乳豬料用原料檢測方法

1、第一部分:乳豬料用原料檢測方法 山東六和集團技術部編輯 2006-01-05目 錄1: 飼用玉米脂肪酸值的測定2: 油脂碘價的測定3: 油脂的酸價及過氧化值的測定4: 魚粉中酸價的測定5: 乳清粉中乳糖的測定.6: 油脂TBA值的測定方法.7: 嘔吐毒素(DON)的檢測ELISA法.8: 黃曲霉毒素的測定ELISA法.9: 魚粉中組胺的測定.10:揮發(fā)性鹽基氮的測定(VBN).11:飼料中免疫球蛋白lgG的測定.12:玉米副產品中二氧化硫殘留量的測定.13:魚粉中脲醛聚合物的鑒別.14:谷物中淀粉含量的測定.15:次粉中泥沙及礦物質的測定.16:鏡檢過程中的定性實驗(魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、

2、豆類蛋白粉、大米蛋白粉)17:淀粉糊化度分析方法.18:大豆制品中尿素酶活性分析方法(PH增值法).19:油脂定性試驗.20:乳糖測定附表.一.飼用玉米脂肪酸值的測定1.試劑：1.1 KOH乙醇標準溶液C(KOH)=0.01mol/L取KOH溶液C(KOH)=0.1mol/L 100ml，用乙醇（95%）稀釋到1 升，然后按GB601標定。1.2 酚酞指示劑：2g/l乙醇溶液1.3 無水乙醇2 步驟：將平均樣品按四分法制得約80g樣品粉碎，過0.45mm孔徑篩（40目），立即稱取10g樣品（精確到0.01g），于150ml具塞三角瓶內，加50ml無水乙醇，加塞振動10分鐘，過濾，并用無水乙醇洗

3、3次，每次15ml，然后加酚酞3滴，用0.01mol/lKOH乙醇標準溶液滴定到溶液呈微紅色，同時取90ml乙醇作空白。3計算：脂肪酸值(mgKOH/100g)按下式計算（V-V0）×C×56.1脂肪酸值= ×100 m 式中：V-樣品耗堿標準溶液的體積，mlV0空白耗堿標準溶液的體積，mlC-KOH標準滴定溶液的濃度，mol/lm-樣品質量,g二、油脂碘價的測定1 試劑與溶液1.1 韋氏液的配制：稱取三氯化碘7.9g和純碘8.7g分別溶于冰乙酸中，合并兩液，再用冰乙酸稀釋至1L，貯于棕色瓶內。1.2 KI溶液 150g/L1.3硫代硫酸鈉標液滴定溶液C（NaS2

4、O3）=0.1mol/L）1.4 三氯甲烷CHCl3 AR2.步驟：按附表稱取試樣（準確至0.0002g）于干燥的碘量瓶中，加20ml CHCl3溶解試樣，加25.00ml韋氏液立即加塞，以KI溶液封口，搖勻后，在20±5條件下，置黑暗處30min（碘價在130以上時放置1h），到時立即加入KI溶液20ml和水100ml,用C（NaS2O3）=0.1mol/L）硫代硫酸鈉標液滴定至淺黃色時，加入1ml 5g/L淀粉指示劑，滴定至蘭色消失。同樣條件做空白兩個，取平均值。結果的表示和計算：碘價按下式計算碘價=×100 式中：V1試樣消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積；mlV2空白消耗

5、硫代硫酸鈉標準溶液的體積；mlC-硫代硫酸鈉標準溶液的濃度；mol/Lm-試樣的質量；g0.1269與1.00ml硫代硫酸鈉標準溶液(C（NaS2O3）=1.000mol/L)的相當的以克表示的碘的質量。附表：碘價數值與試樣用量碘價試樣用量范圍（g）碘價試樣用量范圍（g）200.84611.58651200.21150.2644400.63460.79351400.18130.2266600.42310.52881600.15870.1983800.31730.39661800.14100.17621000.25380.31732000.12690.1586三、油脂的酸價及過氧化值的測定一.油

6、脂的酸價的測定：1 試劑與溶液1.1乙醚-乙醇溶液（2+1）配制時加入酚酞，并用堿調至中性1.2 NaOH標準滴定溶液C（NaOH）=0.1mol/L1.3酚酞指示劑 1g/L2 步驟將需用的錐形瓶烘干；分別移取油脂上層、中層、下層液各12ml置于烘干的錐形瓶中精密稱量。加入50ml乙醚-乙醇溶液使其溶解，可以微熱，加入酚酞指示劑3-5滴,然后用NaOH標準溶液進行滴定至粉紅色，且1分鐘不褪色為終點。同時做空白計算：酸價(mgKOH/g)按下式計算酸價=C×(V-V0 )×56.1/m式中： CNaOH標準溶液的濃度；mol/LV消耗標準溶液的體積；mlm樣品的重量；g 5

7、6.1與1.00mlC（NaOH）=1.000mol/L相當的以mg表示的KOH的質量。說明： 酸價是指中和1.0g油脂所含游離脂肪酸所需KOH的毫克數,同一種油若酸價高，表明油脂因水解而產生更多的游離脂肪酸。二.油脂的過氧化值的測定1.原理：油脂氧化過程產生過氧化物，與KI作用，生成游離碘，以淀粉作指示劑，用硫代硫酸鈉標準溶液滴定。2試劑與溶液2.1三氯甲烷冰乙酸的混合液（4+6）2.2硫代硫酸鈉標準滴定溶液C（Na2S2O3）=0.01mol/L2.3淀粉指示液10g/L2.4碘化鉀KI AR3 步驟：稱取2- 3g(準確到0.0002g)混勻的樣品，置于250ml烘干的碘量瓶中，加入30

8、ml三氯甲烷冰乙酸（4+6）的混合液，使樣品完全溶解，加入約2g的碘化鉀，緊密塞好瓶塞，并輕輕振搖30秒鐘，然后在暗處放置3分鐘，取出加100ml水，搖勻，立即用的硫代硫酸鈉標準溶(C（Na2S2O3）=0.01mol/L)液滴定至淡黃色時，加1ml淀粉指示液（10g/L），繼續(xù)滴定至蘭色消失為終點，同樣條件做空白。4計算：過氧化值（I2%）按下式計算過氧化值（I2%）=（V1V0）×C×0.1269×100/m式中： V1-樣品消耗硫代硫酸鈉的體積；mlV0-空白消耗硫代硫酸鈉的體積；mlC-硫代硫酸鈉標準溶液的濃度；mol/Lm-樣品的重量；g 0.1269與

9、1.00mlC（Na2S2O3）=1.000mol/L相當的以克表的I2的質量 g5 過氧化值二種單位的換算:meq/kg = I2 % * 78.9四、魚粉中酸價的測定1 試劑與溶液1.1乙醚-乙醇溶液（2+1）配制時加入酚酞，并用堿調至中性1.2 NaOH標準滴定溶液C（NaOH）=0.05mol/L1.3酚酞指示劑 1g/L2.步驟 稱取23g（準確到0.0002g）魚粉于干燥帶塞的三角瓶中，加40ml乙醚與乙醇（2+1）混合溶液，在振蕩器上振搖30min，干過濾于150ml三角瓶中，并用少量乙醚乙醇溶液洗滌三角瓶三次，加3滴的酚酞，用氫氧化鈉標準溶液C（NaOH）=0.05mol/L滴

10、定至粉紅色，半分鐘內不褪色為終點，同樣條件做空白。3.結果的表示和計算：酸價（mgKOH/g）按下式計算酸價（mgKOH/g）= 式中：CNaOH標準滴定溶液的濃度；mol/LV魚粉消耗標準溶液的體積；mlV0空白消耗標準溶液的體積；mlm魚粉樣品的質量；g56.1與1.00mlNaOH標準滴定溶液C（NaOH）=1.000mol/L相當的以mg表示的KOH的質量。mg五、乳清粉中乳糖的測定1 試劑與溶液1.1酒石酸銅甲液：34.639gCuSO4溶于水，加入0.5ml濃H2SO4，稀釋到500ml。 酒石酸銅乙液：173g酒石酸鉀鈉，加50gNaOH，稀釋到500ml。1.2 氫氧化鈉溶液c

11、(NaOH)= 1mol/L1.3硫酸鐵溶液 50g/L1.4高錳酸鉀標準滴定溶液c（1/5 KMnO4）=0.1mol/L2 步驟：稱2g樣品（準確到0.0002g）于200ml燒杯中，加50ml水，電爐加熱到80，加酒石酸銅甲液10ml，加NaOH（1mol/L）5ml，攪拌后放置到室溫，用水定容于250ml容量瓶中，搖勻，靜止1h后干過濾。吸取濾液25.00ml于三角瓶中，加25ml酒石酸銅甲液，再加25ml酒石酸銅乙液，在電爐上加熱并煮沸2min（要保證在3min內煮沸），取下過濾，并用水洗滌沉淀45次，之后將濾紙及沉淀物（Cu2O）一起放入三角瓶中，加入硫酸鐵（50g/L）25ml，

12、再加25ml水，用玻璃棒攪拌并微熱到看不到Cu2O的紅色為止，然后用高錳酸鉀標準滴定溶液(c（1/5 KMnO4）=0.1mol/L)的標準溶液滴定到呈微紅色為終點。同樣條件做空白3.結果的表示和計算：乳糖含量按下式計算Cu2O=（V-V0）×C×71.54由Cu2O的質量查表求乳糖的質量m乳：樣品中乳糖的含量:乳糖%=m乳/m樣×100式中： m乳樣品中乳糖的質量；gm樣-樣品的質量；V-樣品消耗KMnO4的體積；mlV0-空白消耗KMnO4的體積；ml71.54常數；C-KMnO4標準溶液的濃度，mol/L六、油脂TBA值的測定方法原理：油脂受到光、熱、空氣中

13、氧的作用，發(fā)生酸敗反應，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產物的一種，它能與硫代巴比妥酸(TBA)作用生成粉紅色化合物，在532nm波長處有吸收高峰，利用此性質即能測出丙二醛含量，從而推導出油脂酸敗的程度。1 試劑2.1硫代巴比妥酸(TBA)水溶液：準確稱取TBA 0.288g溶于水中，并稀釋至100ml（如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清，然后稀釋至100ml），相當于0.02mol/L；2.2 三氯乙酸混合液：準確稱取三氯乙酸（分析純）7.5g及 0.1g EDTA，用水溶解，稀釋至100.00ml；2.3 氯仿（分析純）；2.4 丙二醛標準溶液：稱取0.315g 1，1，3，3-四

14、乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000.00ml，此溶液每ml相當于丙二醛100g，置于冰箱內保存。準確吸取10ml，稀釋至100.00ml，此溶液每ml相當于丙二醛10微克(g)，備用。2 操作步驟3.1標準曲線的繪制準確吸取每ml相當于丙二醛10g的標準溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中，加水至總體積為5ml，加入5ml TBA溶液，然后按樣品測定步驟進行，測得光密度繪制標準曲線。3.2樣品測定：準確稱取融化均勻的油脂樣品5.0g，置于100ml具塞三角瓶內，加入50.0ml三氯乙酸混合液，振搖半小時（保持油脂融溶狀態(tài)，如冷結可在70水浴上略微加熱使之

15、融化后繼續(xù)振搖）用雙層濾紙過濾，除去油脂。濾液重復用雙層濾紙過濾一次。準確移取上述濾液5.0ml置于25ml比色管內，加入5.0 mlTBA溶液，混勻，加塞，置于90水浴內保溫40min，取出，冷卻1h，移入小試管內，離心5min，上清液傾入25ml納氏比色管中，加入5.0ml氯仿，搖勻，靜置，分層，吸出上清液于532nm波長比色，對照標準曲線得到微克數（同時作空白試驗）。3 計算丙二醛含量（mg/kg）按下式計算 丙二醛含量（mg/kg）=式中:C-從標準曲線查得丙二醛的微克數(ug) m-樣品質量（g）七、嘔吐毒素(DON)的檢測ELISA法測試前請仔細閱讀本說明在28冷藏不要凍結1.簡介

16、 DON毒素脫氧瓜萎鐮菌醇（DON，）是單端孢菌素烯烴中的一種，它通常是由生長在谷類物品（如小麥、玉米、大麥和秣草）霉菌鐮紅菌素生成的。脫氧瓜萎鐮菌醇的毒性效應包括：嘔吐、不想進食、胃腸炎、腹瀉、免疫抑制和血液病。研究表明豬對脫氧瓜萎鐮菌醇很敏感。當脫氧瓜萎鐮菌醇含量1ppm時，它們就拒絕進食。其毒性也會對其他物種產生毒性效應，各種物種對脫氧瓜萎鐮菌醇的敏感性各不相同。研究表明脫氧瓜萎鐮菌醇會使已加工食物發(fā)生問題，包括使可吃的谷類制品產生臭味、對生面團質量產生負面影響。因此，精確測定可能含有脫氧瓜萎鐮菌醇的食物和食品就現得十分重要。FDA（美國食品和藥品管理局）已經制定了脫氧瓜萎鐮菌醇含量的強

17、制標準。美國食品藥物管理局已經頒布的DON毒素建議限量如下：適用對象限量物質人1 ppm麥制品(面粉、麩和胚芽)反芻動物牛肉飼養(yǎng)的牛和雞10 ppm 在<50%的食入量(全食入量時為5ppm)所有谷物及其副產品豬5 ppm 在<20%的食入量(全食入量時為1ppm)所有谷物及其副產品所有其它動物5 ppm 在<40%的食入量(全食入量時為2ppm)所有谷物及其副產品2.方法原理本測試盒的測試原理是一種競爭性的直接酶聯(lián)免疫吸附劑測試方法（ELISA），可準確檢測出樣品中ppm級的DON毒素。樣品和標準控制液中游離的DON毒素與軛合物中的DON毒素競爭抗體結合位置。清洗后，加入底

18、物，底物與軛合物反應出現蘭色，蘭色越深表明DON毒素越少。將其置于微型孔閱讀器中可讀出透光度，以控制標準液的透光度作標準曲線，將樣品的透光度與標準曲線比較計算出樣品中DON毒素的準確濃度。 3.貯存要求本試劑盒存放在28時，可以一直使用到標簽上注明的到期日期。4.試劑與儀器4.1已提供的材料1. 48個包被了抗體的孔。2. 48個紅色標記的混合孔。3. 5瓶1.5ml濃度為0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制標準液(黃色標簽) 。4. 1瓶DON毒素-HRP軛合物溶液(蘭色標簽)。5. 1瓶24ml底物溶液(綠色標簽)。4.2需要但未提供的材料1 提取材料：a. 蒸餾水或去離子水

19、。b. 100ml量筒c. 150ml的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗2. 粉碎機3. 稱量為525克的秤4. 帶450nm濾光片的微型孔閱讀器5. 200l移液器6. 200l吸咀7. 紙巾或等效的吸水材料8. 計時器9. 防水記號筆10. 洗瓶11. 移液器用的試劑槽12. 蒸餾水或去離子水13. C（1/2H2SO4）=1mol/L的硫酸終止液5.注意事項1. 本測試盒不使用時應在28下存放。2. 不要使用過期的測試盒。3. 不要把不同測試盒中的試劑混合使用。4. 遵守正確的移液技術，包括取液前先用該液潤洗一次。5. 放置時間與本說明不一致時，可能會出現錯誤的結果。

20、6. 測試盒應先恢復到室溫狀態(tài)(1830)后才開始使用。7. 避免測試盒在室溫下長時間放置。8. 不要使測試盒凍結。9. 待測樣品的pH值應為68。酸堿過大的樣品應進行調整。應將包括樣品提取液在內的所有廢液和實驗器皿進行處理（如同已被DON毒素污染一樣）。應始終穿戴手套和其它防護服。10. 為了避免交叉污染，每個樣品應使用清潔的吸咀和玻璃器皿，并在樣品之間徹底清洗所有的玻璃器皿。6.程序性的提示底物：底物隨時可用，底物為清亮的淺蘭色，如果變成了深蘭，則棄去。使用時，只倒出所需量到試劑槽中，未用完的不要再倒回試劑瓶中。不使用時應蓋住試劑槽，以避免光的照射。7.操作步驟7.1樣品制備和提取1.待測

21、樣品應按公認的采樣技術采集。樣品應磨碎并充分混合后再提取。測試前，將樣品在28存放。2.將30ml硫酸緩緩注入1000ml水中，冷卻搖勻，配成的硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L)終止液。3.取1份代表性樣品。研磨樣品至至少有75%的樣品通過20目的篩子，顆粒尺寸大約相當于細的速溶咖啡。4.將10克研磨過的樣品加入50ml 水或去離子水中，用手或震蕩器劇烈混合15分鐘。 5.將靜置2-3分鐘，使一些物質沉淀下來。6.用濾紙過濾出至少5ml的提取液。收集該濾液即為樣品的待測液。7.2測試程序測試前應將所有的試劑恢復至室溫（1830）。1.從箔包中取紅色標記的混合孔，放在孔架上。2.取同樣

22、數量的包被了抗體的孔。把暫不使用的孔放回到箔包中，并重新密封，以保護抗體。在帶子的一端標上“1”，然后放到孔架上，將有標記的一端放在左邊。不要在孔的里面和底部寫標記。3.在使用之前搖動試劑瓶，混合每種試劑。4.從蘭色標簽的瓶內吸取100l軛合物加到每個紅色標記的混合孔內。 5.每次使用新吸咀，吸取100l控制標準溶液和樣品液按下列順序加到紅色標記的混合孔內6 用移液器吸入、排出3次使孔內溶液徹底混合，吸取100l加到相應的包被了抗體的孔內，在平的表面上將板前后滑動確保充分混合1020秒鐘，不要濺出試劑，混合后于室溫下（1830）放置5分鐘。棄去紅色標記孔。7倒掉包被了抗體孔內的溶液。在每個孔內

23、加滿蒸餾水或去離子水，再倒出，如此重復5次，將板朝下，在吸水材料上拍擊以去除所有的水滴。8從綠色標簽試劑瓶中倒出所需量的試劑到綠色試劑槽中。9用移液器和新吸咀，吸取100l底物加到每個孔內，在平的表面上將板前后滑動確保充分混合1020秒鐘。10混合后放置2.5分鐘。11從試劑瓶中倒出所需量的硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L)終止液到試劑槽中。12吸取100l終止液加到每個孔內，在平的表面上將板前后滑動確保充分混合。13用干凈的布擦凈板底，將板置于微型孔閱讀器于450nm濾光片下讀數。由于氣泡會影響結果，應削除溶液中氣泡。應在加入紅色終止劑后20分鐘內完成讀數。14用Log/logit

24、軟件計算結果。8.特性參數檢出限：0.1 ppm(10次陰性樣品的平均值加2倍標準偏差)。定量檢測限：0.25 ppm(以標準曲線的最低濃度點表示)。定量范圍：0.25-2.5 ppm(大于2.5 ppm時,見樣品制備和提取程序)八、黃曲霉毒素的測定ELISA法測試前請仔細閱讀本說明在28冷藏不要凍結1.簡介 黃曲霉毒素黃曲霉毒素是一種劇毒且致癌的物質，它是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌A的某些菌株產生的。黃曲霉毒素有四種類型：B1，B2，G1和G2。黃曲霉毒素B1是毒性最大且最常有的。最容易產生黃曲霉毒素污染的物質是谷物、花生、棉子、高梁和大多數的樹果。動物食入過量黃曲霉毒素的影響從慢性健康直到死亡

25、，已經證明黃曲霉毒素能引起肝損壞或癌癥、降低奶和蛋的產出、免疫抑制和干擾再生效率。美國食品藥物管理局已經規(guī)定了食品和飼料中最大黃曲霉毒素限量。因此，準確測定黃曲霉毒素的含量，對于監(jiān)測可能發(fā)生黃曲霉毒素污染的食品和飼料的質量來說，是非常重要的。測試程序包括仔細的采樣、化學提取、衛(wèi)生學評價和定量分析。美國食品藥物管理局已經頒布的黃曲霉毒素限量如下：適用對象限量物質人20ppb除牛奶外的所有食品所有動物20ppb所有飼料（下列除外）除外：種牛，種豬，成熟的家禽100ppb谷物育肥期的豬（100磅）200ppb谷物育肥期的菜牛300ppb谷物育肥期的菜牛、豬、家禽300ppb棉籽粉2.方法原理本測試盒

26、的測試原理是一種競爭性的直接酶聯(lián)免疫吸附劑測試方法（ELISA），可準確檢測出樣品中ppb級的黃曲霉毒素。樣品和標準控制液中游離的黃曲霉毒素與軛合物中的黃曲霉毒素競爭抗體結合位置。清洗后，加入底物，底物與軛合物反應出現蘭色，蘭色越深表明黃曲霉毒素越少。將其置于微型孔閱讀器中可讀出透光度，以控制標準液的透光度作標準曲線，將樣品的透光度與標準曲線比較計算出樣品中黃曲霉毒素的準確濃度。 3.貯存要求本試劑盒存放在28時，可以一直使用到標簽上注明的到期日期。4.試劑與儀器4.1提供的材料4.1.1 48個包被了抗體的孔。4.1.2 48個紅色標記的混合孔。4.1.3 4瓶1.5ml濃度為0、5、15、

27、50ppb黃曲霉毒素控制標準液(黃色標簽)（甲醇溶液的處理，見注意事項）。4.1.4 1瓶7ml黃曲霉毒素-HRP軛合物溶液(蘭色標簽)。4.1.5 1瓶24mlK蘭底物溶液(綠色標簽)。4.1.6 1瓶32ml紅色 (紅色標簽)。4.2需要但未提供的材料4.2.1 提取材料：a. 70%甲醇溶液b. 100ml量筒c. 150ml的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗4.2.2 粉碎機4.2.3 稱量為525克的秤4.2.4 帶450nm濾光片的微型孔閱讀器4.2.5 200l移液器4.2.6 200l吸咀4.2.7 紙巾或等效的吸水材料4.2.8 計時器4.2.9 防水記號

28、筆4.2.10 洗瓶4.2.11 移液器用的試劑槽4.2.12 蒸餾水或去離子水4.2.13 硫酸終止液C（1/2H2SO4）=1mol/L5.注意事項5.1 甲醇易燃，其容器應密閉并遠離熱、火花、明火和煙。如果吞下或吸入蒸氣，它是有毒的。應避免與皮膚接觸。5.2 本測試盒不使用時應在28下存放。5.3 不要使用過期的測試盒。5.4 不要把不同測試盒中的試劑混合使用。5.5 遵守正確的移液技術，包括取液前先用該液潤洗一次。5.6 放置時間與本說明不一致時，可能會出現錯誤的結果。5.7 測試盒應先恢復到室溫狀態(tài)(1830)后才開始使用。5.8 避免測試盒在室溫下長時間放置。5.9 不要使測試盒凍

29、結。5.10應將包括樣品提取液在內的所有廢液和實驗器皿進行處理（如同已被黃曲霉毒素污染一樣）。應始終穿戴手套和其它防護服。5.11為了避免交叉污染，每個樣品應使用清潔的吸咀和玻璃器皿，并在樣品之間徹底清洗所有的玻璃器皿。5.12待測樣品的pH值應為68。酸堿過大的樣品應進行調整。關于pH值的調整，請與Neogen代表或技術服務部門聯(lián)系。6.程序性的提示K-蘭底物隨時可用，底物為清亮的淺蘭色，如果變成了深蘭，則棄去。使用時，只倒出所需量到試劑槽中，未用完的不要再倒回試劑瓶中。不使用時應蓋住試劑槽，以避免光的照射。7.操作步驟7.1樣品制備和提取待測樣品應按公認的采樣技術采集。樣品應磨碎并充分混合

30、后再提取。測試前，將樣品在28存放。按以下程序進行：1 將7份分析級甲醇與3份蒸餾水或去離子水混合配成70%的甲醇溶液。2 將30ml硫酸緩緩注入1000ml水中，冷卻搖勻，配成硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L) 的終止液。2 取1份代表性樣品。研磨樣品至至少有75%的樣品通過20目的篩子，顆粒尺寸大約相當于細的速溶咖啡。3 把5克研磨過的樣品加入到25ml 70%的甲醇中，然后用力搖動15分鐘。4 用濾紙過濾出至少5ml的提取液。該濾液即為樣品的待測液。5 該待測液即可用于測試。7.2測試程序測試前應將所有的試劑恢復至室溫（1830）。1.從箔包中取紅色標記混合孔，放在孔架上。2.

31、取同樣數量的包被了抗體的孔。把暫不使用的孔放回到箔包中，并重新密封，以保護抗體。3.在使用之前搖動試劑瓶，混合每種試劑。4.從蘭色標簽瓶內吸取100l軛合物加到每個紅色標記的混合孔內。棄去吸咀。5.每次使用新吸咀，吸取100l控制標準溶液和樣品液按下列順序加到紅色標記的混合孔內 6.用移液器吸入、排出3次使孔內溶液徹底混合，吸取100l加到相應的包被了抗體的孔內，在平的表面上將板前后滑動確保充分混合1020秒鐘，不要濺出試劑，混合后于室溫下（1830）放置2分鐘。7.倒掉包被了抗體孔內的溶液。在每個孔內加滿蒸餾水或去離子水，再倒掉，如此重復5次，將板朝下，在吸水材料上拍擊以去除所有的水滴。8.

32、從綠色試劑瓶中倒出所需量的試劑到試劑槽中。9.用移液器和新吸咀，吸取100l底物加到每個孔內，在平的表面上將板前后滑動確保充分混合1020秒鐘。10.混合后放置1.5分鐘。11.從試劑瓶中倒出所需量的硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L)終止液到試劑槽中。12.用移液器吸取100l終止液加到每個孔內，在平的表面上將板前后滑動確保充分混合。13.用干凈的布擦凈板底，將板置于微型孔閱讀器于450nm濾光片下讀數。由于氣泡會影響結果，應削除溶液中氣泡。應在加入終止液后20分鐘內完成讀數。14.用Log/logit軟件計算結果。8.特性參數檢出限：2ppb(10次陰性樣品的平均值加2倍標準偏差)

33、。定量檢測限：5ppb(以標準曲線的最低濃度點表示)。定量范圍：5-50 ppb(大于50 ppb時應稀釋)九、魚粉中組胺的測定 原理簡介:魚粉中組胺用三氯乙酸提取，之后調PH=9，將游離的組胺用正戊醇提取出，之后再用HCl反萃取，用偶氮試劑顯色。組胺+三氯乙酸鹽（溶于水）-PH=9-組胺（溶于正戊醇）-HCl-正戊醇（組胺溶于稀HCl）1試劑與溶液1.1偶氮試劑的配制甲液：稱取0.5g對硝基苯胺，加5ml鹽酸（1+1）溶解，再加水釋到200ml，置冰箱中（28度）保存。乙液：亞硝酸鈉溶液5g/l，臨用現配甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。1. 2三氯乙酸 100 g/L1.3氫氧化鈉

34、250g/L1.4鹽酸 1mol/L1.5正戊醇 分析純1. 6碳酸氫鈉溶液 50g/L1.7磷酸組胺（Sigma公司）2.步驟 2.1樣品處理 稱取1-3克魚粉于具塞三角瓶內，加入25.0ml三氯乙酸（100g/L）每隔30分鐘搖動一次，提取3小時，過濾，取濾液2.00ml或1.00ml于15ml試管內，加氫氧化鈉（250g/L）5滴，振蕩一下，再加5ml正戊醇振蕩2分鐘，靜止分層（如出現乳化現象可滴加2-3滴無水乙醇），用移液槍小心吸取上清液（正戊醇層）于50ml分液漏斗內，下層沉淀再下層沉淀再分別用正戊醇5ml、3ml、3ml反萃取3次。將正戊醇全部收集到50ml分液漏內,分別用鹽酸(1

35、mol/L)6 ml、6 ml、3 ml反萃取3次,收集水相（下層）于20ml刻度試管內，用水定容至刻度(20.00ml)，搖勻，吸取1.00ml（或2.00ml）鹽酸提取液于10 ml比色管中，加入碳酸氫鈉溶液（50g/L）3.0ml搖勻，振蕩下加入偶氮試劑3.0ml，用水定容到刻度，室溫下顯色10min，用1cm比色皿于480nm下測定吸光度。2.2標準曲線稱取磷酸組胺樣品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶內，用水溶解并定容到刻度，此液組胺含量為10ug/ml，分別取此標液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管內，各加鹽酸（1mol/

36、L）1.0ml，振蕩，用水定容到刻度，搖勻后放置10min（室溫下），用1cm比色皿于480nm下測吸光值。參比液：試劑空白3計算魚粉中組胺按下式計算公式：組胺（mg/100g）= C*100 (m/25.0)*(1.00/15.0)*1000實例：魚粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257標準曲線:A=0.012380*C+0.01310計算: C =(A-0.0131)/0.012380=19.70ug組胺=(19.70*100)/(2.3455/25)*(1.0/15)*1000=315mg/100g=3150ppm應用：進口白魚粉：組胺<10mg/100

37、g(1-5mg/100g)進口水產級蒸汽魚粉<100mg/100g(50mg/100g)優(yōu)質國產魚粉<150mg/100g(50-150mg/100g)新鮮度差的魚粉(國產,進口)組胺200340mg/100g用于乳豬料的魚粉 組胺<100mg/100g十、揮發(fā)性鹽基氮的測定(VBN)原理簡介:蛋白質分解時，氨基酸脫胺基生成氨，氨基酸脫羧基生成胺，氨與胺(揮發(fā)性的胺)在堿液(氧化鎂)中被蒸發(fā)出來，用硼酸吸收，用標準鹽酸反滴定，測出其含量。1試劑與溶液1.1氧化鎂溶液 10g/L2.步 驟稱取5-10g樣品于250ml具塞三角瓶內，加入100.0ml水，振蕩30min，過濾，取

38、慮液10.00ml，按粗蛋白蒸餾操作，但加入的堿為氧化鎂溶液（10g/L）7-10ml。3.計算：揮發(fā)性鹽基氮（VBN）（mg/100g）按下式計算VBN（mg/100g）= C（V-V0）*14/m*（10/100）*100實例:魚粉樣品8.6706g，VHCl=0.0200mol/L V=3.93ml V0=0.15ml VBN=0.0200*14* (3.93-0.15)/8.6706*(10/100)*100=122.1mg/100g應用：新鮮度好的魚粉VBN<100mg/100g（40-80 mg/100g） 新鮮度差的魚粉VBN>150mg/100g（180-350 m

39、g/100g）乳豬料魚粉VBN<100mg/100g十一、飼料中免疫球蛋白lgG的測定(高效液相色譜法)1 范圍本標準規(guī)定了用高效液相色譜法儀測定飼料中免疫球蛋白IgG含量的方法本標準適用配合飼料、濃縮飼料、含Ig的飼料原料（包括血漿蛋白粉、雞蛋粉等）中免疫球蛋白IgG的測定本方法檢出限：當取樣1g，稀釋至25ml，進樣量20ul，檢出濃度為0.2mg/ml2 原理根據高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接，在PH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。3 試劑除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑，水為去離子水或相當純度的水，應符合CB/T66

40、82三級用水的規(guī)定3.1磷酸二氫鉀3.2 磷酸氫二鉀3.3流動相A：PH6.5，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液3.4流動相B：PH2.5，0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液3.5 IgG儲備標準液：稱取IgG標準品（Sigma公司）0.0100g，用流動相A（3.3）溶解并定容至10ml，搖勻，濃度為1.0mg/ml3.6 IgG工作標準溶液：取IgG標準儲備液，用流動相A（3.3）稀釋成含IgG 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/ml的標準系列。臨用時配制。4 儀器和設備4.1 實驗室常用儀器設備4.2 PH計4.3超純水裝置4.4勻漿機4.5高效液相色譜儀：具紫外檢測器和梯度洗脫

41、裝置5 試樣制備按GB/T14699飼料采樣，選取飼料樣品至少500g，四分法縮減至少100g，磨碎，通過0.28 um(80目)孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩? 分析步驟6.1試樣處理：稱取一定量試樣（精確至0.0001），配合飼料、濃縮飼料時，稱取試樣25g；血漿蛋白粉稱取試樣0.1g；雞蛋粉稱取試樣0.5g，于茄形瓶中，準確加入25ml流動相A（3.3），用勻漿機勻漿5分鐘，取溶液10ml 于離心管中，以3500 r/min離心10min，通過0.45um微孔濾膜后進樣6.2 測定：6.2.1 HPLC測定參數的設定：色譜柱：Pharmacia HI-Trap Prote

42、in G柱，1 ml波長： 280nm進樣量：20ul6.2.2梯度洗脫條件梯度洗脫見表1表1時間流速(ml/min)A(%)B(%)04.55.515.018.526.00.50.50.50.50.50.51001000010010000100100006.2. 3測定先用5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱，再用10倍柱體積流動相A（3.3）平衡柱，按洗脫程序進行洗脫。分別取6.1試樣處理液和3.6標準工作液進行測定，以色譜峰面積積分值做單點或多點校準定量。7 結果計算7.1試樣中IgG含量(g/100g)按下式計算：w= P1×V×c×Vst×100

43、Pst×m×Vi×V1×100式（1）中：w-試樣中IgG含量，g/100g； c標準工作液（A.2.3）中IgG的濃度,mg/ml; P1 標準工作液峰面積值； Vst標準工作液進樣體積，ul； Pst試樣峰面積值； Vi-試樣進樣體積；ul； V-試樣體積，ml； m-稱取試樣的質量，g；7.2 平行測定結果用算術平行值表示，保留小數點后兩位有效數字。8 重復性在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的測定值的絕對差值不得超過算術平均值的15%。十二 、玉米副產品中二氧化硫殘留量的測定方法1:GB/T5009.34-1996方法2:稱取樣品10g于三角燒

44、瓶內,加入少量水(約10ml),加入20ml濃鹽酸,5g鋅粉,瓶口用乙酸鉛試紙扎緊,放在沸水浴上加熱,若瓶中變黑則含SO2 ,標準樣品可用無水亞硫酸鈉(Na2SO3)代替,同上操作,根據黑班的大小,確認含量. 方法3:稱樣品20g于具塞三角瓶內,準確加入100ml水,振蕩5分鐘,靜止待瓶內液體澄清后,準確吸取上清液20ml,置于250ml碘量瓶內,加入1mol/L NaCl 25ml,振蕩2分鐘,靜止10分鐘,然后加入硫酸(1+3)10ml,邊加邊振蕩,之后加淀粉(10g/l)1ml,用碘標準滴定溶液(C(1/2I2)=0.1mol/L)滴定到溶液呈蘭色,同時作空白試驗.SO2 % =C

45、15;(V-V0)×0.032/(m×1/5)×100十三、 魚粉中脲醛聚合物的鑒別1 原理脲醛聚合物在濃硫酸的作用下分解成甲醛與氨，甲醛與變色酸（鉻變酸 ,1.8二羥基萘3.6二磺酸）的濃硫酸溶液一起微熱，形成一種紫色 紫紅色化合物2 試驗部分 試劑與儀器立體顯微鏡（160倍可連續(xù)變焦，帶光源）眼科鑷子燒杯 50 ml變色酸 2g/L稱取變色酸0.2g于200ml干燥的燒杯中，加入100ml濃硫酸，電爐上微熱(50-60)2min并攪拌使之溶解，冷卻后，移入120ml棕色滴瓶內。3 結果與討論3.1反應的干擾情況和檢出限量 變色酸的濃硫酸溶液對乙醛、丙醛、丁醛、

46、異丁醛、異戊醛、庚醛、巴豆醛、水合氯醛、乙二醛及芳香族醛類物均無此反應，與甘油醛、糠醛、阿拉伯糖、果糖及蔗糖反應顯黃色，其它糖類、丙酮及羧酸類都不與變色酸的濃硫酸溶液發(fā)生反應。此方法的檢出限量為0.05mg (脲醛聚合物)3.2加熱溫度 滴加變色酸的濃硫酸溶液后，加熱的溫度應在150 以下，溫度過高部分“蛋白精”被炭化成黑色，影響判斷。3.3 夾取可疑物時應注意的問題由于“蛋白精”的粒度很小，而且易碎，雖然在體視鏡下看到了，鑷子也夾到了，但在轉移到燒杯的過程中易丟失，因此，在夾取了數粒后，要將燒杯放到體視鏡下確認可疑物已放到燒杯中，并輕輕振動燒杯或用探針撥動可疑物，使之集中在燒杯底部的某個點上

47、，滴加變色酸時要對準此點。3.4 依據氨基酸總量來判斷是否摻有“蛋白精”通常根據魚粉氨基酸總量明顯偏低（小于粗蛋白質的85%），而水溶性非蛋白氮(NPN)為陰性來判斷魚粉中有脲醛聚合物“蛋白精”，這并不能說明樣品中一定含有脲醛聚合物“蛋白精”，只能證實含有難溶性的非蛋白氮(NPN)。3.5 此方法也適用于肉骨粉、玉米蛋白粉、豆類蛋白粉、大米蛋白粉中蛋白精的檢測十四、 谷物中淀粉含量的測定1 試劑與溶液1.1 酒石酸銅甲液(菲林甲液)：34.639gCuSO4溶于水，加入0.5ml濃H2SO4，稀釋到500ml。 1.2 酒石酸銅乙液(菲林乙液)：173g酒石酸鉀鈉，加50gNaOH，稀釋到50

48、0ml。1.2 氫氧化鈉溶液c(NaOH)= 1mol/L1.3 硫酸鐵溶液 50g/L1.4 高錳酸鉀標準滴定溶液c（1/5 KMnO4）=0.1mol/L1.5 乙醇溶液85% v/v1.6 HCl 1+1 和 1+3NaOH溶液40%乙酸鉛溶液20%硫酸鈉10%2 步驟：稱取樣品（粉碎過40目篩）2.05.0g，準確至0.0002g，置于放有慢速濾紙的漏斗中，用30ml乙醚分三次洗去樣品中脂肪，再用150ml 85%乙醇溶液分數次洗滌殘渣，以除去可溶性糖類物質，濾干乙醇溶液，將濾紙連同殘渣一并轉移至250ml錐形瓶中，加100ml水，加30ml（1+1）HCl，在沸水浴上回流2h，回流完

49、畢后，立即在流水中冷卻，待樣品水解液冷卻完全后，加3滴甲基紅指示劑，先用40%NaOH溶液調至黃色，再用(1+3)的HCl調至水解液剛變紅色為宜，使水解液的PH值約為5，然后加20ml 20%的乙酸鉛溶液，搖勻，放置10min，再加20ml 10%的硫酸鈉溶液，搖勻后，將全部溶液及殘渣轉入500ml容量瓶中，用水洗滌錐形瓶，洗液合并于容量瓶中，定容，搖勻，過濾，棄去初濾液20ml，濾液供測定用。吸取25.00ml濾液于三角瓶中，加25ml菲林甲液，再加25ml菲林乙液，在電爐上加熱(在3min內煮沸)并煮沸2min，取下過濾，并用水洗滌沉淀45次，之后將濾紙及沉淀物一起放入三角瓶內，加入硫酸鐵

50、（50g/L）25ml，再加25ml水，用玻璃棒攪拌到看不到Cu2O的紅色為止，然后用高錳酸鉀標準溶液C（1/5KMnO4）=0.1mol/L滴定到呈微紅色30s不褪色為終點。同樣條件做空白。3計算：以質量百分含量表示的淀粉含量按下式計算：（1） Cu20=（V-V0）×C×71.54（2） 用Cu20的質量查表求轉化糖的質量：淀粉含量 % = ×100式中： V-樣品消耗KMnO4的體積；mlV0空白消耗KMnO4的體積；ml , m-試樣的質量,g十五 、 次粉中泥沙及礦物質的測定1 步驟：稱取20g樣品（準確至0.1g）于250ml干燥的分液漏斗中，加約10

51、0ml的四氯化碳，振蕩幾分鐘，靜止0.5h以上，小心地將下層沉淀物放出到已在105烘至恒重的小燒杯中，水浴上蒸干溶劑后，放到105烘箱內烘0.5h，取出，冷卻，稱重。2 沉淀物分析（定性）如沉淀物為白色、灰白色物質，且不溶于鹽酸，則為滑石粉；反之，沉淀溶于鹽酸，并放出大量的氣泡，則為石粉。如沉淀物外觀如泥砂狀物質，則沉淀為混入或摻入的泥砂。如沉淀外觀很白，并有熒光性，則沉淀物為增白劑。3 計算：沉淀物 % = ×100式中：m2烘后沉淀物燒杯的質量；gm1燒杯的質量；gm樣品的質量；g說明：此方法也適用于豆粕、棉粕及菜粕中泥砂的測定。十六、魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、豆類蛋白粉、大米蛋

52、白粉鏡檢過程中的定性實驗定性檢查A . 摻入植物類物質（如小麥麩、稻谷粉、豆類蛋白粉和大米蛋白粉）試劑： 碘-碘化鉀溶液配制：稱1g的碘及5g碘化鉀于燒杯內，加100ml水攪拌2分鐘，待溶解后將其移入120ml棕色的滴瓶內。步驟：取約5g樣品放在燒杯內，加約70ml水，在電爐上煮沸，取下靜止2分鐘，滴加碘碘化鉀溶液ml，如溶液變成藍色則摻入植物性的物質。B. 摻入尿素試劑：(1)生黃豆粉:將大豆磨成粉末（注意:防止粉碎中升溫）(2)酚紅:g/L。稱取酚紅（苯酚紅）0.1g溶于100ml乙醇中。步驟：取約0.5g魚粉樣品，于50ml比色管內，再加約0.1-0.2g生黃豆粉，35滴酚紅，40ml水

53、，塞好塞子，搖動30秒，靜止，如溶液變成紅色，則樣品中摻入尿素。C. 摻入銨鹽類物質（氨化銨，碳酸氫銨）試劑 (1)氫氧化鈉溶液:稱g氫氧化鈉加ml水。(2)PH 試紙步驟：取魚粉3-5g于100ml 燒杯內，表皿內側沾一條濕的PH試紙，向燒杯內加約5-10ml 氫氧化鈉，將表皿迅速蓋上，如試紙迅速變藍，則含銨鹽。D. 摻入蛋白精（脲醛聚合物）試劑 :變色酸(0.1%硫酸溶液 )稱取0.1g變色酸于干燥的燒杯內，加入100 ml濃硫酸，電爐上加熱到（70-80），待溶解后，降溫，移入120 ml棕色的滴瓶內。步驟: 將可疑物從顯微鏡下夾出數粒于干燥的小燒杯內，滴加約1 ml變色酸，電爐上加熱到

54、剛剛產生微煙，取下，加入20 -30ml水，如變成紫色，則樣品中有蛋白精。E. 摻入植物性物質（含大量粗纖維類物質：如鋸末、稻草、麥芽根）試劑: (1) 間苯三酚2%:稱間苯三酚2 g，加100 95%乙醇，溶解后放入棕色滴瓶內。(2) 濃鹽酸 36% 分析純試劑步驟：稱1-2g魚粉于培養(yǎng)皿內，滴加間苯三酚使樣品濕潤，放置5-10分鐘后，滴加濃鹽酸約0.5ml，放置2-3分鐘，如樣品顯現深紅色，則樣品中含木質素，在顯微鏡下進一步確認為何物。F. 摻入皮革粉試劑:(1)稀硫酸C(H2SO4)=2mol/L,將取10ml濃硫酸慢慢加入到90ml水中。(2) 二苯基卡巴腙0.2%,稱0.2g二苯基卡巴腙，加入100ml 95%乙醇，溶解后，移入棕色滴瓶內。步驟：取1-3 g魚粉于坩堝內，在電爐上炭化