煙草及煙草制品 多種農(nóng)藥殘留量的測定 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1、出口食品中氟啶蟲胺腈殘留量的測定高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determination of sulfoxaflor residues in foodHPLC method and LC-MS-MS method前 言本標準依據(jù)GB/T 1.12009標準化工作導則 第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫、GB/T 20001.42001標準編寫規(guī)則 第4部分：化學分析方法和SN/T 00011995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗方法標準編寫的基本規(guī)定起草。本標準起草單位：中華人民共和國貴州出入境檢驗檢疫局、貴州食品藥品檢驗所、貴州省疾病預防控制中心。本標準主要起草人：王興寧、曹桂紅、林

2、野、周貽兵、朱明、李潔、王緬。出口食品中氟啶蟲胺腈殘留量的測定高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法第一法 高效液相色譜法（HPLC）1 范圍 本標準規(guī)定了出口食品中出口食品中氟啶蟲胺腈殘留量的測定高效液相色譜法（LC）本標準適用于糙米、棉籽、玉米及黃瓜中氟啶蟲胺腈殘留量的檢測和確證。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必可不少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3方法原理樣品中氟啶蟲胺腈用乙腈提取，提取液鹽析萃取、取上層清液經(jīng)吸附劑凈化，用高效液相色

3、譜法，紫外檢測器檢測，外標法定量。 4 試劑與材料除特殊要求外，所用試劑均為色譜純（或者重蒸分析純），存儲于玻璃瓶中。4.1乙睛 色譜純。4.2甲酸 色譜純。4.3氯化鈉 分析純。4.4 檸檬酸鈉 分析純。4.5檸檬酸氫二鈉 分析純。4.6 N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，即PSA吸附劑（primary secondary amine）。4.7 氟啶蟲胺腈對照品(EprinomecEin)純度98%。4.8 氟啶蟲胺腈標準儲備液(100g/mL)分別稱取氟啶蟲胺腈對照品約10 mg于100 mL容量瓶，用乙睛溶解稀釋至刻度。-20下保存，有效期6個月。4.9 混合標準儲備液(1g/mL)四種標準

4、儲備液各1. 0 mL于100 rnI一容量瓶中，用乙睛稀釋至刻度，4下保存，有效期3個月。4.10 標準工作液分別量取適量上述棍合標準儲備液，用乙睛稀釋成濃度為1,5,10,20,50,100和200 ng/mL的系列標準工作液。5 儀器和設(shè)備5.1 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配電子轟擊源（EI）。5.2 電子天平：感應(yīng)為0.01 g和0.1 mg。5.3 均質(zhì)器。5.4 振蕩器。5.5 離心機：最大轉(zhuǎn)速可達8 000 r/min。5.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.7 氮吹儀。5.8 具蓋離心管：聚四氟乙烯，50 mL。5.9 粉碎機，配2 mm(10目）篩網(wǎng)。5.10 固相萃取裝置。5 儀器5.1液相

5、色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀配有電噴霧電離源(Electray spray ionozition, E5I)5.2天平感量 0.01 g5.3分析天平感量0.0001g5.4離心機5.5振蕩器5.6渦動儀5.7氮吹儀5.8組織勻漿機6 試料的制備包括:取制備后的供試樣品，作為供試試料。取制備后的空白樣品，作為空白試料。取制備后的空白樣品，添加適宜濃度的標準溶液作為空白添加試料。7分析步驟7.1 提取7.1 提取稱取2 g樣品于50 mL具蓋離心管中，精確至0.01 g，加入10 mL水，手持離心管振蕩直至樣品與水充分混合后，靜置10 min。分別移取10 mL乙腈于該離心管中，并置于漩渦混合振蕩儀上

6、以2000 r/min 速率振蕩2 min。將離心管在（-18-20）條件下冷凍保存10 min后，取出。向離心管中分別加入4 g無水硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉，立即手持離心管劇烈振蕩以防結(jié)塊，再置于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速度振蕩2 min，然后以4000 r/min離心5 min。收集上層清液備用。7.2凈化移取1.5 mL樣品提取液上層清液于2 mL離心管中，加入150 mg無水硫酸鎂和50 mg N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速率振蕩2 min，以4000 r/min 離心5 min，收集上層清

7、液，待檢測分析。7. 3基質(zhì)添加標準工作液的制備取空白試樣按提取與凈化進行處理，在洗脫液中加入0.5mL相應(yīng)濃度的標準工作液，于40 氮氣吹干，加0. 5 mL乙睛溶解。作為基質(zhì)添加標準工作液，過0.45 µm濾膜，進HPLC分析。供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。7.4.1測定7.4.1.1色譜柱:C18，100 mm×2.1mm,粒徑1.7µm，或相當者。7.4.1.2流動相:乙醇-水(40+60，v/v)。7.4.1.3 流速:0.2 mL/min。7.4.1.4柱溫:40 。7.4.1.5 波長:260 nm。7.4.1.6 進樣量:10µL。7.4.

8、2 液相色譜測定 分別取適量衍生化后的試樣液和標準工作液進液相色譜測定，做單點校準或多點校準，以色譜峰的峰面積積分值定量。標準工作液及試樣液中阿維菌素類藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。試樣液測定過程中應(yīng)參插標準工作液，以便準確定量。標準品液相色譜圖.見附錄B中圖1。8 結(jié)果計算和表述 動物組織中阿維菌素類藥物及其代謝物的含量X，以質(zhì)量分數(shù)毫克每千克(ug/kg)表示，按式(1)計算:Xi=ci×V (1）m式中：Xi試樣中被測物殘留量，單位為毫克每千克(mg/kg）；ci由標準曲線得到的樣液中i的濃度，單位為微克每毫升(µg/L）；V樣液最終定容體積，單位為毫升(

9、mL）；m試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g）。注：測定結(jié)果用平行測定后的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。9檢測方法靈敏度、準確度、精密度9.1 靈敏度本方法在大米、糙米、小麥、玉米及黃瓜檢測限均為1.5 µg/kg，定量限均為5 µg/kg回收率9.2 準確度本方法在0.1mg/kg -5mg/kg添加濃度水平上的回收率為80%-120%。9.3精密度本方法的批內(nèi)變異系數(shù)20%，批間變異系數(shù)鎮(zhèn)30%。附錄A(資料性附錄)色 譜 圖(1: 氟陡蟲胺睛A；2: 氟陡蟲胺睛B) 圖A1. 0.5 mg/L的氟啶蟲胺腈標準溶液色譜圖(1: 氟陡蟲胺睛A；2: 氟陡蟲胺睛B)

10、圖A2. 大米中添加0.5 mg/L的氟啶蟲胺腈標準溶液色譜圖圖A2. 大米空白樣品色譜圖第二法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS-MS)1 范圍 本標準規(guī)定了出口食品中出口食品中氟啶蟲胺腈殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSMS)本標準適用于大米、糙米、小麥、玉米及大白菜中氟啶蟲胺腈殘留量的檢測和確證。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必可不少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3方法原理樣品中氟啶蟲胺腈用乙腈提取，提取液鹽析萃取、取上層

11、清液經(jīng)吸附劑凈化,用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定，色譜保留時間和質(zhì)譜離子定性，外標法定量。 4 試劑與材料除特殊要求外，所用試劑均為色譜純（或者重蒸分析純），存儲于玻璃瓶中。4.1乙睛 色譜純。4.2甲酸 色譜純。4.3氯化鈉 分析純。4.4 檸檬酸鈉 分析純。4.5檸檬酸氫二鈉 分析純。4.6 N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，即PSA吸附劑（primary secondary amine）。4.7 氟啶蟲胺腈對照品(EprinomecEin)純度98%。4.8 氟啶蟲胺腈標準儲備液(100g/mL)分別稱取氟啶蟲胺腈對照品約10 mg于100 mL容量瓶，用乙睛溶解稀釋至刻度。-20下保存，有效期

12、6個月。4.9 混合標準儲備液(1g/mL)四種標準儲備液各1. 0 mL于100 rnL的容量瓶中，用乙睛稀釋至刻度，4下保存，有效期3個月。4.10 標準工作液分別量取適量上述棍合標準儲備液，用乙睛稀釋成濃度為1,5,10,20,50,100和200 ng/mL的系列標準工作液。5 儀器5.1液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀配有電噴霧電離源(Electray spray ionozition, E5I)5.2天平感量 0.01 g5.3分析天平感量0.0001g5.4離心機5.5振蕩器5.6渦動儀5.7氮吹儀5.8組織勻漿機6 試料的制備包括:取制備后的供試樣品，作為供試試料。取制備后的空白樣品

13、，作為空白試料。取制備后的空白樣品，添加適宜濃度的標準溶液作為空白添加試料。7分析步驟7.1 提取稱取2 g樣品于50 mL具蓋離心管中，精確至0.01 g，加入10 mL水，手持離心管振蕩直至樣品與水充分混合后，靜置10 min。分別移取10 mL乙腈于該離心管中，并置于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速率振蕩2 min。將離心管在（-18-20）條件下冷凍保存10 min后，取出。向離心管中分別加入4 g無水硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉，立即手持離心管劇烈振蕩以防結(jié)塊，再置于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速度振蕩2 min，然后以4000

14、r/min離心5 min。收集上層清液備用。7.2凈化移取1.5 mL樣品提取液上層清液于2 mL離心管中，加入150 mg無水硫酸鎂和50 mg N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速率振蕩2 min，以4000 r/min 離心5 min，收集上層清液，待檢測分析。7. 3基質(zhì)添加標準工作液的制備取空白試樣按提取與凈化進行處理，在洗脫液中加入0.5mL相應(yīng)濃度的標準工作液，于40 氮氣吹干，加0. 5 mL乙睛溶解。作為基質(zhì)添加標準工作液，供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。7.4.1測定7.4.11色譜柱:C18，100 mm×2.1mm,粒徑1.7

15、µm，或相當者。7.4.1.2流動相及梯度洗脫見表1。7.4.1.3 梯度洗脫程序。7.4.1.4 柱溫:40 。7.4.1.5進樣量:10µL。表1 流動相梯度程序及流速時間/min流速/(L/min)水（含0.1%甲酸）/%乙腈/%020090100.520010903.92001090420090107.4.2質(zhì)譜條件離子化方式:電噴霧離子源，正離子掃描。毛細管電壓:3.2 kV 。離子源溫度:320 。脫溶劑氣溫度：300 霧化氣:45 ml/min。輔助氣：10 ml/min倍增器電壓:650 V。碰撞氣:氦氣。其他參數(shù)見表2。表2 質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置名稱母離子m/z子

16、離子m/z駐留時間（secs）碰撞能量（ev）錐孔電壓（volts）氟啶蟲胺腈2781740.415802781540.425807.4.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定根據(jù)樣品溶液中農(nóng)藥的殘留量，選擇峰面積相近的標準工作液作為隨行標樣。對標準工作液和樣品溶液等體積參插進樣進行測定。氟啶蟲胺腈的離子色譜圖見圖B.1至圖B. 3 07.4.3.1定性測定通過液相色譜保留時間與串聯(lián)質(zhì)譜選擇離子共同定性。待測樣品的保留時間與標準樣品保留時間的相對偏差不大于2.5%。且與標準品相比，樣品中待測組分兩個定性子離子的相對豐度比不大于20%。7.4.3.2定最測定分別取適量試樣溶液和相應(yīng)濃度的基質(zhì)添加標準工作液，作單點校準，以色譜峰面積積分值定量。標準工作液及試樣液中氟啶蟲胺腈的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)，試樣液進樣測定過程中應(yīng)參插標準工作液，以便準確定量。8結(jié)果計算與表達 食品中氟啶蟲胺腈的殘留量X，以質(zhì)量分數(shù)毫克每千克(mg/kg)式(1)計算:Xi=ci×V (1）m式中：Xi試樣中被測物殘留量，單位為毫克每千克(mg/kg）；ci由標準曲線得到的樣液中i的濃度，單位為微克每毫升(µg/L）；V樣液最終定容體積，單位為毫升(mL）；m試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g）。注：測定結(jié)果用平行測定后的算術(shù)