蛋白質(zhì)及非蛋白含氮化合物檢驗

1、蛋白質(zhì)及非蛋白含氮化合物蛋白質(zhì)及非蛋白含氮化合物檢驗檢驗蛋白質(zhì)是機體生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，許多蛋白質(zhì)是機體生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，許多疾病均可引發(fā)蛋白質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致血漿疾病均可引發(fā)蛋白質(zhì)代謝紊亂，導(dǎo)致血漿蛋白質(zhì)的種類與含量變化，對其進行監(jiān)測蛋白質(zhì)的種類與含量變化，對其進行監(jiān)測分析可用于診斷疾病和監(jiān)測病情。分析可用于診斷疾病和監(jiān)測病情。 人體中蛋白質(zhì)種類約有十萬種之多，人體中蛋白質(zhì)種類約有十萬種之多，大部分是細胞或器官的結(jié)構(gòu)蛋白，少部分大部分是細胞或器官的結(jié)構(gòu)蛋白，少部分是存在于細胞內(nèi)外液的可溶性蛋白質(zhì)。是存在于細胞內(nèi)外液的可溶性蛋白質(zhì)。 可溶性蛋白質(zhì)的功能非常廣泛，在可溶性蛋白質(zhì)的功能非常廣泛，在

2、許多疾病狀態(tài)下體液蛋白質(zhì)可出現(xiàn)異常。許多疾病狀態(tài)下體液蛋白質(zhì)可出現(xiàn)異常。 血液的基本組成及有關(guān)概念血液的基本組成及有關(guān)概念血液血液 液態(tài)的血漿液態(tài)的血漿有形的血細胞有形的血細胞 紅細胞紅細胞白細胞白細胞血小板血小板一、血漿蛋白質(zhì)一、血漿蛋白質(zhì)概念概念 全血：由液態(tài)的血漿和有形的血細胞組成。全血：由液態(tài)的血漿和有形的血細胞組成。 血漿：全血中的液體成分，是含有多種溶血漿：全血中的液體成分，是含有多種溶質(zhì)質(zhì) 的黃色水溶液。約占全血的黃色水溶液。約占全血 容積的容積的50%50%60%60% 血清：血液凝固，血塊收縮后析出的淡血清：血液凝固，血塊收縮后析出的淡 黃色清液。黃色清液。（二）血漿（二）血

3、漿 1 1血漿的組成血漿的組成2 2血漿中的白蛋白、球蛋白、纖維蛋白、血漿中的白蛋白、球蛋白、纖維蛋白、 無機鹽的作用無機鹽的作用血漿蛋白（白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原）：血漿蛋白（白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原）： 白蛋白：主要形成血漿膠體滲透壓。白蛋白：主要形成血漿膠體滲透壓。 球蛋白：主要參與機體免疫。球蛋白：主要參與機體免疫。 纖維蛋白：主要參與凝血。纖維蛋白：主要參與凝血。小分子晶體物質(zhì)（無機鹽、葡萄糖、氨基酸等）小分子晶體物質(zhì)（無機鹽、葡萄糖、氨基酸等） 無機鹽：主要形成血漿晶體滲透壓及維持體液酸堿平無機鹽：主要形成血漿晶體滲透壓及維持體液酸堿平衡。衡。 葡萄糖、氨基酸等：葡萄糖、氨基酸

4、等： 供能、營養(yǎng)。供能、營養(yǎng)。血漿蛋白質(zhì)是血漿固體成分中含量最多、血漿蛋白質(zhì)是血漿固體成分中含量最多、組成復(fù)雜、功能廣泛的一類化合物。組成復(fù)雜、功能廣泛的一類化合物。 血漿蛋白質(zhì)功能血漿蛋白質(zhì)功能1.直接在血液中發(fā)揮作用直接在血液中發(fā)揮作用 在血漿中運載弱水溶性物質(zhì)在血漿中運載弱水溶性物質(zhì) 維持血漿膠體滲透壓維持血漿膠體滲透壓 組成血液組成血液pH緩沖系統(tǒng)緩沖系統(tǒng) 參與凝血與纖維蛋白溶解參與凝血與纖維蛋白溶解2.需要時進入組織發(fā)揮作用需要時進入組織發(fā)揮作用 對組織蛋白起修補作用對組織蛋白起修補作用 血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用 組成體液免疫防御系統(tǒng)組成體液免疫防御系統(tǒng) 抑制

5、組織蛋白酶抑制組織蛋白酶 參與代謝調(diào)控作用的激素參與代謝調(diào)控作用的激素（二）血漿蛋白質(zhì)的分類二）血漿蛋白質(zhì)的分類1 1功能分類法功能分類法復(fù)雜復(fù)雜 運輸載體運輸載體凝血與纖溶蛋白凝血與纖溶蛋白免疫球蛋白和補體蛋白免疫球蛋白和補體蛋白蛋白酶抑制物蛋白酶抑制物蛋白類激素蛋白類激素血酶類血酶類2. 2. 電泳分類法電泳分類法 醋酸纖維素薄膜電泳一般可將血清蛋白質(zhì)分醋酸纖維素薄膜電泳一般可將血清蛋白質(zhì)分為白蛋白、為白蛋白、1 1、2 2、球蛋白球蛋白5 5條主要區(qū)帶。條主要區(qū)帶。 正常血清蛋白電泳圖譜增示意圖及其掃描曲線正常血清蛋白電泳圖譜增示意圖及其掃描曲線 血清蛋白電泳的正常組分血清蛋白電泳的正常

6、組分二、血清總蛋白及主要組分正常與異常二、血清總蛋白及主要組分正常與異常電泳電泳 人血漿總蛋白人血漿總蛋白(total protein(total protein，TP)TP)濃度濃度為為606080g/L80g/L 臨床實驗室采用的標本多為血清臨床實驗室采用的標本多為血清 測定血清測定血清TPTP的首選方法：雙縮脲法的首選方法：雙縮脲法 樣品采集時，患者應(yīng)置仰臥位，直立時升樣品采集時，患者應(yīng)置仰臥位，直立時升高。高。 靜脈采血時止血帶壓迫靜脈時間超過靜脈采血時止血帶壓迫靜脈時間超過3min3min，TPTP也可上升也可上升10%10%。 劇烈運動后立即采血劇烈運動后立即采血TPTP最多可升高

7、最多可升高12%12%。（二）異常電泳圖譜的臨床意義（二）異常電泳圖譜的臨床意義1. 1. 異常血清蛋白電泳圖譜分型異常血清蛋白電泳圖譜分型 2. 2. 典型異常血清蛋白電泳圖譜典型異常血清蛋白電泳圖譜3 3 漿細胞病與漿細胞病與M M蛋白蛋白 異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征圖譜類型圖譜類型TPAlb12 低蛋白血癥型低蛋白血癥型NNN腎病型腎病型NN肝硬化型肝硬化型NNN-（融合）（融合）彌漫性肝損害型彌漫性肝損害型N慢性炎癥型慢性炎癥型急性時相反應(yīng)型急性時相反應(yīng)型NNNM蛋白血癥型蛋白血癥型在在 - 區(qū)區(qū) 帶帶 中中 出出 現(xiàn)現(xiàn) M 蛋蛋 白白 區(qū)

8、帶區(qū)帶高高2()-球蛋白血癥型球蛋白血癥型 妊娠型妊娠型N N蛋白質(zhì)缺陷型蛋白質(zhì)缺陷型個個 別別 區(qū)區(qū) 帶帶 出出 現(xiàn)現(xiàn) 特特 征征 性性 缺缺 乏乏2典型異常血清蛋白電泳圖譜典型異常血清蛋白電泳圖譜 A 正常人正常人 B腎病綜合征腎病綜合征 C 肝硬化肝硬化(-橋橋) ) D 肝硬化肝硬化(不典型不典型-橋橋) ) E 多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤IgA型型 F 多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)性骨髓瘤IgG型型血漿蛋白質(zhì)的性質(zhì)功能及其與電泳區(qū)帶的關(guān)系血漿蛋白質(zhì)的性質(zhì)功能及其與電泳區(qū)帶的關(guān)系電泳區(qū)帶電泳區(qū)帶蛋白質(zhì)種類蛋白質(zhì)種類成人參考值成人參考值（g/ L）半壽期半壽期（d）分子量分子量（kD）等電點等電點含糖

9、量含糖量(%)功能功能前清蛋白前清蛋白前清蛋白前清蛋白0.20.41.9554.70.5營養(yǎng)、運載營養(yǎng)、運載清蛋白清蛋白清蛋白清蛋白3552151966.245.80維持膠壓、運載和營維持膠壓、運載和營養(yǎng)等養(yǎng)等1-球蛋白球蛋白1-抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶0.92.04524.812蛋白酶抑制劑蛋白酶抑制劑1-酸性糖蛋白酸性糖蛋白0.51.25402.7445免疫應(yīng)答修飾劑免疫應(yīng)答修飾劑甲胎蛋白甲胎蛋白310569胎兒期蛋白胎兒期蛋白高密度脂蛋白高密度脂蛋白1.73.25200膽固醇逆轉(zhuǎn)運膽固醇逆轉(zhuǎn)運2-球蛋白球蛋白結(jié)合珠蛋白結(jié)合珠蛋白0.32.02854004.112結(jié)合血紅蛋白結(jié)合血紅蛋白2-巨

10、球蛋白巨球蛋白1.33.057205.48蛋白酶抑制劑蛋白酶抑制劑銅藍蛋白銅藍蛋白0.10.44.51324.4鐵氧化酶鐵氧化酶-球蛋白球蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白2.03.6779.65.76運鐵到胞內(nèi)運鐵到胞內(nèi)低密度脂蛋白低密度脂蛋白0.61.55300運膽固醇到組織運膽固醇到組織C30.91.81852補體成分補體成分C40.10.42067補體成分補體成分2-微球蛋白微球蛋白0.0010.00211.8纖維蛋白原纖維蛋白原2.04.02.53405.53凝血因子凝血因子-球蛋白球蛋白IgG7.0162414415067.33免疫球蛋白免疫球蛋白IgA0.74.061608免疫球蛋白免疫球蛋白

11、IgM0.42.3597012免疫球蛋白免疫球蛋白C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白51156.20炎癥介質(zhì)炎癥介質(zhì)（一）前白蛋白（一）前白蛋白 （prealbuminprealbumin，PAPA）分子量分子量55kD55kD由肝臟細胞合成的四亞基蛋白質(zhì)由肝臟細胞合成的四亞基蛋白質(zhì)電泳時遷移在電泳時遷移在AlbAlb之前之前半壽期半壽期與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體作為組織修補材料和運載蛋白作為組織修補材料和運載蛋白2. 2. 檢測檢測 目前多采用免疫透射比濁法目前多采用免疫透射比濁法3. 3. 臨床意義臨床意義（一）前白蛋白（一）前白蛋白 （prealbuminprealbumin

12、，PAPA）作為營養(yǎng)不良的指標作為營養(yǎng)不良的指標作為肝功能不全的指標作為肝功能不全的指標負性急性時相反應(yīng)蛋白負性急性時相反應(yīng)蛋白PA: 200PA: 200400mg/L 400mg/L 正常正常PA: 100PA: 100150mg/L 150mg/L 輕度缺乏輕度缺乏PA: 50PA: 50100mg/L 100mg/L 中度缺乏中度缺乏PAPA50mg/L 50mg/L 嚴重缺乏嚴重缺乏視黃醇結(jié)合蛋白視黃醇結(jié)合蛋白 (retinol-binding protein，RBP ) 肝臟合成，肝臟合成，21kD，半壽期，半壽期12h 攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運到各種靶組織。攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運到各種

13、靶組織。 與與PA以以1:1比例結(jié)合，避免比例結(jié)合，避免RBP從腎小球濾過。從腎小球濾過。 在靶細胞，在靶細胞，TTR-RBP降解后，視黃醇被攝入細降解后，視黃醇被攝入細胞。胞。RBP被腎小球濾出，腎近端小管細胞吸收被腎小球濾出，腎近端小管細胞吸收并降解并降解?！九R床意義臨床意義】 血漿血漿RBP增高見于腎小球損傷增高見于腎小球損傷 血漿血漿RBP下降見于：下降見于： 急性時相反應(yīng)、肝臟疾病和蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良急性時相反應(yīng)、肝臟疾病和蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良 尿液尿液RBP排泄量增加可反映腎小管功能損害排泄量增加可反映腎小管功能損害（三）白蛋白（三）白蛋白 （albuminalbumin，AlbAlb）血漿

14、中含量最多的蛋白質(zhì)血漿中含量最多的蛋白質(zhì)585585個氨基酸殘基組成個氨基酸殘基組成分子量分子量含含1717個二硫鍵，是不含糖的血漿蛋白質(zhì)個二硫鍵，是不含糖的血漿蛋白質(zhì)肝實質(zhì)細胞合成，每天合成。肝實質(zhì)細胞合成，每天合成。半壽期半壽期18-20 d18-20 d 最重要血漿營養(yǎng)蛋白最重要血漿營養(yǎng)蛋白, , 最重要血漿載體蛋白最重要血漿載體蛋白 維持血漿膠體滲透壓：血漿滲透壓的維持血漿膠體滲透壓：血漿滲透壓的75%75%80%80%由由AlbAlb維維持持 血漿中主要的載體蛋白，具有結(jié)合各種配體分子的能力血漿中主要的載體蛋白，具有結(jié)合各種配體分子的能力 緩沖酸堿維持酸堿平衡作用緩沖酸堿維持酸堿平衡

15、作用 高度溶于水，能運載許多疏水分子高度溶于水，能運載許多疏水分子 生理生理pHpH中為負離子，每分子帶中為負離子，每分子帶200200個負電荷個負電荷 運輸膽紅素運輸膽紅素. .長鏈脂肪酸長鏈脂肪酸. .膽汁酸鹽膽汁酸鹽. .前列腺素前列腺素. .類固類固醇激素醇激素, , 無機離子無機離子( (如如Ca2+Ca2+、Cu2+Cu2+、Ni2+).Ni2+).藥物藥物( (如阿司如阿司匹林、青霉素匹林、青霉素) ) 結(jié)合型激素和藥物無活性，結(jié)合型激素和藥物無活性，ALBALB含量或含量或pHpH變化時其活性變化時其活性變化變化【檢測方法檢測方法】 包括電泳法、免疫化學法和染料結(jié)合法。包括電泳

16、法、免疫化學法和染料結(jié)合法。 電泳法只能測其百分含量，乘電泳法只能測其百分含量，乘TP濃度得其濃度濃度得其濃度用于用于ALB定量不方便且精密度不如直接定量定量不方便且精密度不如直接定量 免疫化學法包括免疫比濁法和放射免疫法等免疫化學法包括免疫比濁法和放射免疫法等特異性好、靈敏度高，特異性好、靈敏度高，ALB易純化、抗血清易制備，易純化、抗血清易制備，適合尿液和腦脊液等低濃度適合尿液和腦脊液等低濃度ALB的測定的測定 血清血清ALB測定可采用染料結(jié)合法測定可采用染料結(jié)合法【參考區(qū)間參考區(qū)間】隨年齡有所變化，隨年齡有所變化，04天：天：2844 g/L 4天天14歲：歲：3854 g/L，此后下降

17、，此后下降 成人：成人：3552 g/L， 60歲歲 為為3246 g/L 走動者走動者 比臥床者平均高比臥床者平均高3 g/L【醫(yī)學決定水平醫(yī)學決定水平】：35gL時正常時正常 2834gL為輕度缺乏為輕度缺乏 2127gL為中度缺乏為中度缺乏 21gL則嚴重缺乏則嚴重缺乏 低于低于28gL時，會出現(xiàn)組織水腫時，會出現(xiàn)組織水腫臨床意義臨床意義（1 1）血漿）血漿AlbAlb增高僅見于嚴重脫水時增高僅見于嚴重脫水時（2 2）低白蛋白血癥）低白蛋白血癥 1 1）AlbAlb合成降低：合成降低： 2 2）AlbAlb丟失丟失 3 3）AlbAlb分解代謝增加分解代謝增加 4 4）AlbAlb的分布

18、異常的分布異常 5 5）無白蛋白血癥）無白蛋白血癥(analbuminaemia) (analbuminaemia) （3 3）由）由AlbAlb含量估計其配體的存在形式和作用含量估計其配體的存在形式和作用（4 4）作為個體營養(yǎng)狀態(tài)的評價指標）作為個體營養(yǎng)狀態(tài)的評價指標（5 5）AlbAlb的遺傳性變異的遺傳性變異（四）（四）1 1- -抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（1 1-AT-AT或或AATAAT） 394394個氨基酸殘基組成個氨基酸殘基組成 分子量分子量 pIpI為為 含糖含糖10%10%12%12% 占占1 1區(qū)帶蛋白區(qū)帶蛋白90%90% 主要由肝細胞合成，單核細胞、肺泡巨噬主要由肝細胞合

19、成，單核細胞、肺泡巨噬細胞和上皮細胞也能合成細胞和上皮細胞也能合成 蛋白酶的抑制劑蛋白酶的抑制劑 ATTATT基因的遺傳表型基因的遺傳表型 常染色體共顯性遺傳，有多種遺傳表型常染色體共顯性遺傳，有多種遺傳表型現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少有現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少有7575種基因變體種基因變體主要根據(jù)電泳遷移率分類主要根據(jù)電泳遷移率分類最多見的是最多見的是PiMM型型,占人群的占人群的90%以上，另外還有以上，另外還有兩種蛋白兩種蛋白:Z型和型和S型，型，【臨床意義臨床意義】 AAT缺陷與肺氣腫缺陷與肺氣腫 PiZZ型、型、PiSZ型個體常出現(xiàn)年青時肺氣型個體常出現(xiàn)年青時肺氣腫腫 低血漿低血漿AAT還可出現(xiàn)在胎兒呼吸窘迫綜

20、合還可出現(xiàn)在胎兒呼吸窘迫綜合征征 AAT缺陷與肝?。喝毕菖c肝?。?新生兒新生兒PiZZ型和型和PiSZ型與其膽汁淤積、型與其膽汁淤積、肝硬化和肝細胞癌的發(fā)生有關(guān)肝硬化和肝細胞癌的發(fā)生有關(guān) PiZZ表型的某些成人也會發(fā)生肝損害表型的某些成人也會發(fā)生肝損害AATAAT的檢測的檢測 血清蛋白電泳血清蛋白電泳 單向擴散試驗單向擴散試驗 免疫散濁比濁免疫散濁比濁 免疫透射比濁法。免疫透射比濁法。 對于對于AATAAT降低者可進一步采用等電聚焦電降低者可進一步采用等電聚焦電泳或分子生物學方法進行泳或分子生物學方法進行AATAAT表型分析。表型分析。（五）（五）1 1- -酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAA

21、G） 181181個氨基酸殘基組成個氨基酸殘基組成 分子量約分子量約40kD40kD 屬血漿中含糖量最高（達屬血漿中含糖量最高（達45%45%）、酸性最強）、酸性最強的糖蛋白的糖蛋白 pIpI為為 典型的急性時相反應(yīng)蛋白典型的急性時相反應(yīng)蛋白 主要在肝臟產(chǎn)生主要在肝臟產(chǎn)生, , 某些腫瘤組織也可產(chǎn)生某些腫瘤組織也可產(chǎn)生 可以結(jié)合許多藥物和激素可以結(jié)合許多藥物和激素2 2臨床意義臨床意義目前主要作為急性時相反應(yīng)指標：在風濕病、惡性腫目前主要作為急性時相反應(yīng)指標：在風濕病、惡性腫瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時 48h48h后濃度迅速后濃度迅速增高增高3 35 5天時出

22、現(xiàn)高峰，天時出現(xiàn)高峰，一般增加一般增加3 34 4倍。倍。AAGAAG增高增高是活動性潰瘍性結(jié)腸炎最可靠的指標之一。是活動性潰瘍性結(jié)腸炎最可靠的指標之一。nAAGAAG增高：糖皮質(zhì)激素增加，包括內(nèi)源性的庫欣綜合增高：糖皮質(zhì)激素增加，包括內(nèi)源性的庫欣綜合征和外源性強的松、地塞米松等藥物治療時，可引征和外源性強的松、地塞米松等藥物治療時，可引起起AAGAAG升高。升高。nAAGAAG降低：營養(yǎng)不良、嚴重肝損害、腎病綜合征以及降低：營養(yǎng)不良、嚴重肝損害、腎病綜合征以及胃腸道疾病致蛋白嚴重丟失等情況下胃腸道疾病致蛋白嚴重丟失等情況下AAGAAG降低。此外降低。此外雌激素可使雌激素可使AAGAAG降低。

23、降低。3 31 1- -酸性糖蛋白的檢測酸性糖蛋白的檢測 n過氯酸和磷鎢酸分級沉淀過氯酸和磷鎢酸分級沉淀AAGAAG后，測定蛋白質(zhì)或含后，測定蛋白質(zhì)或含糖量再計算之。糖量再計算之。n免疫擴散免疫擴散n免疫比濁法免疫比濁法（五）結(jié)合珠蛋白（五）結(jié)合珠蛋白 （haptoglobinhaptoglobin，HpHp） 一種急性時相蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白一種急性時相蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白 在電泳中位于在電泳中位于2 2區(qū)帶區(qū)帶1 1性質(zhì)與遺傳表型性質(zhì)與遺傳表型2 2功能功能 運輸血管內(nèi)游離的血紅蛋白運輸血管內(nèi)游離的血紅蛋白(Hb)(Hb)到網(wǎng)到網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞降解，狀內(nèi)皮細胞降解，每分子每分子HpHp結(jié)合兩分子結(jié)合兩分子

24、Hb,Hb, 防止防止HbHb從腎臟丟失而為機體有效地保留鐵從腎臟丟失而為機體有效地保留鐵, ,并能避免并能避免HbHb對腎臟的損傷。對腎臟的損傷。 Hp-HbHp-Hb復(fù)合物不可逆，不能被重復(fù)合物不可逆，不能被重新被利用，溶血后其含量急劇降低，血漿新被利用，溶血后其含量急劇降低，血漿HpHp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。3 3臨床意義臨床意義 nHpHp濃度下降見于：濃度下降見于： 溶血性疾病如溶血性貧血、輸血反應(yīng)、瘧疾。溶血性疾病如溶血性貧血、輸血反應(yīng)、瘧疾。HpHp參考值范圍較寬，須連續(xù)觀察以監(jiān)測溶血是否處參考值范圍較寬，須連續(xù)觀察以監(jiān)測溶血是否處于進行狀態(tài)。于

25、進行狀態(tài)。 對于溶血性疾病合適的組合檢測項目包括血漿對于溶血性疾病合適的組合檢測項目包括血漿HpHp、LDLD和游離和游離HbHb。血管外溶血不會使。血管外溶血不會使HpHp發(fā)生變化。發(fā)生變化。 嚴重肝病患者，其嚴重肝病患者，其HpHp合成減少。合成減少。nHpHp濃度升高見于：濃度升高見于： 屬急性時相反應(yīng)蛋白，當燒傷和腎病綜合征情況屬急性時相反應(yīng)蛋白，當燒傷和腎病綜合征情況下，血下，血HpHp常明顯升高。常明顯升高。4 4HpHp的檢測的檢測 n放射免疫擴散法放射免疫擴散法n免疫比濁法免疫比濁法定量檢測定量檢測HpHp亞型亞型n聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳n等電聚焦電泳等電聚焦電泳

26、（六）（六）2 2- -巨球蛋白巨球蛋白（2 2-macroglobulin -macroglobulin ，2 2-MG-MG或或AMGAMG）n血漿中分子量最大的糖蛋白，約為血漿中分子量最大的糖蛋白，約為720kD720kD，含糖量約，含糖量約8%8%。n由肝細胞、單核細胞和星形細胞合成由肝細胞、單核細胞和星形細胞合成n半壽期約半壽期約5d5dn包括補體包括補體C3C3和和C4C4在內(nèi)的一組血漿蛋白的主要成員，為在內(nèi)的一組血漿蛋白的主要成員，為硫酯鍵血漿蛋白家族。硫酯鍵血漿蛋白家族。n主要特性是能與多種離子和分子結(jié)合，特別是能與蛋主要特性是能與多種離子和分子結(jié)合，特別是能與蛋白水解酶結(jié)合而

27、抑制酶的活性白水解酶結(jié)合而抑制酶的活性n是主要的蛋白酶抑制劑，可選擇地保護某些蛋白酶活是主要的蛋白酶抑制劑，可選擇地保護某些蛋白酶活性性1 1性質(zhì)性質(zhì)2 2臨床意義臨床意義 不屬于急性時相反應(yīng)蛋白。不屬于急性時相反應(yīng)蛋白。 低清蛋白血癥，尤其是腎病綜合征時，低清蛋白血癥，尤其是腎病綜合征時，2 2-MG-MG含量可顯著增高含量可顯著增高 2-MG2-MG水平降低見于：嚴重的急性胰腺炎水平降低見于：嚴重的急性胰腺炎和進展型前列腺癌治療前和進展型前列腺癌治療前免疫比濁法免疫比濁法3 32 2-MG-MG的檢測方法的檢測方法（七）銅藍蛋白（七）銅藍蛋白（ceruloplasminceruloplas

28、min，CpCp） 含銅的含銅的2 2球蛋白，肝實質(zhì)性細胞合成球蛋白，肝實質(zhì)性細胞合成 由由10461046個氨基酸殘基組成個氨基酸殘基組成 含糖約含糖約8%-9.5%8%-9.5% 每分子結(jié)合每分子結(jié)合6 68 8個銅原子，由于含銅而呈個銅原子，由于含銅而呈藍色藍色 95%95%的血清銅存在于的血清銅存在于CpCp中，其余中，其余5%5%呈可擴呈可擴散狀態(tài)散狀態(tài) 血循環(huán)中的血循環(huán)中的CpCp可認為是銅的無毒性代謝庫可認為是銅的無毒性代謝庫 具有抑制膜脂質(zhì)氧化作用具有抑制膜脂質(zhì)氧化作用1 1性質(zhì)性質(zhì)（七）銅藍蛋白（七）銅藍蛋白（ceruloplasminceruloplasmin，CpCp）

29、血漿銅的轉(zhuǎn)運血漿銅的轉(zhuǎn)運 具有鐵氧化酶作用，將具有鐵氧化酶作用，將FeFe2+2+氧化為氧化為FeFe3+3+，調(diào)節(jié)鐵的運輸、利用和氧化還原反應(yīng)調(diào)節(jié)鐵的運輸、利用和氧化還原反應(yīng) 抗氧化作用，抑制膜脂質(zhì)被金屬離子的過抗氧化作用，抑制膜脂質(zhì)被金屬離子的過氧化作用氧化作用2 2功能功能 CpCp濃度減少有關(guān)的疾?。喊舛葴p少有關(guān)的疾?。喊╓ilsonWilson病、病、營養(yǎng)性銅缺乏和營養(yǎng)性銅缺乏和MenkesMenkes?。ㄟz傳性銅吸收?。ㄟz傳性銅吸收不良）。不良）。 屬于急性時相反應(yīng)蛋白：在妊娠、感染、屬于急性時相反應(yīng)蛋白：在妊娠、感染、創(chuàng)傷和腫瘤時血漿濃度增加。但在營養(yǎng)不創(chuàng)傷和腫瘤時血漿濃度

30、增加。但在營養(yǎng)不良、嚴重肝病及腎病綜合征時往往下降。良、嚴重肝病及腎病綜合征時往往下降。3 3臨床意義臨床意義 一種常染色體隱性遺傳病一種常染色體隱性遺傳病 因血漿因血漿CpCp減少，血漿游離銅增加，銅沉積在減少，血漿游離銅增加，銅沉積在肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節(jié)的豆狀核肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節(jié)的豆狀核導(dǎo)致豆狀核變性，該病又稱為肝豆狀核變性導(dǎo)致豆狀核變性，該病又稱為肝豆狀核變性 該病的原因不全是該病的原因不全是CpCp減少減少 大部分患者可有肝功損害并伴神經(jīng)系統(tǒng)癥狀大部分患者可有肝功損害并伴神經(jīng)系統(tǒng)癥狀 不及時治療，此病是進行性和致命的，宜及不及時治療，此病是進行性和致命的，宜及時診

31、斷時診斷 可用驅(qū)銅的方法進行治療可用驅(qū)銅的方法進行治療 WilsonWilson病診斷標準：病診斷標準：CpCp下降，血清總銅濃度下降，血清總銅濃度降低、游離銅增加和尿銅排泄增加降低、游離銅增加和尿銅排泄增加作為作為WilsonWilson病的輔助診斷指標病的輔助診斷指標n放射免疫擴散法放射免疫擴散法n散射免疫比濁法散射免疫比濁法n透射免疫比濁法透射免疫比濁法 4. Cp4. Cp的檢測的檢測 （八）轉(zhuǎn)鐵蛋白（八）轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，TRF）n分子量約分子量約n為單鏈糖蛋白，含糖量約為單鏈糖蛋白，含糖量約6%6%n電泳位置在電泳位置在區(qū)帶區(qū)帶n等電點等電點n主要由肝細胞合成主要由

32、肝細胞合成n半壽期為半壽期為n能可逆地結(jié)合多價陽離子，每分子能可逆地結(jié)合多價陽離子，每分子TRFTRF可結(jié)合可結(jié)合2 2個個FeFe3+3+n血漿中血漿中TRFTRF的濃度受食物鐵供應(yīng)的影響的濃度受食物鐵供應(yīng)的影響n 1 1性質(zhì)性質(zhì) 從小腸進入血液的從小腸進入血液的Fe2+被被Cp氧化為氧化為Fe3+， 再被再被TRF的載體蛋白結(jié)合。的載體蛋白結(jié)合。 每種細胞表面都有每種細胞表面都有TRF受體，對受體，對TRF-Fe3+ 復(fù)合物比對復(fù)合物比對TRF的載體蛋白親和力高得多的載體蛋白親和力高得多 TRF-Fe3+將大部分將大部分Fe3+運輸?shù)焦撬韬铣蛇\輸?shù)焦撬韬铣蒆b小部分則運輸?shù)礁鹘M織細胞，形成

33、鐵蛋白小部分則運輸?shù)礁鹘M織細胞，形成鐵蛋白及合成肌紅蛋白、細胞色素等及合成肌紅蛋白、細胞色素等2 2臨床意義臨床意義n貧血的鑒別診斷和鐵缺乏的治療監(jiān)測：貧血的鑒別診斷和鐵缺乏的治療監(jiān)測： 缺鐵性低血色素貧血時，缺鐵性低血色素貧血時，TRFTRF代償性合成增加；代償性合成增加；血漿鐵低，結(jié)合到血漿鐵低，結(jié)合到TRFTRF的鐵少，鐵飽和度下降的鐵少，鐵飽和度下降（正常參考值為（正常參考值為30303838） 再生障礙性貧血，血漿再生障礙性貧血，血漿TRFTRF正?；虻拖抡；虻拖录t細胞對鐵的利用障礙，使鐵飽和度增高紅細胞對鐵的利用障礙，使鐵飽和度增高3 3檢測檢測多采用免疫比濁測定法多采用免疫比濁

34、測定法總鐵結(jié)合力總鐵結(jié)合力(total iron binding capacity,TIBC)血漿蛋白質(zhì)對鐵的結(jié)合容量血漿蛋白質(zhì)對鐵的結(jié)合容量(主要是主要是TRF對鐵結(jié)對鐵結(jié)合容量合容量)，單位與血清鐵相同。，單位與血清鐵相同。 鐵飽和度（）血清鐵鐵飽和度（）血清鐵/TIBC兩者尤其是后者對貧血診斷和鑒別診斷更好兩者尤其是后者對貧血診斷和鑒別診斷更好（十）（十） 微球蛋白微球蛋白（ 2 microglobulin,2 M,BMG 位于位于 2區(qū)帶，單鏈多肽區(qū)帶，單鏈多肽 存在于各種有核細胞表面，僅 是HLA的輕鏈或鏈，可從細胞表面尤其是淋巴細胞和腫瘤細胞表面脫落到血漿中 從腎小球濾過，再被腎近

35、端小管重吸收和分解【臨床意義臨床意義】 血漿血漿BMG增高：增高：見于腎衰竭、炎癥、腫瘤見于腎衰竭、炎癥、腫瘤尤其是與尤其是與B淋巴細胞相關(guān)的腫瘤淋巴細胞相關(guān)的腫瘤 尿液尿液BMG排泄量增加：排泄量增加：可反映腎小管功能損害可反映腎小管功能損害 由肝細胞合成的典型急性時相反應(yīng)蛋白由肝細胞合成的典型急性時相反應(yīng)蛋白 由由5 5個相同亞基非共價結(jié)合成盤形多聚體個相同亞基非共價結(jié)合成盤形多聚體 分子量為分子量為115kD115kD 電泳分布在電泳分布在區(qū)帶，有時可延伸到區(qū)帶，有時可延伸到 區(qū)帶區(qū)帶 在鈣離子存在下，結(jié)合多種細菌、真菌及原蟲等體內(nèi)的在鈣離子存在下，結(jié)合多種細菌、真菌及原蟲等體內(nèi)的多糖物

36、質(zhì)以及磷酸膽堿，卵磷脂和核酸多糖物質(zhì)以及磷酸膽堿，卵磷脂和核酸 在鈣離子缺乏情況下，結(jié)合多聚陽離子在鈣離子缺乏情況下，結(jié)合多聚陽離子 與抗體相似，可引發(fā)對入侵微生物對細胞的免疫調(diào)理作與抗體相似，可引發(fā)對入侵微生物對細胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用用和吞噬作用 可識別、結(jié)合從損傷組織中釋放的毒性物質(zhì)，然后解毒可識別、結(jié)合從損傷組織中釋放的毒性物質(zhì)，然后解毒或從血中清除或從血中清除 本身在發(fā)生調(diào)理作用后被分解本身在發(fā)生調(diào)理作用后被分解（九）（九）C-C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白(C-reactive protein(C-reactive protein，CRP)CRP)1 1性質(zhì)性質(zhì) 第一個被認識的急性時相反

37、應(yīng)蛋白，是急第一個被認識的急性時相反應(yīng)蛋白，是急性時相反應(yīng)的一個極靈敏指標，以健康人性時相反應(yīng)的一個極靈敏指標，以健康人群群CRPCRP的的95%95%參考上限判斷患者有無明顯的參考上限判斷患者有無明顯的感染性炎癥感染性炎癥 血漿中血漿中CRPCRP濃度在急性心肌梗死、創(chuàng)傷、濃度在急性心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術(shù)、腫瘤浸潤等發(fā)病感染、炎癥、外科手術(shù)、腫瘤浸潤等發(fā)病時迅速增高，心肌梗死后時迅速增高，心肌梗死后6-12h6-12h即升高，即升高，可達正常值可達正常值20002000倍。倍。 5mg/L作為明顯的炎癥信號作為明顯的炎癥信號 15mg/L為慢性低程度的炎癥或急性時為慢性低程度的炎癥或急性時相反應(yīng)始相反應(yīng)始2 2臨床意義臨床意義 CRPCRP是非特異性指標，主要用于結(jié)合臨床是非特異性指標，主要用于結(jié)合臨床監(jiān)測疾?。罕O(jiān)測疾病： 篩查微生物感染篩查微生物感染 評估炎癥性疾病的活動度和療效監(jiān)評估炎癥性疾病的活動度和療效監(jiān)控控 識別系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病和外