煙草及煙草制品 多種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1、出口食品中氟啶蟲(chóng)胺腈殘留量的測(cè)定高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determination of sulfoxaflor residues in foodHPLC method and LC-MS-MS method前 言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T 1.12009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)、GB/T 20001.42001標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則 第4部分：化學(xué)分析方法和SN/T 00011995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)的基本規(guī)定起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)貴州出入境檢驗(yàn)檢疫局、貴州食品藥品檢驗(yàn)所、貴州省疾病預(yù)防控制中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王興寧、曹桂紅、林

2、野、周貽兵、朱明、李潔、王緬。出口食品中氟啶蟲(chóng)胺腈殘留量的測(cè)定高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法第一法 高效液相色譜法（HPLC）1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口食品中出口食品中氟啶蟲(chóng)胺腈殘留量的測(cè)定高效液相色譜法（LC）本標(biāo)準(zhǔn)適用于糙米、棉籽、玉米及黃瓜中氟啶蟲(chóng)胺腈殘留量的檢測(cè)和確證。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必可不少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3方法原理樣品中氟啶蟲(chóng)胺腈用乙腈提取，提取液鹽析萃取、取上層清液經(jīng)吸附劑凈化，用高效液相色

3、譜法，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。 4 試劑與材料除特殊要求外，所用試劑均為色譜純（或者重蒸分析純），存儲(chǔ)于玻璃瓶中。4.1乙睛 色譜純。4.2甲酸 色譜純。4.3氯化鈉 分析純。4.4 檸檬酸鈉 分析純。4.5檸檬酸氫二鈉 分析純。4.6 N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，即PSA吸附劑（primary secondary amine）。4.7 氟啶蟲(chóng)胺腈對(duì)照品(EprinomecEin)純度98%。4.8 氟啶蟲(chóng)胺腈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100g/mL)分別稱取氟啶蟲(chóng)胺腈對(duì)照品約10 mg于100 mL容量瓶，用乙睛溶解稀釋至刻度。-20下保存，有效期6個(gè)月。4.9 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1g/mL)四種標(biāo)準(zhǔn)

4、儲(chǔ)備液各1. 0 mL于100 rnI一容量瓶中，用乙睛稀釋至刻度，4下保存，有效期3個(gè)月。4.10 標(biāo)準(zhǔn)工作液分別量取適量上述棍合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙睛稀釋成濃度為1,5,10,20,50,100和200 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。5 儀器和設(shè)備5.1 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配電子轟擊源（EI）。5.2 電子天平：感應(yīng)為0.01 g和0.1 mg。5.3 均質(zhì)器。5.4 振蕩器。5.5 離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速可達(dá)8 000 r/min。5.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.7 氮吹儀。5.8 具蓋離心管：聚四氟乙烯，50 mL。5.9 粉碎機(jī)，配2 mm(10目）篩網(wǎng)。5.10 固相萃取裝置。5 儀器5.1液相

5、色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀配有電噴霧電離源(Electray spray ionozition, E5I)5.2天平感量 0.01 g5.3分析天平感量0.0001g5.4離心機(jī)5.5振蕩器5.6渦動(dòng)儀5.7氮吹儀5.8組織勻漿機(jī)6 試料的制備包括:取制備后的供試樣品，作為供試試料。取制備后的空白樣品，作為空白試料。取制備后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白添加試料。7分析步驟7.1 提取7.1 提取稱取2 g樣品于50 mL具蓋離心管中，精確至0.01 g，加入10 mL水，手持離心管振蕩直至樣品與水充分混合后，靜置10 min。分別移取10 mL乙腈于該離心管中，并置于漩渦混合振蕩儀上

6、以2000 r/min 速率振蕩2 min。將離心管在（-18-20）條件下冷凍保存10 min后，取出。向離心管中分別加入4 g無(wú)水硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉，立即手持離心管劇烈振蕩以防結(jié)塊，再置于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速度振蕩2 min，然后以4000 r/min離心5 min。收集上層清液備用。7.2凈化移取1.5 mL樣品提取液上層清液于2 mL離心管中，加入150 mg無(wú)水硫酸鎂和50 mg N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速率振蕩2 min，以4000 r/min 離心5 min，收集上層清

7、液，待檢測(cè)分析。7. 3基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備取空白試樣按提取與凈化進(jìn)行處理，在洗脫液中加入0.5mL相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，于40 氮?dú)獯蹈?，?. 5 mL乙睛溶解。作為基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)工作液，過(guò)0.45 µm濾膜，進(jìn)HPLC分析。供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。7.4.1測(cè)定7.4.1.1色譜柱:C18，100 mm×2.1mm,粒徑1.7µm，或相當(dāng)者。7.4.1.2流動(dòng)相:乙醇-水(40+60，v/v)。7.4.1.3 流速:0.2 mL/min。7.4.1.4柱溫:40 。7.4.1.5 波長(zhǎng):260 nm。7.4.1.6 進(jìn)樣量:10µL。7.4.

8、2 液相色譜測(cè)定 分別取適量衍生化后的試樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)液相色譜測(cè)定，做單點(diǎn)校準(zhǔn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，以色譜峰的峰面積積分值定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣液中阿維菌素類(lèi)藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。試樣液測(cè)定過(guò)程中應(yīng)參插標(biāo)準(zhǔn)工作液，以便準(zhǔn)確定量。標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖.見(jiàn)附錄B中圖1。8 結(jié)果計(jì)算和表述 動(dòng)物組織中阿維菌素類(lèi)藥物及其代謝物的含量X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每千克(ug/kg)表示，按式(1)計(jì)算:Xi=ci×V (1）m式中：Xi試樣中被測(cè)物殘留量，單位為毫克每千克(mg/kg）；ci由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣液中i的濃度，單位為微克每毫升(µg/L）；V樣液最終定容體積，單位為毫升(

9、mL）；m試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g）。注：測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定后的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。9檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度9.1 靈敏度本方法在大米、糙米、小麥、玉米及黃瓜檢測(cè)限均為1.5 µg/kg，定量限均為5 µg/kg回收率9.2 準(zhǔn)確度本方法在0.1mg/kg -5mg/kg添加濃度水平上的回收率為80%-120%。9.3精密度本方法的批內(nèi)變異系數(shù)20%，批間變異系數(shù)鎮(zhèn)30%。附錄A(資料性附錄)色 譜 圖(1: 氟陡蟲(chóng)胺睛A；2: 氟陡蟲(chóng)胺睛B) 圖A1. 0.5 mg/L的氟啶蟲(chóng)胺腈標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(1: 氟陡蟲(chóng)胺睛A；2: 氟陡蟲(chóng)胺睛B)

10、圖A2. 大米中添加0.5 mg/L的氟啶蟲(chóng)胺腈標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖圖A2. 大米空白樣品色譜圖第二法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS-MS)1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口食品中出口食品中氟啶蟲(chóng)胺腈殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSMS)本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、糙米、小麥、玉米及大白菜中氟啶蟲(chóng)胺腈殘留量的檢測(cè)和確證。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必可不少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3方法原理樣品中氟啶蟲(chóng)胺腈用乙腈提取，提取液鹽析萃取、取上層

11、清液經(jīng)吸附劑凈化,用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜離子定性，外標(biāo)法定量。 4 試劑與材料除特殊要求外，所用試劑均為色譜純（或者重蒸分析純），存儲(chǔ)于玻璃瓶中。4.1乙睛 色譜純。4.2甲酸 色譜純。4.3氯化鈉 分析純。4.4 檸檬酸鈉 分析純。4.5檸檬酸氫二鈉 分析純。4.6 N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，即PSA吸附劑（primary secondary amine）。4.7 氟啶蟲(chóng)胺腈對(duì)照品(EprinomecEin)純度98%。4.8 氟啶蟲(chóng)胺腈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100g/mL)分別稱取氟啶蟲(chóng)胺腈對(duì)照品約10 mg于100 mL容量瓶，用乙睛溶解稀釋至刻度。-20下保存，有效期

12、6個(gè)月。4.9 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1g/mL)四種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1. 0 mL于100 rnL的容量瓶中，用乙睛稀釋至刻度，4下保存，有效期3個(gè)月。4.10 標(biāo)準(zhǔn)工作液分別量取適量上述棍合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙睛稀釋成濃度為1,5,10,20,50,100和200 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。5 儀器5.1液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀配有電噴霧電離源(Electray spray ionozition, E5I)5.2天平感量 0.01 g5.3分析天平感量0.0001g5.4離心機(jī)5.5振蕩器5.6渦動(dòng)儀5.7氮吹儀5.8組織勻漿機(jī)6 試料的制備包括:取制備后的供試樣品，作為供試試料。取制備后的空白樣品

13、，作為空白試料。取制備后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為空白添加試料。7分析步驟7.1 提取稱取2 g樣品于50 mL具蓋離心管中，精確至0.01 g，加入10 mL水，手持離心管振蕩直至樣品與水充分混合后，靜置10 min。分別移取10 mL乙腈于該離心管中，并置于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速率振蕩2 min。將離心管在（-18-20）條件下冷凍保存10 min后，取出。向離心管中分別加入4 g無(wú)水硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉，立即手持離心管劇烈振蕩以防結(jié)塊，再置于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速度振蕩2 min，然后以4000

14、r/min離心5 min。收集上層清液備用。7.2凈化移取1.5 mL樣品提取液上層清液于2 mL離心管中，加入150 mg無(wú)水硫酸鎂和50 mg N-丙基乙二胺鍵合固相吸附劑，于漩渦混合振蕩儀上以2000 r/min 速率振蕩2 min，以4000 r/min 離心5 min，收集上層清液，待檢測(cè)分析。7. 3基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備取空白試樣按提取與凈化進(jìn)行處理，在洗脫液中加入0.5mL相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，于40 氮?dú)獯蹈?，?. 5 mL乙睛溶解。作為基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)工作液，供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。7.4.1測(cè)定7.4.11色譜柱:C18，100 mm×2.1mm,粒徑1.7

15、µm，或相當(dāng)者。7.4.1.2流動(dòng)相及梯度洗脫見(jiàn)表1。7.4.1.3 梯度洗脫程序。7.4.1.4 柱溫:40 。7.4.1.5進(jìn)樣量:10µL。表1 流動(dòng)相梯度程序及流速時(shí)間/min流速/(L/min)水（含0.1%甲酸）/%乙腈/%020090100.520010903.92001090420090107.4.2質(zhì)譜條件離子化方式:電噴霧離子源，正離子掃描。毛細(xì)管電壓:3.2 kV 。離子源溫度:320 。脫溶劑氣溫度：300 霧化氣:45 ml/min。輔助氣：10 ml/min倍增器電壓:650 V。碰撞氣:氦氣。其他參數(shù)見(jiàn)表2。表2 質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置名稱母離子m/z子

16、離子m/z駐留時(shí)間（secs）碰撞能量（ev）錐孔電壓（volts）氟啶蟲(chóng)胺腈2781740.415802781540.425807.4.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定根據(jù)樣品溶液中農(nóng)藥的殘留量，選擇峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液作為隨行標(biāo)樣。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液等體積參插進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定。氟啶蟲(chóng)胺腈的離子色譜圖見(jiàn)圖B.1至圖B. 3 07.4.3.1定性測(cè)定通過(guò)液相色譜保留時(shí)間與串聯(lián)質(zhì)譜選擇離子共同定性。待測(cè)樣品的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于2.5%。且與標(biāo)準(zhǔn)品相比，樣品中待測(cè)組分兩個(gè)定性子離子的相對(duì)豐度比不大于20%。7.4.3.2定最測(cè)定分別取適量試樣溶液和相應(yīng)濃度的基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)工作液，作單點(diǎn)校準(zhǔn)，以色譜峰面積積分值定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣液中氟啶蟲(chóng)胺腈的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)，試樣液進(jìn)樣測(cè)定過(guò)程中應(yīng)參插標(biāo)準(zhǔn)工作液，以便準(zhǔn)確定量。8結(jié)果計(jì)算與表達(dá) 食品中氟啶蟲(chóng)胺腈的殘留量X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每千克(mg/kg)式(1)計(jì)算:Xi=ci×V (1）m式中：Xi試樣中被測(cè)物殘留量，單位為毫克每千克(mg/kg）；ci由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣液中i的濃度，單位為微克每毫升(µg/L）；V樣液最終定容體積，單位為毫升(mL）；m試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g）。注：測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定后的算術(shù)