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1、ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般使用專門的曲線擬合工具，如：Curve Exert1.3下面以Curve Exert1.3為例說(shuō)明怎么樣制作：1 啟動(dòng)“Curve Expert1.3”2 X軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值，Y軸輸入所對(duì)應(yīng)的濃度值，如圖：3單擊運(yùn)行 按鈕（上圖紅圈圈），出現(xiàn)如下對(duì)話框 4單擊ok按鈕，出現(xiàn)如下兩個(gè)對(duì)話框，關(guān)閉下面一個(gè)對(duì)話框 關(guān)閉下面一個(gè)對(duì)話框 5. 在對(duì)話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱，從“1”開(kāi)始依次點(diǎn)擊曲線名稱，在右下角會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線，。 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊，出現(xiàn)如下對(duì)話框：注意：選擇系數(shù)（即“r”值）最好的曲線方程來(lái)進(jìn)行運(yùn)算。在下面的對(duì)話框右

2、上角有“r”值 ，當(dāng)“r”值越接近1擬合度越好 7按Ctrl鍵+L鍵，（或者在上圖的界面上點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，出現(xiàn)analyze選項(xiàng)），出現(xiàn)如下對(duì)話框： 8輸入標(biāo)準(zhǔn)的OD值，單擊Calculate按忸，即可得到待測(cè)蛋白的實(shí)際含量。（標(biāo)本稀釋了N倍，運(yùn)算出的數(shù)值應(yīng)再乘以N）。9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程，可在步驟6的對(duì)話框空白處右擊，選擇”Information” 10. 得到如下對(duì)話框：點(diǎn)擊“Copy”在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù)：Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx2)當(dāng)抗原或抗體濃度過(guò)高時(shí)，對(duì)應(yīng)的ELISA讀數(shù)不會(huì)再顯著升高，這時(shí)會(huì)達(dá)到一個(gè)平臺(tái)期，同樣在低濃度時(shí)也有一個(gè)平臺(tái)期。只有在適當(dāng)?shù)臐舛葧r(shí)才會(huì)出現(xiàn)類似直線的曲線，所以一般數(shù)據(jù)都要進(jìn)行多參數(shù)擬和，才能得到能更準(zhǔn)

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