人乳頭瘤病毒(HPV)疫苗的研究進(jìn)展.docxVIP

1、白,相信隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的順利完成和各個(gè)基因功能的明確,IgA-N的相關(guān)基因必將得到充分闡明。參考文獻(xiàn)呂繼成，張宏，陳育青，等.家族性IgA腎病-777例中國(guó)IgA回顧調(diào)查分析J.中華腎臟病雜志,2004,20：57.1 TurnerMW.Mannoee-bindinglectin；thepluripotentmdeculeoftheinnateimmunesystemJ.ImmunolToday,1996,17(11)：532-540.2 GonqR,LiuZ,ChenZ,etal.Mannose-bindingproteingenepol-ymoiphisininfluencesthep

2、atternsofglomerularimmunedepoeitioninIgAnephropalhyJ,ZhoniuaYiXueYiChuanXueZaZhi,2001,18(2):83-87.3 GongR,LiuZ,ChenZ,etal.Geneticvariationofmannoee-bind-ingproteinaaeociatedwithglomendarimmunedepo«itioainIgAaephropa-thyJ.ChinMedJ(Engl),2002,115(2):192-196.4 ZhanZ,KunduGC,ZhengF,etal.Insiitintot

3、hephysiologicalfunction(s)ofuteroglobinbygene-knockoutandantiscnse-traiugenicap-proflches(J.AnnNYAcadSci,2000,923：210-213.5 MatsunagaA,NumakuraC,KawakamiT,etal.AssocialionoftheuteroglobingenepolymorphismwithIgAnephropathyJ.AmJKidneyDis,2002,39(1):3641.6 NaritaI,SaitoN,GotoS,elal.RoleofuteroglobinG38

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5、A腎病患者UG基因G38A基因多態(tài)性與臨床和8(后的關(guān)系J.中華內(nèi)科雜志,2004,43(1):3740.10TatsumaN,TsuH,MurakamiM.HLA-DQregionandTCRgenepolymorphismaraociatedwithprimaryIgAnephropathyinJapanesechildrenJ.NipponJinzoGakkaiShi,1997,39(7)：734-739.11LiPK,PoonP,PhilM,etal.AssociationofIgAnephropathywithT-cellreceptorconstantalphachaingenep

6、olymorphiiunJ.AmJKidneyDis,1997,30(2)：260-264.12薛超,李幼姬，李彩，等.TCRCa-560G/T多態(tài)性與I«A腎病臨床病理的關(guān)聯(lián)分析J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005,26(10)：897-900.13 GotoS,NaritaI,SaitoN,etal.A(-20)CpolymorphismoftheangiotensinogcngeneandprogreasionofIgAnephropathyJ.KidneyInt,2002,62(3):980-985.14 Narita1,GotoS,SaitoN,ctal.Angiotensino

7、gengenevariationandrenoprotectiveefficacyofrenin-anolensinsystemblockadeinIgAnephropathyJ.KidneyInt,2003,64(3):1050-1058.15 HardenPN,GeddesC,RowePA,etal.Polj-nxxphismsinangio-tenain-converting-enzymegeneandprogressionofIgAnephropathyJ.Lancet,1995,345(8964):1540-1542.16 陳香美.劉述文.血管緊張素轉(zhuǎn)換酵基因多態(tài)性與IgA腎病的相關(guān)

8、性研究J.中華醫(yī)學(xué)雜志,1997,110(7)：526-528.17 SyijanenJ,HurmeM,LehtimakiT,etal.PolymorphismofthecytokinegenesandIgAnephropathyJ.KidneyInt,2002,61(3)：1079-1085.18 WatanabeM,IwanoM,AkaiY,etal.Associationofinterleukin-1receptorantagonistgenepolymorphismwithIgAnephropathyJ.Nephron,2002,91(4):744-746.19 LeeEY,YangD

9、H,HwangKY,etal.Istumornecro*isfactorgenotype(TNFA2/TNFA2)ageneticprognosticfactorofanunfavorableoutcomeinIgAnephropalhy?J.JKoreanMedSci,2001,16(6)；751-755.20 倪紅兵，張芹，鞠少卿，等.IgA腎病與腫瘤壞死因子B基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性研究J.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2004,19(5):14-16.21MaixmeroviD,MertaM,Reitcrov。J,etal.Theinfluenceofthreeendothelin-lpolymorph

10、ismsontheprogressionofIgAnephropathyJ.FoliaBiol(Praha),2007,53(1)：27-32.22 ReiterovAJ,MertaM,StekroviJ,etal.TTieinfluenceofendo-thelin-AreceptorgenepolymorphismontheprogressionofautosomaldominantpolycystickidneydiseaseandnephropathyJ.FoliaBiol(Pta-ha),2007,53(4)：134-137.23 MalychaF,EggermannT,Hristo

11、vM,etal.Noevidenceforaroleofcosmc-chaperonemutationsineuropeanIgAnephropathypatients(J.NephrolDialTransplant.2009,24(1)：321-324.24 QinW,ZhongX,FanJM,etal.ExternalsuppressioncausesthelowexpressionofthecoeincgeneinIgAnephropathy.NephrolDialTnuwplant,2008,23(5)：1608-1614.(2012-11-20收稿,2012-12-02修回)DOI1

12、0.3969/j.isan.1008-9810.2013.04.033人乳頭1病毒(HPV)疫苗的研究進(jìn)展(文獻(xiàn)綜述)解放軍第二五三醫(yī)院(010051)海HPV是引起女性宮頸癌的DNA病毒，本文簡(jiǎn)要回原了HPV的發(fā)現(xiàn)過(guò)程，并對(duì)HPV預(yù)防性疫苗與治療性疫苗的研究現(xiàn)狀綜述如下。1關(guān)于HPVHPV的發(fā)現(xiàn)及其危害1976年，德國(guó)著名病毒學(xué)家1.免疫中心；2.體檢中心峰'白梅2孟和寶力高'顫爾頓'HaraldzurHausen博士提出HPV與宮秘癌發(fā)病可能有關(guān)的假設(shè)后，拉開(kāi)了宮頸癌病因研究的新篇章。此前，早在19世紀(jì)40年代，意大利醫(yī)師DomenicoRigoni-stem從死亡

13、登記資料分析中發(fā)現(xiàn)，患宮頸癌的婦女大多數(shù)為已婚者，未婚者很少，修女幾乎不患宮頸癌，因此，他根據(jù)疾病分布原理建立病因假說(shuō),認(rèn)為結(jié)婚與否與宮頸癌發(fā)生有關(guān)。1968年，Dunn等進(jìn)一步證明，人生殖器疣組織內(nèi)有病毒顆粒存在。1970年,Oriel等在此基礎(chǔ)上又進(jìn)一步證明，所有引起疣的病毒都屬于含DNA的HPV病毒-20世紀(jì)（6070）年代，人們將主要目光投向在體外被證實(shí)具有一定致癌性的單純皰疹病毒（HSV）,且在宮頸癌標(biāo)本中有定的檢出率，但臨床活體標(biāo)本能檢出HSV的始終只占其中一小部分,流行病學(xué)調(diào)查不支持與宮頸癌相關(guān)，而巨細(xì)胞病毒（CMV）.EB病毒、衣原體等至今未發(fā)現(xiàn)有力的證據(jù)。1983年,Hara

14、ldzurHausen終于從宮頸癌患者活檢組織中首次分離出HPV16型病毒，并發(fā)現(xiàn)了新的可引起人類(lèi)腫府的HPV亞型，1984年，他成功地克隆了HPV16型和18型病毒基因組，以及檢測(cè)到與人的腫痛細(xì)胞整合后的特定HPVDNA基因的表達(dá)，首先證實(shí)HPV是引起宮頸癌病因的學(xué)說(shuō)3。目前,多數(shù)宮頸癌標(biāo)本中可檢測(cè)到HPV基因組或基因片段,90%以上的宮頸癌合并HPV感染，1995年國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)（IARC）專(zhuān)題討論會(huì)的學(xué)者們認(rèn)為,HPV感染是宮頸癌的主要病因。宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界范閣內(nèi)每年約有50萬(wàn)左右的宮頸癌新發(fā)病例，其中約有20多萬(wàn)女性死于該疾病。新發(fā)病例的80%來(lái)自發(fā)展中國(guó)家，

15、其中我國(guó)每年新發(fā)病例約13.15萬(wàn)，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的28.8%,且近年來(lái)呈現(xiàn)地區(qū)增長(zhǎng)及發(fā)病年齡提前的現(xiàn)象，特別是近年來(lái)年輕宮頸癌患者有明顯上升趨勢(shì)，發(fā)病率以每年約2%3%的速度增長(zhǎng)6刁。1.1 HPV流行病學(xué)特點(diǎn)HPV呈球形，無(wú)包膜，呈多面體立體對(duì)稱(chēng)的核衣殼結(jié)構(gòu)，直徑約為（4560）nm,表面有72個(gè)充微粒，內(nèi)含8000個(gè)堿基對(duì)（bp）,分子最為5x106D,其中88%是病毒蛋白。在發(fā)現(xiàn)的HPV型約有一百多種亞型，根據(jù)其致病性差異,可分為低危型HPV（如6、11亞型等）和高危型HPV（如16、18、58亞型等）。低危型HPV主要引起生殖道肛周皮膚和陰道下部的外生性濕疣類(lèi)病變、扁平濕疣

16、類(lèi)病變和輕度子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN1）,而高危型HPV主要導(dǎo)致中度子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN2）、重度子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN3）和宮頸癌的發(fā)生。目前主要檢測(cè)的方法為導(dǎo)流雜交法。2關(guān)于HPV疫苗HPV基因結(jié)構(gòu)及功能HPV基因組是雙鏈環(huán)狀DNA,以共價(jià)閉合的超螺旋結(jié)構(gòu)、開(kāi)放的環(huán)狀結(jié)構(gòu)、線(xiàn)性分子3種形式存在。HPV基因組編碼為9個(gè)開(kāi)放讀碼框架，分為3個(gè)功能區(qū)即早期轉(zhuǎn)錄區(qū)、晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)和非轉(zhuǎn)錄區(qū)（控制區(qū)）。早期轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱(chēng)為E區(qū)，由4500個(gè)堿基對(duì)組成，分別編碼為E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8等8個(gè)早期蛋白，具有參與翹毒DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控和細(xì)胞轉(zhuǎn)化等功能。晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱(chēng)為L(zhǎng)區(qū)，

17、由2500個(gè)堿基對(duì)組成，編碼2個(gè)衣殼蛋白即主要衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白",組成病毒的衣殼，且與病毒的增殖有關(guān)。非轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱(chēng)為上游調(diào)節(jié)區(qū)、非編碼區(qū)或長(zhǎng)調(diào)控區(qū)，由1000個(gè)堿基對(duì)組成，位于E8和L1之間。該區(qū)含有HPV基因組DNA的復(fù)制起點(diǎn)和HPV基因表達(dá)所必需的調(diào)控元件,以調(diào)控病毒的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。HPV基因組主要功能見(jiàn)表1。1.1 HPV疫苗日前,HPV疫苗主要分三類(lèi):一是阻止感染的預(yù)防性疫苗;二是使原有感染及相關(guān)疾病消退的治療性疫苗;三是預(yù)防多種疾病的HPV嵌合疫苗。預(yù)防性疫苗是將HPV的晚期結(jié)構(gòu)蛋白L1、E2作為基礎(chǔ)誘導(dǎo)，產(chǎn)生特異性的抗HPV抗體，從而使機(jī)體免受HPV感染2】

18、76;這類(lèi)疫苗主要用于接種尚未發(fā)生感染的人群;而治療性疫苗，目的則是清除HPV感染的細(xì)胞。這種疫苗以E6、E7蛋白為基礎(chǔ)，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異的細(xì)胞免疫,來(lái)阻止HPV感染損害的延續(xù)，清除病灶嵌合疫苗則是新的研究熱點(diǎn)，不同型別、不同時(shí)期蛋白的嵌合，將大幅提高預(yù)防效能。表1HPV基因組主要功能基因名稱(chēng)主要功能E1復(fù)制、復(fù)制抑制E2激活轉(zhuǎn)錄（HPV6、11、16）抑制轉(zhuǎn)泉，結(jié)合長(zhǎng)控區(qū)E3未知其產(chǎn)物成功能E4HPV11引起之疣的細(xì)胞蛋白E5轉(zhuǎn)化作用（HPV6）E6協(xié)同E7轉(zhuǎn)化作用（HPV16和HPV18）E7協(xié)同E6轉(zhuǎn)化作用（HPV16和HPV18）轉(zhuǎn)錄激活（HPV16）E8未知其產(chǎn)物或功能,可能參與復(fù)制L1

19、主要衣殼蛋白12次次衣殼蛋白2.2.1預(yù)防性疫苗HPV疫苗的研究實(shí)踐經(jīng)歷了一個(gè)漫長(zhǎng)而艱苦的過(guò)程，因?yàn)镠PV僅在人體內(nèi)復(fù)制，很難進(jìn)行人工培養(yǎng),其基因組包含3種強(qiáng)力致癌基因，故即使是滅活HPV疫苗也不能在人體內(nèi)使用。1984年HaraldzurHausen證實(shí)，宮頸癌致病原因后，曾經(jīng)游說(shuō)一些組織致力于HPV疫苗的研究，但未得到重視。隨著乙型肝炎病毒疫苗的研發(fā)成功和廣泛應(yīng)用，啟示科學(xué)家們將研究目標(biāo)放在主要和次要病毒衣殼抗原的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)HPV疫苗。1991年，澳大利亞和美國(guó)科學(xué)家分別在實(shí)驗(yàn)室中合成出HPV16型病毒樣顆粒，此后又陸續(xù)得到了其他型別病毒樣顆粒，在此基礎(chǔ)上，針對(duì)晚期表達(dá)產(chǎn)物L(fēng)1的HPV預(yù)防

20、性疫苗才研制成功。2006年6月8日，美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)默克公司的HPV6、】1、16、18四價(jià)疫苗（Gardasil）用于預(yù)防該4型HPV感染引起的宮頸癌、生殖道癌前病變和生殖器疣。同年，美國(guó)得克薩斯州州長(zhǎng)簽署命令，強(qiáng)制要求該州所有6年級(jí)女學(xué)生接種HPV疫苗。2007年9月24日，歐盟委員會(huì)批準(zhǔn)葛蘭素史克公司的HPV6J1型二價(jià)疫苗（Cervarix）上市”幻。這兩種疫苗對(duì)于HPV16型和18型的保護(hù)作用達(dá)到了99%,保護(hù)時(shí)間可能長(zhǎng)達(dá)20年。疫苗上市后安全性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)也顯示，兩種疫苗接種后安全性也較好。目前已在100多個(gè)國(guó)家上市，有的還納入到國(guó)家免疫規(guī)劃實(shí)行免費(fèi)接種，主要用于青

21、春期女孩和年輕女性（9-26歲）。WHO、美國(guó)疾病控制中心、歐洲醫(yī)學(xué)機(jī)構(gòu)等6個(gè)國(guó)家多個(gè)部門(mén)均認(rèn)為HPV疫苗是安全有效的，應(yīng)積極促進(jìn)其在全球發(fā)達(dá)或發(fā)展中國(guó)家進(jìn)行接種'E。HPV主要通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入宿主細(xì)胞，衣殼蛋白L1和12在此過(guò)程中發(fā)揮了重要作用另外,HPV的衣殼蛋白與其他病毒的衣殼蛋白相比，具有顯著的不同特點(diǎn)是HPV的衣殼蛋白具有較強(qiáng)的保守性。這種保守性表現(xiàn)在兩個(gè)方面:病毒的衣殼在選擇壓力等外界環(huán)境的作用下變異很小，而其他病毒變異較大;不同型的HPV的L1蛋白的氨基酸序列的同源性在60%以上。以上兩種疫苗是針對(duì)引起官頸癌的HPV16J8和引起尖銳濕疣和外陰炎的HPV6J1的通用疫苗，

22、預(yù)防機(jī)制在于通過(guò)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和性抗體預(yù)防HPV感染，是經(jīng)過(guò)幾期臨床試驗(yàn)后批準(zhǔn)上市的,均由衣殼抗原L1重組表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的既不包含病毒DNA也無(wú)傳染性的病毒樣顆粒（VLP）組成，重組LIVLP在結(jié)構(gòu)和免疫原性上都與天然乳頭痛病毒極其相似。VLP能與細(xì)胞受體結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞，這樣有利于抗原的加工呈遞以及誘發(fā)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫。以上兩種疫苗在效價(jià)方面:對(duì)679名墨西哥婦女進(jìn)行隨機(jī)雙盲m期臨床試驗(yàn)證實(shí)四價(jià)體疫苗高度有效，能夠100%預(yù)防HPV6、11、16、18相關(guān)的CIN2和3、原位癌、濕疣和外陰陰道上皮（VIN）,且疫苗接種耐受性好mi。對(duì)歐洲地區(qū)9265名（1624）歲女性進(jìn)行臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，四價(jià)體疫苗

23、能夠100%預(yù)防HPV6、ll、16、l8相關(guān)的CIN2和3和原位癌，99.0%預(yù)防VIN、濕疣和外陰陰道癌除此之外，針對(duì)HPV其他亞型的研究報(bào)道較少。近些年，人們研究較多的是利用昆蟲(chóng)細(xì)胞、重組痘苗病毒以及沙門(mén)氏菌和大腸桿菌等的表達(dá)系統(tǒng),來(lái)表達(dá)L1蛋白和12蛋白。根據(jù)人種的易感性和地區(qū)差別，如HPV45在非洲相對(duì)較多,HPV33在歐洲較多，而HPV58和52在亞洲較多頃，其學(xué)者根據(jù)本地區(qū)感染情況，研究其他HPV亞型方面有部分報(bào)道。2.2.2治療性疫苗關(guān)于HPV治療性疫苗,到目前沒(méi)有臨床應(yīng)用疫苗，大多在實(shí)驗(yàn)室研究階段。治療性疫苗通常是以經(jīng)修飾后去除其轉(zhuǎn)化活性,但仍保留其抗原性的HPV早期蛋白作為

24、靶抗原，它可誘導(dǎo)特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)，被用于控制或消除感染HPV的良性和惡性病灶,并可作為這類(lèi)疾病的手術(shù)后的輔助治療。研究顯示,預(yù)防性VLP疫苗對(duì)已經(jīng)感染的HPV幾乎沒(méi)有什么療效，其主要致癌蛋白E6和E7在基底細(xì)胞中表達(dá)，E6.E7主要與抑癌基因p53、pRb結(jié)合,從而介導(dǎo)被感染的細(xì)胞增殖，永生化和惡性轉(zhuǎn)化，因此治療性疫苗和基因療法主要針對(duì)的是E6和E7,91O正常組織中不存在這兩種蛋白，因此,E6和E7蛋白就成為HPV相關(guān)宮頸癌及癌前病變治療性疫苗的理想靶抗原。對(duì)中晚期宮頸癌病人手術(shù)后殘留的腫瘤細(xì)胞，通過(guò)激發(fā)病人的細(xì)胞免疫來(lái)殺傷、清除這些腫瘤細(xì)胞和已感染的上皮細(xì)胞，從而防止或限制腫瘤的復(fù)發(fā)和

25、擴(kuò)散。1996年，英國(guó)用表達(dá)HPV16型和HPV18型的E6和E7蛋白以及重組痘苗病毒疫苗進(jìn)行了宮頸癌治療的一期臨床試驗(yàn)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的副作用，在部分受試病人體內(nèi)可檢測(cè)到特異性抗體和CTL反應(yīng)以及細(xì)胞因子wo治療性疫苗目前主要研究狀況為： 肽疫苗以多肽代表T細(xì)胞表位已在治療HPV在小鼠體內(nèi)的腫瘤臨床前期方面有些報(bào)道。肽類(lèi)疫苗在離體及在體的條件下均能促發(fā)特異性的CD8.細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）反應(yīng),從而對(duì)腫痛細(xì)胞起殺傷作用，無(wú)癌蛋白的致病性，借助基因工程技術(shù)大量生產(chǎn),肽段疫苗最典型的代表為E7肽段疫苗,主要是K7蛋白第11-20和86*3氨基酸2段分子肽段。目前，已經(jīng)確認(rèn)有9個(gè)HPV16E6

26、和E7編碼結(jié)合肽，其中3個(gè)由E7編碼的多肽具有免疫源性多肽疫苗具有易于生產(chǎn)、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，但多肽疫苗抗原性弱,一般要結(jié)合佐劑使用，目前唯一批準(zhǔn)的佐劑是A1（OH）3,該佐劑能促進(jìn)體液免疫，但對(duì)治療起重要作用的細(xì)胞免疫無(wú)促進(jìn)作用。肽疫苗另一個(gè)問(wèn)題是需要符合特定的HLA型，目前，人們巳經(jīng)發(fā)現(xiàn)了HPV16型E6、E7抗原中的幾個(gè)能與人HLA-AD相配的CTL表位。用HPV型E7多肽疫苗免疫HPV相關(guān)腫瘤這一方法，也已進(jìn)入I/U期臨床試驗(yàn)，試驗(yàn)中未見(jiàn)其有明顯副作用。由于多肽疫苗具有易于生產(chǎn)、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，因此，多肽疫苗有一定的應(yīng)用前景。但多肽疫苗由受MHC-I類(lèi)分子的限制性影響，對(duì)于不同遺傳背景的個(gè)體需要

27、使用與接種對(duì)象的HLA相匹配的多肽疫苗。但目前除與人HLA-AD相配的CTL表位外，人們對(duì)HPV16型E6、E7抗原中與其它類(lèi)型MHC-I類(lèi)分子相結(jié)合的CTL表位尚未明瞭，因此使得多肽疫苗的應(yīng)用受到較大限制。此外，合成肽疫苗的不足之處還在于其免疫源性不強(qiáng)，大多需要輔以強(qiáng)佐劑才能獲得有效免疫反應(yīng)，這也影響了該疫苗的實(shí)際應(yīng)用刃。HPV16E7多肽僅能對(duì)有限的患者起作用，為擴(kuò)大該疫苗在患者中的應(yīng)用范圍，可采用一些與其它HLA組織型有親和性的較長(zhǎng)的多肽片段。 蛋白疫苗因?yàn)殡娜狈ν暾牡鞍仔蛄?，有可能限制相關(guān)表位庫(kù)，因此許多研究小組都關(guān)注治療性重組蛋白疫苗。重組蛋白與熱休克蛋白（Hsp）的融合皆白可比單

28、獨(dú)表達(dá)的蛋白產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫反應(yīng)。例如，在沒(méi)有佐劑的條件下,E6、E7重組蛋白與結(jié)核分枝桿菌的Hsp70融合可阻止小鼠的HPV16E6/E7誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的生成）。包含Hsp65和HPV16E7融合蛋白的治療性疫苗（HspE7）在CIN3女性患者中評(píng)估顯示，雖然該疫苗在一些患者中表現(xiàn)出一定的臨床效應(yīng)，但是否為自然衰退或臨床治療的作用尚未明確睛。還有一種免疫策略包括抗原呈遞到自身抗原呈遞細(xì)胞（APC），如樹(shù)突細(xì)胞，再?gòu)捏w外回輸給患者以剌激產(chǎn)生免疫反應(yīng)。如果宮頸癌患者對(duì)重組HPV16或HPV18E7蛋白剌激的樹(shù)突細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，其腫瘤進(jìn)展速度將變緩（13個(gè)月存活期），而不產(chǎn)生反應(yīng)的患者則在開(kāi)始治療后

29、的5個(gè)月內(nèi)死亡。評(píng)估HPV16E7肽剌激產(chǎn)生的自體樹(shù)突細(xì)胞的安全性和有效性的I期臨床實(shí)驗(yàn)正在宮頸癌患者中進(jìn)行爭(zhēng)；。重組蛋白疫苗的第三種策略是多抗原的融合蛋白疫苗。在臨床前試驗(yàn)中，一種嵌合HPV16LIVLP與全長(zhǎng)HPV16I2、E7、E2順序融合蛋白（VLPE7E2）的疫苗可對(duì)小鼠產(chǎn)生治療作用，其抗LIVLP的抗體應(yīng)答未出現(xiàn)衰減。一個(gè)結(jié)構(gòu)相似的L1-E7融合蛋白疫苗的I期臨床試驗(yàn)正在39位單純感染HPV16的CIN2和3患者中進(jìn)行。該疫苗可誘導(dǎo)產(chǎn)生高效價(jià)的抗HPV16L1抗體、低效價(jià)的抗E7的抗體以及抗這兩種蛋白的細(xì)胞免疫反應(yīng)。沒(méi)有觀察到明顯的組織學(xué)和HPV-DNA改善的趨勢(shì)曲。 病毒載體疫苗

30、痘苗病毒載體疫苗曾用于消滅人類(lèi)天花的痘苗病毒是最為常用的病毒載體，其具有長(zhǎng)期、大短模的人類(lèi)接種史。同時(shí)，痘苗病毒感染率高，外源基因表達(dá)水平高，又為裂解性病毒，其基因組與宿主細(xì)胞基因組整合的幾率非常小，因而無(wú)致癌性擔(dān)憂(yōu)。這些特性使痘苗病毒成為腫擂疫苗的合適載體。但痘苗病毒載體疫苗也存在著不足，其產(chǎn)生的并發(fā)癥一直阻礙著它的廣泛使用。此外，接種該疫苗后產(chǎn)生的抗痘苗病毒抗體可能抑制再次免疫,從而影響了它的免疫治療效果。重組痘苗病毒疫苗多為活性頁(yè)組疫苗，具有用量少、抗原不需純化等優(yōu)點(diǎn)。用其免疫接種后,重組病毒在體內(nèi)產(chǎn)生大最抗原.刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫。同時(shí),病毒栽體本身還可發(fā)揮佐劑效果。近年來(lái)研

31、制成功的非復(fù)制型痘苗病毒載體，除具有痘苗病毒載體的一般優(yōu)點(diǎn)外，還具有在人體中不能繁殖后代，卻能有效表達(dá)外源基因的優(yōu)點(diǎn)，從而大大減少了免疫缺損病人在“種痘”后出現(xiàn)并發(fā)癥的可能性，使該疫苗用于人體更為安全。由于其免疫效果不像活痘苗那樣依賴(lài)于病毒能否繁殖，因此有可能在一定程度上克服痘苗病毒載體疫苗存在的再次免疫效果不好的問(wèn)題。我國(guó)在“九五”期間用非復(fù)制型痘苗病毒載體成功研制了HPV16非復(fù)制型痘苗病毒疫苗。該疫苗在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)具有特異性CTL反應(yīng)和抗腫瘤移植反應(yīng)。最近，我國(guó)有研究者將HPV16治療性重組痘苗病毒疫苗與蛋白疫苗聯(lián)合使用，獲得了理想的免疫效果。 DNA疫苗DNA疫苗是將插入目的基因的

32、表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入人體內(nèi)，通過(guò)在人體內(nèi)表達(dá)抗原而引起人體的特異性免疫反應(yīng)。與其它疫苗相比,DNA疫苗有許多優(yōu)點(diǎn)，（1）DNA疫苗免疫應(yīng)答持久、免疫效率可靠；（2）DNA疫苗可同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫;（3）DNA疫苗安全可靠,DNA疫苗的載體部分無(wú)免疫原性，可重復(fù)接種，不會(huì)像重組疫苗一樣產(chǎn)生針對(duì)載體的自身免疫反應(yīng);（4）DNA疫苗制備簡(jiǎn)單，容易大量生產(chǎn)，有利于控制和保證質(zhì)景，成本低;（5）DNA疫苗性質(zhì)穩(wěn)定，便于保存并運(yùn)輸。為了獲得更好的免疫效果，可將E6和田基因進(jìn)行一些修飾，從而增強(qiáng)MHC-H類(lèi)抗原的呈遞，提高細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，用Sig/E7/LAMP1融合基因制備的DNA疫苗，

33、比采用野生型E7基因制備的DNA疫苗有更好的抗腫瘤效果。這一經(jīng)肌肉注射途徑免疫的疫苗，其I/U期臨床試驗(yàn)?zāi)壳罢诩s翰霍普金斯醫(yī)院進(jìn)行。值得指出的是，DNA疫苗在人體中免疫效果弱的問(wèn)題及安全性問(wèn)題尚待進(jìn)一步解決算。2.3存在的問(wèn)題與展魚(yú)2.3.1存在的問(wèn)題近幾十年來(lái)，人們?cè)趯m頸癌發(fā)病機(jī)制以及宮頸癌預(yù)防和治療方面取得了很大的進(jìn)展,HPV疫苗的發(fā)明，為通過(guò)接種預(yù)防宮頸癌提供了可能。但仍存在諸多問(wèn)題：疫苗安全問(wèn)題預(yù)防性HPV疫苗Ganlasil和Cervarix在一些國(guó)家和地區(qū)得到了較為廣泛的應(yīng)用，但在某些國(guó)家和地區(qū)針對(duì)是否將其納入常規(guī)接種計(jì)劃尚有爭(zhēng)議。預(yù)防性疫苗在預(yù)防HPV感染和CIN

34、方面有高效性，且其安全性也得到了一定程度的證實(shí)，但有部分報(bào)道其接種后的不良反應(yīng)。雖然大部分人出現(xiàn)副反應(yīng)的癥狀較為輕微，主要表現(xiàn)為局部皮膚紅疹、腫脹、疼痛、淋巴結(jié)腫大或者發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)等:叫，但對(duì)HPV疫苗安全性的研究還少，尚待進(jìn)一步的研究證實(shí)。疫苗成本過(guò)高HPV四價(jià)疫苗剛上市時(shí)售價(jià)約在（300500）美元，目前中國(guó)大陸還未正式引進(jìn)，在香港和臺(tái)灣售價(jià)約2000元以上，疫苗費(fèi)用較貴,會(huì)給國(guó)家和家庭帶來(lái)負(fù)擔(dān)，特別是在一些發(fā)展中國(guó)家，開(kāi)發(fā)經(jīng)濟(jì)高效的疫苗對(duì)開(kāi)展大規(guī)模接種有重要的現(xiàn)實(shí)意義。認(rèn)知度問(wèn)題一項(xiàng)國(guó)內(nèi)調(diào)查結(jié)果表明，僅32.85%篩查女性聽(tīng)說(shuō)過(guò)HPV,而絕大多數(shù)女性從來(lái)都沒(méi)有

35、聽(tīng)說(shuō)，說(shuō)明城市女性對(duì)HPV的知識(shí)相當(dāng)缺乏。另外，香港報(bào)道38%女性曾經(jīng)聽(tīng)說(shuō)過(guò)HPV,但對(duì)HPVF專(zhuān)業(yè)知識(shí)了解甚少3）。人們認(rèn)知水平的問(wèn)題，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)宮頸癌相關(guān)科普知識(shí)的宣傳和普及，讓更多的人知道和了解HPV疫苗。缺少通用疫苗與治療性疫苗目前上市的兩種疫苗主要是預(yù)防性疫苗，HPV6、11、16和18,雖然不同型的HPV的L1蛋白的氨基酸序列的同源性在60%以上,但對(duì)其他亞型預(yù)防效果并不怎么樣，多價(jià)疫苗或通用疫苗的研究勢(shì)在必得。根據(jù)地區(qū)實(shí)際情況，國(guó)內(nèi)有學(xué)者致力于HPV16J8和58復(fù)合疫苗的研究叫，但處于起步研究階段，實(shí)際應(yīng)用還需較長(zhǎng)時(shí)間周期。另外，治療性疫苗多在動(dòng)物模型試驗(yàn)階段，正式

36、臨床應(yīng)用,需進(jìn)一步探索和實(shí)踐檢驗(yàn)。但通用或復(fù)合疫苗是今后疫苗研究的重要方向。2.3.2展望復(fù)合疫苗或嵌合疫苗DNA疫苗將病毒DNA直接編碼成抗原，可以根據(jù)宿主的HLA型別經(jīng)抗原提呈細(xì)胞（ApC）與T細(xì)胞結(jié)合，產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，無(wú)MHC限制性，但免疫原性較弱，樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是APC的免疫反應(yīng)中最重要的免疫細(xì)胞，因此，目前的研究是以DC為載體來(lái)增強(qiáng)DNA疫苗的免疫反應(yīng),可產(chǎn)生特異性T細(xì)胞反應(yīng)及CTL反應(yīng);RNA疫苗沒(méi)有DNA疫苗穩(wěn)定，轉(zhuǎn)染能力也較低，免疫原性較弱，但自我復(fù)制能力較強(qiáng),可以產(chǎn)生較高濃度的抗體,因此.DNA-RNA聯(lián)合疫苗可以產(chǎn)生明顯的E7特異性CTL反應(yīng)及抗腫

37、瘤效應(yīng)。HPV-16VLP-E7是既有預(yù)防作用又有治療作用的疫苗，VLP可以激活DC,而HPVE7既可產(chǎn)生針對(duì)E7的特異性T細(xì)胞反應(yīng),也可產(chǎn)生中和性抗體，這是研究兼預(yù)防與治療疫苗的新思路。另外，最近有部分重組嵌合DNA疫苗的報(bào)道I心）。HPV患者存在著細(xì)胞因子失衡所引起的一系列細(xì)胞免疫抑制或逃避現(xiàn)象，因此改善和提高HPV感染者的細(xì)胞免疫功能成為HPV疫苗尤其是HPVDNA疫苗研究目標(biāo)之一。細(xì)胞因子基因與目的基因共表達(dá)或共接種可以提高目的基因編碼抗原誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。在宮頸炎的臨床藥物治療中通常采用干擾素（IFN）治療法，部分學(xué)者目前正著手研究HPV基因與IFN結(jié)合的重組病毒DNA疫苗的研究。2.

38、3.2.2 E2蛋白的研究到目前，尚無(wú)任何一種治療方法可消滅HPV感染，而且HPV還可在細(xì)胞內(nèi)潛伏數(shù)年,一旦機(jī)體免疫力下降，病毒就可恢復(fù)活動(dòng)，最終導(dǎo)致癌癥發(fā)生。先前的大多數(shù)治療性疫苗致力于致癌性的HPVE6、E7基因的研究上，關(guān)于E2基因的研究報(bào)道較少）。E2能夠抑制E6、E7的過(guò)度表達(dá),宮頸癌組織中E2結(jié)構(gòu)遭到破壞，其抑制作用解除，E6、E7處于高表達(dá)狀態(tài)。現(xiàn)認(rèn)為E2蛋白是一種特異性的DNA束縛蛋白，可以調(diào)節(jié)病毒mRNA的轉(zhuǎn)錄和DNA的復(fù)制，并有減星調(diào)節(jié)E6、E7表達(dá)的作用。E2蛋白還可以通過(guò)結(jié)合病毒啟動(dòng)子附近的基因序列而抑制轉(zhuǎn)錄起始。有關(guān)E2蛋白的研究仍需加強(qiáng)。參考文獻(xiàn)1DuralM,Gi

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