生化試劑性能評估及穩(wěn)定性測試流程和方法（課堂PPT）

1、1生化試劑性能評估及穩(wěn)定生化試劑性能評估及穩(wěn)定性測試流程和方法性測試流程和方法高開顯 生化試劑研發(fā)部 2009.10.262內(nèi)內(nèi)容容提提要要n測試簡介n測試主要內(nèi)容n分析性能測試n穩(wěn)定性測試3測試簡介n定義：定義：是對事物進(jìn)行評價的過程，是為確定某種事物存在特性或真實(shí)性而采取的方法和手段。n目的和意義目的和意義保證設(shè)計(jì)開發(fā)質(zhì)量保證產(chǎn)品質(zhì)量確認(rèn)產(chǎn)品規(guī)格符合規(guī)格需求4測試簡介n試劑測試的特殊性試劑測試的特殊性試劑是由生物或者化學(xué)物質(zhì)所組成；試劑是批次生產(chǎn)的，同一批次內(nèi)具有均勻性和一致性；試劑是一種具有存儲有效期和使用有效期的物質(zhì)。5測試主要內(nèi)容n規(guī)格驗(yàn)證：只是一個客戶角度的驗(yàn)證n功能/性能驗(yàn)證：對

2、產(chǎn)品參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，保證產(chǎn)品質(zhì)量n法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)符合性驗(yàn)證n臨床性能n環(huán)境/安全、可制造性、風(fēng)險管理等6測試主要內(nèi)容-法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)符合性SFDA注冊注冊國標(biāo)與行標(biāo)，如：WS/T 124-1999臨床化學(xué)體外診斷試劑盒質(zhì)量檢驗(yàn)總則、GB臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）通用技術(shù)要求（報(bào)批稿）企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)臨床試驗(yàn)、注冊檢驗(yàn)、現(xiàn)場質(zhì)量體系審核CE認(rèn)證認(rèn)證IVD指令：98/79 EC協(xié)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量體系，自我測試，自我宣稱，現(xiàn)場質(zhì)量體系審核FDA注冊注冊21CFR820FDA指南文件代理機(jī)構(gòu)，文檔審核，現(xiàn)場質(zhì)量體系審核7測試主要內(nèi)容-標(biāo)準(zhǔn)分類n國際標(biāo)準(zhǔn)（ISO）n歐盟標(biāo)準(zhǔn)（EN）n國家標(biāo)準(zhǔn)n行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)n企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)8測試主要內(nèi)容-舉例

3、：歐盟協(xié)調(diào)標(biāo)準(zhǔn) 98/79 EC IVD指令 EN 13640 穩(wěn)定性測試 EN13612 性能評估 EN 375 產(chǎn)品標(biāo)識 EN 980 符號使用 EN 13641 傳染性風(fēng)險降低 ISO13485 質(zhì)量控制 ISO14971 風(fēng)險管理9測試主要內(nèi)容-研發(fā)各階段測試任務(wù)n小試階段：小試階段：保證產(chǎn)品功能的實(shí)現(xiàn)，確認(rèn)符合預(yù)期的規(guī)格；n中試階段：中試階段：從產(chǎn)品級別進(jìn)行測試的階段，是保證產(chǎn)品符合要求的最重要階段；n試產(chǎn)階段：試產(chǎn)階段：主要針對可制造性、生產(chǎn)穩(wěn)定性進(jìn)行測試，保證能夠按要求生產(chǎn)出合格的產(chǎn)品；n試用階段：試用階段：產(chǎn)品都未經(jīng)過市場驗(yàn)證的，試用階段主要是從市場使用角度進(jìn)一步驗(yàn)證產(chǎn)品的性能

4、，也包括對正式生產(chǎn)后生產(chǎn)穩(wěn)定性的驗(yàn)證。10測試主要內(nèi)容-測試工作流程n制定測試計(jì)劃，安排測試資源；n設(shè)計(jì)測試方案，確定具體的測試項(xiàng)目及可接收標(biāo)準(zhǔn)；n測試過程實(shí)施；n統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，進(jìn)行分析，編寫測試報(bào)告。11測試主要內(nèi)容-方案的設(shè)計(jì)與編制n明確該測試的目的與要求；n查閱相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)（國標(biāo)、行標(biāo)、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)等等）的要求；n查閱相關(guān)的通用測試方案；n確定測試的范圍以及具體測試項(xiàng)目；n綜合上述要求，制定合適的測試方案。12測試主要內(nèi)容-測試方案內(nèi)容n該項(xiàng)測試的任務(wù)及目的；n測試所需的資源；n測試所使用的樣品信息；n樣品的預(yù)處理過程，測試的環(huán)境條件；n需要進(jìn)行的測試項(xiàng)目；n測試所需要達(dá)到的標(biāo)準(zhǔn)；n其他需要說

5、明的內(nèi)容。13測試主要內(nèi)容-測試報(bào)告內(nèi)容n測試所依據(jù)的方案；n測試涉及到的樣品；n所有得到的測試結(jié)果；n由測試得到的結(jié)論。14分析性能測試-主要內(nèi)容n試劑空白吸光度n分析靈敏度n線性范圍n精密度n干擾分析n準(zhǔn)確度15試劑空白吸光度n每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，其改變往往提示該試劑的變質(zhì)；n原則上，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過一個高限。反之亦然； n試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核查超限，儀器會自動報(bào)警，提示更換試劑 ；n舉例：利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。 16試劑空白吸光度-測試方法n測定待檢試劑在測

6、定波長、37 1條件下檢測蒸餾水的吸光度A；n將試劑更換成蒸餾水，再測定吸光度B；n試劑空白吸光度值=A-B。 17分析靈敏度 定義：定義：檢測系統(tǒng)可檢測的樣本中最低分析物濃度； 檢測低限：檢測低限：定性含義； 功能靈敏度：功能靈敏度：定量含義。18檢測低限（LLD）n定義：定義：樣本單次檢測可以達(dá)到的非空白檢測響應(yīng)量對應(yīng)的分析物量。檢測系統(tǒng)或方法對小于或等于檢測低限的分析物量只能報(bào)告“無分析物檢出”。n計(jì)算：計(jì)算：通常估計(jì)95%和97.5%的兩種可能性95%可能性：LLD=X(空白)+2SD(空白)99.7%可能性： LLD=X(空白)+3SD(空白)19檢測低限-疑問？ 問題：問題：大于檢

7、測低限的響應(yīng)信號說明樣品內(nèi)含有分析物，但方法還不能正確報(bào)告定量結(jié)果； 原因：原因：在這樣低的濃度或其他量值范圍內(nèi)，單次檢測樣品的反應(yīng)響應(yīng)量重復(fù)性較差； 疑問：疑問：在多少檢測響應(yīng)量時才能較好地報(bào)告定量結(jié)果呢？ 結(jié)論：結(jié)論：功能靈敏度。20功能靈敏度（FS） 定義：定義：以天間重復(fù)CV為20%時對應(yīng)檢測限樣本具有的平均濃度，確定為檢測系統(tǒng)或方法可定量報(bào)告分析物的最低濃度或其他量值的限值。 注意：注意：為估計(jì)FS，須用多個檢測限濃度來確定在低濃度處的精密度表現(xiàn)，從中選擇具有或最近于20%CV值的對應(yīng)濃度，為可定量報(bào)告的最低濃度。21線性范圍 參照文件：參照文件：CLSI EP6-A:2003（定量

8、測量程序線性評價：統(tǒng)計(jì)方法）。 定義：定義：線性：在給定范圍內(nèi)，提供的測量結(jié)果與樣品中被檢測物的量直接成比例的能力；線性范圍：測試系統(tǒng)可接收線性的范圍，即在此范圍內(nèi)非線性誤差小于規(guī)定誤差。22線性范圍-樣本要求n證實(shí)系統(tǒng)的線性范圍：證實(shí)系統(tǒng)的線性范圍：選用5-7個濃度，每個濃度重復(fù)2次； 建立系統(tǒng)的線性范圍：建立系統(tǒng)的線性范圍：使用橫跨期望報(bào)告范圍的9-11個濃度。更多的點(diǎn)和比預(yù)期報(bào)告范圍大30的范圍，可用減少點(diǎn)來發(fā)現(xiàn)最寬的可能線性范圍； 5點(diǎn)被認(rèn)為是可靠描述線性范圍的最小數(shù)：點(diǎn)被認(rèn)為是可靠描述線性范圍的最小數(shù)：更多的點(diǎn)將提供對線性更精確的描述及更寬的線性范圍，即使有些點(diǎn)需要被刪除。23線性范

9、圍-可接收基質(zhì)的分類n理想的樣本基質(zhì)：理想的樣本基質(zhì)：病人樣本混合物；n高值樣本高值樣本-添加了分析物的病人樣本混合物 ：如果將一個濃縮的分析物溶液添加到混合物中，盡可能小的稀釋病人樣本混合物（推薦小于10）；n低值樣本低值樣本-用處理過的低濃度物質(zhì)或混合物質(zhì)稀釋的混合物：如果可能，使用低濃度病人樣本混合物。另外，一定的處理可以減小分析物濃度，例如透析，加熱及層析； n其他。其他。24線性范圍-樣本添加物的選擇n使用一些推薦的天然材料必須考慮溶解度； 必須認(rèn)真選擇天然材料的酶來源以確保酶的活性和人來源的材料相等，并且添加物不影響結(jié)果；如果可以得到的話，人來源的酶可能是最合適的選擇，然而這些物質(zhì)

10、通常很昂貴； 已證實(shí)的參考物，一些來自NIST和ACS的化學(xué)物質(zhì)適合許多一般的分析物如葡萄糖，鈉，氯化物等； 樣本添加物的選擇可參照EP-6A文件：表1。25線性范圍-注意事項(xiàng)n分析次序分析次序-隨機(jī)隨機(jī)n臨床重要評價濃度臨床重要評價濃度最小分析濃度或線性范圍下限；多種醫(yī)學(xué)決定水平；最大分析濃度或線性范圍上限。26線性范圍-計(jì)算方法舉例 將血清樣本隨機(jī)排列，每個樣本重復(fù)測定3次，計(jì)算其平均值 ； 以線性上限物加入量為橫坐標(biāo)（x），測定結(jié)果均值為縱坐標(biāo)（y）作線性回歸 ； 計(jì)算相關(guān)及各測定平均值和線性回歸值的相對偏差（S）等。2i2i2ii2)y-(y)x-(x)y-)(yx-(xr相對偏差S=

11、（實(shí)測平均值線性回歸值）/線性回歸值27精密度 參考文件：參考文件：CLSI EP5-A2（臨床化學(xué)設(shè)計(jì)的精密度評價）； 定義：定義：在規(guī)定的條件下，相互獨(dú)立的測試結(jié)果之間的一致程度。28精密度-分類 批內(nèi)精密度 批間精密度 儀器內(nèi)不精密度（EP5-A2）29精密度-批內(nèi)精密度 重復(fù)測試20次； 計(jì)算均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（S）； 變異系數(shù)%100/xsCV30精密度-批間精密度 三個批次的試劑測試樣本各3次； 計(jì)算均值； 按公式計(jì)算相對偏差。31精密度-儀器內(nèi)不精密度n操作流程操作流程分裝準(zhǔn)備2個水平的待測樣本； 每天取出2個標(biāo)本，每個項(xiàng)目每天測定2批(間隔不得少于2小時)，雙份測試，共測定20

12、天； 在此期間，保證試劑批號、測定參數(shù)和定標(biāo)系數(shù)的不變； 離群點(diǎn)的檢查：實(shí)驗(yàn)過程中，如每次雙份測定的差值超過初步精密度測定時標(biāo)準(zhǔn)差的5.5倍，這對數(shù)據(jù)為“離群點(diǎn)”，應(yīng)棄去并重做； 按公式計(jì)算結(jié)果。 32精密度-儀器內(nèi)不精密度 目的：目的：評價整個系統(tǒng)的儀器內(nèi)總不精密度； 本實(shí)驗(yàn)中沒有合并可能很重要的變異源如校準(zhǔn)物和試劑批號的不同，技術(shù)員/操作者的不同； 影響精密度的其他一些因素：如樣本預(yù)處理，測試物穩(wěn)定性，攜帶率和漂移等均包含在內(nèi)； 可通過合并多設(shè)備，多操作者，多批號試劑和校準(zhǔn)液及校準(zhǔn)周期（如果適當(dāng)）而減少，但這通常增加精密度標(biāo)準(zhǔn)差。 33精密度-基本要求 樣品一定要穩(wěn)定，且應(yīng)與新鮮的臨床病人

13、標(biāo)本性能接近，穩(wěn)定的冷凍混合血清是首選； 樣本中的分析物含量應(yīng)在該項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平處，盡可能做兩個水平的精密度實(shí)驗(yàn)； 采用冷凍保存的樣品一定要注意內(nèi)含分析物的穩(wěn)定，要嚴(yán)格控制凍融、混勻的操作； 一個分析系統(tǒng)上的檢測數(shù)據(jù)只能反應(yīng)該系統(tǒng)的精密度性能，不能代表該項(xiàng)目在所有機(jī)型上的性能，亦不能代表該檢測系統(tǒng)對所有項(xiàng)目檢測的性能。34分析干擾 參照文件：參照文件：EP7-A（臨床化學(xué)檢驗(yàn)的干擾評價） 定義：定義：指某一物質(zhì)對某分析物的濃度或催化活力測定中任何一步驟的影響作用成為分析干擾；分析物（analyte）是標(biāo)本中準(zhǔn)備測定的成分；干擾物（interferent）也是標(biāo)本中的一個組分，它不是被分析物

14、，但它改變最后的結(jié)果。35分析干擾-干擾對偏倚的影響n總分析誤差主要有三個原因：不精密度、方法特有偏差和樣品特有偏差；n方法評估常常僅評估前兩個；n樣本偏差（如干擾）通常被認(rèn)為是特定樣本單獨(dú)的問題，而不是方法可被定量的特性。 36分析干擾-干擾的機(jī)制n化學(xué)作用：化學(xué)作用：如干擾物和試劑競爭或抑制指示反應(yīng)； 物理作用：物理作用：如干擾物具有和分析物相似的性質(zhì)，如能產(chǎn)生熒光，顏色等； 基體效應(yīng)：基體效應(yīng)：干擾物可能改變標(biāo)本基體的物理性質(zhì)，如濁度、黏度等； 酶的抑制：酶的抑制：干擾物能通過抑制金屬激活劑、和催化點(diǎn)的結(jié)合、或氧化必須的巰基等改變酶（分析物或試劑）活力； 非特異性：非特異性：干擾物會和分

15、析物以同樣方式參與反應(yīng)； 其他。其他。37分析干擾-干擾物測試的濃度 為確定在最壞情況下一種物質(zhì)是否存在干擾，應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)室分析的患者樣本中期望觀察到的最高濃度處進(jìn)行全面的干擾篩選 。藥物和代謝物：報(bào)告的治療劑量最高濃度的2倍倍處測試 ；內(nèi)源性物質(zhì)：確定預(yù)期的患者群體期望的最高最高濃度 ；抗凝血劑和防腐劑：5倍倍推薦的添加濃度 ；進(jìn)食的物質(zhì)：測試2倍倍的期望的最大濃度 ；注：部分干擾物濃度可參照EP7附錄推薦濃度。38分析干擾-常分析干擾物 抗壞血酸 黃疸 溶血 脂血39分析干擾-具體測試步驟 干擾原液的配制 不同濃度干擾血清標(biāo)本的制備 測試及結(jié)果判斷40分析干擾-干擾原液的制備 干擾物：干擾物

16、：獲得可能干擾物合適的純形式，或這種物質(zhì)最接近循環(huán)形式的形式。 溶劑：溶劑：選擇一種足以溶解測試物的溶劑 ，一些可能的溶劑按一般的優(yōu)先順序如下列出 ：純水、HCL或NaOH稀釋液、乙烷或甲醇、丙酮、二甲基磺胺、其他有機(jī)溶劑。41分析干擾-干擾原液的制備 抗壞血酸、黃疸、脂血：分別稱取一定量的抗壞血酸純品、膽紅素純品和內(nèi)源性酯純品溶于純水（膽紅素溶于0.1 mol/L的NaOH溶液中 ）中，充分混勻后得到干擾原液； 溶血：以新鮮全血自制溶血干擾物；收集普通全血標(biāo)本，充分離心；吸走上清液，加入510 mL的生理鹽水，適度搖動混勻清洗沉積細(xì)胞，離心，吸走上清液；重復(fù)三次上述過程后離心收集沉淀，加入與

17、沉淀等體積的去離子水，混勻，室溫靜置10 min后置冰箱-20 冷凍過夜，復(fù)融后充分離心，收集上清液，在血液細(xì)胞分析儀上測試血紅蛋白濃度，血紅蛋白濃度應(yīng)加去離子水調(diào)整至100 g/L。42分析干擾-不同濃度干擾血清標(biāo)本的制備 方法方法將加有干擾原液溶劑的新鮮病人血清和加有同體積干擾原液的相同病人血清進(jìn)行梯度混合； 注意注意基礎(chǔ)混合物：最好為沒有吃藥的健康個體獲得的新鮮樣本；其次為冷凍或凍干樣本。43分析干擾-測試及結(jié)果判斷 將不同濃度干擾物血清標(biāo)本分別測試3次； 以未加入干擾物的血清樣本為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算其他樣本與該樣本的相對偏差； 一般以相對偏差絕對值超過10%判斷為對待測項(xiàng)目有干擾，以相對偏差絕

18、對值不大于10%判斷為該濃度對待測項(xiàng)目沒有顯著干擾。 44準(zhǔn)確度 定義：一個測量值與可接收的參考值之間的一致程度。 常見方法相對偏差回收試驗(yàn)比對試驗(yàn)（重點(diǎn)介紹）45準(zhǔn)確度-方法（相對偏差） 用參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)（CRM）和相應(yīng)的參考測量程序?qū)υ噭┻M(jìn)行測試，取測試均值，計(jì)算相對偏差： B%=（M-T）/T*100% 其中：M-測試結(jié)果均值；T-有證參考物質(zhì)標(biāo)示值，或各濃度人血清定值；B-相對偏差。46準(zhǔn)確度-方法（回收試驗(yàn)） 在人血清樣品中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)溶液或純品，每個濃度測定3次，按下式計(jì)算回收率：47準(zhǔn)確度-方法（比對試驗(yàn)）n參考文件：參考文件： CLSI EP9-A2（用患者樣本進(jìn)行

19、方法比對及偏倚評估）n必要性必要性實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備用一個新的檢測系統(tǒng)或測試方法進(jìn)行病人標(biāo)本測定前，應(yīng)和原有檢測系統(tǒng)或公認(rèn)的參考方法一起檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解新檢測系統(tǒng)或方法引入后的偏倚；若偏倚不大，或偏倚在允許誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)或方法對病人樣品測定結(jié)果基本相符，新檢測系統(tǒng)或方法替代原有檢測系統(tǒng)或方法不會對臨床引入明顯偏倚。48準(zhǔn)確度-方法（比對試驗(yàn)） 測試步驟測試步驟收集新鮮血清樣本：被測物濃度覆蓋以下范圍，接近可報(bào)告范圍下限，接近可報(bào)告范圍上限，醫(yī)學(xué)決定濃度水平附近等；測試：參照系統(tǒng)（X）與待檢系統(tǒng)（Y），同時對以上血清樣本進(jìn)行測試，每種試劑對每個樣本測試至少兩次，取均值

20、，然后以Y對X作圖，得線性回歸方程Y = a X + b及相關(guān)系數(shù)R；一般要求：R0.975， 0.9a1.1 ；R、a及b的指代意義。49準(zhǔn)確度-方法（比對試驗(yàn)）n實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)時間至少做5天，長一些更好，可以客觀反映實(shí)際情況；至少做40份病人樣本，多一些更好。實(shí)驗(yàn)的可靠性和有效性隨時間延長及更多的樣品量而增加；盡可能50%的實(shí)驗(yàn)樣品內(nèi)分析物含量不在參考區(qū)間內(nèi)，各個樣本內(nèi)分析物含量分布越寬越好；不要使用對任一方法已知會干擾的標(biāo)本（如溶血）；將樣本按某次序排列先測一次，做雙份第2次測定時，樣本順序全部倒過來-可最小化批內(nèi)雙份測定的均值受攜帶和漂移的影響。50穩(wěn)定性測試 參照文件：ISO1

21、3640:2002（體外診斷試劑穩(wěn)定性研究） 定義：穩(wěn)定性是體外診斷試劑必須具有的基本屬性、是確保產(chǎn)品在使用過程中安全有效的重要指標(biāo)。穩(wěn)定性研究是根據(jù)產(chǎn)品的理化性質(zhì)，設(shè)計(jì)合理的穩(wěn)定性研究試驗(yàn)項(xiàng)目，以考察不同條件下產(chǎn)品的主要質(zhì)量指標(biāo)隨時間的變化情況，為產(chǎn)品的保存條件和有效期的確定提供依據(jù)。51穩(wěn)定性測試-目的 確定試劑的貯存有效期； 確定試劑在第一次打開原裝包裝后的使用期限（開瓶使用有效期）； 監(jiān)測已經(jīng)進(jìn)入市場的試劑的穩(wěn)定性； 確認(rèn)試劑在經(jīng)過可能影響其穩(wěn)定性的更改后的穩(wěn)定性。52穩(wěn)定性測試-測試批次要求 用于支持測試目的研究的最小批次數(shù)目應(yīng)該： 3批用于確定新的IVD試劑的有效期（長期穩(wěn)定性）

22、1批用于模擬運(yùn)輸過程 1批用于測試使用中的穩(wěn)定性，例如，那些經(jīng)過了重新組合或是 最初被真空包裝的試劑 此外還有以下數(shù)目地批次應(yīng)當(dāng)進(jìn)行測試： 3批用于延長了有效期的IVD試劑 1批用于經(jīng)過改進(jìn)的IVD試劑53穩(wěn)定性測試-內(nèi)容 實(shí)時穩(wěn)定性研究（real-time stability testing） 加速穩(wěn)定性研究（accelerated stability testing）54穩(wěn)定性測試-實(shí)時穩(wěn)定性研究n長期穩(wěn)定性：長期穩(wěn)定性：在長期穩(wěn)定性研究期間，應(yīng)按規(guī)定的保存條件（例如溫度、濕度等）進(jìn)行穩(wěn)定性研究。n開瓶穩(wěn)定性：開瓶穩(wěn)定性：為確定使用過程中的穩(wěn)定性，如打開包裝后的穩(wěn)定性等，應(yīng)充分考慮到產(chǎn)品在

23、使用過程中可能遇到的各種環(huán)境因素，設(shè)置穩(wěn)定性研究的試驗(yàn)條件，考察產(chǎn)品在一定時間內(nèi)的穩(wěn)定性。n運(yùn)輸穩(wěn)定性：運(yùn)輸穩(wěn)定性：運(yùn)輸條件的模擬應(yīng)當(dāng)基于對運(yùn)輸條件的了解（如運(yùn)輸時間、預(yù)計(jì)溫度和濕度）。如果必要，可以進(jìn)行調(diào)查來確定實(shí)際的運(yùn)輸條件以作為模擬的基礎(chǔ)。55穩(wěn)定性測試-實(shí)時穩(wěn)定性研究 時間及間隔設(shè)置時間及間隔設(shè)置長期穩(wěn)定性研究考察時間應(yīng)涵蓋所預(yù)期的有效期，且應(yīng)包括足夠的安全性余量，如果必要，還應(yīng)持續(xù)到可以確定產(chǎn)品性能出現(xiàn)明顯變化的時間。根據(jù)產(chǎn)品的理化性質(zhì)，適當(dāng)選擇穩(wěn)定性研究試驗(yàn)的時間間隔，對于環(huán)境因素敏感的產(chǎn)品，應(yīng)適當(dāng)增加考察時間點(diǎn)。對于由于儀器和試劑而產(chǎn)生的變異較大的產(chǎn)品，亦應(yīng)適當(dāng)增加考察時間點(diǎn)，以

24、便能夠從數(shù)據(jù)的變化趨勢評價產(chǎn)品質(zhì)量的變化情況。56穩(wěn)定性測試-實(shí)時穩(wěn)定性研究 時間間隔設(shè)置舉例時間間隔設(shè)置舉例進(jìn)行實(shí)時穩(wěn)定性測試時，12個月有效期可以按照3個月的時間間隔進(jìn)行測試（即0，3，6，9，12個月時分別進(jìn)行測試），24個有效期月可以按照4個月的時間間隔進(jìn)行測試，在進(jìn)行長期穩(wěn)定性研究時一般應(yīng)考察至有效期后三個月。注意：間隔時間可適當(dāng)調(diào)整，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)前松后緊。57穩(wěn)定性測試-實(shí)時穩(wěn)定性研究 項(xiàng)目設(shè)置項(xiàng)目設(shè)置根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)、質(zhì)量研究項(xiàng)目和結(jié)果、成品檢定項(xiàng)目和限度，選擇即能夠靈敏地反映產(chǎn)品質(zhì)量的變化情況，又具有可操作性的項(xiàng)目作為穩(wěn)定性研究試驗(yàn)項(xiàng)目，如不穩(wěn)定的物理、生物或化學(xué)指標(biāo)、分析靈敏度、測

25、定準(zhǔn)確度等。測試項(xiàng)目應(yīng)重點(diǎn)考察表現(xiàn)其功能的性能指標(biāo)。生化試劑通常選擇試劑空白吸光度、質(zhì)控準(zhǔn)確度、重復(fù)性和線性范圍等項(xiàng)目進(jìn)行測試，以監(jiān)控試劑隨保存時間延長引起的性能變化情況。58穩(wěn)定性測試-實(shí)時穩(wěn)定性研究 結(jié)果分析結(jié)果分析 實(shí)時穩(wěn)定性的測試結(jié)果可以直接作為有效期確定的依據(jù)； 在沒有足夠?qū)崟r測試的數(shù)據(jù)支持的情況下，如果要用加速測試的結(jié)果來確定IVD試劑在推薦貯存條件下的有效期，則要以相似的相似的IVD試劑的經(jīng)驗(yàn)試劑的經(jīng)驗(yàn)和/或者利用阿阿列紐斯方程列紐斯方程或者其他規(guī)定的模型其他規(guī)定的模型為依據(jù)。 穩(wěn)定性可以依據(jù)以前的數(shù)據(jù)或者類似試劑的穩(wěn)定性或者已有的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行預(yù)測，但是仍然必須在隨后的實(shí)時穩(wěn)定性試驗(yàn)中得到驗(yàn)證。 59穩(wěn)定性測試-加速穩(wěn)定性研究 定義加速穩(wěn)定性研究是指采用過度的條件來增加產(chǎn)品的化學(xué)或物理降解的速度，從而預(yù)測其有效期。加速穩(wěn)定性研究試驗(yàn)的設(shè)計(jì)可以包括升高溫度、升高濕度、光照和震動等。60穩(wěn)定性測試-加速穩(wěn)定性研究 通過基于Arrhenius方程的加速穩(wěn)定性測試來預(yù)測有效期的方法：將每個溫度條件下濃度的對數(shù)（y軸）對時間（x軸）作圖，得到回歸方程y=ax+b；根據(jù)定義的穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算IVD試劑性質(zhì)不能再被接受時候的百分?jǐn)?shù)。結(jié)果變換為對數(shù)值；在每個溫度條件下，用b）得到的濃度的對數(shù)值替換a）y，計(jì)算出穩(wěn)定時間；按照c）計(jì)算出的時間換算為對數(shù)時間，以時間對數(shù)（y軸）對絕對溫度