常見蛋白酶抑制劑

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上當(dāng)前位置： >  >  > 正文蛋白酶及蛋白酶抑制劑大全日期：2012-06-13     來源：互聯(lián)網(wǎng)標(biāo)簽：相關(guān)專題：摘要 : 破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦鞣N蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制

2、以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦鞣N蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。在寶靈曼公司的目錄上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。常用抑制劑PMSF1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于異丙醇中;3)在室溫下可保存一年;4)工作濃度:17174ug/ml(0.11.0mmol/L);5)在水液體溶液

3、中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。1)抑制金屬水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH89;3)溶液在4穩(wěn)定六個(gè)月以上;4)工作濃度:0.51.5mmol/L. (0.20.5mg/ml);5)加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。胃蛋白酶抑制劑(pepstn)l)抑制酸性如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3儲(chǔ)存液在4一周內(nèi)穩(wěn)定，-20穩(wěn)定6個(gè)月;4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶解。亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;2)lO

4、mg/ml溶于水;3)儲(chǔ)存液4穩(wěn)定一周，-20穩(wěn)定6個(gè)月;4)工作濃度0.5mg/ml。胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;2)lOmg/ml溶于水，pH783儲(chǔ)存液4穩(wěn)定一周，-20穩(wěn)定6個(gè)月;4)工作濃度:0.062.0ug/ml(0.010.3umol/L);5)避免反復(fù)凍融:6)在pH>12.8時(shí)失活。蛋白酶抑制劑混合使用35ug/ml PMSF絲氨酸蛋白酶抑制劑0.3mg/ml EDTA金屬蛋白酶抑制劑0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)酸性蛋白酶抑制劑0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupep

5、tin)廣譜蛋白酶抑制劑常用蛋白酶抑制劑表抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲(chǔ)藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50g/ml1mg/ml水溶液對胰凝蛋白酶，胃液素，纖溶酶無影響APMSF胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶10-40g/ml或10-20M100mmol/L水溶液毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶0.06-2g/ml10mg/mlPBS溶液避免反復(fù)動(dòng)凍融抑氨肽酶B氨基肽酶40g/ml溶于甲醇不能抑制羧肽酶Calpain抑制劑、Calpain (鈣依賴性半胱氨酸蛋白酶):17g/ml:7g/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜朊酶素胰凝乳蛋白酶6-60g/ml溶于DMSO

6、0;B.M.綜合酶片絲氨酸，半胱氨酸和金屬蛋白酶每10-50ml細(xì)胞提取液內(nèi)加一片 不含EDTAEDTA金屬蛋白酶0.2-0.5mg/ml或0.5-1.3mol/L500mmol/L水溶液pH=8.0 抑蛋白酶醛肽絲氨酸蛋白酶，巰基蛋白酶0.5-2g/ml10mg/ml水溶液 a2-巨球蛋白廣譜1/ml100/ml PBS 溶液避免接觸還原劑Pefabloc SC(boe- hringer Mannheim)絲氨酸蛋白酶0.1-1.0mg/ml或0.4-4mmol/L100mM水溶液無毒，在中性pH下較PMSF 穩(wěn)定胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶0.7g/ml1mg/m

7、l甲醇溶液 PMSF絲氨酸蛋白酶17-170g/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時(shí)新鮮加入TLCK胰蛋白酶37-50g/ml1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸鹽溶液，pH=5.0對胰凝蛋白酶無影響TPCK胰凝乳蛋白酶70-100g/ml3mg/ml乙醇溶液對胰蛋白酶無影響作者：青嵐 點(diǎn)擊：次來源于-生物秀知道常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度2014-06-09 23:01:02 來源： 瀏覽次數(shù)：119 常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液

8、濃度 在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加和蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可少的，本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(proteas 蛋白酶抑制劑 分子量 溶解性 磷酸酶抑制劑 工作濃度 貯存液 胰蛋白酶 

9、絲氨酸在與蛋白相關(guān)的檢測中，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取。蛋白質(zhì)的提取過程中，我們要經(jīng)常加和抑制劑(protease inhibitor)以防止蛋白質(zhì)的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，抑制劑也是必不可少的，本文總結(jié)了常用的抑制劑(protease inhibitor)PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，-Na2等以及抑制劑NaF氟化鈉，Na3VO4 原礬酸鈉 ，BETA-glycerophosphate甘油磷酸鈉，Na2P2O4 焦磷酸鈉等。對這

10、些蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)的溶解配制，貯存液與工作液濃度，保存都做了詳細(xì)的說明。蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF：特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面處理）。溶解性：溶于異丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果>10mg/ml。在水溶液中不穩(wěn)定。在100%異丙醇， +25時(shí)穩(wěn)定至少9個(gè)月分子量：174.2使用：貯存濃度：200mM，工作濃度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，

11、纖溶酶，和組織蛋白酶B溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。4一周穩(wěn)定,分成小份冷凍在-20至少6個(gè)月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：貯存濃度：1mg/ml，工作濃度0.5 ug/ml (1mM)Aprotinin抑肽酶特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，抑制纖維蛋白溶酶， 激肽釋放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。溶解性：易溶于水（10mg/ml）或（例如，tris，0.1M，pH8.0）。pH約7-8的溶液在4可保存1周，分裝保存在-20

12、可至少保存6個(gè)月。避免反復(fù)凍融, pH>12.8的堿性環(huán)境可使其滅活。分子量：6,512使用：貯存濃度:1mg/ml, 工作濃度：0.062.0 ug/ml(0.010.3 uM)Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，腎素，組織蛋白酶D，凝乳酶， 許多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇約1mg/ml； 可溶于乙醇，過夜溶解可達(dá)到1 mg/ml；在6當(dāng)量乙酸中溶解度為300ug/ml。4穩(wěn)定一周，分裝儲(chǔ)存于-20時(shí)可保存1個(gè)月分子量： 685.9使用：貯存濃度：1mg/ml，使用濃度：0.7 g/ml(1

13、M)-Na2特性：金屬蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的條件下，4穩(wěn)定至少6個(gè)月分子量: 372.24使用：工作濃度：0.20.5 mg/ml(0.51.3 mM)，不需現(xiàn)用現(xiàn)配，在溶液pH值調(diào)至8-9時(shí)再加入。磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉溶解性：溶于水分子量： 41.99使用： 貯存液：5M 工作濃度：10-20mMNa3VO4 原礬酸鈉分子量：183.91溶解性：溶于水，我們購買過來的是原礬酸鈉.原礬酸鈉需要經(jīng)過處理以后才能成為激活的礬酸鈉,激活的礬酸鈉才具有抑制去磷酸化的作用.原礬酸鈉變成激活的礬酸鈉的過程是:100mM原礬酸鈉激活儲(chǔ)存液配制(1).取0.183克的原礬酸鈉溶解于10ml的雙蒸水中,加酸調(diào)節(jié)PH至10(顏色變黃)(2).煮至無色(3).室溫冷卻(4).重調(diào)PH至10(5)重復(fù)（）（）（）（）直至溶液保持無色，并且穩(wěn)定于10,分裝