細胞工程及其在食品工業(yè)中應用

1、第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 細胞工程（cell engineering）：以生物細胞或組織為研究對象，利用細胞生物學和分子生物學技術，應用工程學的步驟，按照預定目標和設計有計劃地改變細胞的遺傳物質并使之增殖，從而生產有用的細胞生物產品或獲得新型生物品種的一門綜合性技術。細胞工程細胞工程植物細胞工程植物細胞工程動物細胞工程動物細胞工程微生物細胞工程微生物細胞工程細胞工程細胞工程細胞培養(yǎng)及控制生長技術細胞培養(yǎng)及控制生長技術組織培養(yǎng)技術組織培養(yǎng)技術細胞融合技術細胞融合技術細胞拆合技術細胞拆合技術染色體導入技術染色體導入技術胚胎和細胞核移植技術胚胎和細胞核移植技術轉基因技術轉基因技術細胞工程的內涵細胞工程

2、的內涵第二節(jié)第二節(jié) 細胞培養(yǎng)技術細胞培養(yǎng)技術 細胞培養(yǎng)（cell culture）：從生物體獲得細胞,在體外模擬體內生理環(huán)境,使之生存和生長,并維持其結構和功能特性的培養(yǎng)技術。 一、植物細胞培養(yǎng)技術一、植物細胞培養(yǎng)技術 （一）植物細胞培養(yǎng)的發(fā)展簡史：（一）植物細胞培養(yǎng)的發(fā)展簡史： 20世紀世紀40年代年代 J. Bonner報道了銀膠菊組織培養(yǎng)能報道了銀膠菊組織培養(yǎng)能產生橡膠；產生橡膠； 20世紀世紀70年代年代 植物細胞培養(yǎng)生產藥用有效成分在工植物細胞培養(yǎng)生產藥用有效成分在工業(yè)上獲得成功；業(yè)上獲得成功； 20世紀世紀80年代年代 全世界已經建立了全世界已經建立了400多種植物的組多種植物的組

3、織和細胞培養(yǎng)，可分離出超過織和細胞培養(yǎng)，可分離出超過600種代謝產物；種代謝產物； 20世紀世紀90年代年代 全世界有全世界有1000多種植物被進行過細多種植物被進行過細胞培養(yǎng)的研究。胞培養(yǎng)的研究。 植物細胞培養(yǎng)植物細胞培養(yǎng)： 指在離體條件下，將愈傷組織或其他易分散的的組織置于液體培養(yǎng)基中，進行振蕩培養(yǎng)，得到分散成游離的懸浮細胞，通過傳代培養(yǎng)使細胞增殖，從而獲得大量的細胞群體的一種技術。（二）植物細胞工程理論基礎1 細胞的全能性細胞的全能性指：即單一的離體細胞在一定的環(huán)境條件下能分化成不同細胞組織的乃至整個植株的能力。動物和植物細胞都可在一定的條件表現出全能性，其中最先發(fā)現的是植物細胞的全能性

4、，植物細胞表現全能性要求的條件更容易達到。但不是所有基因型的所有細胞在任何條件下都具有良好的培養(yǎng)反應；即使對于植物細胞而言，細胞全能性也并不意味著任何細胞均可以直接產生植物個體。植物細胞全能性的差異植物細胞全能性的差異根據細胞所處的組織不同從強到弱為：頂端分生組織根據細胞所處的組織不同從強到弱為：頂端分生組織 居間分生組織居間分生組織 側生分生側生分生 組織組織 薄壁組織薄壁組織(基本組織基本組織) 厚角組織厚角組織 輸導組織輸導組織 厚壁組織。厚壁組織。P702 細胞分化與脫分化2-1 細胞分化，是指導致細胞形成不同結構，引起功能改變或潛在發(fā)育方式改變的過程。 細胞分化也可以說是相同基因型的

5、細胞所具有的各個不同的表現型。 它包括：時間上的分化：一個細胞在不同的發(fā)育階段上可以有不同的形態(tài)結構和功能；空間上的分化：對于多細胞生物來講，同一細胞后代，由于所處的環(huán)境不同而可以有相異的形態(tài)結構和功能。細胞分化是一個復雜的生物化學過程，它是以內部生理生化變化為基礎，同時又受到外界條件的調控。據知，營養(yǎng)物質和激素的種類和配比能深刻影響分化過程，光照則是許多細胞分化的必需條件2-2 細胞脫分化與組織培養(yǎng) 組織培養(yǎng)(tissue culture) 指通過無菌操作分離出植物體的一部分接種到培養(yǎng)基上，在人工控制條件下(包括溫度、濕度、光照等)進行培養(yǎng)的過程。 外植體(explant)：通常指被培養(yǎng)的上

6、述植物離體部分。 離體器官、 組織或細胞 脫分化 愈傷組織 再分化 根、芽 植物體 p69脫分化：植株上已經分化的細胞或組織離體后在培養(yǎng)條件下逐漸恢復到分生狀態(tài)的過程。愈傷組織：細胞脫分化的結果通常是形成愈傷組織（未分化的細胞團）。已經脫分化的細胞或組織在一定條件下，它們又可以經過胚狀體(由體細胞形成的類似合子胚的結構)或愈傷組織再分化出芽和根，從而發(fā)育成一個完整的植株，因為在細胞的基因中，除了全套的結構基因外，還有操縱基因，使結構基因不能啟動而無法工作。激素則是在一定條件下能打破操縱基因的控制，使結構基因活化。因此，它直接影響和控制細胞的分化。（三）植物細胞培養(yǎng)基（四）愈傷組織和懸浮細胞培養(yǎng)

7、技術（四）愈傷組織和懸浮細胞培養(yǎng)技術基本概念： 細胞懸浮培養(yǎng) 愈傷組織 外植體3個步驟：1 步驟選擇細胞株，一般選擇次生代謝物含量高的植物種類、品種或某一高產植株，利用外植體誘導出愈傷組織。將愈傷組織轉移到液體培養(yǎng)基中，建立懸浮細胞培養(yǎng)株， 并從中篩選出目標產物產量高、性能優(yōu)良的無性繁殖系。擴大培養(yǎng)，即把選出的“種子”接種到通氣攪拌罐或進一步放大到幾百升至幾立方米的生物培養(yǎng)器中。注意： 由于植物細胞培養(yǎng)的目標產物都屬于次級代謝產物，要在細胞生長的后期才開始合成。因此，為了讓產物產量高，一般采用二步培養(yǎng)法： 即使用生長培養(yǎng)基使細胞大量增殖，達到了一定的細胞密度，然后再改用適合細胞產物積累的培養(yǎng)基

8、，促進細胞啟動 次級代謝途徑并提高產物的產量2 培養(yǎng)條件（1）物理因素 光：根據植物細胞而定 溫度：25 左右 PH值：56（2）化學因素 溶氧：植物細胞懸浮培養(yǎng)是好氧過程，但植物細胞的呼吸率低。選擇合適溶氧度 培養(yǎng)基：有機碳源、含氮鹽類（有時加入有機氮）、植物激素（IAA和2，4D等）3.植物細胞培養(yǎng)的細胞生理特性 在自然狀態(tài)下，植物之間通過“細胞間連絲”實現細胞間的聯(lián)系與接觸。這種接觸對于細胞懸浮培養(yǎng)同樣重要，所以，植物細胞離體懸浮培養(yǎng)需要保持一定的聚集度，適當保持細胞的尺寸。與微生物發(fā)酵相比，植物細胞培養(yǎng)需要注意的方面為：細胞尺寸、對剪氣力的敏感性，沉降性、生長速率、次級代謝物的合成特點

9、和細菌污染等 解決對策剪氣力敏感在減少流體剪切力和滿足植物細胞良好混合之間的尋求平衡易染菌反應器要加強密封性，防止污染細胞生長與次級代謝產物積累無關聯(lián)在培養(yǎng)基中分別進行細胞增殖和代謝物積累，或采用固定化物來控制細胞處于只積累目的代謝物的理想狀態(tài)4. 植物細胞培養(yǎng)工業(yè)化存在的問題 生長緩慢 次級代謝物含量低 培養(yǎng)細胞不穩(wěn)定等 多數產物積累于胞內 不耐受剪切力 一般的說，只有當次級代謝產物的價格高于1000美元/kg時，才考慮采用植物細胞培養(yǎng)方法。（五）單細胞培養(yǎng)技術1.單細胞分離方法 機械法 酶法 化學法 2. 單細胞培養(yǎng)方法 看護培養(yǎng) 平板培養(yǎng) 微室培養(yǎng) 單細胞培養(yǎng)的程序：建立細胞株高產細胞株

10、的選擇分化培養(yǎng)或擴大培養(yǎng)鑒定和提取（六）提高植物細胞次級代謝產物含量的方法 1.加入前體物或誘導物 2.毛狀根和冠癭瘤培養(yǎng)技術紅豆杉毛狀根紅豆杉毛狀根紅莧菜毛狀根紅莧菜毛狀根西洋參毛西洋參毛狀根狀根煙草毛狀根煙草毛狀根二、動物細胞培養(yǎng)技術 1885 Roux最早將雞胚神經培養(yǎng)在保溫的生理鹽水中，并存活了一段時間； 1907 Ross Harrison采用懸滴培養(yǎng)蛙胚神經組織，保持存活幾周，并觀察到細胞突起生長過程； 1923 Carrel將設計的卡氏瓶成功用于雞胚的心肌組織培養(yǎng)； 1951 Earle等人開發(fā)了動物細胞體外培養(yǎng)基； 1975 Kohler和Milstein創(chuàng)立了淋巴細胞雜交瘤技

11、術，獲得了單克隆抗體； 1997 英國Wilmut小組用體細胞克隆技術克隆出多利綿羊； 2001 英國宣布成功培育出世界首批轉基因克隆豬。動物細胞培養(yǎng)一般程序 胚胎成幼齡動物的組織器官（細胞來源）胚胎成幼齡動物的組織器官（細胞來源）單個細胞單個細胞原代細胞原代細胞細胞株細胞株細胞系細胞系剪碎胰蛋白酶剪碎胰蛋白酶分離細胞分離細胞洗滌、稀釋、分離洗滌、稀釋、分離原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)遺傳物質沒有發(fā)生改變遺傳物質沒有發(fā)生改變遺傳物質發(fā)生改變遺傳物質發(fā)生改變1、動物細胞培養(yǎng)過程、動物細胞培養(yǎng)過程2、應用：、應用：細胞系細胞系動物胚胎動物胚胎幼齡動物器官幼齡動物器官細胞懸細胞懸浮液浮液1010

12、代代細胞細胞5050代代細胞細胞細胞株細胞株原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體的生產，制皮膚病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體的生產，制皮膚細胞，檢測有毒物質的毒性細胞，檢測有毒物質的毒性 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)： 傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)： 細胞株：細胞株： 細胞系：細胞系：單個細胞單個細胞十代左右十代左右原代培養(yǎng)細胞原代培養(yǎng)細胞4050代左右代左右10到到40、50代的細胞，代的細胞，遺傳物質沒發(fā)生改變遺傳物質沒發(fā)生改變超過超過50代的細胞，代的細胞，遺傳物質發(fā)生改變，可無限增殖遺傳物質發(fā)生改變，可無限增殖3、植物組織培養(yǎng)和動物組織培養(yǎng)的比較、植物組織培養(yǎng)和動物組織培養(yǎng)的比較比較

13、項目原理培養(yǎng)基結果培養(yǎng)目的植植物物動動物物細細胞胞全全能能性性細細胞胞增增殖殖固體固體營養(yǎng)物質營養(yǎng)物質植物激素植物激素液體液體營養(yǎng)物質營養(yǎng)物質動物血清動物血清培養(yǎng)成培養(yǎng)成植株植株培養(yǎng)成培養(yǎng)成細胞株細胞株細胞系細胞系快速繁殖快速繁殖培養(yǎng)無病毒培養(yǎng)無病毒植株植株獲得細胞獲得細胞產品、細產品、細胞胞培養(yǎng)液培養(yǎng)液 種類種類: :液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 成分：成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、葡萄糖、氨基酸、無機鹽、 維生素和動物血清等維生素和動物血清等一、細胞融合的定義一、細胞融合的定義細胞融合（細胞融合（cell fusion)，又稱體細胞雜交（somatic hybridiazation），是指兩個或更

14、多個相同或不同細胞通過膜 融合形成單個細胞的過程。第三節(jié)第三節(jié) 細胞融合技術及其應用細胞融合技術及其應用uMuller于1838年觀察到脊椎動的腫瘤細胞能在體內自發(fā)地融合產生多核的腫瘤細胞。uVirchow于1858年描述了正常組織、發(fā)炎組織以及腫瘤組織中的多核細胞現象。uLuginbuhl于1873年觀察到天花病人的血液中也有多核的血細胞存在。uLange于1875年第一個觀察到脊椎動物（蛙類）的血液細胞發(fā)生融合的過程。uCienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在無脊椎動中發(fā)現了細胞合并現象。u1958年日本學者岡田（Okada）發(fā)現仙臺病毒具有觸發(fā)動

15、物細胞融合的效應。u1974年華裔加拿大學者高國楠創(chuàng)立了聚乙二醇（PEG）化學融合法。u1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴細胞和骨髓瘤細胞而產生能分泌預定單克隆抗體的雜交瘤細胞。u20世紀80年代出現了電融合技術。二、細胞融合研究進展二、細胞融合研究進展生物種類生物種類細胞來源細胞來源成功年代成功年代煙草兩個種間苷藍青菜大豆馬唐草矮牽牛龍面花大麥花生大麥大豆小麥矮牽牛油菜大豆玉米大豆大豆野豌豆大麥蠶豆大豆草香木犀酵母菌雞大豆煙草大豆秋水仙人胡蘿卜番茄馬鈴薯人小鼠葉葉葉根愈傷組織葉葉花瓣種子種子葉懸浮細胞葉花瓣葉懸浮細胞葉懸浮細胞懸浮細胞懸浮細胞葉根懸浮細胞葉原生質

16、體血紅細胞懸浮細胞葉懸浮細胞葉腹水癌細胞原生質體葉根尖纖維肉瘤細胞畸胎瘤細胞197219721972197219721972197219721972197219721972197219721972197219721972幾種細胞融合成功的例子幾種細胞融合成功的例子植物融合細胞成長狀態(tài)對比植物融合細胞成長狀態(tài)對比,右瓶為地面融合的右瓶為地面融合的細胞，左瓶中為太空微重力環(huán)境下融合的細胞細胞，左瓶中為太空微重力環(huán)境下融合的細胞 動物細胞融合實驗使用的小白鼠 三、動植物細胞的融合過程三、動植物細胞的融合過程植物細胞融合過程植物細胞融合過程人造小鼠培育過程示意圖人造小鼠培育過程示意圖四、細胞融合的意義

17、四、細胞融合的意義u理論上說任何細胞，都有可能通過體細胞雜交而成為新的生物資源。這理論上說任何細胞，都有可能通過體細胞雜交而成為新的生物資源。這 對于種質資源的開發(fā)和利用具有深遠的意義。對于種質資源的開發(fā)和利用具有深遠的意義。u融合過程不存在有性雜交過程中的種性隔離機制的限制，為遠緣物種間融合過程不存在有性雜交過程中的種性隔離機制的限制，為遠緣物種間 的遺傳物質交換提供了有效途徑。的遺傳物質交換提供了有效途徑。u體細胞雜交產生的雜種細胞含有來自雙親的核外遺傳系統(tǒng)，在雜種的分體細胞雜交產生的雜種細胞含有來自雙親的核外遺傳系統(tǒng)，在雜種的分 裂和增殖過程中雙親的葉綠體、線粒體裂和增殖過程中雙親的葉綠

18、體、線粒體DNA亦可發(fā)生重組，從而產生新亦可發(fā)生重組，從而產生新 的核外遺傳系統(tǒng)。的核外遺傳系統(tǒng)。u淋巴細胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。淋巴細胞雜交瘤和單克隆抗體的制備。五、細胞融合的基本原理 細胞融合是指兩種不同親株經酶法除去細胞融合是指兩種不同親株經酶法除去細胞壁得到兩個原生質體球，然后置于細胞壁得到兩個原生質體球，然后置于高滲溶液中，在促融因子（生物的、物高滲溶液中，在促融因子（生物的、物理的，化學的）作用下，使兩者互相凝理的，化學的）作用下，使兩者互相凝聚并發(fā)生細胞之間的融合，進而導致基聚并發(fā)生細胞之間的融合，進而導致基因重組，獲得新的菌株。因重組，獲得新的菌株。顯微鏡下細胞融合過程顯微

19、鏡下細胞融合過程融合過程中兩個細胞膜從彼此接觸到破裂形成細胞橋的變化過程圖解融合過程中兩個細胞膜從彼此接觸到破裂形成細胞橋的變化過程圖解用滅活的病毒誘導的動物細胞融合過程示意圖用滅活的病毒誘導的動物細胞融合過程示意圖 六、六、 細胞融合的常用方法細胞融合的常用方法(一一) 生物學法：仙臺病毒（生物學法：仙臺病毒（HVJ）法）法仙臺病毒誘導細胞融合經四個階段：仙臺病毒誘導細胞融合經四個階段：兩種細胞在一起培養(yǎng)，加入病毒，在4條件下病毒附著在細胞 膜上。并使兩細胞相互凝聚；在37中，病毒與細胞膜發(fā)生反應，細胞膜受到破環(huán)，此時需 要Ca2+和Mg2+，最適PH為8.0一8.2；細胞膜連接部穿通，周邊

20、連接部修復，此時需Ca2+和ATP；融合成巨大細胞，仍需ATP 。病毒促使細胞融合的主要步驟如下：病毒促使細胞融合的主要步驟如下：1. 兩個原生質體或細胞在病毒黏結作用下彼此靠近；兩個原生質體或細胞在病毒黏結作用下彼此靠近；2. 通過病毒與原生質體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透，通過病毒與原生質體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透，胞質互相滲透；胞質互相滲透；3. 兩個原生質體的細胞核互相融合，兩個細胞融為一體；兩個原生質體的細胞核互相融合，兩個細胞融為一體；4. 進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。用滅活的病

21、毒誘導的動物細胞融合過程示意圖用滅活的病毒誘導的動物細胞融合過程示意圖 u 優(yōu)點是易得，用法簡單，融合效果穩(wěn)定。u聚乙二醇(PEG)結構為：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分子量大于 200小于6000者均可用作細胞融合劑。uPEG濃度以W/W；如將10克PEG與10mlEagLe氏液混合（假定1ml 培養(yǎng)液為1g重)，即成50PEG溶液。uPEG經高壓滅菌后，與溫熱的Engle氏液混合。u通常用分子量低于1000的PEG作融合劑最好，50PEG溶液能產生 最多雜交細胞。uPEG溶液在pH6.0時細胞融合率最高。(二二) 化學法：聚乙二醇（化學法：聚乙二醇（PEG）法）法聚乙二醇（聚

22、乙二醇（PEG）法細胞融合過程）法細胞融合過程PEG的作用機理的作用機理： Kao等認為，由于等認為，由于PEG分子具有分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成和碳水化合物等形成H鍵，從而在在質膜之間形成分子鍵，從而在在質膜之間形成分子橋，其結果是使細胞質膜發(fā)生粘連進而促使質膜的融合；橋，其結果是使細胞質膜發(fā)生粘連進而促使質膜的融合；另外，另外，PEG能增加類脂膜的流動性，也使細胞的核、細能增加類脂膜的流動性，也使細胞的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。胞器發(fā)生融合成為可能。 PEG誘導融合的特點誘導融合的特點：其優(yōu)點

23、是融合成本低，勿需特殊其優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設備；融合子產生的異核率較高；融合過程不受物種限制。設備；融合子產生的異核率較高；融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害?？赡軐毎卸竞Α＞垡叶迹ň垡叶迹≒EG）法）法細胞融合步驟細胞融合步驟（1）將兩種不同親本細胞各）將兩種不同親本細胞各5l06混勻；混勻；（2）離心沉淀，吸去上清液；）離心沉淀，吸去上清液；（3）加）加1ml 50PEG溶液，用吸管吹打，使之與細胞接觸溶液，用吸管吹打，使之與細胞接觸1分鐘；分鐘；（4）加）加9ml 培養(yǎng)液，離心沉淀，吸去上清液；培養(yǎng)液，離心沉淀，吸去上

24、清液；（5）加）加5ml 培養(yǎng)液，分別接種培養(yǎng)液，分別接種5個直徑個直徑60mm平皿，每個平皿加培平皿，每個平皿加培養(yǎng)液至養(yǎng)液至 5ml，37的的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（6）624小時后，換成選擇培養(yǎng)液篩選雜交細胞。小時后，換成選擇培養(yǎng)液篩選雜交細胞。（三）電融合法（三）電融合法 電融合法是80年代出現的細胞融合技術，在直流電脈沖的誘導下，細胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細胞粘合并發(fā)生質膜瞬間破裂，進而質膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。電融合法的優(yōu)點：電融合法的優(yōu)點：u融合率高、重復性強、對細胞傷害??；u裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程；u

25、免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可控性強。電融合的基本過程：電融合的基本過程：細胞膜的接觸：細胞膜的接觸：當原生質體置于電導率很低的溶液中時，電場通當原生質體置于電導率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質體而不是通過溶液，其結果是原生質體在電后，電流即通過原生質體而不是通過溶液，其結果是原生質體在電場作用下極化而產生偶極子，從而使原生質體緊密接觸排列成串；電場作用下極化而產生偶極子，從而使原生質體緊密接觸排列成串；膜的擊穿：膜的擊穿：原生質體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以原生質體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質膜擊穿，從而導致兩個緊密接觸的細胞融合在一起。使原

26、生質膜擊穿，從而導致兩個緊密接觸的細胞融合在一起。 電融合誘導法原理示意圖電融合誘導法原理示意圖七、七、 雜種細胞的篩選雜種細胞的篩選根據已經發(fā)生融合的細胞中所含有核的類型，可將其根據已經發(fā)生融合的細胞中所含有核的類型，可將其分為以下幾種類型：分為以下幾種類型：u異核細胞：非同源細胞的融合體。u同核細胞：兩個相同細胞的融合體。u多核細胞：含有雙親不同比例核物質的融合體。u基于酶缺陷型細胞和藥物抗性所建立的雜種篩選基于酶缺陷型細胞和藥物抗性所建立的雜種篩選u基于營養(yǎng)缺陷型細胞所建立的雜種篩選基于營養(yǎng)缺陷型細胞所建立的雜種篩選u由溫度敏感型細胞組成的雜種細胞的篩選由溫度敏感型細胞組成的雜種細胞的篩

27、選u具有所需性狀雜種細胞的篩選具有所需性狀雜種細胞的篩選常用的雜種細胞篩選方法常用的雜種細胞篩選方法八、細胞融合技術在食品工業(yè)的應用八、細胞融合技術在食品工業(yè)的應用 （一）氨基酸生產菌的育種 （二）酶制劑生產菌的育種 （三）酵母菌的育種 （四）醬油曲霉菌的育種氨基酸生產菌的育種 谷氨酸生產菌FM84-415是我國推廣應用于味精廠的高產優(yōu)良菌株，但該菌不太穩(wěn)定，易被噬菌體感染。 趙廣鈴等人選用FM84-415和FM242-4作為出發(fā)菌株進行原生質體融合，FM242-4帶有噬菌體敏感的phages遺傳標記。 目的是篩選出性能穩(wěn)定、能抗噬菌體感染的谷氨酸高產菌株。 操作流程： FM84-415和FM

28、242-4的原生質體懸浮液各3mL混勻2500r/min離心8min 沉淀置于高滲溶液中，加入適量PEG和CaCl2溶液 2500r/min離心8min 用高滲緩沖溶液洗洗滌沉淀后，懸浮于3mL高滲緩沖液中 挑取HMM平板上菌落5000個，點種于CM平板和含噬菌體的雙層平板上培養(yǎng)得菌63株復篩出高產且抗噬菌體的菌株。35保溫20min酵母菌的育種 釀酒酵母生長快，耐酒精，但是不能分解淀粉或糊精，也不發(fā)酵乳糖。 糖化酵母和乳酸克魯維酵母具備分解乳糖及糊精和淀粉的能力。 釀酒酵母與糖化酵母的融合子可以直接發(fā)酵乳糖或淀粉。酵母菌的育種酵母菌的育種（五）、植物細胞培養(yǎng)的應用1 利用植物細胞培養(yǎng)進行藥物生產 太平洋紫杉細胞生產抗癌藥物紫杉醇、人參細胞培養(yǎng)人參皂苷和人參多糖、毛地黃細胞培養(yǎng)轉化毛地黃毒苷典型案例：紫杉醇生產案例 紫杉醇(Paclitaxel)是繼阿霉素和鉑類抗癌藥之后本世紀后期最受人們重視的一種抗癌新藥，是一新發(fā)現的有絲分裂抑制劑，其作用機理在于阻止微管正常生理聚集，抑制癌細胞的有絲分裂和紡錘體的形成，從而使癌細胞的