腫瘤免疫治療思考和對(duì)策

1、關(guān)于腫瘤免疫治療思考和對(duì)策第一頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片第二頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片第三頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片第四頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片第五頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片第六頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片第七頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片一、樹(shù)突狀細(xì)胞在腫瘤免疫中的應(yīng)用一、樹(shù)突狀細(xì)胞在腫瘤免疫中的應(yīng)用第八頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片z樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是機(jī)體內(nèi)最重要的一群抗原提呈細(xì)胞，是機(jī)體免疫應(yīng)答的有力啟動(dòng)者，以DC為物質(zhì)基礎(chǔ)的免疫療法是近年來(lái)新發(fā)展起來(lái)的一種新的生物治療手段。第九頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片DC激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的三個(gè)環(huán)節(jié)激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的三個(gè)環(huán)節(jié)z 1. 腫瘤特異性抗原的遞呈；腫瘤特異性抗原的遞呈；z2. 腫瘤特異性腫瘤特異性CTL細(xì)胞和

2、非特異性殺傷細(xì)胞的活細(xì)胞和非特異性殺傷細(xì)胞的活化；化；z 3. 效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制因素的識(shí)別。因素的識(shí)別。z主要目的是誘導(dǎo)患者機(jī)體產(chǎn)生腫瘤特異性的、主要目的是誘導(dǎo)患者機(jī)體產(chǎn)生腫瘤特異性的、持久的免疫應(yīng)答。持久的免疫應(yīng)答。第十頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片主要治療策略主要治療策略z（1）直接輸注）直接輸注DCs，以激發(fā)機(jī)體免疫功能的，以激發(fā)機(jī)體免疫功能的主動(dòng)免疫；主動(dòng)免疫；z（2）以經(jīng)自體）以經(jīng)自體DCs體外擴(kuò)增、激活的體外擴(kuò)增、激活的T淋巴淋巴細(xì)胞（細(xì)胞（CTL）為物質(zhì)基礎(chǔ)的過(guò)繼免疫療法，）為物質(zhì)基礎(chǔ)的過(guò)繼免疫療法，使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗

3、腫瘤免疫效使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗腫瘤免疫效應(yīng)。應(yīng)。第十一頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片 3.DC體外擴(kuò)增的方法z DC 在組織中含量甚微，細(xì)胞表面缺乏特征性的標(biāo)志，不易與其它細(xì)胞分離。細(xì)胞來(lái)源的困難一度限制了對(duì)DC生物學(xué)特性等方面的深入研究。z 在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)治療時(shí)使用的DC可能并不完全成熟，相當(dāng)一部分回輸?shù)腄C是非功能性的幼稚DC，從而大大降低了治療效果；而如果僅僅應(yīng)用未成熟的DC往往只能導(dǎo)致機(jī)體的免疫耐受。 國(guó)內(nèi)外許多實(shí)驗(yàn)室都致力于研究通過(guò)體外培養(yǎng)獲得大量高純度功能性成熟DC的方法第十二頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片 z 目前用于臨床和實(shí)驗(yàn)研究的DC 大多是通過(guò)體外分離DC的前體細(xì)胞，在含有有關(guān)細(xì)胞因子的培養(yǎng)

4、體系中誘導(dǎo)獲得。z 骨髓、臍血、外周血CD34+細(xì)胞或外周血單個(gè)核細(xì)胞均可作為體外培養(yǎng)DC的來(lái)源。z 適當(dāng)?shù)募?xì)胞因子配伍和應(yīng)用順序?qū)C的培養(yǎng)具有重要作用。 第十三頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片腫瘤抗原特異性腫瘤抗原特異性DCs的制備的制備z細(xì)胞性腫瘤抗原體外沖擊DC：包括采用滅活的腫瘤細(xì)胞或凋亡的腫瘤細(xì)胞負(fù)載DC; z合成的腫瘤細(xì)胞抗原或抗原肽體外沖擊DC;z腫瘤抗原提取物負(fù)載DC：目前常用的提取物包括腫瘤細(xì)胞碎片、酸性洗脫肽及mRNA抽提物; z 基因修飾的DC：包括腫瘤抗原編碼的基因及某些細(xì)胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通過(guò)病毒導(dǎo)入DC。 第十四頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片二、細(xì)胞毒性二、細(xì)胞

5、毒性T細(xì)胞在腫瘤免疫中的運(yùn)用細(xì)胞在腫瘤免疫中的運(yùn)用第十五頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片zCTL抗凋亡能力測(cè)定 FLIP、Bcl-2、Baxz51Cr釋放試驗(yàn) 對(duì)相應(yīng)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用 對(duì)自體PBMC的殺傷作用zT細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)第十六頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片A病人選擇病人選擇z 已經(jīng)病理組織學(xué)確診為非小細(xì)胞肺癌z 已失去手術(shù)機(jī)會(huì)或不愿接受手術(shù)治療z 住院病人z 臨床分期（TNM）：期及期以上 z 年齡65歲z 預(yù)計(jì)生存期1.0年z 生存質(zhì)量評(píng)分60分z 心、肝、腎等臟器功能基本正常z 知情同意的志愿受試者第十七頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片B腫瘤治療腫瘤治療za）將病人隨機(jī)分為A、B、C三組，zA組：對(duì)照組，行常規(guī)的正規(guī)放療或

6、化療；zB組：試驗(yàn)組，正規(guī)化療+腫瘤抗原特異性自體T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療；zC組：試驗(yàn)組，正規(guī)放療+腫瘤抗原特異性自體T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療；zb) 腫瘤抗原特異性CTL輸注程序：在減瘤治療后，分3次回輸體外擴(kuò)增的自體T淋巴細(xì)胞（1109/次），即在最大程度降低機(jī)體的腫瘤負(fù)荷后，重建患者的細(xì)胞免疫功能。第十八頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片C療效評(píng)價(jià)療效評(píng)價(jià)z a) 二個(gè)療程后，按WHO的判定標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)定療效z l CR（完全緩解）z l PR（部分緩解）z l MR（穩(wěn)定）z l NC或PD（無(wú)變化或進(jìn)展）z b) 生存質(zhì)量評(píng)分（Karnofsky的標(biāo)準(zhǔn)）z 根據(jù)腫瘤患者治療前后的精神、睡眠、食欲、疲乏、疼痛、家庭

7、理解與配合、同事的理解與配合、自身對(duì)癌癥的認(rèn)識(shí)、對(duì)治療的態(tài)度、行為狀態(tài)、日常活動(dòng)z 情況、面部的表情等進(jìn)行等級(jí)綜合評(píng)分。z c） 臨床癥狀體征改變的分析。z d） 生存期、中位生存期的分析。z e） 免疫功能狀況的分析z 采用免疫熒光標(biāo)記法分析患者治療前后的T細(xì)胞及其亞群功能變化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-+、CD8+-IFN-+、 CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L） z 采用ELISA法分析患者治療前后的血清細(xì)胞因子水平變化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL

8、-12、IFN-）z 患者治療前后自體T淋巴細(xì)胞對(duì)相應(yīng)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)測(cè)定（51Cr釋放試驗(yàn)）z 肽-MHC四聚體的測(cè)定第十九頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片三、免疫分子的分析及臨床意義三、免疫分子的分析及臨床意義第二十頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片Dual Parameter HistogramsFSC SizeSSCgranularityLymphsMonosGrans25第二十一頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片CD3CD4CD3CD8HumanLymphocytesMouse-anti-CD4Mouse-anti-CD3Mouse-anti-CD8CD3CD4CD3CD8Immunophenotyping第二十二頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片抗體的基本結(jié)抗體的基本結(jié)構(gòu)是一個(gè)構(gòu)是一個(gè)Y Y型的多型的多肽鏈，由兩條完肽鏈，由兩條完全相同的重鏈和全相同的重鏈和輕鏈組成。輕鏈組成。第二十三頁(yè)，共25頁(yè)幻燈片抗體抗體（Antibody,AbAntibody,Ab）是血液和組織液是血液和組織液中的一類(lèi)糖蛋白，以中的一類(lèi)糖蛋白，以球蛋白的形式存在球蛋白的形式存在血清中，也是血清中，也是B B淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答效分化為漿細(xì)胞所