔牛骨無機(jī)材料（bovine porous bone mineral,BPBM)能否增強(qiáng)GTR治療犬度根

7、分叉病變的療效。1  材料和方法1.1  材料  成年雄性Beagle犬6只福州振華實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供（合格證：閩實(shí)動字準(zhǔn)第200208），體質(zhì)量2530 kg。BioGide膠原膜，BioOss骨粉（美國Osteohealth公司）；瞬康醫(yī)用膠（北京瞬康醫(yī)用膠有限公司）；顯微鏡（IX 71，日本Olympus公司）。1.2  實(shí)驗(yàn)方法1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2  結(jié)果2.1  血小板計(jì)數(shù) 

8、 全血血小板計(jì)數(shù)為(179.17±38.13)×109 L-1。PRP血小板計(jì)數(shù)為（2 501.67±1 233.73）×109 L-1，其血小板濃度約為全血的14倍。2.2  組織學(xué)分析  共13顆實(shí)驗(yàn)牙，GTR組7顆，PRP組6顆（因制備標(biāo)本時處理不當(dāng)而遺棄一顆）。光鏡下可見GTR/PRP/BPBM組及GTR組均有新生牙槽骨和新生牙骨質(zhì)樣組織生長，表現(xiàn)為自根方切跡處向冠方生長，與原有牙槽骨和牙骨質(zhì)連為一體。新生牙槽骨礦化程度較低，其表面可見較多成骨細(xì)胞連續(xù)排列。新生牙骨質(zhì)在有些牙根表面呈不連續(xù)再生，絕大部分與切跡根方原有牙骨質(zhì)相連

9、。在新生牙槽骨和新生牙骨質(zhì)樣組織的間隙內(nèi)有斜行及平行的纖維穿行，且可見新生血管，未見根骨粘連和牙根吸收（圖2）。圖1  新生牙骨質(zhì)長度和新生牙槽骨面積的計(jì)算方法（略）Fig 1  Schematic drawing of morphometric analysis of percentage of new cementum length and percentage of new bone areaN：切跡，NC：新生牙骨質(zhì)，NB：新生牙槽骨.  A：可見切跡上方NC及NB（HE染色×20）；B：切跡處放大圖，可見新生牙槽骨和牙骨質(zhì)表面有成骨細(xì)胞（箭頭1

10、）和成牙骨質(zhì)細(xì)胞（箭頭2）連續(xù)排列（HE染色×40）.圖2  GTR/PRP/BPBM組切跡處的牙周組織再生圖（略）Fig 2  Periodontal tissue regeneration in the notch area in group of GTR/PRP/BPBM2.3  組織形態(tài)學(xué)測量分析  GTR組的新生牙骨質(zhì)長度和新生牙槽骨面積的百分比分別為(57.7±7.8)和(30.8±7.4)，GTR/PRP/BPBM組為(76.3±10.1)和(59.9±13.1)，2組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

11、         3  討論   BPBM是一種可吸收性牛骨無機(jī)材料，其結(jié)構(gòu)與人的網(wǎng)狀骨相似，與GTR聯(lián)合應(yīng)用能促進(jìn)牙周組織再生，而PRP富含多種能促進(jìn)牙周組織再生的生長因子1，因此，將GTR、BPBM和PRP三者聯(lián)合應(yīng)用可能有助于增強(qiáng)GTR的再生療效。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PRP/BPBM不能明顯增強(qiáng)GTR的療效，與陳超等的研究結(jié)果相似，推測除了缺損類型可能影響再生效果，還可能與下述因素有關(guān)。3.1  PRP中的血小板濃度  血小板是PRP中生長因子的主要來源，它的濃度

12、因制備方法的不同而不同。Marx認(rèn)為血小板濃度為全血45倍的PRP才是“有療效”的PRP，濃度過小可能達(dá)不到應(yīng)有的效應(yīng)，太大則對骨再生有抑制作用。劉彩霞等將3種不同方法制備的PRP用于牽張成骨，結(jié)果顯示PRP中血小板濃度為全血的500%左右為最佳,與Marx的觀點(diǎn)相同。Weibrich也發(fā)現(xiàn)PRP促進(jìn)兔股骨種植體周圍骨缺損再生的血小板最佳濃度為47倍。而本實(shí)驗(yàn)中PRP中的血小板濃度高達(dá)全血的14倍左右，但因根分叉區(qū)牙周組織的再生涉及多種細(xì)胞成分，較體外單一的細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)單純的骨再生更為復(fù)雜，Marx所提倡的最佳濃度是否也適用于牙周組織再生還有待研究。3.2  凝血酶的濃度 

13、; PRP內(nèi)生長因子的釋放有賴于凝血酶的激活。而凝血酶的濃度對PRP內(nèi)生長因子的釋放量有一定影響10。目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)是采用一定濃度的牛凝血酶和氯化鈣在體外與PRP混合，形成凝膠后再用于術(shù)區(qū)?？紤]到外源性凝血酶的應(yīng)用可能增加發(fā)生危及生命的凝血病的風(fēng)險(xiǎn)11，而牙周韌帶細(xì)胞和成骨細(xì)胞本身可分泌凝血酶12，因此本實(shí)驗(yàn)未使用外源性牛凝血酶，而是將PRP與BPBM混合后直接植入根分叉病變區(qū)，期望通過自體凝血酶激活PRP，以尋找更安全有效的作用方式。YassibagBerkman 曾用此法將PRP復(fù)合TCP，發(fā)現(xiàn)無論是否使用屏障膜都能促進(jìn)人前牙骨內(nèi)缺損的牙周組織再生13。但用此法無法確定根分叉病變區(qū)自體凝血酶

14、的濃度，而且PRP植入缺損區(qū)時仍呈液態(tài)，依靠骨粉和膠原膜的吸附和覆蓋作用而保留在術(shù)區(qū)，有可能導(dǎo)致部分PRP流失從而影響療效。因此，尚需探討自體凝血酶更適宜的用法及用量。3.3  PRP載體的功能  PRP凝膠中血小板內(nèi)容物（包括生長因子）持續(xù)釋放最多達(dá)1周左右，而創(chuàng)傷的愈合通常需要數(shù)月之久。因此，如何使生長因子持續(xù)高效穩(wěn)定地發(fā)揮作用是促進(jìn)組織再生的關(guān)鍵問題之一。生長因子緩釋系統(tǒng)的應(yīng)用可保持生長因子的活性并延長使用時間。BPBM可吸收，具有多孔隙結(jié)構(gòu),能促進(jìn)血管再生和凝血塊的穩(wěn)定，有利于生長因子的吸附,其小梁結(jié)構(gòu)與人的網(wǎng)狀骨相似，可為細(xì)胞的生長和分化提供支架和骨傳導(dǎo)作用，符合

15、生長因子緩釋系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)14。雖然BPBM具有緩釋載體的條件，但它是否真的能延長PRP內(nèi)生長因子的釋放時間？如能延長，延長的時間是多少？它與PRP中多種生長因子在不同的微環(huán)境中是如何相互作用的？今后可對PRP與不同載體間的相互作用機(jī)制進(jìn)行深入研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Camargo P M,Lekovic V,Weinlaender M, et al. Platelerrich plasma and bovine porous bone mineral combined with guided tissue regeneration in the treatment of intrab

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