乳豬料用原料檢測(cè)方法

1、第一部分:乳豬料用原料檢測(cè)方法 山東六和集團(tuán)技術(shù)部編輯 2006-01-05目 錄1: 飼用玉米脂肪酸值的測(cè)定2: 油脂碘價(jià)的測(cè)定3: 油脂的酸價(jià)及過氧化值的測(cè)定4: 魚粉中酸價(jià)的測(cè)定5: 乳清粉中乳糖的測(cè)定.6: 油脂TBA值的測(cè)定方法.7: 嘔吐毒素(DON)的檢測(cè)ELISA法.8: 黃曲霉毒素的測(cè)定ELISA法.9: 魚粉中組胺的測(cè)定.10:揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定(VBN).11:飼料中免疫球蛋白lgG的測(cè)定.12:玉米副產(chǎn)品中二氧化硫殘留量的測(cè)定.13:魚粉中脲醛聚合物的鑒別.14:谷物中淀粉含量的測(cè)定.15:次粉中泥沙及礦物質(zhì)的測(cè)定.16:鏡檢過程中的定性實(shí)驗(yàn)(魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、

2、豆類蛋白粉、大米蛋白粉)17:淀粉糊化度分析方法.18:大豆制品中尿素酶活性分析方法(PH增值法).19:油脂定性試驗(yàn).20:乳糖測(cè)定附表.一.飼用玉米脂肪酸值的測(cè)定1.試劑：1.1 KOH乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液C(KOH)=0.01mol/L取KOH溶液C(KOH)=0.1mol/L 100ml，用乙醇（95%）稀釋到1 升，然后按GB601標(biāo)定。1.2 酚酞指示劑：2g/l乙醇溶液1.3 無水乙醇2 步驟：將平均樣品按四分法制得約80g樣品粉碎，過0.45mm孔徑篩（40目），立即稱取10g樣品（精確到0.01g），于150ml具塞三角瓶?jī)?nèi)，加50ml無水乙醇，加塞振動(dòng)10分鐘，過濾，并用無水乙醇洗

3、3次，每次15ml，然后加酚酞3滴，用0.01mol/lKOH乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到溶液呈微紅色，同時(shí)取90ml乙醇作空白。3計(jì)算：脂肪酸值(mgKOH/100g)按下式計(jì)算（V-V0）×C×56.1脂肪酸值= ×100 m 式中：V-樣品耗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlV0空白耗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mlC-KOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度，mol/lm-樣品質(zhì)量,g二、油脂碘價(jià)的測(cè)定1 試劑與溶液1.1 韋氏液的配制：稱取三氯化碘7.9g和純碘8.7g分別溶于冰乙酸中，合并兩液，再用冰乙酸稀釋至1L，貯于棕色瓶?jī)?nèi)。1.2 KI溶液 150g/L1.3硫代硫酸鈉標(biāo)液滴定溶液C（NaS2

4、O3）=0.1mol/L）1.4 三氯甲烷CHCl3 AR2.步驟：按附表稱取試樣（準(zhǔn)確至0.0002g）于干燥的碘量瓶中，加20ml CHCl3溶解試樣，加25.00ml韋氏液立即加塞，以KI溶液封口，搖勻后，在20±5條件下，置黑暗處30min（碘價(jià)在130以上時(shí)放置1h），到時(shí)立即加入KI溶液20ml和水100ml,用C（NaS2O3）=0.1mol/L）硫代硫酸鈉標(biāo)液滴定至淺黃色時(shí)，加入1ml 5g/L淀粉指示劑，滴定至蘭色消失。同樣條件做空白兩個(gè)，取平均值。結(jié)果的表示和計(jì)算：碘價(jià)按下式計(jì)算碘價(jià)=×100 式中：V1試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；mlV2空白消耗

5、硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；mlC-硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度；mol/Lm-試樣的質(zhì)量；g0.1269與1.00ml硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(C（NaS2O3）=1.000mol/L)的相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜牡獾馁|(zhì)量。附表：碘價(jià)數(shù)值與試樣用量碘價(jià)試樣用量范圍（g）碘價(jià)試樣用量范圍（g）200.84611.58651200.21150.2644400.63460.79351400.18130.2266600.42310.52881600.15870.1983800.31730.39661800.14100.17621000.25380.31732000.12690.1586三、油脂的酸價(jià)及過氧化值的測(cè)定一.油

6、脂的酸價(jià)的測(cè)定：1 試劑與溶液1.1乙醚-乙醇溶液（2+1）配制時(shí)加入酚酞，并用堿調(diào)至中性1.2 NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液C（NaOH）=0.1mol/L1.3酚酞指示劑 1g/L2 步驟將需用的錐形瓶烘干；分別移取油脂上層、中層、下層液各12ml置于烘干的錐形瓶中精密稱量。加入50ml乙醚-乙醇溶液使其溶解，可以微熱，加入酚酞指示劑3-5滴,然后用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定至粉紅色，且1分鐘不褪色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白計(jì)算：酸價(jià)(mgKOH/g)按下式計(jì)算酸價(jià)=C×(V-V0 )×56.1/m式中： CNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度；mol/LV消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；mlm樣品的重量；g 5

7、6.1與1.00mlC（NaOH）=1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊詍g表示的KOH的質(zhì)量。說明： 酸價(jià)是指中和1.0g油脂所含游離脂肪酸所需KOH的毫克數(shù),同一種油若酸價(jià)高，表明油脂因水解而產(chǎn)生更多的游離脂肪酸。二.油脂的過氧化值的測(cè)定1.原理：油脂氧化過程產(chǎn)生過氧化物，與KI作用，生成游離碘，以淀粉作指示劑，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。2試劑與溶液2.1三氯甲烷冰乙酸的混合液（4+6）2.2硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液C（Na2S2O3）=0.01mol/L2.3淀粉指示液10g/L2.4碘化鉀KI AR3 步驟：稱取2- 3g(準(zhǔn)確到0.0002g)混勻的樣品，置于250ml烘干的碘量瓶中，加入30

8、ml三氯甲烷冰乙酸（4+6）的混合液，使樣品完全溶解，加入約2g的碘化鉀，緊密塞好瓶塞，并輕輕振搖30秒鐘，然后在暗處放置3分鐘，取出加100ml水，搖勻，立即用的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶(C（Na2S2O3）=0.01mol/L)液滴定至淡黃色時(shí)，加1ml淀粉指示液（10g/L），繼續(xù)滴定至蘭色消失為終點(diǎn)，同樣條件做空白。4計(jì)算：過氧化值（I2%）按下式計(jì)算過氧化值（I2%）=（V1V0）×C×0.1269×100/m式中： V1-樣品消耗硫代硫酸鈉的體積；mlV0-空白消耗硫代硫酸鈉的體積；mlC-硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度；mol/Lm-樣品的重量；g 0.1269與

9、1.00mlC（Na2S2O3）=1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮淼腎2的質(zhì)量 g5 過氧化值二種單位的換算:meq/kg = I2 % * 78.9四、魚粉中酸價(jià)的測(cè)定1 試劑與溶液1.1乙醚-乙醇溶液（2+1）配制時(shí)加入酚酞，并用堿調(diào)至中性1.2 NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液C（NaOH）=0.05mol/L1.3酚酞指示劑 1g/L2.步驟 稱取23g（準(zhǔn)確到0.0002g）魚粉于干燥帶塞的三角瓶中，加40ml乙醚與乙醇（2+1）混合溶液，在振蕩器上振搖30min，干過濾于150ml三角瓶中，并用少量乙醚乙醇溶液洗滌三角瓶三次，加3滴的酚酞，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液C（NaOH）=0.05mol/L滴

10、定至粉紅色，半分鐘內(nèi)不褪色為終點(diǎn)，同樣條件做空白。3.結(jié)果的表示和計(jì)算：酸價(jià)（mgKOH/g）按下式計(jì)算酸價(jià)（mgKOH/g）= 式中：CNaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度；mol/LV魚粉消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；mlV0空白消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積；mlm魚粉樣品的質(zhì)量；g56.1與1.00mlNaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液C（NaOH）=1.000mol/L相當(dāng)?shù)囊詍g表示的KOH的質(zhì)量。mg五、乳清粉中乳糖的測(cè)定1 試劑與溶液1.1酒石酸銅甲液：34.639gCuSO4溶于水，加入0.5ml濃H2SO4，稀釋到500ml。 酒石酸銅乙液：173g酒石酸鉀鈉，加50gNaOH，稀釋到500ml。1.2 氫氧化鈉溶液c

11、(NaOH)= 1mol/L1.3硫酸鐵溶液 50g/L1.4高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（1/5 KMnO4）=0.1mol/L2 步驟：稱2g樣品（準(zhǔn)確到0.0002g）于200ml燒杯中，加50ml水，電爐加熱到80，加酒石酸銅甲液10ml，加NaOH（1mol/L）5ml，攪拌后放置到室溫，用水定容于250ml容量瓶中，搖勻，靜止1h后干過濾。吸取濾液25.00ml于三角瓶中，加25ml酒石酸銅甲液，再加25ml酒石酸銅乙液，在電爐上加熱并煮沸2min（要保證在3min內(nèi)煮沸），取下過濾，并用水洗滌沉淀45次，之后將濾紙及沉淀物（Cu2O）一起放入三角瓶中，加入硫酸鐵（50g/L）25ml，

12、再加25ml水，用玻璃棒攪拌并微熱到看不到Cu2O的紅色為止，然后用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(c（1/5 KMnO4）=0.1mol/L)的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到呈微紅色為終點(diǎn)。同樣條件做空白3.結(jié)果的表示和計(jì)算：乳糖含量按下式計(jì)算Cu2O=（V-V0）×C×71.54由Cu2O的質(zhì)量查表求乳糖的質(zhì)量m乳：樣品中乳糖的含量:乳糖%=m乳/m樣×100式中： m乳樣品中乳糖的質(zhì)量；gm樣-樣品的質(zhì)量；V-樣品消耗KMnO4的體積；mlV0-空白消耗KMnO4的體積；ml71.54常數(shù)；C-KMnO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L六、油脂TBA值的測(cè)定方法原理：油脂受到光、熱、空氣中

13、氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與硫代巴比妥酸(TBA)作用生成粉紅色化合物，在532nm波長(zhǎng)處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。1 試劑2.1硫代巴比妥酸(TBA)水溶液：準(zhǔn)確稱取TBA 0.288g溶于水中，并稀釋至100ml（如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清，然后稀釋至100ml），相當(dāng)于0.02mol/L；2.2 三氯乙酸混合液：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸（分析純）7.5g及 0.1g EDTA，用水溶解，稀釋至100.00ml；2.3 氯仿（分析純）；2.4 丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.315g 1，1，3，3-四

14、乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000.00ml，此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛100g，置于冰箱內(nèi)保存。準(zhǔn)確吸取10ml，稀釋至100.00ml，此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛10微克(g)，備用。2 操作步驟3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取每ml相當(dāng)于丙二醛10g的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中，加水至總體積為5ml，加入5ml TBA溶液，然后按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行，測(cè)得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.2樣品測(cè)定：準(zhǔn)確稱取融化均勻的油脂樣品5.0g，置于100ml具塞三角瓶?jī)?nèi)，加入50.0ml三氯乙酸混合液，振搖半小時(shí)（保持油脂融溶狀態(tài)，如冷結(jié)可在70水浴上略微加熱使之

15、融化后繼續(xù)振搖）用雙層濾紙過濾，除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過濾一次。準(zhǔn)確移取上述濾液5.0ml置于25ml比色管內(nèi)，加入5.0 mlTBA溶液，混勻，加塞，置于90水浴內(nèi)保溫40min，取出，冷卻1h，移入小試管內(nèi)，離心5min，上清液傾入25ml納氏比色管中，加入5.0ml氯仿，搖勻，靜置，分層，吸出上清液于532nm波長(zhǎng)比色，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到微克數(shù)（同時(shí)作空白試驗(yàn)）。3 計(jì)算丙二醛含量（mg/kg）按下式計(jì)算 丙二醛含量（mg/kg）=式中:C-從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù)(ug) m-樣品質(zhì)量（g）七、嘔吐毒素(DON)的檢測(cè)ELISA法測(cè)試前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明在28冷藏不要凍結(jié)1.簡(jiǎn)介

16、 DON毒素脫氧瓜萎鐮菌醇（DON，）是單端孢菌素烯烴中的一種，它通常是由生長(zhǎng)在谷類物品（如小麥、玉米、大麥和秣草）霉菌鐮紅菌素生成的。脫氧瓜萎鐮菌醇的毒性效應(yīng)包括：嘔吐、不想進(jìn)食、胃腸炎、腹瀉、免疫抑制和血液病。研究表明豬對(duì)脫氧瓜萎鐮菌醇很敏感。當(dāng)脫氧瓜萎鐮菌醇含量1ppm時(shí)，它們就拒絕進(jìn)食。其毒性也會(huì)對(duì)其他物種產(chǎn)生毒性效應(yīng)，各種物種對(duì)脫氧瓜萎鐮菌醇的敏感性各不相同。研究表明脫氧瓜萎鐮菌醇會(huì)使已加工食物發(fā)生問題，包括使可吃的谷類制品產(chǎn)生臭味、對(duì)生面團(tuán)質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響。因此，精確測(cè)定可能含有脫氧瓜萎鐮菌醇的食物和食品就現(xiàn)得十分重要。FDA（美國(guó)食品和藥品管理局）已經(jīng)制定了脫氧瓜萎鐮菌醇含量的強(qiáng)

17、制標(biāo)準(zhǔn)。美國(guó)食品藥物管理局已經(jīng)頒布的DON毒素建議限量如下：適用對(duì)象限量物質(zhì)人1 ppm麥制品(面粉、麩和胚芽)反芻動(dòng)物牛肉飼養(yǎng)的牛和雞10 ppm 在<50%的食入量(全食入量時(shí)為5ppm)所有谷物及其副產(chǎn)品豬5 ppm 在<20%的食入量(全食入量時(shí)為1ppm)所有谷物及其副產(chǎn)品所有其它動(dòng)物5 ppm 在<40%的食入量(全食入量時(shí)為2ppm)所有谷物及其副產(chǎn)品2.方法原理本測(cè)試盒的測(cè)試原理是一種競(jìng)爭(zhēng)性的直接酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)試方法（ELISA），可準(zhǔn)確檢測(cè)出樣品中ppm級(jí)的DON毒素。樣品和標(biāo)準(zhǔn)控制液中游離的DON毒素與軛合物中的DON毒素競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位置。清洗后，加入底

18、物，底物與軛合物反應(yīng)出現(xiàn)蘭色，蘭色越深表明DON毒素越少。將其置于微型孔閱讀器中可讀出透光度，以控制標(biāo)準(zhǔn)液的透光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品的透光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中DON毒素的準(zhǔn)確濃度。 3.貯存要求本試劑盒存放在28時(shí)，可以一直使用到標(biāo)簽上注明的到期日期。4.試劑與儀器4.1已提供的材料1. 48個(gè)包被了抗體的孔。2. 48個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔。3. 5瓶1.5ml濃度為0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制標(biāo)準(zhǔn)液(黃色標(biāo)簽) 。4. 1瓶DON毒素-HRP軛合物溶液(蘭色標(biāo)簽)。5. 1瓶24ml底物溶液(綠色標(biāo)簽)。4.2需要但未提供的材料1 提取材料：a. 蒸餾水或去離子水

19、。b. 100ml量筒c. 150ml的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗2. 粉碎機(jī)3. 稱量為525克的秤4. 帶450nm濾光片的微型孔閱讀器5. 200l移液器6. 200l吸咀7. 紙巾或等效的吸水材料8. 計(jì)時(shí)器9. 防水記號(hào)筆10. 洗瓶11. 移液器用的試劑槽12. 蒸餾水或去離子水13. C（1/2H2SO4）=1mol/L的硫酸終止液5.注意事項(xiàng)1. 本測(cè)試盒不使用時(shí)應(yīng)在28下存放。2. 不要使用過期的測(cè)試盒。3. 不要把不同測(cè)試盒中的試劑混合使用。4. 遵守正確的移液技術(shù)，包括取液前先用該液潤(rùn)洗一次。5. 放置時(shí)間與本說明不一致時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。

20、6. 測(cè)試盒應(yīng)先恢復(fù)到室溫狀態(tài)(1830)后才開始使用。7. 避免測(cè)試盒在室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置。8. 不要使測(cè)試盒凍結(jié)。9. 待測(cè)樣品的pH值應(yīng)為68。酸堿過大的樣品應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。應(yīng)將包括樣品提取液在內(nèi)的所有廢液和實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行處理（如同已被DON毒素污染一樣）。應(yīng)始終穿戴手套和其它防護(hù)服。10. 為了避免交叉污染，每個(gè)樣品應(yīng)使用清潔的吸咀和玻璃器皿，并在樣品之間徹底清洗所有的玻璃器皿。6.程序性的提示底物：底物隨時(shí)可用，底物為清亮的淺蘭色，如果變成了深蘭，則棄去。使用時(shí)，只倒出所需量到試劑槽中，未用完的不要再倒回試劑瓶中。不使用時(shí)應(yīng)蓋住試劑槽，以避免光的照射。7.操作步驟7.1樣品制備和提取1.待測(cè)

21、樣品應(yīng)按公認(rèn)的采樣技術(shù)采集。樣品應(yīng)磨碎并充分混合后再提取。測(cè)試前，將樣品在28存放。2.將30ml硫酸緩緩注入1000ml水中，冷卻搖勻，配成的硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L)終止液。3.取1份代表性樣品。研磨樣品至至少有75%的樣品通過20目的篩子，顆粒尺寸大約相當(dāng)于細(xì)的速溶咖啡。4.將10克研磨過的樣品加入50ml 水或去離子水中，用手或震蕩器劇烈混合15分鐘。 5.將靜置2-3分鐘，使一些物質(zhì)沉淀下來。6.用濾紙過濾出至少5ml的提取液。收集該濾液即為樣品的待測(cè)液。7.2測(cè)試程序測(cè)試前應(yīng)將所有的試劑恢復(fù)至室溫（1830）。1.從箔包中取紅色標(biāo)記的混合孔，放在孔架上。2.取同樣

22、數(shù)量的包被了抗體的孔。把暫不使用的孔放回到箔包中，并重新密封，以保護(hù)抗體。在帶子的一端標(biāo)上“1”，然后放到孔架上，將有標(biāo)記的一端放在左邊。不要在孔的里面和底部寫標(biāo)記。3.在使用之前搖動(dòng)試劑瓶，混合每種試劑。4.從蘭色標(biāo)簽的瓶?jī)?nèi)吸取100l軛合物加到每個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔內(nèi)。 5.每次使用新吸咀，吸取100l控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品液按下列順序加到紅色標(biāo)記的混合孔內(nèi)6 用移液器吸入、排出3次使孔內(nèi)溶液徹底混合，吸取100l加到相應(yīng)的包被了抗體的孔內(nèi)，在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合1020秒鐘，不要濺出試劑，混合后于室溫下（1830）放置5分鐘。棄去紅色標(biāo)記孔。7倒掉包被了抗體孔內(nèi)的溶液。在每個(gè)孔內(nèi)

23、加滿蒸餾水或去離子水，再倒出，如此重復(fù)5次，將板朝下，在吸水材料上拍擊以去除所有的水滴。8從綠色標(biāo)簽試劑瓶中倒出所需量的試劑到綠色試劑槽中。9用移液器和新吸咀，吸取100l底物加到每個(gè)孔內(nèi)，在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合1020秒鐘。10混合后放置2.5分鐘。11從試劑瓶中倒出所需量的硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L)終止液到試劑槽中。12吸取100l終止液加到每個(gè)孔內(nèi)，在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合。13用干凈的布擦凈板底，將板置于微型孔閱讀器于450nm濾光片下讀數(shù)。由于氣泡會(huì)影響結(jié)果，應(yīng)削除溶液中氣泡。應(yīng)在加入紅色終止劑后20分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。14用Log/logit

24、軟件計(jì)算結(jié)果。8.特性參數(shù)檢出限：0.1 ppm(10次陰性樣品的平均值加2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差)。定量檢測(cè)限：0.25 ppm(以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)表示)。定量范圍：0.25-2.5 ppm(大于2.5 ppm時(shí),見樣品制備和提取程序)八、黃曲霉毒素的測(cè)定ELISA法測(cè)試前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明在28冷藏不要凍結(jié)1.簡(jiǎn)介 黃曲霉毒素黃曲霉毒素是一種劇毒且致癌的物質(zhì)，它是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌A的某些菌株產(chǎn)生的。黃曲霉毒素有四種類型：B1，B2，G1和G2。黃曲霉毒素B1是毒性最大且最常有的。最容易產(chǎn)生黃曲霉毒素污染的物質(zhì)是谷物、花生、棉子、高梁和大多數(shù)的樹果。動(dòng)物食入過量黃曲霉毒素的影響從慢性健康直到死亡

25、，已經(jīng)證明黃曲霉毒素能引起肝損壞或癌癥、降低奶和蛋的產(chǎn)出、免疫抑制和干擾再生效率。美國(guó)食品藥物管理局已經(jīng)規(guī)定了食品和飼料中最大黃曲霉毒素限量。因此，準(zhǔn)確測(cè)定黃曲霉毒素的含量，對(duì)于監(jiān)測(cè)可能發(fā)生黃曲霉毒素污染的食品和飼料的質(zhì)量來說，是非常重要的。測(cè)試程序包括仔細(xì)的采樣、化學(xué)提取、衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)和定量分析。美國(guó)食品藥物管理局已經(jīng)頒布的黃曲霉毒素限量如下：適用對(duì)象限量物質(zhì)人20ppb除牛奶外的所有食品所有動(dòng)物20ppb所有飼料（下列除外）除外：種牛，種豬，成熟的家禽100ppb谷物育肥期的豬（100磅）200ppb谷物育肥期的菜牛300ppb谷物育肥期的菜牛、豬、家禽300ppb棉籽粉2.方法原理本測(cè)試盒

26、的測(cè)試原理是一種競(jìng)爭(zhēng)性的直接酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)試方法（ELISA），可準(zhǔn)確檢測(cè)出樣品中ppb級(jí)的黃曲霉毒素。樣品和標(biāo)準(zhǔn)控制液中游離的黃曲霉毒素與軛合物中的黃曲霉毒素競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位置。清洗后，加入底物，底物與軛合物反應(yīng)出現(xiàn)蘭色，蘭色越深表明黃曲霉毒素越少。將其置于微型孔閱讀器中可讀出透光度，以控制標(biāo)準(zhǔn)液的透光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品的透光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較計(jì)算出樣品中黃曲霉毒素的準(zhǔn)確濃度。 3.貯存要求本試劑盒存放在28時(shí)，可以一直使用到標(biāo)簽上注明的到期日期。4.試劑與儀器4.1提供的材料4.1.1 48個(gè)包被了抗體的孔。4.1.2 48個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔。4.1.3 4瓶1.5ml濃度為0、5、15、

27、50ppb黃曲霉毒素控制標(biāo)準(zhǔn)液(黃色標(biāo)簽)（甲醇溶液的處理，見注意事項(xiàng)）。4.1.4 1瓶7ml黃曲霉毒素-HRP軛合物溶液(蘭色標(biāo)簽)。4.1.5 1瓶24mlK蘭底物溶液(綠色標(biāo)簽)。4.1.6 1瓶32ml紅色 (紅色標(biāo)簽)。4.2需要但未提供的材料4.2.1 提取材料：a. 70%甲醇溶液b. 100ml量筒c. 150ml的具塞三角瓶d. 濾紙e. 樣品收集具塞試管f. 漏斗4.2.2 粉碎機(jī)4.2.3 稱量為525克的秤4.2.4 帶450nm濾光片的微型孔閱讀器4.2.5 200l移液器4.2.6 200l吸咀4.2.7 紙巾或等效的吸水材料4.2.8 計(jì)時(shí)器4.2.9 防水記號(hào)

28、筆4.2.10 洗瓶4.2.11 移液器用的試劑槽4.2.12 蒸餾水或去離子水4.2.13 硫酸終止液C（1/2H2SO4）=1mol/L5.注意事項(xiàng)5.1 甲醇易燃，其容器應(yīng)密閉并遠(yuǎn)離熱、火花、明火和煙。如果吞下或吸入蒸氣，它是有毒的。應(yīng)避免與皮膚接觸。5.2 本測(cè)試盒不使用時(shí)應(yīng)在28下存放。5.3 不要使用過期的測(cè)試盒。5.4 不要把不同測(cè)試盒中的試劑混合使用。5.5 遵守正確的移液技術(shù)，包括取液前先用該液潤(rùn)洗一次。5.6 放置時(shí)間與本說明不一致時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。5.7 測(cè)試盒應(yīng)先恢復(fù)到室溫狀態(tài)(1830)后才開始使用。5.8 避免測(cè)試盒在室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置。5.9 不要使測(cè)試盒凍

29、結(jié)。5.10應(yīng)將包括樣品提取液在內(nèi)的所有廢液和實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行處理（如同已被黃曲霉毒素污染一樣）。應(yīng)始終穿戴手套和其它防護(hù)服。5.11為了避免交叉污染，每個(gè)樣品應(yīng)使用清潔的吸咀和玻璃器皿，并在樣品之間徹底清洗所有的玻璃器皿。5.12待測(cè)樣品的pH值應(yīng)為68。酸堿過大的樣品應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。關(guān)于pH值的調(diào)整，請(qǐng)與Neogen代表或技術(shù)服務(wù)部門聯(lián)系。6.程序性的提示K-蘭底物隨時(shí)可用，底物為清亮的淺蘭色，如果變成了深蘭，則棄去。使用時(shí)，只倒出所需量到試劑槽中，未用完的不要再倒回試劑瓶中。不使用時(shí)應(yīng)蓋住試劑槽，以避免光的照射。7.操作步驟7.1樣品制備和提取待測(cè)樣品應(yīng)按公認(rèn)的采樣技術(shù)采集。樣品應(yīng)磨碎并充分混合

30、后再提取。測(cè)試前，將樣品在28存放。按以下程序進(jìn)行：1 將7份分析級(jí)甲醇與3份蒸餾水或去離子水混合配成70%的甲醇溶液。2 將30ml硫酸緩緩注入1000ml水中，冷卻搖勻，配成硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L) 的終止液。2 取1份代表性樣品。研磨樣品至至少有75%的樣品通過20目的篩子，顆粒尺寸大約相當(dāng)于細(xì)的速溶咖啡。3 把5克研磨過的樣品加入到25ml 70%的甲醇中，然后用力搖動(dòng)15分鐘。4 用濾紙過濾出至少5ml的提取液。該濾液即為樣品的待測(cè)液。5 該待測(cè)液即可用于測(cè)試。7.2測(cè)試程序測(cè)試前應(yīng)將所有的試劑恢復(fù)至室溫（1830）。1.從箔包中取紅色標(biāo)記混合孔，放在孔架上。2.

31、取同樣數(shù)量的包被了抗體的孔。把暫不使用的孔放回到箔包中，并重新密封，以保護(hù)抗體。3.在使用之前搖動(dòng)試劑瓶，混合每種試劑。4.從蘭色標(biāo)簽瓶?jī)?nèi)吸取100l軛合物加到每個(gè)紅色標(biāo)記的混合孔內(nèi)。棄去吸咀。5.每次使用新吸咀，吸取100l控制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品液按下列順序加到紅色標(biāo)記的混合孔內(nèi) 6.用移液器吸入、排出3次使孔內(nèi)溶液徹底混合，吸取100l加到相應(yīng)的包被了抗體的孔內(nèi)，在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合1020秒鐘，不要濺出試劑，混合后于室溫下（1830）放置2分鐘。7.倒掉包被了抗體孔內(nèi)的溶液。在每個(gè)孔內(nèi)加滿蒸餾水或去離子水，再倒掉，如此重復(fù)5次，將板朝下，在吸水材料上拍擊以去除所有的水滴。8.

32、從綠色試劑瓶中倒出所需量的試劑到試劑槽中。9.用移液器和新吸咀，吸取100l底物加到每個(gè)孔內(nèi)，在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合1020秒鐘。10.混合后放置1.5分鐘。11.從試劑瓶中倒出所需量的硫酸(C（1/2H2SO4）=1mol/L)終止液到試劑槽中。12.用移液器吸取100l終止液加到每個(gè)孔內(nèi)，在平的表面上將板前后滑動(dòng)確保充分混合。13.用干凈的布擦凈板底，將板置于微型孔閱讀器于450nm濾光片下讀數(shù)。由于氣泡會(huì)影響結(jié)果，應(yīng)削除溶液中氣泡。應(yīng)在加入終止液后20分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。14.用Log/logit軟件計(jì)算結(jié)果。8.特性參數(shù)檢出限：2ppb(10次陰性樣品的平均值加2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差)

33、。定量檢測(cè)限：5ppb(以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)表示)。定量范圍：5-50 ppb(大于50 ppb時(shí)應(yīng)稀釋)九、魚粉中組胺的測(cè)定 原理簡(jiǎn)介:魚粉中組胺用三氯乙酸提取，之后調(diào)PH=9，將游離的組胺用正戊醇提取出，之后再用HCl反萃取，用偶氮試劑顯色。組胺+三氯乙酸鹽（溶于水）-PH=9-組胺（溶于正戊醇）-HCl-正戊醇（組胺溶于稀HCl）1試劑與溶液1.1偶氮試劑的配制甲液：稱取0.5g對(duì)硝基苯胺，加5ml鹽酸（1+1）溶解，再加水釋到200ml，置冰箱中（28度）保存。乙液：亞硝酸鈉溶液5g/l，臨用現(xiàn)配甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。1. 2三氯乙酸 100 g/L1.3氫氧化鈉

34、250g/L1.4鹽酸 1mol/L1.5正戊醇 分析純1. 6碳酸氫鈉溶液 50g/L1.7磷酸組胺（Sigma公司）2.步驟 2.1樣品處理 稱取1-3克魚粉于具塞三角瓶?jī)?nèi)，加入25.0ml三氯乙酸（100g/L）每隔30分鐘搖動(dòng)一次，提取3小時(shí)，過濾，取濾液2.00ml或1.00ml于15ml試管內(nèi)，加氫氧化鈉（250g/L）5滴，振蕩一下，再加5ml正戊醇振蕩2分鐘，靜止分層（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象可滴加2-3滴無水乙醇），用移液槍小心吸取上清液（正戊醇層）于50ml分液漏斗內(nèi)，下層沉淀再下層沉淀再分別用正戊醇5ml、3ml、3ml反萃取3次。將正戊醇全部收集到50ml分液漏內(nèi),分別用鹽酸(1

35、mol/L)6 ml、6 ml、3 ml反萃取3次,收集水相（下層）于20ml刻度試管內(nèi)，用水定容至刻度(20.00ml)，搖勻，吸取1.00ml（或2.00ml）鹽酸提取液于10 ml比色管中，加入碳酸氫鈉溶液（50g/L）3.0ml搖勻，振蕩下加入偶氮試劑3.0ml，用水定容到刻度，室溫下顯色10min，用1cm比色皿于480nm下測(cè)定吸光度。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線稱取磷酸組胺樣品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶?jī)?nèi)，用水溶解并定容到刻度，此液組胺含量為10ug/ml，分別取此標(biāo)液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管內(nèi)，各加鹽酸（1mol/

36、L）1.0ml，振蕩，用水定容到刻度，搖勻后放置10min（室溫下），用1cm比色皿于480nm下測(cè)吸光值。參比液：試劑空白3計(jì)算魚粉中組胺按下式計(jì)算公式：組胺（mg/100g）= C*100 (m/25.0)*(1.00/15.0)*1000實(shí)例：魚粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257標(biāo)準(zhǔn)曲線:A=0.012380*C+0.01310計(jì)算: C =(A-0.0131)/0.012380=19.70ug組胺=(19.70*100)/(2.3455/25)*(1.0/15)*1000=315mg/100g=3150ppm應(yīng)用：進(jìn)口白魚粉：組胺<10mg/100

37、g(1-5mg/100g)進(jìn)口水產(chǎn)級(jí)蒸汽魚粉<100mg/100g(50mg/100g)優(yōu)質(zhì)國(guó)產(chǎn)魚粉<150mg/100g(50-150mg/100g)新鮮度差的魚粉(國(guó)產(chǎn),進(jìn)口)組胺200340mg/100g用于乳豬料的魚粉 組胺<100mg/100g十、揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定(VBN)原理簡(jiǎn)介:蛋白質(zhì)分解時(shí)，氨基酸脫胺基生成氨，氨基酸脫羧基生成胺，氨與胺(揮發(fā)性的胺)在堿液(氧化鎂)中被蒸發(fā)出來，用硼酸吸收，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸反滴定，測(cè)出其含量。1試劑與溶液1.1氧化鎂溶液 10g/L2.步 驟稱取5-10g樣品于250ml具塞三角瓶?jī)?nèi)，加入100.0ml水，振蕩30min，過濾，取

38、慮液10.00ml，按粗蛋白蒸餾操作，但加入的堿為氧化鎂溶液（10g/L）7-10ml。3.計(jì)算：揮發(fā)性鹽基氮（VBN）（mg/100g）按下式計(jì)算VBN（mg/100g）= C（V-V0）*14/m*（10/100）*100實(shí)例:魚粉樣品8.6706g，VHCl=0.0200mol/L V=3.93ml V0=0.15ml VBN=0.0200*14* (3.93-0.15)/8.6706*(10/100)*100=122.1mg/100g應(yīng)用：新鮮度好的魚粉VBN<100mg/100g（40-80 mg/100g） 新鮮度差的魚粉VBN>150mg/100g（180-350 m

39、g/100g）乳豬料魚粉VBN<100mg/100g十一、飼料中免疫球蛋白lgG的測(cè)定(高效液相色譜法)1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法儀測(cè)定飼料中免疫球蛋白IgG含量的方法本標(biāo)準(zhǔn)適用配合飼料、濃縮飼料、含Ig的飼料原料（包括血漿蛋白粉、雞蛋粉等）中免疫球蛋白IgG的測(cè)定本方法檢出限：當(dāng)取樣1g，稀釋至25ml，進(jìn)樣量20ul，檢出濃度為0.2mg/ml2 原理根據(jù)高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接，在PH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。3 試劑除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑，水為去離子水或相當(dāng)純度的水，應(yīng)符合CB/T66

40、82三級(jí)用水的規(guī)定3.1磷酸二氫鉀3.2 磷酸氫二鉀3.3流動(dòng)相A：PH6.5，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液3.4流動(dòng)相B：PH2.5，0.05mol/L甘氨酸鹽酸緩沖液3.5 IgG儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液：稱取IgG標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma公司）0.0100g，用流動(dòng)相A（3.3）溶解并定容至10ml，搖勻，濃度為1.0mg/ml3.6 IgG工作標(biāo)準(zhǔn)溶液：取IgG標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相A（3.3）稀釋成含IgG 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列。臨用時(shí)配制。4 儀器和設(shè)備4.1 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備4.2 PH計(jì)4.3超純水裝置4.4勻漿機(jī)4.5高效液相色譜儀：具紫外檢測(cè)器和梯度洗脫

41、裝置5 試樣制備按GB/T14699飼料采樣，選取飼料樣品至少500g，四分法縮減至少100g，磨碎，通過0.28 um(80目)孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩? 分析步驟6.1試樣處理：稱取一定量試樣（精確至0.0001），配合飼料、濃縮飼料時(shí)，稱取試樣25g；血漿蛋白粉稱取試樣0.1g；雞蛋粉稱取試樣0.5g，于茄形瓶中，準(zhǔn)確加入25ml流動(dòng)相A（3.3），用勻漿機(jī)勻漿5分鐘，取溶液10ml 于離心管中，以3500 r/min離心10min，通過0.45um微孔濾膜后進(jìn)樣6.2 測(cè)定：6.2.1 HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定：色譜柱：Pharmacia HI-Trap Prote

42、in G柱，1 ml波長(zhǎng)： 280nm進(jìn)樣量：20ul6.2.2梯度洗脫條件梯度洗脫見表1表1時(shí)間流速(ml/min)A(%)B(%)04.55.515.018.526.00.50.50.50.50.50.51001000010010000100100006.2. 3測(cè)定先用5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱，再用10倍柱體積流動(dòng)相A（3.3）平衡柱，按洗脫程序進(jìn)行洗脫。分別取6.1試樣處理液和3.6標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰面積積分值做單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)定量。7 結(jié)果計(jì)算7.1試樣中IgG含量(g/100g)按下式計(jì)算：w= P1×V×c×Vst×100

43、Pst×m×Vi×V1×100式（1）中：w-試樣中IgG含量，g/100g； c標(biāo)準(zhǔn)工作液（A.2.3）中IgG的濃度,mg/ml; P1 標(biāo)準(zhǔn)工作液峰面積值； Vst標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣體積，ul； Pst試樣峰面積值； Vi-試樣進(jìn)樣體積；ul； V-試樣體積，ml； m-稱取試樣的質(zhì)量，g；7.2 平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平行值表示，保留小數(shù)點(diǎn)后兩位有效數(shù)字。8 重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的測(cè)定值的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15%。十二 、玉米副產(chǎn)品中二氧化硫殘留量的測(cè)定方法1:GB/T5009.34-1996方法2:稱取樣品10g于三角燒

44、瓶?jī)?nèi),加入少量水(約10ml),加入20ml濃鹽酸,5g鋅粉,瓶口用乙酸鉛試紙?jiān)o,放在沸水浴上加熱,若瓶中變黑則含SO2 ,標(biāo)準(zhǔn)樣品可用無水亞硫酸鈉(Na2SO3)代替,同上操作,根據(jù)黑班的大小,確認(rèn)含量. 方法3:稱樣品20g于具塞三角瓶?jī)?nèi),準(zhǔn)確加入100ml水,振蕩5分鐘,靜止待瓶?jī)?nèi)液體澄清后,準(zhǔn)確吸取上清液20ml,置于250ml碘量瓶?jī)?nèi),加入1mol/L NaCl 25ml,振蕩2分鐘,靜止10分鐘,然后加入硫酸(1+3)10ml,邊加邊振蕩,之后加淀粉(10g/l)1ml,用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液(C(1/2I2)=0.1mol/L)滴定到溶液呈蘭色,同時(shí)作空白試驗(yàn).SO2 % =C

45、15;(V-V0)×0.032/(m×1/5)×100十三、 魚粉中脲醛聚合物的鑒別1 原理脲醛聚合物在濃硫酸的作用下分解成甲醛與氨，甲醛與變色酸（鉻變酸 ,1.8二羥基萘3.6二磺酸）的濃硫酸溶液一起微熱，形成一種紫色 紫紅色化合物2 試驗(yàn)部分 試劑與儀器立體顯微鏡（160倍可連續(xù)變焦，帶光源）眼科鑷子燒杯 50 ml變色酸 2g/L稱取變色酸0.2g于200ml干燥的燒杯中，加入100ml濃硫酸，電爐上微熱(50-60)2min并攪拌使之溶解，冷卻后，移入120ml棕色滴瓶?jī)?nèi)。3 結(jié)果與討論3.1反應(yīng)的干擾情況和檢出限量 變色酸的濃硫酸溶液對(duì)乙醛、丙醛、丁醛、

46、異丁醛、異戊醛、庚醛、巴豆醛、水合氯醛、乙二醛及芳香族醛類物均無此反應(yīng)，與甘油醛、糠醛、阿拉伯糖、果糖及蔗糖反應(yīng)顯黃色，其它糖類、丙酮及羧酸類都不與變色酸的濃硫酸溶液發(fā)生反應(yīng)。此方法的檢出限量為0.05mg (脲醛聚合物)3.2加熱溫度 滴加變色酸的濃硫酸溶液后，加熱的溫度應(yīng)在150 以下，溫度過高部分“蛋白精”被炭化成黑色，影響判斷。3.3 夾取可疑物時(shí)應(yīng)注意的問題由于“蛋白精”的粒度很小，而且易碎，雖然在體視鏡下看到了，鑷子也夾到了，但在轉(zhuǎn)移到燒杯的過程中易丟失，因此，在夾取了數(shù)粒后，要將燒杯放到體視鏡下確認(rèn)可疑物已放到燒杯中，并輕輕振動(dòng)燒杯或用探針撥動(dòng)可疑物，使之集中在燒杯底部的某個(gè)點(diǎn)上

47、，滴加變色酸時(shí)要對(duì)準(zhǔn)此點(diǎn)。3.4 依據(jù)氨基酸總量來判斷是否摻有“蛋白精”通常根據(jù)魚粉氨基酸總量明顯偏低（小于粗蛋白質(zhì)的85%），而水溶性非蛋白氮(NPN)為陰性來判斷魚粉中有脲醛聚合物“蛋白精”，這并不能說明樣品中一定含有脲醛聚合物“蛋白精”，只能證實(shí)含有難溶性的非蛋白氮(NPN)。3.5 此方法也適用于肉骨粉、玉米蛋白粉、豆類蛋白粉、大米蛋白粉中蛋白精的檢測(cè)十四、 谷物中淀粉含量的測(cè)定1 試劑與溶液1.1 酒石酸銅甲液(菲林甲液)：34.639gCuSO4溶于水，加入0.5ml濃H2SO4，稀釋到500ml。 1.2 酒石酸銅乙液(菲林乙液)：173g酒石酸鉀鈉，加50gNaOH，稀釋到50

48、0ml。1.2 氫氧化鈉溶液c(NaOH)= 1mol/L1.3 硫酸鐵溶液 50g/L1.4 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c（1/5 KMnO4）=0.1mol/L1.5 乙醇溶液85% v/v1.6 HCl 1+1 和 1+3NaOH溶液40%乙酸鉛溶液20%硫酸鈉10%2 步驟：稱取樣品（粉碎過40目篩）2.05.0g，準(zhǔn)確至0.0002g，置于放有慢速濾紙的漏斗中，用30ml乙醚分三次洗去樣品中脂肪，再用150ml 85%乙醇溶液分?jǐn)?shù)次洗滌殘?jiān)?，以除去可溶性糖類物質(zhì)，濾干乙醇溶液，將濾紙連同殘?jiān)徊⑥D(zhuǎn)移至250ml錐形瓶中，加100ml水，加30ml（1+1）HCl，在沸水浴上回流2h，回流完

49、畢后，立即在流水中冷卻，待樣品水解液冷卻完全后，加3滴甲基紅指示劑，先用40%NaOH溶液調(diào)至黃色，再用(1+3)的HCl調(diào)至水解液剛變紅色為宜，使水解液的PH值約為5，然后加20ml 20%的乙酸鉛溶液，搖勻，放置10min，再加20ml 10%的硫酸鈉溶液，搖勻后，將全部溶液及殘?jiān)D(zhuǎn)入500ml容量瓶中，用水洗滌錐形瓶，洗液合并于容量瓶中，定容，搖勻，過濾，棄去初濾液20ml，濾液供測(cè)定用。吸取25.00ml濾液于三角瓶中，加25ml菲林甲液，再加25ml菲林乙液，在電爐上加熱(在3min內(nèi)煮沸)并煮沸2min，取下過濾，并用水洗滌沉淀45次，之后將濾紙及沉淀物一起放入三角瓶?jī)?nèi)，加入硫酸鐵

50、（50g/L）25ml，再加25ml水，用玻璃棒攪拌到看不到Cu2O的紅色為止，然后用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液C（1/5KMnO4）=0.1mol/L滴定到呈微紅色30s不褪色為終點(diǎn)。同樣條件做空白。3計(jì)算：以質(zhì)量百分含量表示的淀粉含量按下式計(jì)算：（1） Cu20=（V-V0）×C×71.54（2） 用Cu20的質(zhì)量查表求轉(zhuǎn)化糖的質(zhì)量：淀粉含量 % = ×100式中： V-樣品消耗KMnO4的體積；mlV0空白消耗KMnO4的體積；ml , m-試樣的質(zhì)量,g十五 、 次粉中泥沙及礦物質(zhì)的測(cè)定1 步驟：稱取20g樣品（準(zhǔn)確至0.1g）于250ml干燥的分液漏斗中，加約10

51、0ml的四氯化碳，振蕩幾分鐘，靜止0.5h以上，小心地將下層沉淀物放出到已在105烘至恒重的小燒杯中，水浴上蒸干溶劑后，放到105烘箱內(nèi)烘0.5h，取出，冷卻，稱重。2 沉淀物分析（定性）如沉淀物為白色、灰白色物質(zhì)，且不溶于鹽酸，則為滑石粉；反之，沉淀溶于鹽酸，并放出大量的氣泡，則為石粉。如沉淀物外觀如泥砂狀物質(zhì)，則沉淀為混入或摻入的泥砂。如沉淀外觀很白，并有熒光性，則沉淀物為增白劑。3 計(jì)算：沉淀物 % = ×100式中：m2烘后沉淀物燒杯的質(zhì)量；gm1燒杯的質(zhì)量；gm樣品的質(zhì)量；g說明：此方法也適用于豆粕、棉粕及菜粕中泥砂的測(cè)定。十六、魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、豆類蛋白粉、大米蛋

52、白粉鏡檢過程中的定性實(shí)驗(yàn)定性檢查A . 摻入植物類物質(zhì)（如小麥麩、稻谷粉、豆類蛋白粉和大米蛋白粉）試劑： 碘-碘化鉀溶液配制：稱1g的碘及5g碘化鉀于燒杯內(nèi)，加100ml水?dāng)嚢?分鐘，待溶解后將其移入120ml棕色的滴瓶?jī)?nèi)。步驟：取約5g樣品放在燒杯內(nèi)，加約70ml水，在電爐上煮沸，取下靜止2分鐘，滴加碘碘化鉀溶液ml，如溶液變成藍(lán)色則摻入植物性的物質(zhì)。B. 摻入尿素試劑：(1)生黃豆粉:將大豆磨成粉末（注意:防止粉碎中升溫）(2)酚紅:g/L。稱取酚紅（苯酚紅）0.1g溶于100ml乙醇中。步驟：取約0.5g魚粉樣品，于50ml比色管內(nèi)，再加約0.1-0.2g生黃豆粉，35滴酚紅，40ml水

53、，塞好塞子，搖動(dòng)30秒，靜止，如溶液變成紅色，則樣品中摻入尿素。C. 摻入銨鹽類物質(zhì)（氨化銨，碳酸氫銨）試劑 (1)氫氧化鈉溶液:稱g氫氧化鈉加ml水。(2)PH 試紙步驟：取魚粉3-5g于100ml 燒杯內(nèi)，表皿內(nèi)側(cè)沾一條濕的PH試紙，向燒杯內(nèi)加約5-10ml 氫氧化鈉，將表皿迅速蓋上，如試紙迅速變藍(lán)，則含銨鹽。D. 摻入蛋白精（脲醛聚合物）試劑 :變色酸(0.1%硫酸溶液 )稱取0.1g變色酸于干燥的燒杯內(nèi)，加入100 ml濃硫酸，電爐上加熱到（70-80），待溶解后，降溫，移入120 ml棕色的滴瓶?jī)?nèi)。步驟: 將可疑物從顯微鏡下夾出數(shù)粒于干燥的小燒杯內(nèi)，滴加約1 ml變色酸，電爐上加熱到

54、剛剛產(chǎn)生微煙，取下，加入20 -30ml水，如變成紫色，則樣品中有蛋白精。E. 摻入植物性物質(zhì)（含大量粗纖維類物質(zhì)：如鋸末、稻草、麥芽根）試劑: (1) 間苯三酚2%:稱間苯三酚2 g，加100 95%乙醇，溶解后放入棕色滴瓶?jī)?nèi)。(2) 濃鹽酸 36% 分析純?cè)噭┎襟E：稱1-2g魚粉于培養(yǎng)皿內(nèi)，滴加間苯三酚使樣品濕潤(rùn)，放置5-10分鐘后，滴加濃鹽酸約0.5ml，放置2-3分鐘，如樣品顯現(xiàn)深紅色，則樣品中含木質(zhì)素，在顯微鏡下進(jìn)一步確認(rèn)為何物。F. 摻入皮革粉試劑:(1)稀硫酸C(H2SO4)=2mol/L,將取10ml濃硫酸慢慢加入到90ml水中。(2) 二苯基卡巴腙0.2%,稱0.2g二苯基卡巴腙，加入100ml 95%乙醇，溶解后，移入棕色滴瓶?jī)?nèi)。步驟：取1-3 g魚粉于坩堝內(nèi)，在電爐上炭化